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PeproTech胃上皮类器官培养的原理与方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-15
近年来，类器官培养热潮一直不断攀升，而胃类器官也受到大多数人的关注，胃类器官是一种衍生于胃干细胞或者多能诱导干细胞的类器官模型，体外培养的胃类器官含有多种细胞克隆亚群，其培养环境模拟活体内的真实微环境，因此胃类器官在细胞成分、组织构架及特定功能等方面与胃上皮组织高度相似，可实现在体外培养环境中对胃上皮组织的复制，为人类胃生理与疾病的研究提供了一个新的平台。 原理 胃上皮类器官培养的原理就是3D环境下培养胃上皮干细胞，加入生长因子和小分子刺激干细胞自发分裂、分化形成球囊状结构。胃上皮腺体可分为胃底/体腺和胃窦/幽门腺两部分，胃底腺和胃窦腺均可构建胃上皮类器官，其中含有的细胞成分与各自上皮一致。 胃类器官的培养较为繁琐，特别是获取原始干细胞操作步骤较多，操作时间长，培养过程中也有些注意事项，对于初学者若不注意一些操作细节，很可能导致培养失败。所以PeproTech技术员实践总结了以下全面的操作流程，并强调在培养操作中的注意要点，以便您可以清楚透彻的get其培养方法，帮助大家提高培养的成功率。 ■胃类器官的制备方法 1) 小鼠腹腔麻醉后以颈椎脱臼法处死，剖腹，分离胃移至置于冰上的培养皿中。 2) 沿胃大弯侧剪开胃壁，冰 PBS 冲洗并分离胃体部。去除胃肌层，将剩下的上皮层剪成直径小于2 mm大小的碎片。用10 ml的移液管将组织碎片的移至15 ml离心管中，添加10 ml冰PBS反复吹打重悬，然后让组织碎片自然沉降于管底，弃去约 7.5 ml的上清。 3) 重复该重悬清洗步骤 5 ～10 次至上清液清亮，弃上清。 4) 最后一次漂洗后，吸除大部分上清液，向沉淀中加入含10 mM EDTA溶液(25 ml)室温消化60 min后，弃上清。 5) 加入10 ml冰PBS用移液管轻轻吹打几次，等待组织块沉淀下去，弃去上清，将组织块转移到10 cm2的培养皿中，在组织块上覆盖一个无菌的载玻片，戴上无菌手套，
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PeproTech 为您总结小鼠小肠类器官培养方法与技术要点
作者：德尔塔 日期：2022-04-15
小鼠小肠类器官的培养说起来容易，操作起来好像也并不是那么简单的，小肠类器官的培养较为繁琐，尤其是获取原始干细胞操作步骤多、操作时间长，而且培养过程中也有颇多注意事项。对于初学者来说，此实验并不是那么友好，稍不注意一些操作细节，很可能导致培养失败。 但是！别怕。 PeproTech技术员已经亲自实践操作，趟过一遍泥泞的路~呕心沥血总结了非常全面的小鼠小肠类器官的培养方法和注意事项, 快点读起来吧！ ♦ 前言 ♦ 2009年，荷兰科学家Hans Clevers的团队成功地在体外将Lgr5+肠道干细胞培养成包括隐窝样区域和绒毛样上皮区域的三维结构，即小肠类器官。这一结构包含所有终末分化细胞类型，能准确模拟肠道上皮生理情况，这一方法的建立既实现了肠上皮长期体外培养又可以维持肠上皮细胞原始分化能力，该技术已经逐渐被应用于干细胞、疾病模型以及再生药物等相关研究。 小肠类器官的培养可以通过多能诱导干细胞或胚胎干细胞来诱导分化，也可以取小肠的隐窝干细胞来诱导分化。目前大多数研究都是采用小肠隐窝干细胞来培养，因为该方法不仅获取干细胞方便，对技术的要求不高，而且培养的类器官传代次数更多，可以在体外长期培养长达2个月之久。 ♦ 小肠类器官的制备方法 ♦ 1）将小鼠断颈处死后，收集自末端回肠起约15cm肠断，置于冰的PBS 洗涤液液中，使用尖头镊子去除肠道外部的膜、血管和脂肪，用注射器从小肠一端注入PBS进行冲洗； 2）使用小剪刀，将肠段纵向切开，肠腔朝上打开。用冰冷的PBS（2-8°C）轻轻洗涤切开的肠道片段，用玻片刮出肠管内容物和绒毛结构，再次用冰冷的PBS冲洗； 3）向50 mL离心管加入15 mL冰冷的PBS。用镊子夹住肠道一端，并悬在管口上。从肠道底部开始，用剪刀将肠切成1~2毫米的小片，让这些碎片落入管内的缓冲液中； 4）用PBS预先润湿10 mL移液管，加入15 mL冰冷的PBS清洗肠道碎片5~10次，直至上
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PeproTech 常用蛋白重悬液的配制方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-15
1.磷酸钠缓冲液 (Sodium Phosphate) 配置量：100mL 1. 分别称取相应重量的Na2HPO4和NaH2PO4； 2. 溶解并定容至100 ml双蒸水中； 3. 0.22 μm滤膜过滤除菌后使用。 2.柠檬酸缓冲液 (Citric Acid) 配置量：100mL 1. 称取相应重量的柠檬酸和柠檬酸三钠； 2. 溶解并定容至100 ml双蒸水中； 3. 0.22 μm滤膜过滤除菌后使用。 3.Tris 缓冲液 (Tris) 配置量：100mL 1. 分别称取相应重量的Tris盐酸和Tris碱； 2. 溶解并定容至100 ml双蒸水中； 3. 0.22 μm滤膜过滤除菌后使用。 4.醋酸溶液 (Acetic Acid) 配置量：100mL 1. 吸取相应体积的冰醋酸； 2. 用双蒸水稀释并定容至100 ml； 3. 0.22 μm滤膜过滤除菌后使用。 5.盐酸溶液 (HCl) 配置量：100mL 1. 吸取相应体积的浓盐酸； 2. 用双蒸水稀释并定容至100 ml； 3. 0.22 μm滤膜过滤除菌后使用。
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新型冠状病毒病原学检测假阴性的产生原因及高效检测方法分析
作者：德尔塔 日期：2022-04-15
自2020年开始，新型冠状病毒肺炎的疫情就一直牵动着亿万人的心。截至2月11日8:29，全国已确诊病例累计42708例，疑似21675例，疫情防控形势依然严峻。 新型冠状病毒传播方式多样，除了经呼吸道飞沫和接触传播的主要途径外，目前已有报道病毒还可以经由气溶胶、消化道、母婴等不同方式传播，传播渠道多，传染力强。因此，控制nCov病毒传播比SARS等以往冠状病毒传播更加困难，也是目前感染率居高不下的重要原因之一，早发现，早隔离，早确诊，早**是本次疫情防控的重中之重。 根据国家发布的《新型冠状病毒感染的肺炎诊疗方案（第五版）》，“疑似”和“确诊”的含义是： 由此可见，除了及早发现临床表现异常之外，及早从病原学确诊更是疫情防控的重要一环。快速确诊不但可以尽早对病人施以对症的**方法和药物、增加病人存活率，更可以减少医疗物资的使用量，提高医疗效率，更有力的控制疫情。 新型冠状病毒病原学检测 对于病原学检测，虽然有研究表明CRISPR和免疫方法也可用于病毒检测，但荧光RT-PCR和基因测序目前仍是唯二被认可的方法。两者相比，前者无疑有更大的优势，通常在1小时内即可检测接近几十甚至几百个核酸样本。所以，当前诸多医院和医检所均采用RT-qPCR的方法，使用官方公布的引物和探针，检测nCov的N1，N2，N3三个靶标基因检测和人类RNase P，通过阴性对照、阳性对照和目的基因的Ct值判断标本中是否含有nCov病毒（Real-Time RT-PCR Panel for Detection 2019-Novel Coronavirus, www.cdc.gov）。 另一方面，确诊除了需要速度，更需要精度，要在最大程度避免假阴性的产生。假阴性不但会造成对个体的错误判断，延误病情，更有可能造成传染源的遗漏，造成更大规模的传染。假阴性的产生原因主要有以下几点： 1. 样本采集不当，并未采集到合理位置的标本，病毒含量不能反映真实状况。 2. 样本保存和处理不当，造成处理过程中病毒RNA降解。 3. 提取效率低，病毒并未完全提取，或提取过程中病毒降解。 4.
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浅析肺癌**的潜在靶点-水通道蛋白4(AQP4)
作者：德尔塔 日期：2022-04-15
肺癌是一种危害性较大的恶性肿瘤之一，探讨肺癌的发病机制、寻找抗肿瘤**新靶点是当前肺癌**研究的热点和难点。研究发现水通道蛋白4（AQP4）在肺癌细胞中呈高表达，而且敲降AQP4可明显降低肺癌细胞迁移能力。作为一种广泛用于蛋白检测和分析的技术，Western印迹分析可以检测细胞或者提取物中的蛋白表达水平。有研究发现水通道蛋白4可以作为肺癌靶向**的靶点。靶向**是一种以肿瘤细胞特异性表达的基因产物作为**靶点，从而最大程度地杀死肿瘤细胞，而尽量不对正常细胞产生杀伤作用。 在1994 年，研究者从大鼠的肺组织中克隆出来的一种选择性水转运体——AQP4 蛋白，它属于汞不敏感性AQP 家族。研究者采用电镜和免疫细胞化学技术检测发现 AQP4 定位于肺组织的气管、支气管上皮及成纤维细胞的膜基质侧顶部，此外 AQP4 也存在于气管、支气管的柱状上皮的基质侧，AQP4 在肺泡水的转运及气道表面液体的调整中发挥重要作用。探讨水通道蛋白4对肺癌细胞作用的研究，可以为肺癌靶向**的研究提供丰富的研究信息。 采用免疫组化、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、或者Western印迹分析方法都可以检测组织标本AQP4表达与分布情况。Western印迹分析方法又称为蛋白质印迹法，它是在凝胶电泳和固相免疫测定技术基础上发展起来的一种新的免疫生化技术，既具有凝胶电泳的高分辨率又具备固相免疫测定的高特异性和高灵敏性。作为一种借助特异性抗体鉴定抗原的有效方法，具有方法简便、标本可长期保存、结果便于比较等优点，被广泛应用于分子生物学等领域。美迪西提供新药研发外包服务，其生物部在体外生物学领域有丰富广泛的经验，通过酶水平测定、细胞水平测定、细胞生物学、生物化学、体外同位素测定、稳定细胞株建立、基因敲除、RNAi和MicroRNA技术等，提供一套完整的生物学服务。 为了研究水通道蛋白AQP4对肺癌细胞增殖的影响及分子机制，研究者在肺癌细胞A549中，转染AQP4的siRNAs后，采用CCK-8试剂盒检测肿瘤细胞的增殖能力，采用Western
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贝克曼新型冠状病毒核酸检测自动化方案
作者：德尔塔 日期：2022-04-15
2019-nCov新型冠状病毒肺炎，一场突如其来的疫情在这个冬季席卷全国，让本应是阖家欢乐的新春佳节蒙上阴影，也给节后恢复生产生活带来巨大的压力。确诊、疑似、死亡病例继续增加，截至2月11日15时，国家卫健委共收到累积确诊病例42717例，疑似病例21675例，死亡病例1017例。正如WHO所说，We must remember that these are people, not numbers。在当前的严峻形势下，尽快完成大量疑似病例的病毒核酸检测，收治所有确诊病人，将是疫情防控的重要工作。生命至上，小贝战“疫”——贝克曼库尔特生命科学特制定新型冠状病毒核酸检测自动化方案，为奋战在一线的医务人员、检验人员助力。 【新型冠状病毒核酸检测的困难】 准确性与假阴性 样本的采集规范化、核酸提取的产率与纯度、试剂盒检测体系的灵敏度与稳定性、人工操作的重复性和人为错误等因素都可能影响检测的准确性。 巨大的工作量 在病人数目持续增加，检验人手有限的情况下，人力和通量难以平衡，影响确诊救治以及疫情防控。 检测的安全性 检验人员在操作过程中频繁接触样本，存在感染的风险。 【小贝的新型冠状病毒核酸检测方案】 小贝为你提供从自动化的样本核酸提取，到实时荧光RT-PCR体系构建，以及宏基因组文库构建的高通量、高效率自动化核酸检测方案。加速实验进程、保证人员安全、避免人为错误，为病毒核酸的准确检测保驾护航。 >> 自动化高通量核酸提取 RNAdvance系列提取试剂盒能够从血液、鼻拭子、咽拭子、深咳痰液及肺泡灌洗液等临床样本中提取病毒RNA。它应用于丙型肝炎病毒RNA，流感病毒，登革热病毒等多种类型病毒的核酸提取。贝克曼SPRI磁珠技术在保证核酸产率和纯度的同时，兼容提取结果的稳定性及自动化的高通量实验，适合从疾控中心到医院检验科各种检测通量的灵活需求。 Biomek i5自动化工作站配置灵活八通道加样器可从样品管中自动移取灭活样品进行全自动核酸提取，避免手工接触转管及核酸提取，保护操作人员安全。完成96个样品全
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泛冠状病毒药物开发的基础知识
作者：德尔塔 日期：2022-04-15
前言 高致病性冠状病毒感染成了这十年来广受关注公共卫生问题。严重急性呼吸综合征（SARS，2002-2004），中东呼吸综合征（MERs，2012-至今），2019-nCov（COVID-19），每一个对人类健康，经济发展都带了巨大的冲击。 病毒通过接触，飞沫，气溶胶等形式，引起广泛传播，引起高感染率。虽然SARS和MERS最初表现为轻微的流感样疾病，并伴有发烧、呼吸困难和咳嗽，但进展到更严重的症状是非典型间质性肺炎和弥漫性肺泡损伤。他们都能引起急性呼吸窘迫综合征（ARDS），这是急性肺损伤中最严重的一种，50%的ARDS患者肺泡炎、肺炎和缺氧导致呼吸衰竭、多器官疾病和死亡。 COV特别令人关切的是，病例死亡率高，缺乏经验证的**药物，以及这些病原体迅速跨越地理和地缘政治边界进入其他国家和大陆的种子爆发能力。 冠状病毒科 高致病性冠状病毒SARS-CoV和MERS-CoV最近出现在人类群体中，但包括HCoV-oc43、HCoV-229e、HCoV-nl63和HCoV-hku1在内的其他人类冠状病毒估计已在人类群体中传播了数百年，导致轻度呼吸道疾病，其中约5-30%的“普通感冒”。 在冠状病毒科（nidovirales）中，有四个属被鉴定：alphacoronavirus，betacoronavirus，gammacoronavirus和deltacoronavirus 。 目前鉴定的几种人HCoVs属于alphacoronavirus（HCoV-229e和HCoV-nl63）和betacoronavirus（SARS-cov、MERS-cov、COVID-19，HCoV-OC43和HCoV-HKU1）。gammacoronavirus和deltacoronavirus没有已知感染人类的病毒。 泛冠状病毒药物发现的体外研究系统 反向遗传学系统 高致病性冠状病毒和潜在泛冠状病毒药物候选药物的研究进展，部分依赖于基因操纵CoVS的技术，以探讨病毒发病机制和抗病毒药物活性。 反向遗传学系统可根据已知的病毒序列合成病毒。因为传染性病人样本收取、分离、运送等限制了大多数实验室对临床分离病毒的获取和使用。反向遗传学系统为研究病毒的发病机制和模型开发提供了必要的研究材料。 在SARS大流行之前，通过系统地将cDN
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病毒和肿瘤细胞的实时互作
作者：德尔塔 日期：2022-04-15
病毒是怎样识别细胞的？对于病毒的入侵，细胞是无动于衷，任凭宰割呢？还是主动防卫，保护自己呢？ 2011年发表在JVI（病毒学界期刊，侧重于发表病毒学领域基础机制性的研究工作，包括病毒结构及组装，病毒基因组复制及基因表达调控，病毒基因多样性及进化，病毒与细胞之间的相互作用，病毒感染的细胞反应，病毒致病机理及免疫和疫苗及抗病毒药物研发等方面。）上的一篇文章就展示了这个过程。下面就让我带领大家回顾一下这篇故事。 Adenovirus with hexon Tat-PTD modification exhibits increased therapeutic effect in experimental neuroblastoma and neuroendocrine tumors 六邻体Tat-PTD 修饰的腺病毒在神经细胞瘤和神经内分泌瘤试验中显示出**效果增强 腺病毒在**肿瘤中的应用一直在进行，但是少有成效。人类腺病毒5（Ad5）因为其具有不会引发疾病的隐患，不会与人类染色体融为一体的特性，被广泛用于癌症**的溶瘤细胞药剂。但是其感染性高度依赖于肿瘤细胞表面的柯萨基病毒腺病毒受体（CAR）的表达水平。在这种情况下，感染的细胞过度产生腺病毒纤维蛋白，并在细胞裂解前就被释放出去，恰好这些释放的纤维蛋白会抑制未感染的邻近细胞CAR的表达水平，从而防止病毒的持续侵入，病毒**效果大打折扣。 所以，这篇故事就是研究人员将Ad5病毒进行改造，在六邻体蛋白的高度可变区域5（HVR5）编辑了一个HIV-1 Tat蛋白转导结构域。Tat-PTD的功能是作为细胞穿膜肽，与未修饰的Ad5相比，基因编辑的Ad5在细胞系中的转导率急剧增加。与此同时，用纤维蛋白同时处理野生型和突变体，发现突变体的感染效率只是略微减少。在活体实验中，将人的神经细胞瘤以及神经内分泌瘤植入小鼠，将野生型Ad5和（Tat-PTD）基因编辑型分别处理小鼠。发现基因编辑型显著抑制了肿瘤的生长，且小鼠的存活时间相对更长。所以，研究人员通过给Ad5增加了一条不依赖于识别细胞表面受体（CAR）的另外一条感染路径（HIV-1 Ta
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药物作用靶点筛选与基因敲除技术的关系
作者：德尔塔 日期：2022-04-15
2018年一对双胞胎婴儿的CCR5基因敲除的事件在社会上引起了轩然大波，抛开这次事件而言，作为一项生物研究技术，基因敲除在药物研发领域应用也很广泛，今天我们来看一下它在药物作用靶点筛选上的作用吧！ 通过药物作用的靶点来设计开发创新药物是目前创新药制剂开发的一条重要线索，每年都会有作用于新靶点的药物上市，为**疾病提供了全新的作用机制，也为一些无法**的药物提供了新的希望，因此药物靶点筛选和确定对于创新药物研发具有巨大的潜力。通过基因敲除技术构建的模型不仅在发现具体基因功能和药物作用新靶点方面具有高度价值，同时也有助于确定药物作用于特定靶点后的不良反应，可以为探寻药物作用新靶点提供一个更高效便捷的研究手段，从而极大地促进新药研发。 基因敲除主要指的是基因同源重组，用设计的同源片段替代靶基因片段，从而达到基因敲除的目的。选择确定新颖有效的药物靶点是创新药制剂开发的一项重要任务，基因敲除技术的建立和发展使得人们为研究基因的功能和寻找新的**人类疾病的靶点提供了强有力的支持。基因打靶和基因捕获是两种通过胚胎干细胞(ESC)构建基因敲除小鼠的技术.基因打靶通过同源重组替换内源基因从而敲除目的基因，而基因捕获则有启动子捕获和polyA捕获两种方法对目的基因进行敲除。 如有研究者探讨了HMGN5基因敲除对人膀胱上皮癌细胞顺铂化疗敏感性的影响，采用不同浓度CDDP(0、1、2、4，8、16 μg/ml)处理人UBC细胞系，采用Western blot、菌落形成、细胞侵袭、细胞凋亡及Hoechst 33342染色法评价HMGN55蛋白敲除对UBC细胞CDDP敏感性的影响，同时分析HMGN5基因参与到UBC细胞CDDP**环节可能分子机制[1]。最终研究结果发现HMGN5可能是顺铂**潜在靶点，抑制HMGN5基因有助于增加UBC细胞化疗敏感性，这一作用主要通过干扰PI3K/Akt信号通路实现。 通过观察某个基因的敲除对癌症细胞的化疗敏感性的影响，为探索该基因的具体作用机制，寻找潜在的**靶点提供了帮助。美迪西药物化学为客户
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用于抗性研究的新型自动化图像表型方法——潜在空间表型（LSP）介绍
作者：德尔塔 日期：2022-04-15
来源：植物表型组学 2020年1月，Plant Phenomics刊发了加拿大萨斯喀彻温大学Jordan Ubbens团队题为Latent Space Phenotyping: Automatic Image-Based Phenotyping for Treatment Studies 的研究论文，提出了一种新的表型方法——潜在空间表型（Latent Space Phenotyping，LSP），能够直接从图像中自动检测和量化植物对逆境的反应。 关联定位研究使研究人员能够为许多重要的环境耐受因子确定候选位点，包括植物在农艺学上相关抗性性状的位点。然而，诸如此类的传统环境基因组研究需要一种能够准确测量逆境反应的表型管线，尤其是在使用图像处理的自动化高通量背景下。本研究中提出了潜在空间表型（LSP），这是一种新的表型方法，能够直接从图像中自动检测和量化植物对逆境的反应。本研究使用来自种间杂交的C4模式植物狗尾草，一组具有多样性的高粱(S. bicolor )以及具有内在基因定位关联的初始油菜籽（Brassica napus L.）群组的数据证明示例程序。然后，使用两个合成生成的图像数据集，本研究表明LSP能够在简单和复杂合成图像中成功模拟生成QTL。本研究建议用LSP代替传统的图像分析方法进行表型分析，这样就可以对任意的和潜在的复杂响应性状进行表型分析，而不需要复杂的图像处理工程。 Fig.1: Overview of the processed technique. 本研究所述的潜在空间表型分析方法有一些局限性，包括与大多数基于图像的表型分析技术相比所增加的计算要求。由于该方法涉及多个深度神经网络，因此建议使用GPU在可控制的时间内进行优化。本文展示的实验是在两个NVIDIA Titan V GPU上进行的，每个实验所需的时间从2小时到8小时不等，这取决于数据集中的材料数量和取样时间点数量。 5个实验的结果表明，LSP能够通过训练从图像中自动形成准确的逆境-响应概念，并以极低的假阳性率恢复QTL。作为一种自动化系统，该方法避免了在开发和部署图像分析管线以首先从图像中测量表型时出现的巨大挑战。该方法避免了处理造成
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从分类来源、传播方式、入侵机理、识别检测等全方位解读新型冠状病毒
作者：德尔塔 日期：2022-04-15
今年的春节，我们要从一只蝙蝠，哦不，是从一种病毒说起～（一）要理解冠状病毒，首先要说说病毒 病毒是一种个体微小，结构简单，只含一种核酸（DNA或RNA），必须在活细胞内寄生并以复制方式增殖的非细胞型生物。 我们常听说的病毒有鼻病毒（主要引起人的感冒）、HIV病毒（艾滋病的元凶）、埃博拉病毒（致死率超高）、狂犬病毒（致死率近乎100%的牛X病毒）……到现在为止，谁都不知道在地球上到底有多少种病毒，可能有几百万种，可能有几亿种，反正就是在任何地方、任何生物体中都存在数量不一的病毒，但其中只有约5000种已经被详细描述。 （二）病毒的分类 病毒那么多，想要正确认识和研究病毒就需要根据不同的依据对病毒进行分类。 从遗传物质分类：DNA病毒、RNA病毒、蛋白质病毒（如：朊病毒，疯牛病就属于软病毒感染的病） 从病毒结构分类：真病毒（Euvirus，简称病毒）和亚病毒（Subvirus，包括类病毒、拟病毒、朊病毒） 从寄主类型分类：噬菌体（细菌病毒）、植物病毒（如烟草花叶病毒）、动物病毒（如禽流感病毒、天花病毒、HⅣ等） 从性质来分：温和病毒（例如HⅣ）、烈性病毒（例如狂犬病毒）。 病毒的形态： ⑴球状病毒（脊髓灰质炎病毒） ⑵杆状病毒（烟草花叶病毒） ⑶砖形病毒（天花病毒） ⑷冠状病毒（SARS病毒） ⑸丝状病毒（埃博拉病毒） …… OK，知道了病毒的分类，我们可以将这次发现的新型冠状病毒理解为主要感染动物的冠状RNA病毒（注：非生物学严谨描述，仅为简单理解）（三）冠状病毒 1937年，冠状病毒（Coronaviruses）首先从鸡身上分离出来。 1965年，分离出第一株人的冠状病毒。由于在电子显微镜下可观察到其外膜上有明显的棒状粒子突起，使其形态看上去像中世纪欧洲帝王的皇冠，因此命名为“冠状病毒”。 到目前为止，大约有15种不同冠状病毒株被发现，能够感染多种哺乳动物和鸟类，到本次新型冠状病毒爆发前，已知的仅有6种可以感染人。其中4种在人群中较为普遍，仅引起普通感冒和一些轻
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大样本数据共享视角下对新冠病毒论文的理解
作者：德尔塔 日期：2022-04-15
2020 年 2 月 9 日，中国工程院院士、新型冠状病毒肺炎疫情联防联控工作机制科研攻关专家组组长钟南山院士团队、李兰娟院士团队、武汉市金银潭医院、武汉市中心医院、黄冈市主要医院、浙江大学附属第一医院、香港中文大学医学与**学系等一线临床医院和研究机构联合在预印本平台 medRxiv 发表了题为Clinical characteristics of 2019 novel coronavirus infection in China 的文章。研究汇总了全国 31 个省市，共 552 家医院的 NCP 患者病例资料，纳入了从发病到 1 月 29 号共计 1099 例确诊的 2019-nCoV 感染 NCP 患者。（文章地址https://www.medrxiv.org/content/10.1101/2020.02.06.20020974v1.full.pdf） 一线的研究数据、高水平的研究团队、大规模的共享样本数据分析、及时的信息披露等等，无论从哪个角度来看，这篇论文都具有极高的科研价值。本篇论文得出以下结论：潜伏期最长可达 24 天，尿液、粪便中都能找到新型冠状病毒，初诊时仅有 43.8% 的病人有发热症状…… (文字来源：http://www.raincent.com/content-10-14382-1.html) 通过对钟院士文章的理解，我们可以发现在本次研究过程中，大样本数据共享和建立数据集在进行疫情精准防控分析中起到重要作用。样本数据共享的价值在于：通过不同机构之间进行样本数据共享，集中形成大样本数据。对大样本数据从不同维度进行数据挖掘，发现新冠病毒的统计性信息特点，为公众提供完整、连续、准确、及时的防疫策略，为医护人员提供追溯疾病源头的方法，为决策者提供传染病发展的有效数据和依据。 本论文为回顾性研究，为什么要做回顾性研究？分析可以分为以下两点：①单一机构样本数据量不足，不能支撑研究需要，所以几家单位联合研究；②无可用数据集，导致数据分析缓慢，结果难汇总。基于以上两点，做了回顾性研究。当然，如果有一个平台，能够实现数据实时共享，那么研究者还可以进行大样本数据的阶段性实时研究，为疫情防控工作提供指导。 （来源：科技部官
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小鼠模型B-hTNFA/hIL17A与银屑病的**新途径
作者：德尔塔 日期：2022-04-15
咣咣咣...各位看官晚上好呀，真是好久没有灌输营养知识啦，小编甚是想念这个步调，想必大家也是很希望自己的2020年硕果累累，猜猜看今天小编带来什么样的惊喜呢，那就是B-hTNFA/hIL17A 小鼠。 建立B-hTNFA/hIL17A小鼠模型，有助于推进以TNF-α和 IL-17A为**靶点的抗体新药开发，这将可能成为**银屑病的新途径呢，那就一起去看看吧~ 基本信息 基因功能简介 TNF基因编码一种多功能促炎细胞因子——TNFα，属于肿瘤坏死因子 (TNF) 超家族，可由CD4+淋巴细胞、NK细胞、嗜中性粒细胞等多种类型细胞产生，但主要由活化的巨噬细胞产生。肿瘤坏死因子 (TNF) 超家族是含有 TNF 同源结构域并形成三聚体的 Ⅱ 型跨膜蛋白的蛋白超家族。该超家族成员可通过细胞外蛋白水解裂解从细胞膜上释放出来，并作为细胞因子发挥作用。这些蛋白主要由免疫细胞表达，它们调节多种细胞功能，包括免疫应答和炎症，但也包括增殖、分化、凋亡和胚胎形成。TNF产生的失调与多种人类疾病有关，包括阿尔茨海默氏病、癌症、重度抑郁症、银屑病和炎症性肠病。 IL17A基因编码的蛋白是由活化的T细胞产生的促炎性细胞因子，是IL-17家族的创始成员。IL17A可以调节 NF-κB 和丝裂原活化蛋白激酶的活性，刺激 IL6 和环氧合酶-2 (PTGS2/COX-2) 的表达，以及增强一氧化氮 (NO) 的产生。高水平的IL17A与几种慢性炎症性疾病有关，包括类风湿性关节炎、哮喘、银屑病和多发性硬化症。 研究发现，IL-17和TNF-α在银屑病皮损中表达呈正相关，表达位置也基本一致，提示二者在其发病中具有协同促进作用， IL-17可能促进角质形成细胞分泌TNF-α，促进局部血管形成，加速表皮增殖，加重局部炎症反应，导致病程迁延慢性化[1]。 TNF信号通路 IL-17A信号通路 B-hTNFA/hIL17A小鼠蛋白表达分析 通过ELISA方法对B-hTNFA/hIL17A纯合小鼠中TNFα蛋白表达进行分析 收集体内 LPS 刺激的野生型C57BL/6和 B-hTNFA/hIL17A (H/H) 纯合小鼠血清，用种属特异性 TNF
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长非编码RNA在下丘脑中抗衰老的机制
作者：德尔塔 日期：2022-04-15
近日，中南大学湘雅医学院罗湘杭团队的研究成果在国际顶级代谢期刊Cell Metabolism（IF = 22.415）刊登，文章标题为《Reducing Hypothalamic Stem Cell Senescence Protects against Aging-Associated Physiological Decline》。该研究在下丘脑的神经干细胞中发现一种名为Hnscr（htNSCs-related）的长非编码RNA（lncRNA）能够与YB-1（Y-box Protein 1）蛋白结合，并抑制YB-1蛋白的降解。而YB-1又能抑制衰老相关的蛋白的表达，而且还能恢复衰老小鼠的记忆认知和肌肉平衡等功能。并且通过对YB-1蛋白与Hnscr结合区域的结构分析，筛选到了一种叫做TF2A的天然化合物，该化合物能够模拟Hnscr的功能，通过抑制YB-1的降解，从而降低衰老相关蛋白的表达，也能起到对小鼠衰老表型的恢复作用。 研究背景 衰老是生物界的法则，任何有生命的个体都无法逃脱从一诞生就走向衰老，直至死亡这一过程。人类从古至今孜孜不倦地寻找长生不老之法，中国古代从秦皇汉武，到明清的嘉靖雍正，为此无不耗费了巨大财力和人力。即便是在现在，人们依然在寻找长寿的秘诀。但目前能做到的只能想方设法将这一过程延缓，提高衰老过程中的人类的生活质量。因此对衰老的深层生物学机制的研究可以帮助我们更好地有的放矢，寻找能够帮助人类延缓衰老的方案。 目前引起衰老的9大原因： 1. 基因组不稳定性增加（genomic instability） 2. 端粒缩短（telomere attrition） 3. 表观遗传学改变（epigenetic alterations） 4. 蛋白内稳态丧失（loss of proteostasis） 5. 营养感应失调（deregulated nutrient sensing） 6. 线粒体功能异常（mitochondrial dysfunction） 7.细胞间信息传递改变（altered intercellular communication） 8. 干细胞枯竭（stem cell exhaustion） 9. 细胞衰老（cellular senescence） 图1. 衰老的九大标志（引自Lopez-Otin et al., 2013 ） 目前有研究发现下丘脑的功能对人
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无菌鼠独特的生理特征解析
作者：德尔塔 日期：2022-04-15
无菌小鼠是采用目前的监测方法在小鼠体内无法检测到任何微生物（包括细菌，真菌，病毒和寄生虫等除内源性逆转录病毒外）存在的一种小鼠。为了防止任何微生物的可能污染，无菌小鼠的饲养与无菌状态的维持必须按照严格的无菌饲养操作程序和严谨的样品检测要求进行，并且必须在严格监控的隔离器条件下操作实施。 与常规实验室小鼠比较，无菌小鼠的外观没什么特别的，但是其机能、结构和常规实验室小鼠有一些不同，主要体现在以下几个方面： 肠道结构 对无菌小鼠进行解剖，能观察到最明显特点是盲肠比普通小鼠大5-6倍。 图1. GF、SPF级BALB/c小鼠盲肠对比 观察其肠道肌层，会发现它的肠道肌层很薄、肠绒毛较不规则、绒毛长度相对较长，这是由于肠道微生物广泛参与食物的代谢和吸收，无菌鼠因肠道中缺失微生物群营养代谢障碍，表现为结直肠和盲肠通过代偿性增生增加营养的吸收，其中增生程度以盲肠表现最为明显。 图2. 3月龄GF、SPF级 BALB/c 小鼠小肠组织结构图 肠道机能 肠蠕动较慢、小肠通透性较低、肠上皮细胞再生能力较弱。 无菌鼠的循环系统、血液系统和网状内皮系统 和普通小鼠相比，无菌鼠的心脏以及血容量相对较小、血液中的白细胞数增加且相对恒定、胆固醇含量增加。 获取更多无菌动物模型相关研究案例？点我咨询 >>咨询 脾脏缩小，无三级滤泡，网状内皮细胞功能降低。这是由于无菌鼠中肠道微生物群的缺失会严重影响肠道相关免疫组织和淋巴细胞的发育，并导致先天性免疫应答减弱。 图3. GF、SPF级BALB/c小鼠脾脏对比 图4. GF、SPF级BALB/c小鼠肠系膜淋巴结组织结构图 疾病模型 通常对高脂饮食引起的肥胖不敏感； 某些肿瘤易感小鼠（如某些基因修饰小鼠）经无菌化后，成为肿瘤不易感小鼠。 对饲养条件要求高 因为无菌鼠一直生活在无菌的环境，它们对微生物的感染异常敏感，也更容易出现污染，因此对饲养繁殖的要求就更高。无菌
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