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Sirp基因敲除小鼠助力肿瘤研究
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
想调整研究方向，获得学术研究突破口？想获得论文选题思路，提高发文命中率？你需要了解学科发展态势和未来走向！赛业生物专栏《Gene of the Week》每周二会根据热点研究领域介绍一个基因，详细为您介绍基因基本信息、研究概况和应用背景等，助您保持学术研究敏锐度，提高科学研究效率，期待您的持续关注哦。今天我们要讲的主角是“不要吃我”信号CD47的好搭档Sirpα。 基因基本信息 备注：标有√的意为赛业红鼠资源库有该种保存状态的小鼠 Sirpα的表达与结构 信号调节蛋白α(signal regulatory protein α，Sirpα)，也称为Src homology 2 domain-containing protein tyrosine phosphatase substrate-1 (SHPS-1)，在髓系造血细胞（e.g. 巨噬细胞、树突状细胞）和神经细胞表面均有表达；而其配体CD47，也称整合素相关蛋白(integrin-associated protein，IAP)，广泛表达于几乎所有正常细胞的表面。 Sirpα是一个跨膜蛋白（图1）。其胞外域中含有3个Ig样结构域（1个V样结构域和2个C1样结构域），胞内域的C端含有2个酪氨酸磷酸化位点。Sirpα的酪氨酸磷酸化位点能与蛋白质酪氨酸磷酸酶SHP-1和SHP-2结合，从而激活这些磷酸酶。Sirpα的配体CD47属于Ig超家族，具有1个V型Ig样胞外域，5个跨膜段和1个短的胞质尾。Sirpα的IgV样结构域能与CD47的IgV样结构域反式结合，并促进Sirpα胞内域中的酪氨酸磷酸化，同时，这种结合也能激活CD47的下游信号蛋白Cdc42，一个属于Rho-家族的GTP-结合蛋白。此外，CD47还能通过胞外域与整合素顺式结合，调节其功能。 图1. CD47-Sirpα信号通路[1]。 Sirpα-CD47信号通路 Sirpα主要表达在巨噬细胞表面，与其他细胞上的CD47结合后，可向巨噬细胞传递抑制性信号，抑制巨噬细胞对靶细胞的吞噬作用。因此，这条通路可用来识别己细胞（self）与非己细胞（non-self）。一些肿瘤细胞利用这个机制，高表达CD47来向巨噬细胞发出“别吃我（Don’t eat me）”信号，来进行免疫逃逸（图2）。 图2. 通过Sir
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ELISA试剂盒(酶联免疫分析试剂盒)包被用抗体和抗原的选取
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
ELISA试剂盒(酶联免疫分析试剂盒)包被用抗体还是抗原的选取？ （一）包被用抗原： ELISA试剂盒(酶联免疫分析试剂盒)用于包被固相载体的抗原按其来源不同可分为天然抗原、重组抗原和合成多肽抗原三大类。天然抗原可取自动物组织、微生物培养物等，须经提取纯化才能作包被用。如HBsAg可以从携带者的血清中提取，一般的细菌和病毒抗原可以从其培养物中提取，蛋白成份抗原可从富含此抗原的材料中提取等（例如AFP从脐带血或胎肝中提取）。重组抗原是抗原基因在质粒体中表达的蛋白质抗原，多以大肠杆菌或酵母菌为质粒体。重组抗原的优点是除工程菌成份外，其他杂质少，而且无传染性，但纯化技术难度较大。以大肠杆菌为质粒体的重组抗原如不能充分除大肠杆菌成份，用于ELISA，在反应中可出现假阳性，因不少受检者受大肠杆菌感染而在血清中存在抗大肠杆菌抗体。重组抗原的另一特点是能用基因工程制备某些无法从天然材料中分离的抗原物质。例如丙型肝炎病毒（HCV）尚不能培养成功，而且丙肝病人血清中HCV抗原含量极微。目前检测抗HCV ELISA中所用包被抗原大多为根据HCV的基因克隆表达而制备的重组抗原。在传染病诊断中，不少重组抗原如HBsAg、HBeAg和HIV抗原等均在ELISA中取得应用。合成多肽抗原是根据蛋白质抗原分子的某一抗原决定簇的氨基酸序列人工合成的多肽片段。多肽抗原一般只含有一个抗原决定簇，纯度高，特异性也高，但由于分子量太小，往往难于直接吸附于固相上。多肽抗原的包被一般需先使其与无关蛋白质如牛血清白蛋白质（BSA）等偶联，借助于偶联物与固相载体的吸附，间接地结合到固相载体表面。应用多肽抗原的另一注意点为他仅能检测与其相应的抗体。一种蛋白质抗原往往含有多个不同的能引起抗体产生的决定簇，因此在受检血清中的其他抗体就不能与该多肽抗原发生反应。另外，某些微生物发生变异时往往发生抗原结构变化，在这种情况下，用个别多肽抗原进行包被可引起其他抗体的漏检。 （二）包被用抗体： ELISA试
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瞿建国先生与何晓文博士做客节目《思创空间》 细胞银行精彩问答汇总
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
近日，上海人民广播电台长三角之声《思创空间》节目，邀请原能细胞科技集团创始人瞿建国先生，上海原能医学技术有限公司联合创始人、执行副总裁兼CSO何晓文博士，与主持人虹见一起探讨细胞存储与细胞银行的意义与价值，分享细胞产业发展前景。 其中干货满满 一起跟随小编来分享吧！ ↓↓ 问：什么是细胞银行？ 瞿建国：把我们年轻的、有活力的、健康的细胞采集储存起来，到了我们年纪大或者需要的时候，把它取出来使用，这是细胞库的概念。真正发展成为细胞银行，需具备三点：1、细胞资源是非常有价值的；2、细胞冻存需做到永久保藏；3、未来细胞资源可以保值增值。 问：到底该存什么样的细胞，它具备什么特性？ 何晓文：很多细胞可以储存，主要是免疫细胞与干细胞。来自于人体的免疫细胞，它具备抵抗细菌、病毒，甚至是**肿瘤等作用；干细胞有一定的分化能力，具有营养、组织、支持等功能，常见来源于围产组织，如生孩子时的胎盘、脐带、羊膜等，这种围产组织里边含有各种成体干细胞。除了来源于医疗遗弃物的这个围产组织外，还有小朋友换牙的牙髓干细胞，成人智齿的牙髓里边也富含干细胞，还有脂肪组织里边也富含干细胞。 细胞储存尽可能的维持细胞的多样性，不要对它进行选择。因为未来随着科学、医学的发展，哪怕是现在看起来是占有很小组份的细胞， 未来它在机体里也是有用的，所以这也对储存的这个技术带来了很多挑战。 问：细胞存储、细胞银行的价值体现在哪些方面？ 瞿建国：现在科研、医疗、临床都涉及到生物细胞的存储问题。细胞银行的概念是惠及百姓的，不要等到生病、年老或研究制药时才考虑存储细胞，趁年轻身体机能好的时候存储健康细胞，譬如孩子出生时的围产组织等，将这些被视为医疗废弃物但实则是珍贵的细胞资源保存起来，是非常有意义的事情。 问：细胞存储后可以用于哪些方面？ 瞿建国：细胞的作用很大，细胞制品可以治病救人，可以保健抗衰美容等，还有用于免疫**，代谢性疾病，
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外泌体研究课题中常见问题集合与解答
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
常用外泌体研究样本来源有哪些？ Chris Gardiner等2016发表的调查报告有报道细胞培养上清液是最常用来提取外泌体的样本来源，除了细胞上清，其他最常见的体液是血浆(47%)、血清(22%)、尿液(14%)、脑脊液(8%)和乳汁(5%)。 (Gardiner C et al., 2016, J Extracell Vesicles) 逍鹏生物Dr.Cell实验室从外泌体NTA检测样本中统计分析了其中1620例，对其外泌体来源进行分析，结果如下图，统计结果表明外泌体来源趋势与以上文献报道基本一致。NTA检测样本的外泌体最常用来源依次是细胞培养液、血清、血浆、组织、尿液等。 我们预计当外泌体更多的应用于诊断与预后评估时，血清与血浆样本比例应会大幅 持续上升。 02 如何鉴定提取出来的外泌体？ 以目前外泌体的分离手段很难获得十分纯净而且单一的外泌体样品，也没有任何一个单一实验可以确定外泌体的存在。根据国际细胞外囊泡协会发表的指导手册《MISEV 2018》，外泌体特征鉴定通过NTA测粒径分布、TEM电镜分析形态、WB检测标志蛋白三项来验证。NTA分析样品中外泌体的粒径分布和颗粒浓度，TEM电子显微镜来观察样品中外泌体的形态特征，WB检测外泌体标志蛋白。 03 外泌体如何保存？ 不同时间、温度的保存对不同的外泌体样本影响不一；如果研究方向为外泌体形态特征、蛋白或其他功能性分析，在分离后新鲜使用为最佳。目前主流的建议是提取出外泌体后**是新鲜使用，或低温短期保存。 短时间几天内可以放4°C，长时间储存置于-80°C保存。 04 NTA检测可以进行外泌体定量吗？ NTA是物理方法，基于颗粒的布朗运动，因为不管是脂质体、蛋白，甚至是PBS中的颗粒（部分实验室自行配置的PBS中发现大量颗粒，推荐在外泌体研究中，用VC品牌的PBS（P/N:C3580-0500），避免干扰），都会被软件读取，并不能分辨是否为外泌体。但NTA提供的粒径分布可供判断所提取的内含物是否在外泌体的粒径范围内；另外，在做外泌体分泌的对比实验中，NTA提供的浓度值也可以作为重要的
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FluidFM 技术在活细胞单细胞组学领域的最新进展
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
本文转载自 北大生科院仪器中心 最新进展文章导读： 单细胞测序在疾病诊断和细胞异质性研究中发挥着重要作用。然而目前的单细胞测序手段需要将细胞消化并裂解才能够进行，而细胞状态在这一操作中不可避免的会发生改变，因此很难掌握细胞真实的基因表达情况， 尤其对于基因通路上表达变化的检测极为不利。近期苏黎世联邦理工学院使用FluidFM创建了一种原位活细胞基因测序方法，这种方法能够在不杀死细胞的情况下完成对细胞的测序工作。通过这种技术该团队成功完成单细胞RNA基因测序，并通过这种方法检测到了细胞的基因表达和细胞周期状态变化。下面本文就这项工作的具体内容进行阐述。 1. Live-Seq测序技术简述 由于单个细胞的RNA总量仅有10 pg。为了实现无损的单细胞测序，该团队首先使用FluidFM对现有的scRNA-Seq单细胞测序的方法进行了优化。为了尽可能的接近Smart-Seq的测试条件，该团队采用了首先将缓冲液吸入探针，然后再进行细胞提取的操作。这样可以确保所提取的RNA能够第一时间与缓冲液混合，从而避免RNA的降解。通过这一方法，该团队成功实现了IBA细胞的测序，证明了这种方法的可行性（图1）。 图1. Live-Seq技术a. Live-Seq技术的示意图和代表图片，黑色箭头指代液面；b. IBA细胞测序的质量控制图（n=10）。 2. Live-Seq技术分析细胞系和细胞状态 为了证实Live-Seq的有效性，该团队对多种细胞系进行了测序，这其中包括IBA细胞、小鼠脂肪干细胞和祖细胞（ASPCs）以及脂多糖处理的RAW264.7细胞和Mock处理的RAW264.7细胞。通过对这些细胞系进行测序发现，该方法能够区分上述细胞系，并且在特征基因检测中能够找到每种细胞所对应的特征基因，证明了Live-Seq方法的有效性（图2）。 图2. Live-Seq单细胞测序区分细胞型及细胞状态a. 实验方法示意图，使用LPS和PBS对RAW细胞进行处理；b. 前500个高度易变基因的tSNE图；c. 前十的细胞型、细胞状态差别基因的热图；d. 小鼠基因图谱预测，使用前100个
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藻类光合生理研究技术方案
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
藻类光合生理研究技术方案：FL双调制高灵敏度、高时间分辨率叶绿素荧光测量，光合放氧测量，光合热释光测量 AlgaTech®藻类在线监测技术方案：叶绿素荧光监测，溶解氧、pH与温度监测、多参数营养盐监测 手持式藻类光合生理测量技术：叶绿素荧光测量、光谱测量、溶解氧测量，藻类光合生理测量研究尽在掌握中！ 77K、叶绿素荧光光谱测量技术方案： 参考文献：R.Kana. Application of spectrally resolved fluorescence induction to study light-induced nonphotochemical quenching in algae. Photosynthetica, 2018; Spectral characteristic of fluorescence induction in a model cyanobacterium Synechococcus sp.(PCC 7942). Biochimica et Biophysica Acta, 2009.
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AlgaTech®藻类光谱成像分析全面技术方案
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
易科泰生态技术公司提供藻类光谱成像分析全面技术方案： 叶绿素荧光成像技术、多光谱荧光成像技术 高光谱成像与高光谱荧光成像技术 藻类高通量表型成像分析平台 配套藻类培养与在线监测 AlgaTech®高通量藻类表型分析平台在海洋大学安装运行：该平台由易科泰研发设计，集双轨式自动升降控制、高精度移动扫描平台、多光谱光源系统，高光谱成像、叶绿素荧光成像、多光谱荧光成像、RGB成像分析，可为藻类表型和生理生态研究提供全面、一站式解决方案。左图为平台安装测试，右图为海带光高光谱成像分析。 自左到右：.土壤小球藻环境毒理学研究（引自：Sun-Hwa Nam etc. Quantitative assessment of photosynthetic activity of Chlorella (Class Trebouxiophyceae) adsorbed onto soil by using fluorescence imaging, Environmental Pollution, 2019）；微拟球藻叶绿素荧光成像（Fo）（引自：Giorgio Perin etc. Generation of random mutants to improve light-use efficiency of Nannochloropsis gaditana cultures for biofuel production, Biotechnology Biofuels, 2015）；莱茵衣藻生长曲线与非光化荧光淬灭NPQ（引自：Silvia Berteotti etc. Increased biomass productivity in green algae by tuning non- photochemical quenching, Nature Scientific Report, 2016） 左图：高光谱成像技术分析藻类生长（Pauliina Salmi etc. Rapid Quantification of Microalgae Growth with Hyperspectral Camera and Vegetation Indices, Plants, 2021）；右图：栅藻脂质含量（Xiaoli Li etc. In situ and non-destructive detection of lipid concentration of Scenedesmus obliquus using hyperspectral imaging technique, Algal Research, 2020）
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猪等孢球虫通用PCR检测试剂盒使用说明书
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
猪等孢球虫通用PCR检测试剂盒说明书 本产品是即用型PCR试剂盒的改良产品， 含有Taq DNA 聚合酶、dNTPs、MgCl2、反应缓冲液、PCR 增强剂、上样染料等所有PCR 所需要的成分，用户只需加入模板和引物即可进行PCR 反应，具有广泛的用途。 . 方便，用户只需准备模板和引物既可以进行PCR 实验。 2. 快捷，操作步骤已经限度地简化，能减少污染，降低实验误差。 3. 本产品A 型含电泳染料，PCR 反应液可直接上样电泳，进一步简化了操作。 4. 由于各成分的浓度和比例都经过精心优化，反应的灵敏度高，特异性强。能扩增各种常见的DNA 样品。 5. 产物可直接用于T 载体克隆，不需要额外的加A 反应。 使用及效果：将本产品5 μL 与用户自备的模板，引物和水共5 μL 混合后，直接进行PCR反应（PCR 参数由用户自己确定），反应结束后直接取0 μL 电泳检查扩增结果。 技术特点： 、准确可靠，临床双盲对照试验＞000例，结果与金标准测序法比对，结果一致性大于99%。 2、高灵敏：可检测低至0ng的人基因组DNA。 3、快速：整个检测流程只需3小时。 4、简便：试剂盒提供预混好的试剂，使体系配置操作简便。 5、防污染 6、高特异性：双重特异性组成，保证检测结果的特异性和准确性引物与DNA互补链结合必需完全配对，才能延伸。探针特异性与所检测基因的PCR产物配对，在延伸中产生荧光。 组成及试剂配制: 、 酶标板：一块（96孔） 2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前5分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约0分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，00 U/L，50 U/L，25 U/L，2.5 U/L，6.25 U/L，3.2 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制00 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。 3、 样品稀释液：×20ml。 4、 检测稀释液A：×0
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SCID小鼠（重度联合免疫缺陷小鼠）
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
SCID小鼠，即重度联合免疫缺陷（server combined immune-deficiency，SCID）小鼠，最早在1980年由Dr. Bosma及其团队在C.B-17/Icr小鼠中发现（这个品系后被命名为C.B-17 SCID小鼠）。SCID小鼠具有16号染色体上的隐性基因突变（PrkdcSCID）。Prkdc基因编码了DNA依赖性蛋白激酶的催化亚基（DNA-PKcs）。该蛋白参与了T、B 细胞的 T 细胞抗原受体（TCR）、B 细胞抗原受体（BCR）基因的V（D）J重排（图1）。因此， SCID小鼠缺乏有功效的T、B淋巴细胞。大多数纯合子体内缺乏可检测水平的IgM，IgG1，IgG2a，IgG2b，IgG3或IgA，且其胸腺，淋巴结和脾滤泡几乎没有淋巴细胞。 但随着年龄的增长，部分SCID小鼠会出现免疫泄露（Leakiness）--小鼠体内产生少量有功能的T、B细胞和免疫球蛋白（immunoglobulin, Ig）。这种现象在non-SPF条件下饲养的SCID小鼠中发生率更高。目前，SCID小鼠产生免疫泄露的分子机制仍不明确，且没有一个明确的判定标准（Jax公司认为血清Ig含量>1 ug/ml 的SCID小鼠属于“leaky”）。并且，这种免疫泄露在不同遗传背景的SCID小鼠中的发生率不同：一般来说，SCID小鼠在C57BL/6J 和BALB/c 背景上的泄漏率高；在C3H背景上较低；而在NOD背景上极低。 图1. V（D）J重排[1] 此外，SCID小鼠对辐照敏感。已知辐照会造成DNA双链断裂，而DNA-PK参与了DNA双链断裂的修复（图2）。因此，含有PrkdcSCID突变的细胞由于无法有效修复其受损DNA，会导致细胞损伤和死亡。 图2. DNA PKcs参与了DNA双链断裂的修复[2] 相对于只有T细胞缺陷的裸鼠，SCID小鼠免疫缺陷程度更高，在成瘤所需肿瘤细胞接种量以及成瘤速度上都有一定优势，可以更有效地进行异种移植，包括人源肿瘤细胞系异种移植(cell derived xenograft, CDX)和人源肿瘤组织异种移植（Patient-derived tumor xenograft, PDX）等。此外，通过将PrkdcSCID突变引入不同遗传背景的小鼠品系中，可以得到各具特点的SCID小鼠（表1）。 表1. 不同SCID小鼠的特点比较[3-
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基于非靶向的体内微生物代谢谱识别食品基质中的病原菌
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
发表期刊：Food Research International 影响因子：5.339 平台：SPME/GC × GC- QTOF-MS 研究对象：微生物发酵液、空白发酵液、含菌食品（虾、牛肉、猪肉和牛奶）、空白食品。 1.研究背景 目前，食源性病原菌是影响食品安全的首要因素，建立一种操作方便，有效实用的食源性病原体检测方法显得尤为重要。微生物挥发性有机物（MVOCs）检测已经成为揭示食品中病原菌腐败和污染的一种新颖且有效的手段，但是，MVOCs种类繁多，受微生物种类、生长基质、环境条件等多种因素影响，导致了MVOCs浓度差异巨大。 本文采用的新型的全二维色谱技术和疏水-亲水平衡固相微萃取（SPME）探针技术具有物质分离效果好，捕获代谢物范围广的优点。旨在通过对不同菌种的MVOCs检测，寻找到不同微生物挥发性代谢标志物。从而建立一种食源性致病菌识别新方法。 2.研究思路 3.研究结果 1. 质谱方法优化 本文的适用性验证基于聚合物复合萃取探针，将该探针与三个商用萃取探针相比较，包括DVB /CAR/ PDMS(50/30μm), PDMS / DVB(65μm)和PDMS(75μm)。从提取的Shigella sonnei MVOCs的总峰面积来看1-1，新型SPME探针具有较大的峰面积，提取效果**。结合定性比较结果，PDMS或CAR/PDMS对双极性化合物(如醇和酮)的灵敏度较低。与DVB/CAR/ PDMS相比，新型SPME探针具有更高的保留能力，更适合于提取不同理化性质的MVOCs。因此，新型的SPME探针有助于提供更全面的MVOCs谱，为我们后续的实验提供了有力的工具。考察了气相炉升温速率和萃取时间对萃取效果的影响。优化结果如图1-2，1-3所示。在初始温度不变的条件下，以5℃ /min的加热速率从50 ℃~ 230℃，对MVOCs的检测灵敏度优于其他加热方案。同样，为了获得更好的提取效果，根据图1-3中总峰面积随提取时间的延长而增加的结果，选择60 min作为最佳条件。 图1 1-1SPME探针纤维（左）；1-2温度程序（中）；1-3提取时间（右） 2. MVOCs的鉴定与分析 优化后，将所建立的方法应用于5种食源性致病菌体
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科研用细胞系鉴定的6大要求
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
一种新细胞系，不论是从原代培养衍生或是从已有的细胞系衍生，很难估计它未来的价值。通常要经过一段时间的应用、传播以后，该细胞系真正的重要性才体现出来。这时，需要有关其起源的详细信息，然而已经为时太晚，无法回顾性的收集信息。因此，从组织分离或得到一种新的细胞系开始，充分记录有关细胞系的起源和处理的详细资料，是至关重要的。这些记录形成该细胞系的“身世”，记录越详细，价值越大。 随着细胞系通过细胞库和私人联系广泛传播到已远离其起源的各研究室及商业公司，细胞培养工作中细胞系起源方面的问题也变得尤其重要，特别是当研究需要使用成分明确的细胞时，细胞的真实性即成为关键。在获得细胞时就应鉴定其真实性，并在使用观察中定期鉴定，而且这些鉴定的结果要与现有的数据一致，并补充到已有的“身世”记录中。 鉴定细胞系主要有6个方面的要求： （1）证实没有交叉污染 （2）确定其来源的物种。 （3）与来源组织的关系，包括下列特性： a.确定细胞所属谱系； b.谱系中细胞所处的位置（即干细胞阶段、前体细胞阶段或分化阶段）。 （4）确定细胞系转化与否： a.该细胞系是有限细胞系还是连续细胞系； b.细胞系是否表达恶性特征。 （5）是否有迹象表明细胞系有遗传不稳定和表型多样性的倾向。 （6）确定一组起源相同的细胞中的特定细胞系，以及选出的细胞株或杂交细胞系，都需要证明该种细胞系或细胞株的独特特征。 细胞系的鉴定是至关重要的，不仅决定其功能，而且也证明其真实性。我们应当特别注意细胞系被已有的连续细胞系污染的可能性，或由于标记错误、处理混乱而错认。
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癌症驱动的髓系细胞功能异常
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
免疫稳态通过髓系和淋巴系反应的充分平衡来维持。包括癌症在内的慢性炎症状态中，这种平衡被破坏，原因是髓系细胞的快速扩增，无法成熟为功能性炎症细胞（中性粒细胞、巨噬细胞、树突细胞），从而导致抗肿瘤淋巴样反应的下降。 癌症相关炎症伴随造血生长因子和细胞因子的产生，招募和激活髓系前体细胞，导致持续的慢性炎症。病理性的慢性炎症会改变髓系细胞的代谢，再加上肿瘤细胞竞争必需的营养物质，以及缺氧诱导的代谢重编程，可以加剧这种代谢变化。 病理性髓系细胞生成 （pathologic myelopoiesis） 髓细胞生成增强被认为是驱动炎症性疾病，包括癌症的主要因素，其特征是髓系祖细胞分化异常，具有抑制功能的功能障碍的髓系细胞积累，包括髓系抑制细胞(MDSCs)、耐受性树突细胞(tolerogenic dendritic cells，tDCs)和肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)。 造血干细胞(HSCs)在癌症慢性炎症刺激下持续激活，或在急性感染或者败血症情况下过度激活，以牺牲淋巴细胞生成为代价，导致不成熟和功能失调的髓系细胞扩张，包围和耗尽抗肿瘤免疫，从而导致局部和系统性宿主免疫抑制。这种病理性的髓系细胞生成导致促疾病表型。 这是一个悖论，髓系细胞生成是机体抗肿瘤，抗感染的有生力量，但是异常的病理性的髓系细胞生成，却是促进疾病，促进肿瘤的。 代谢-肿瘤相关炎症-髓系细胞-免疫** 肥胖和脂肪组织巨噬细胞通过释放各种炎症性细胞因子和脂肪因子，激活转录因子（PARs、RORC1/RORγ和C/EBPβ），激活影响HSC的增殖和分化，来促进髓系细胞的扩张。 肿瘤细胞可以促进髓系细胞的扩张，主要是通过释放一系列的因子（CSFs, IL-1, IL-17, 和PGE2），上调转录因子（p50NF-κB、STAT3和PU-1）。 癌细胞产生腺苷、VEGF和IL-10可诱导iDc的肿瘤促进表型(IL-10高/IL-12低)。然后将新出现的髓系细胞招募到肿瘤部位，获得抑制剂表型（TAM、TAN、MDSC和iDC），并建立免疫抑制的肿瘤微环境(TME)。 肿瘤微环
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平衡透析法测定血浆蛋白结合率原理
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
平衡透析法测定血浆蛋白结合率原理 药物血浆蛋白结合率（Plasma Protein Binding, PPB）即血液中与蛋白结合的药物占总药量的百分数，可以反映药物与血浆蛋白结合的程度。药物血浆蛋白结合率是药物在动物体内重要的药理学参数之一，影响着药物体内游离浓度进而影响药物的分布与排泄。药物在进入血液后与血浆蛋白会有不同程度结合，血液中游离药物的比例会影响其在体内吸收、分布、代谢和排泄的过程，与血浆蛋白结合的药物可能会有更长的半衰期和清除速率，因此测定血浆蛋白结合率对于理解化合物的活性以及组织分布有很重要的参考意义。 1 结合蛋白类型 血浆蛋白主要作为载体负责各类外源性和内源性分子在循环系统内的转运。其中参与小分子药物结合的主要有白蛋白、α-1-酸性糖蛋白（AAG）、球蛋白和脂蛋白，主要以白蛋白和α-1-酸性糖蛋白（AAG）为主。药物与蛋白的结合强弱主要与药物-蛋白亲和力、蛋白丰度相关。 2 血浆蛋白结合率常用测定方法 目前常用于药物血浆蛋白结合率测定的常用方法包括平衡透析法（Equilibrium Dialysis），超滤法（Utrafiltration Method），超速离心法（Ultracentrifugation Method），凝胶过滤法（Gel filtration）等。 其中，平衡透析法是基于药物结合的平衡原理来测定药物游离浓度最常用的方法，也是研究药物血浆蛋白结合率的经典方法。超滤法使用滤膜分立自由的药物和结合蛋白的药物，时间短，但确定点是药物容易结合到超滤过程使用的器械上，从而影响检测结果。平衡透析法虽然比超滤法耗时多一些，但它使用teflon镀层的平衡装置，能大大减少药物的非特异性结合，得到更精确的结果。目前，平衡透析法已有96孔板的高通量测试形式，可以实现同时测试大量候选药物的蛋白结合率。 平衡透析法 常用血浆：大鼠血浆，小鼠血浆，比格犬血浆，猴血浆，人血浆 分析方法：LC-MS/MS，GC-MS等 各种药物以一定的比率与血浆蛋白结合之后，在血浆中会同时存在结合型与游离型两种类型，游离性药物具有
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成年大小鼠心肌细胞分离操作方法的技术改进历程汇总
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
近年来，随着心脏电生理研究的不断深入和细胞分子生物学在心血管研究领域的不断普及，成年大小鼠心肌细胞已广泛用于成熟心肌细胞离子通道、蛋白免疫化学、心肌病及心肌梗塞等模型的实验研究中。成熟心肌细胞不仅在结构和功能上更接近在体细胞，并且成熟心肌细胞的体外培养模型可以排除成纤维细胞对实验结果的干扰。 图1.心脏结构图 心脏由心肌细胞和间质细胞组成。心肌细胞占心脏总体积的75%,但细胞数仅占心脏细胞总数的1/3。出生后心肌细胞丧失增值能力，是高度分化的终末细胞，主司收缩功能。间质细胞由成纤维细胞、血管平滑肌细胞、神经细胞及巨噬细胞等组成。成纤维细胞占间质细胞90%以上，成纤维细胞具有分泌功能，合成和分泌生物活性物质，调节自身胶原的产生及周围心肌细胞的形态结构和生理功能。 图2.心脏细胞组成 心肌细胞按生理功能分为两类:一类为工作细胞,包括心房肌及心室肌,胞浆内含有大量肌原纤维,因而具有收缩功能,主要起机械收缩作用。除此以外,还具有兴奋性、传导性而无自律性。另一类为特殊分化的心肌细胞,包括分布在窦房结、房间束与结间束、房室交界、房室束和普肯耶纤维中的一些特殊分化的心肌细胞,胞浆中没有或很少有肌原纤维,因而无收缩功能,主要具有自律性,有自动产生节律的能力,同时具有兴奋性、传导性。无论工作细胞还是自律细胞,其电生理特性都与细胞上的离子通道活动有关,跨膜离子流决定静息膜电位和动作电位的形成。 图3成年大鼠心肌细胞（来源：齐氏生物） 1969年Kono和Powell等先后应用酶解法对成年大鼠心肌细胞进行分离，1977年Jacobson成功进行了成年大鼠心肌细胞的培养。龙西林等于1991年率先在国内分离出成年大鼠心肌细胞。成年大小鼠心肌细胞的分离与培养难度较大，酶解法用于成年鼠心肌细胞的分离已有近五十年的历史，但至今仍无统一方法可循。目前
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徕卡课堂|即刻乳腺重建术：GLOW800增强现实技术的优势和受益
作者：德尔塔 日期：2022-04-14
Dr. Harold Chatel访谈 Dr. Harold Chatel是一名整形重建外科医生，现就职于法国巴黎的一家著名医院。他的专长之一是肿瘤后重建和即刻乳房重建。他就职的医院在Newsweek 2021排名当中获选为世界著名肿瘤医院之一，该排名同时也是对医院尖端设备和高级医学人才的一种认可。 在即刻乳腺重建手术中Dr. Harold Chatel使用GLOW800来检查吻合后的游离皮瓣血管化情况 肿瘤重建手术如即刻乳腺重建等，在很大程度上都要依赖于游离皮瓣技术。精细的显微外科技术和高质量的可视化是实现较好手术效果和优化患者康复的关键。 GLOW800是为支持外科医生工作而开发并申请专利的新型血管荧光成像技术。该产品能够以自然解剖颜色观察解剖结构并通过实时观察血管流动和组织灌注来获得全术野的观察。利用GLOW800增强现实荧光技术，外科医生可在肿瘤重建手术期间做出较有把握的决策。 访谈中的关键亮点 Dr. Chatel认为，内置于手术显微镜的GLOW800增强现实荧光技术“让游离皮瓣技术在精益求精的道路上再迈进了一步”。 在即刻乳腺重建当中，该技术可帮助外科医生： 通过吲哚菁绿（ICG）确认皮瓣存活性 拟定乳房切除术，确定可存活的皮肤和不可存活的皮肤 提高皮瓣分层的精度 避免脂肪坏死等并发症 因此术后恢复期往往时间更短，让医生和患者都享受到较大受益。 此外，GLOW800增强现实荧光在手术室（OR）中操控也非常便捷： 图像可在高清4K显示器上显示 无需关灯，无需改变手术环境 该技术增强了教育培训的效果，允许手术室中的每个人在显示器的2D或3D图像上轻松跟进手术的每一步 了解更多：徕卡显微
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