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食品中真菌毒素的残留量的测定——液相色谱- 串联质谱法
作者：德尔塔 日期：2022-04-21
食品安全分析工作流程 赛默飞生命科学质谱不仅拥有深厚悠久的技术传统，而且不断锐意创新。在全系TSQ® 三重四极杆质谱仪上都使用了可以拟合出教科书般完美理论电场的真正的共轭双曲面的四极杆质量分析。自1980 年赛默飞推出世界上第一台三重四极杆MS/MS (TSQ®) 质谱仪以来，TSQ® 三重四极杆质谱仪广泛应用于环保、农业、检疫、食品安全等方面的快速分析测试，完全可以胜任农作物、畜禽产品、奶制品及相关加工食品中大批量样品日常法规检测项目分析测试，如食品中农药残留、兽药残留、真菌毒素、添加剂、营养强化剂及有机污染物等项目，帮助您轻松应对日益严苛的法规检测要求。 TSQ® 三重四极杆质谱仪与赛默飞食品安全检测策略 概要 真菌毒素是由产毒真菌在适宜的环境条件下产生的有毒代谢产物。日常检测样品涉及奶制品、坚果、饲料等。本文参考NY/T 1970-2010、NY/T 2071-2011、SN/T 3136-2012，开发了快速检测18 种真菌毒素残留量的仪器方法，外标法定量。 前处理 相关试剂材料、标准品配置和储备、样品前处理方法，请参考上述标准，相关仪器方法请参考本文。（TSQ 三重四极杆质谱简明应用手册--食品安全检测） 仪器 TSQ 三重四极杆液质联用系统配备有超高压液相系统。 液相条件 质谱条件 SRM 条件 结论 上述国标检测方法中，黄曲霉毒素、赭曲霉毒素、伏马菌素、玉米赤霉烯酮、脱氧雪腐镰刀菌烯醇等在不同基质中的检出限为0.5-50.0 μg/kg。本方法完全能够满足国内和国际法规标准，对于常规法规检测方法灵敏度、重现性的要求。
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TSQ 系列三重四极杆质谱与法规危险物筛查
作者：德尔塔 日期：2022-04-21
TSQ 系列三重四极杆质谱不仅可以完成法规检测中一系列大规模定量工作，还可以在定量的同时完成目标危险物筛查定性确认工作。TSQ 系列三重四极杆质谱具有独特的QED 功能，只需一次进样，可以在得到高灵敏度的SRM 定量结果的同时获得碎片信息丰富的二级全扫描质谱图，通过质谱库检索，进行化合物确认。 什么是QED 功能？ QED 是quantitation enhanced data-dependant 的缩写。当特定的SRM 扫描响应达到设定阈值时，就会触发QED 扫描功能，Q2 碰撞池的碰撞能量使用RER （Reversed Energy Ramp）即反相阶梯能量，碰撞能量由高到低程序降低，同时Q3对化合物的碎片进行全扫描，这样能够获得一张从低质量端到高质量端碎片信息丰富的二级全扫描质谱图。如图1 所示。图2（A）和（B）是饲喂过三聚氰胺污染的饲料的catfish（鲶鱼）肉中三聚氰胺残留量分析，并且通过QED 功能获得二级谱图，通过谱库检索，进行定性确认。图3 是芦笋基质中添加水平为2 μg/kg 的苯线磷（fenamiphos），轻松触发QED/RER 扫描，获得二级全扫描谱图，通过搜库确认定性检测结果。 QED/RER 功能使TSQ 系列三重四极杆质谱可以完成同时定量定性的工作，即使是复杂基质中低残留量的化合物，也可以轻松触发QED/RER 扫描，获得碎片信息丰富的二级全扫描谱图。QED/RER 功能是一个可靠的同时定量定性的功能，可以排除假阳性结果，提高定量定性工作的可靠性。 图1 QED/RER 功能的示意图 图2（A）和（B） 分析catfish（鲶鱼）肉中三聚氰胺残留量，并且通过QED 功能获得二级谱图，通过谱库检索，进行定性确认。 图3 芦笋中添加水平为2 μg/kg 的苯线磷（fenamiphos），轻松触发QED/RER 扫描，获得二级全扫描谱图，通过搜库确认定性检测结果。 相关链接：（TSQ 三重四极杆质谱简明应用手册--食品安全检测）
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赛默飞--关于质谱学的知识问答
作者：德尔塔 日期：2022-04-21
什么是质谱？离子源？质量分析器？ 质谱是一种测量离子质荷比（m/z）的分析仪器，质谱仪器一般由样品导入系统、离子源、离子传输组件、质量分析器、检测器、数据处理系统等部分组成，如图1 所示。 离子源是使待测物质转化为带电离子的部件，根据离子化原理不同，分为大气压电离电喷雾离子源（ESI）、大气压电离化学电离离子源（APCI）等等。 质量分析器是质谱的核心部件，可以产生不同形状的电场，利用这些不同形状的电场将离子源中生成的样品离子按m/z 的大小分开。质量分析器分为常规分辨率的质量分析器和高分辨率的质量分析器。常规分辨率的质量分析器包括四极杆、离子阱。 图1 质谱示意图 什么是共轭双曲面的四极杆质量分析器？ 1950 年代，德国物理学家Wolfgang Paul 申请的专利944,900 (1956) 指出四个共轭双曲面围成的电场可以筛选离子。四极杆质量分析器分为圆柱形四极杆、共轭双曲面四极杆，如图 2 所示。共轭双曲面的四极杆，对于精密铸造工艺要求非常高，需要使用精密的三坐标磨床，对于铸造四极杆的合金材料也有很高的要求，所以，材料和加工成本比圆柱形四极杆要高很多。但是，只有共轭双曲面的四极杆才能产生教科书般的完美理论电场，而圆柱形的四极杆产生电场与理论电场存在1-2% 偏差。共轭双曲面四极杆是可变分辨率的四极杆质量分析器，但圆柱形四极杆分辨率不可变。 图 2 共轭双曲面四极杆(Hyperquand) 与常规圆柱形四极杆 ( Round rods ) 什么是三重四极杆质谱？ SRM 检测模式？ H-SRM 的检测模式？ 三重四极杆质谱常被形象的简写为QqQ，如图 3 所示，第一重Q1 和第三重Q3 是质量分析器，第二重90 度弯曲的四极杆是Q2碰撞池，90 度的弯曲碰撞池是一个降低中性噪音的设计，目前市场上高端三重四极杆质谱的碰撞池都采取弯曲的结构。三重四极杆质谱是一组经典的用于定量的串联质谱组合，最常用于定量的检测模式就是SRM 检测模式（选择反应检测扫描模式），原理就是Q1 选择特定母离子，
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单克隆抗体的生产
作者：德尔塔 日期：2022-04-21
产生针对特定抗原的大量靶向抗体的过程。单克隆抗体是通过称为杂交瘤的特定细胞的多个/相同拷贝产生的。为了产生杂交瘤细胞，需要将2个细胞融合，以便将2个细胞的特征结合到1个细胞中。其中一种细胞是生产细胞抗体，它是来自实验室小鼠的B淋巴细胞，另一种是肿瘤细胞，称为骨髓瘤。肿瘤细胞具有无限生长的能力，并且以超过正常细胞生长的速度生长。Laboratroy生产的杂交瘤细胞比正常的抗体生产细胞复制快得多，并且单个杂交瘤无限期地生产特异性抗体。 杂交瘤细胞产生初由B淋巴细胞产生的特异性单克隆抗体。原始B淋巴细胞将产生单克隆抗体，这取决于在收获B淋巴细胞之前注射入小鼠的抗原种类。一个小例子是，如果给老鼠注射某种病毒，老鼠体内的B淋巴细胞会产生特定的病毒抗体。与肿瘤细胞融合产生杂交瘤，导致产生针对特定病毒的单克隆抗体。 杂交瘤细胞被置于能帮助它们生长并产生大量单克隆抗体的培养基中。培养单克隆抗体有两种方法，一种是在实验室烧瓶中培养，即体外培养，另一种是在小鼠的胃壁中培养。将杂交瘤注射到小鼠体内是获取单克隆抗体的常见方法。该方法通过将来自用所需抗原免疫的小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞混合来完成。骨髓瘤细胞需要失去合成HGPRT酶(次黄嘌呤-鸟嘌呤-磷酸核糖转移酶)的能力，该酶使细胞能够利用细胞外的次黄嘌呤源作为前体来合成嘌呤。细胞有另一种合成嘌呤的途径，因此缺乏HGPRT对细胞来说不是问题，但当细胞暴露于氨基蝶呤时，它们不能利用这种其他途径，完全依赖HGPRT生存。总而言之，未融合的骨髓瘤细胞不能生长，因为它们缺乏HGPRT，未融合的正常脾细胞也不能生长，因为它们的寿命有限。杂交瘤细胞无限生长，因为脾细胞伴侣提供HGPRT，而骨髓瘤伴侣是永生的。 步是将细胞融合混合物转移到含有次黄嘌呤、氨基蝶呤和嘧啶胸苷的HAT培养基中。2钕步是检测每种培养物的上清液，以确定产生所需抗体的位置。必须从每个抗体阳性培养物中分离出单细胞，并对其进行传代培养，这代表其抗体
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微生物培养基配置与灭菌方法及步骤介绍
作者：德尔塔 日期：2022-04-21
微生物培养基是供微生物生长、繁殖、代谢的混合养料。由于微生物具有不同的营养类型，对营养物质的要求也各不相同，加之研究的目的不同，所以培养基的种类很多，使用的原料也各有差异，但从营养角度分析，微生物培养基中一般含有微生物所必需的碳源、氮源、无机盐、生长素以及水分等。另外，培养基还应具有适宜的pH值、一定的缓冲能力、一定的氧化还原电位及合适的渗透压。为了达到特定要求的研究，需要进行培养基配制和灭菌，那么微生物培养基该如何配制与灭菌呢? 1.配制溶液 向容器内加入所需水量的一部分,按照培养基的配方,称取各种原料,依次加入使其溶解,最后补足所需水分，对蛋白胨、肉膏等物质,需加热溶解,加热过程所蒸发的水分,应在全部原料溶解后加水补足。 配制固体培养基时,先将上述已配好的液体培养基煮沸,再将称好的琼脂加入,继续加热至完全融化.并不断搅拌,以免琼脂糊底烧焦。 2.调节pH值 用pH试纸(或pH电位计、氢离子浓度比色计，BLBIO-2020pH控制器来检测)测试培养基的pH值,如不符合需要,可用10%HCl或10%NaOH进行调节,直到调节到配方要求的pH值为止。 3.过滤 用滤纸、纱布或棉花趁热将已配好的培养基过滤.用纱布过滤时,**折叠成六层,用滤纸过滤时,可将滤纸折叠成瓦棱形,铺在漏斗上过滤。 4.分装 已过滤的培养基应进行分装.如果要制作斜面培养基,须将培养基分装于试管中.如果要制作平板培养基或液体、半固体培养基,则须将培养基分装于锥形瓶内。 分装时,一手捏松弹簧夹,使培养基流出,另一只手握住几支试管或锥形瓶,依次接取培养基。分装时,注意不要使培养基粘附管口或瓶口,以免浸湿棉塞引起杂菌污染。 装入试管的培养基量,视试管和锥形瓶的大小及需要而定.一般制作斜面培养基时,每只15×150毫米的试管,约装3～4毫升(1/4～1/3试管高度),如制作深层培养基,每只20×220毫米的试管约装12～15毫升。每只锥形瓶装入的培养基,一般以其容积的一半为宜。 5.加棉塞 分装完毕后,需要用棉塞堵住管口或瓶口。
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miR-28-5p-IL-34-巨噬细胞反馈回路调节肝癌转移
作者：德尔塔 日期：2022-04-21
周俭教授揭示肝癌转移新机制 复旦大学（附属中山医院）肝癌研究所周俭教授研究团队在2016年5月正式发表《Hepatology》（肝脏病学）杂志的文章"miR-28-5p-IL-34-Macrophage Feedback Loop Modulates Hepatocellular Carcinoma Metastasis"（IF=11.19）。转移是恶性肿瘤最显著的生物学特征之一，也是肿瘤患者死亡的主要原因。肿瘤的侵袭转移是肿瘤细胞、宿主和肿瘤微环境之间一系列复杂的序贯连续过程。microRNA（miRNA），通常含有22个碱基的短链非编码RNA，通过转录后水平调节功能基因的表达，发挥“癌基因”或“抑癌基因”的功能。周俭教授课题组通过实施一套完整缜密的研究流程，对参与肝癌转移的关键miRNAs进行筛选并对其功能展开系列研究。首先，研究人员在具有不同转移潜能的人肝癌细胞株进行RNA-seq筛选，发现肝癌转移关键miRNA：miR-28-5p表达异常，且与细胞系转移潜能呈显著负相关；同时发现miR-28-5p只是体内具有促进肝癌转移的作用。进一步，运用TargetScan生物信息学预测结合细胞因子/趋化因子PCR芯片进行筛选验证，发现miR-28-5p的重要靶基因白介素34 (Interleukin-34，IL-34)（请见图一）。既往研究表明IL-34与单核细胞表面表达的集落刺激因子受体CSFIR结合，刺激巨噬细胞活化。本次研究发现，IL-34在体外激活FAK和ERK1/2信号通路，促进巨噬细胞增殖和趋化。在动物实验中，肝癌细胞中IL-34的上调促进肿瘤细胞的生长以及肺转移，增加瘤内巨噬细胞浸润。值得注意的是，研究者发现巨噬细胞分泌细胞因子TGF-β1形成反馈回路参与miR-28-5p对IL-34的调控网络（请见图二）。最后，肝癌样本中免疫组化分析表明，瘤组织中miR-28-5p 与IL-34表达水平显著负相关，与巨噬细胞的浸润、患者总生存期短以及肿瘤患者的复发显著相关。多变量分析显示，miR-28-5p低表达/IL-34过表达或与瘤内巨噬细胞同时存在，都是一个独立的整体生存和癌症复发预后指标（请见图二）。该研究成果创造性地绘制出肝癌细胞中microRNA与肿瘤相关巨噬细
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关于GNT磁珠能否回收利用的三种情况分析
作者：德尔塔 日期：2022-04-21
关于GNT磁珠能否回收利用的三种情况分析 文章来源：洛阳吉恩特生物科技有限公司 磁珠法核酸提取在当前生物科技行业内已经受到了越来越广泛的关注，很多公司都开始从传统的核酸提取方式向自动化磁珠法转移，生物磁珠也自然成为关键技术的核心。 最近有很多老师询问，GNT系列的生物磁珠是否可以回收利用。从理论上来说，磁珠在整个使用过程中，只要性质和结构不发生变化，与目的物质（核酸或蛋白）的结合与释放是可逆的。通过充分的洗涤，是可以回收后再次利用。但在实际操作中，关于这个问题需要分情况考虑，主要是根据磁珠使用的目的以及所用样本进行判断。 情况一：磁珠用于检测目标物质 通常来讲，如果是用于检测目标物质的磁珠，不推荐回收利用，因为磁珠使用过后，无法避免的会携带上一样本的残留物质，如核酸、蛋白以及其他杂质，虽然通过洗涤的办法可以去除大部分的残留，但并不能做到百分之百去除，而哪怕残留百万分之一的物质，回收后重复使用的磁珠也可能造成假阳性检测。尤其是在一些高灵敏度的检测实验中，因为每一个样本的来源是不同的，且检测结果要求十分精准，就不能重复使用磁珠。 情况二：磁珠用于富集原料单一的目标物质 如果是用于富集目标物质的磁珠，在原料单一重复，产物无需担心差异性，杂质相对较少，生产流程简单的情况下，可以考虑回收后重复利用。比如想用磁珠法富集纯化发酵液中的酶蛋白。因所有样本都是相同工艺的发酵液，目的产物都是同种酶蛋白，重复使用中不存在异源污染，就可以将磁珠回收后重复使用。但这种重复利用不是可以无限次的。因为每次使用，杂质都会残留占据一定的功能基团，随着重复次数的增加，磁珠的有效位点越来越少，吸附效率下降，纯化后的产物纯度降低。严重时会浪费原料且无法得到合格的产品，所以即使可以重复使用的磁珠，重复使用的次数也是有限的。 情况三：磁珠的结构或性质发生了改变 还有一些实验，磁珠上修饰的部分基团会随产物断裂丧失，磁珠的功能
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气相色谱三重四级杆质谱TSQ 8000 用于纺织品中20 种农药残留的检测分析
作者：德尔塔 日期：2022-04-21
朱曼洁 赛默飞世尔科技（中国）有限公司 关键词 TSQ 8000；农残检测；纺织品。 1. 前言 目前，对于多农残检测分析多集中在食品安全和环境安全的范畴，但是随着科学的发展，生活的进步，我们开始放眼于那些我们不曾注意但是与我们又息息相关的领域。例如，在天然植物纤维的种植过程中会用到多种农药( 如杀虫剂、除草剂等)，在纺织品加工过程中绝大部分被除去，但仍可能有部分残留在最终产品上。虽然农药的危害因其毒性和残留量有关，但其则极易被人体皮肤吸收并引发不良反应。目前，国际上还没有针对纺织品中农药残留的检测技术和通用的分析方法，但是随着检测技术的逐步发展，检测纺织品的农残含量可能会成为又一个新的关注的课题。近年来，也有越来越多的文章开始关注纺织品中农残的检测，涉及到多种检测方法，常用气相检测方法或者气相色谱单四极杆气质联用仪检测，应用三重四极杆进行检测的方法却不是很多（1-3）。 本实验用TSQ 8000 结合高惰性的弱极性色谱柱进行多农残的分析检测，对生态纺织织物中的多种农药残留进行了测定，为纺织品农残检测提供了有效手段得到了非常出色的结果。方法的线性范围从20ppb 到400ppb，50ppb基质加标样品连续3 针进样的RSD% 在1.82%-7.63% 之间。 2 实验部分 2.1 仪器和色谱柱 TSQ 8000 三重四极杆气相色谱质谱联用仪（赛默飞世尔科技，美国），TG-5MS（30m*0.25mm*0.25um），高惰性的弱极性色谱柱。 GC 方法： 传输线温度：300°；进样口：250°，不分流加压进样，不分流时间1min，加压压力120kPa，加压时间 1min；载气：恒流，1.2ml/min；柱温箱：60°起始，以20°/min 升至200°，保持1min，再以25°/min 的速率升至250°，保持2min，再以15°/min 的速率升至300°，保持5min。进样量：1ul。 质谱方法： 离子源温度：280 ºC，灯丝电流为20uA，碰撞气1.0mTorr， 采用T-SRM 方法，无需分时间段，各化合物离子对如下表所示： 表1. 20 种农残的离子对信息及保留时间 2.2 前处
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气相色谱- 三重四极杆质谱联用技术测定农药残留的方法验证
作者：德尔塔 日期：2022-04-21
Laszlo Hollosi, Katerina Bousova, Michal Godula 赛默飞世尔科技, 食品安全应用中心，德国Dreieich 关键词 TraceFinder，TSQ8000，气相色谱，GC，GC-MS/MS，农药残留，QuEChERS，三重四极杆 1.方法示意图 2. 前言 食品中农药残留的分析是实验室日常工作中最重要和最具挑战性的任务之一。欧洲法规规定了植物和动物来源的各种产品中农药的最大残留限量（MRL），是目前世界上最严格的法规（欧洲法规396/2005 和指令2006/125/EC）。这些法规要求一些特定的食品基质有很低的定量检出限（LOQ），针对这些基质的分析是一个很大的挑战。目前已经有各种各样的GC 和HPLC 方法结合各种样品前处理和净化技术用于多种农药残留的测定。近年来，QuEChERS方法被广泛的应用在水果和蔬菜的样品前处理，但是随着对测定方法的灵敏度和准确度的要求越来越高，同样需要仪器生产厂商不断进步。 本文方法中样品前处理采用QuEChERS 试剂盒，样品测定采用最新开发的Thermo ScientificTM TSQTM 8000 PesticideAnalyzer 系统，并采用Thermo ScientificTM TraceFinderTM 软件进行快速的数据分析。本文介绍了完整的多农药残留的测定方法的内部方法验证结果，以及对方法性能参数的评估。 3. 范围 本方法验证研究的目的是证明一种能应用在一些有代表性的基质（草莓、小麦粉和韭菜）中的多农药残留（大约140 种优先的农药）的日常分析的完整工作流程及解决方案（由Thermo Scientific 化学品、消耗品和仪器提供）。此方法符合现行法规的要求，方法的检出限（LOQ）与MRL 值一致，具有良好的灵敏度1-4。 4. 原理 取出部分事先均质好的样品（对一些不稳定的化合物，建议在低温下研磨），采用标准的QuEChERS 方法（萃取和净化）进行样品前处理，然后进样到TSQ 8000 Triple-Stage Quadrupole GC-MS/MS 系统5,6。 现成的QuEChERS 试剂盒包括萃取管和净化管， 以及相关的样品前处理操作方法（赛默飞世尔科技，英国Runcorn）。农药残留的鉴定是基于保
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实验室真空抽滤装置和其他行业同类产品的区别
作者：德尔塔 日期：2022-04-21
真空抽滤装置是一种无论在实验室、工业生产、医用还是民用领域都用途非常广泛的设备。很多实验室用户在选择真空抽滤装置时都存在较大的疑惑，面对繁杂的型号和差异极大的价格，往往无从下手，甚至购买了一些工业、民用领域的产品，在使用一段时间后才发现并不合适实验室使用 。本文将简要介绍实验室使用的过滤装置和其他行业使用的产品有哪些差异： 单次过滤量：单次样品过滤量将决定过滤器的容量大小，在工业生产等领域，往往单次过滤样品量都要在几十升甚至上百升，所以过滤器体积较大。而实验室进行检测、溶剂除菌或澄清等用途，一般过滤量都比较小。如果使用工业用途的过滤装置往往会造成样品损耗过大，使用过程也极为不方便，浪费实验室有限的室内空间。尤其一些实验室客户需要过滤的样品非常珍贵，价格高昂，需要实验室尺寸极小的过滤膜和小容积的抽滤瓶，才能保证不过度浪费珍贵的样品，此时可以推荐使用圣斯特FU-M1真空过滤瓶，适合直径25mm的过滤膜，非常适合昂贵样品的抽滤。 过滤目的种类多：一般来说过滤最终需要达到固液分离的目的，一般民用和工业领域较多是进行过滤以出去浆料中的杂质。但实验室过滤种类非常繁杂，包括澄清或除菌试剂用于后续的使用、过滤出样品中的固体或悬浮物进行称重检测、将微生物或细菌截留在滤膜上进行培养等等。不同的过滤目的往往对于过滤装置的结构、材质、容量、抽滤泵类型等等各方面都有不同要求。例如客户在进行培养基除菌过滤时，为了保证过滤好的样品不受二次污染，需要使用的过滤漏斗应当能直接连接带有瓶盖的试剂瓶，如果使用一般过滤装置，过滤完后还需要倒出就可能会再污染。所以针对此类客户圣斯特特别设计R300-500培养基除菌过滤装置，可以直接连接蓝盖试剂瓶，方便过滤完之后的滤液保存。 过滤装置的材质：正如上文所提到，由于过滤实验室过滤样品种类多，可能遇到水溶液，有机容积，也有可能遇到腐蚀性极强的样品，这可能对于过滤器和泵的材质都有不要求，所以
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人（Human）前白蛋白（PA）ELISA检测试剂盒使用说明书
作者：德尔塔 日期：2022-04-21
试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断 人（Human）前白蛋白（PA）ELISA检测试剂盒使用说明书 检测原理 试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被前白蛋白（PA）抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的前白蛋白（PA）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。 样品收集、处理及保存方法 1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。 2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。 3. 细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。 4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。 5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。 自备物品 酶标仪（450nm） 高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL 37℃恒温箱 操作注意事项 试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。 实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。 浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白；按照说明书操作时样本已经稀释5倍，最终结果乘以5才是样本实际浓度。 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。 所有液体组分使用前充分摇匀。 试剂盒组成 名称 96孔配置 48孔配置 备注 微孔酶标板 12孔×8条 12孔×4条 无 标准品 0.3mL*6管 0.3mL*6管 无 样本稀释液 6mL 3mL 无 检测抗体-HRP 1
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PCR实验原理及反应要素介绍
作者：德尔塔 日期：2022-04-21
聚合酶链式反应 一、发展简史 聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术，它可看作是生物体外的特殊DNA复制，PCR的最大特点，是能将微量的DNA大幅增加。因此，无论是化石中的古生物、历史人物的残骸，还是几十年前凶杀案中凶手所遗留的毛发、皮肤或血液，只要能分离出一丁点的DNA，就能用PCR加以放大，进行比对。这也是"微量证据"的威力之所在。 1983年美国Mullis首先提出设想，1985年由其发明了聚合酶链反应，即简易DNA扩增法，意味着PCR技术的真正诞生。 二、实验原理 类似于DNA的体内复制。 首先待扩增DNA模板加热变性解链，随之将反应混合物冷却至某一温度，这一温度可使引物与它的靶序列发生退火，再将温度升高使退火引物在DNA聚合酶作用下得以延伸。这种热变性-复性-延伸的过程就是一个PCR循环。 PCR过程是由变性，退火，延伸3个步骤组成的不断重复的过程。标准的PCR过程分为三步： 1.DNA变性（90℃-96℃）：双链DNA模板在热作用下，氢键断裂，形成单链DN 2.退火（复性）（40℃-65℃）：系统温度降低，引物与DNA模板结合，形成局部双链。 3.3.延伸（68℃-75℃）：在Taq酶（在72℃左右最佳的活性）的作用下，以dNTP为原料，从引物的5′端→3′ 端延伸，合成与模板互补的DNA链。 每一循环经过变性、退火和延伸，DNA含量既增加一倍。 三、PCR反应要素： DNA模版：可以是双链、单链、提取染色体的DNA、克隆的质粒DNA， 引物：一对寡聚DNA，分别与模板两侧的3’端序列互补，可使DNA序列得到扩增 DNA聚合酶（TaqDNA聚合酶）：催化DNA合成， 缓冲液：提供DNA合成反应所需的PH,离子强度等环境 4种单核苷酸：dNTP,提供DNA合成原料 实验材料 PCR扩增仪、PCR反应管、PCR离心管、移液器、凝胶电泳设备、冰盒、离心机 模板、PCR引物、TaqDNA聚合酶、dNTP反应缓冲液、Mg2+、ddH2O。 PCR反应体系 以DNA为模板的反应体系： 模板：DNA102~105拷贝
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三重四级杆气质联用法测定食品和生物体中多氯联苯（PCBs）的分析方法研究
作者：德尔塔 日期：2022-04-21
Dirk Krumwiede, Hans-Joachim Huebschmann, Thermo Fisher Scientific, Bremen, Germany 关键词 TSQ Quantum XLS，dl-PCBs, 食品安全, 同位素稀释,PCBs,SRM,WHOPCBs 简介 多氯联苯 (PCBs) 是一类耐用性极强的工业化学品，主要用于变压器、电容器、油墨、涂料、农药、粉尘控制，以及绝缘液体的制造。据估计，全球的PCBs 总产量已达一百五十万吨。在1930 至1977 年间，美国是多氯联苯单一最大生产国，生产了超过六十万吨的PCBs。欧洲区紧随其后，至1984 年的产出为四十五万吨。 多氯联苯包括209 种不同的单体（同系物），对健康有不同的影响。虽然美国早在1977 年就禁止生产PCBs，用PCBs 制造的产品却仍然在使用。由于多氯联苯在环境中降解缓慢，所以它们可以被气流带到了地球的各个角落。PCBs 已经污染了地球上所有动物及人类的身体。 《关于持久性有机污染物的斯德哥尔摩公约》将PCBs 列为世界上已知对人体和环境有害的十二种最危险的化合物之一。尽管体内二恶英水平在缓慢稳定的下降，反映出多种防止扩散的努力总的来说取得了一定效果，然而PCBs 污染水平在全球来讲预计不会发生变化 (2007 东京二恶英研讨会)。对二恶英水平的监测作为斯德哥尔摩公约的工作项目还将继续多年，会涉及大量样品的采集，尤其是对于危险的类二恶英PCBs（dl-PCB) 来说。值得一提的是共面dl-PCB，即非间位取代的PCB，由于具有与2,3,7,8-TCDD 类似的毒性，成为食品安全控制的焦点。dl-PCBs 也对样品毒性当量（TEQ）值有显著贡献。 本应用文章详细记录了一种使用Thermo Scientific TSQ Quantum XLS 三重四极杆质谱仪，对环境、食品和生物样品中的PCB 进行定量分析的快速、可靠，并且具有高选择性的痕量筛查方法。本方法的分析策略近似于美国国家环境保护局（USEPA）已建立的方法1668A。 由于分析响应有差异，每种氯代物都是根据各自同位素标记的内标化合物进行定量。这样保证了最佳的分析准确性和同类化合物相似性。内标化合物用13C
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Multiple studies with a single experiment: The Power of Quantitative Multiplexing
作者：德尔塔 日期：2022-04-21
Multiple studies with a single experiment: The Power of Quantitative Multiplexing Overview Part1：Introduction An overview of multiplexed isobaric labeling, the basics of Tandem Mass Tags and the SPS MS3 technique Part2：Sample Prep A summary of the steps involved for a complete TMT workflow including labeling and fractionation Part3：Instrument Configuration Getting started with building an instrument method on the Orbitrap Tribrids and Benchtops using nanoHPLC Part4：Data Analysis Data analysis of SPS MS3 data using Proteome Discoverer 2.1 workflow Introduction Moving Beyond Qualitative Proteomics Problem: Quantitative information about expression level of a protein is essential to understanding its biological role in response to change or disease. Add another dimension to any experiment by determining the relative abundance of each identified protein Alterations in expression can reveal a meaningful biological pattern not apparent in a pure identification experiment, which provides only a list of detected proteins Label Free Quantitation Several well established pipelines for the quantitation of label-free data from a data dependent (or DDA informed DIA experiment) exist. Among these: Label Free *Multiple LC/MS Runs *Compare a few conditions *Requires replicate sample material Problem: Requires multiple LC/MS analyses and is thus sample intensive A differential analysis of 2 biological conditions with 3 technical replicates each would require six LC/MS injections and analyses: Problem: Substantial instrument time to compare
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dek35编码PPR蛋白影响玉米籽粒的线粒体nad4基因内含子1的顺式剪接和发育
作者：德尔塔 日期：2022-04-21
农林RNA测序助力玉米籽粒dek35突变体研究 该研究与前几天RNA测序在玉米籽粒dek2突变体中分子机制的研究应用相似，研究的主角依然是上海大学生命科学学院，该工作主要由陈鑫泽博士完成。研究对象由dek2突变体变为了dek35突变体。 研究思路 研究结果 dek35突变表现出发育迟缓的表型 本研究中dek35突变来源于美国玉米种质中心，编号为5605F。其表现出小籽粒，并且顶部种皮中空（图1）。突变体百粒重只有野生型20%（dek2是35%）（图1）。总淀粉、直链淀粉和总储藏蛋白含量没有显著变化，醇溶蛋白在突变体中显著下降。亚细胞层面观察发现，胚乳转移层细胞（BETL）在突变体中发育迟缓，表明籽粒发育受到抑制（图1）。 dek35基因克隆 研究人员对dek35突变体进行图位克隆，将其定位于玉米1号染色体254,244,136 bp to 289,337,516 bp大约35M区段内。由于该突变来源于Mutator突变系，研究人员怀疑其可能含有Mu的插入（图2）。对其进行Mu标签分离表明，一个Mu标签存在于35M的区段内，插入在了GRMZM2G066749起始密码子下游30bp处。该结果同样通过等位测试验证（图2）。 dek35编码了一个P-type PPR蛋白 研究人员通过将GRMZM2G066749蛋白编码序列在数据库中比对后发现，该基因编码了一个P-type PPR蛋白（图2）。 dek35在籽粒发育过程中持续性表达 研究人员通过定量PCR以及Western Blot杂交发现，dek35是一个全组织表达的基因（图3）。 dek35定位于线粒体中 将dek35连接入荧光表达载体，使其与黄色荧光蛋白YFP融合，并对其共聚焦显微镜亚细胞定位研究。结果发现，dek35定位于线粒体内嵴（图4）。 dek35影响nad4内含子1的剪切 由于PPR蛋白可以与对应的线粒体或者叶绿体RNA互作，因此研究人员对dek35突变体胚乳以及野生型胚乳的线粒体转录本进行了分析。研究人员使用特异的引物扩增了线粒体cDNA，在35个基因中，只有nad4的成熟转录本在dek35中显著下降（图5）。进一步研究发现，nad4内含子1在dek35中显著下降导致了全长成熟
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