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培养细胞时如何正确的使用胎牛血清
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
牛血清是细胞培养中常用的天然培养基，与合成的基础培养基配合使用，一般添加使用量在10~20%，主要作用是提供细胞生长所需的营养物质、激素和生长因子等。 养过细胞的小伙伴们应该都知道：血清，由于其复杂的内在成分和难以控制的外界因素，它既是细胞生长的营养，也是细胞死亡的“致命du药”，当我们废寝忘食的，呕心沥血的，鞠躬尽瘁的养着细胞同时，也极有可能因为一时的疏忽和大意选择了品质不好的血清，导致珍贵的细胞意外身外，一切归零，不得不重头开始! 血清质量的差异性大 市场上各种血清产品鱼龙混珠，一不小心，你可能就使用了品质不好的血清。 血清按照采血时间可分为胎牛血清、新生牛血清和小牛血清，三者的优劣顺序为：胎牛血清>新生牛血清>小牛血清。 一般细胞建议使用胎牛血清培养，部分细胞可使用新生牛血清培养，小牛血清则不建议用于细胞培养。 血清在生产中受采血来源，条件和生产工艺等的影响，质量差异较大，即使相同厂家不同批次的血清都会有差异;另外不同种类的细胞对血清的适应也有不同，这可能与血清中所含的生长因子有关，所以血清在使用之前应提前验证一下对所培养的细胞生长的促进作用。 血清的正确保存及使用指南 1）保存：胎牛血清一般在-20℃以下冷冻保存，使用之前应先放到2~8℃冰箱过夜溶解，不建议直接放到室温或37℃水浴溶解(升温过快会导致血清中蛋白质大量沉淀，影响血清质量);若一次使用量不多，可溶解后分装至小包装冻存，避免反复冻融。血清解冻后在2~8℃保存时间一般不超过一个月。 2）灭活：一般血清使用时不需要灭活。灭活的作用是消除血清中的各种补体成分，但事实证明血清灭活之后会产生大量的沉淀，会对血清的营养物质造成较大破坏，对细胞的生长不利。 3）沉淀：血清中的沉淀一般为析出的纤维蛋白，另外新生牛血清中各种蛋白含量明显偏高，溶解时较易产生大量沉淀。血清中出现沉淀一般不会影响血清质量，并且升温至37℃时会溶解(不建议加热血清);若沉淀量较多，可在4
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核酸提取与纯化整体解决方案
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
核酸提取与纯化整体解决方案 核酸是由许多核苷酸聚合成的生物大分子化合物，是生命最基本的物质之一。核酸存在于所有动物细胞、植物细胞、微生物内。生物体内的核酸常与蛋白质结合形成核蛋白。核酸主要包括RNA（核糖核酸）和DNA(脱氧核糖核酸)。核酸提取的原则首先保证核酸一级结构的完整性，其次要排除其它分子的污染。 核酸提取大致分为3大部分：破碎、提取、纯化。核酸提取是其中很重要的一个环节，核酸模板的质量很大程度上决定了下游PCR检测结果的准确性。 在目前的分子诊断实验室当中，磁珠法提取和硅胶膜离心柱法提取是的两种提取方法。那么，这两种提取方法各有什么特点？提取流程与原理又是什么呢？ 磁珠法特点主要体现在： 1、 能够实现自动化、大批量的实验操作。 2、操作简单，用时短，整个流程大约可以在30分钟内完成。 3、安全无毒，符合环保理念。 4、磁珠与核酸的特异性结合使得提取的核酸纯度高、浓度大。 磁珠法吸附原理： 运用纳米技术，对超顺磁性纳米颗粒的表面进行改良和表面修饰后，制备成超顺磁性氧化硅纳米磁珠。该磁珠能在微观界面上与核酸分子特异性地识别和高效结合。核酸结合到磁珠上主要依靠静电作用、疏水作用和氢键作用。在盐酸胍、异硫氰酸胍和外加磁场的作用下，能从血液样本中分离出DNA，并洗去非特异性吸附的杂质，得到纯化后的DNA，可应用于实验室检测。磁珠法提取的原理，具有传统DNA提取方法的优势，可以应用在血液、组织、拭子、鼻咽分泌物等样本之中。 磁珠法核酸提取流程： Yeasen Auto-Pure32A全自动核酸提取仪 产品描述 Auto-Pure32A核酸提取纯化仪是通过使用磁珠法提取纯化核酸的设备，具有自动化程度高，提取速度快，结果稳定，操作简便等优点。使用96 孔深孔板试剂盒，可同时纯化1-32个样品。搭配不同种类的磁珠核酸试剂组，可以快速提取动植物组织、血液、体液、刑事检体等样品中的DNA
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关于TFF浓缩EV的相关知识
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
什么是EV? 细胞外囊泡(ev)是细胞分泌的纳米颗粒，主要参与细胞间通讯过程。在过去的几年里，EV获得了越来越多的兴趣从科学界，成为一个多学科的研究领域。EV具有由于纳米尺寸和生物活性含量所产生的独特的物理化学性质。EV能够跨越多种生物屏障，比如细胞膜和血脑屏障，它们参与了许多病理过程。基于这些原因，EV前景广阔，应用于药物靶点、生物标志物和给药载体。 传统EV浓缩方法 将EV用于科学和医疗应用的一个主要挑战是隔离过程，因为EV可以在各种复杂的生物基质中找到，这些基质是由大量的在尺寸和密度上重叠的纳米生物材料。 常用的隔离技术ev与其他流体组分的分离是超离心法(UC)，即密度梯度(DG)，阻垢层析(SEC)。然而，这些方法可能是有限的输入量、时间消耗和EV产量。例如UC协议能够处理体积较大(可达1.5 L)，但回收率较低[15,16]，且耗时较长离心步骤，经常破坏EV，并引起共沉淀污染物。虽然DG和SEC通常会产生纯度高的EV配方，这些方法耗费时间，导致低收益，并且需要较小的体积(小于5毫升)。此外，上述方法的临床实际操作具有挑战性临床级生产的无菌和放大要求。因此,改进技术能够以可扩展、可再生和无菌的方式浓缩EV，这对未来是必要的临床要求。 在过去的几年里，用于纯化合成纳米粒子、蛋白质、液体悬浮液中的病毒也被用于EV分离。这些新兴EV的分离方法主要是利用抗原-抗体结合亲和力、高性能液体色谱法或过滤。例如，场流分馏(FFF)]和非对称流场流分馏(AF4)依赖于作用于流经的液体悬浮液的场管式过滤器。切向流过滤是另一种新兴的耦合渗透技术膜过滤和流动，以从胶体基质中获得有效浓度的ev。 全新TFF技术 切向流动过滤(TFF)不同于传统的终端过滤，因为流体是切向流动的以避免滤饼的形成。事实上，通过终端过滤，较大的颗粒通常会堵塞膜孔，导致颗粒分离受损这是基于原始孔隙大小。TFF被评价为一种基于大小的EV浓度方法，能够处理可伸缩量的生物液体。UC和TFF的并行
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细胞培养时生长缓慢？
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
细胞生长缓慢的常见原因: (1)培养基可能缺乏细胞生长所需的某种因子。 通常情况下，当小伙伴购买细胞，并没有按照ATCC或国内细胞库推荐的方法制备培养基，使用实验室兄弟姐妹使用的培养基来培养细胞。解决方法一般是按照推荐的方法制备培养基，或直接购买培养细胞的培养基。(B)细菌、支原体、真菌等污染:虽然培养基中通常添加双抗体(青霉素和链霉素)，但如果无菌操作观念不强，仍有可能造成污染。处理方法:如果有冷冻细胞，可以丢弃污染细胞。当然，丢弃并不是随意的，扔进垃圾桶。应按照实验室生物安全规定进行。然后复苏培养物，建议培养箱完全消毒。 (2)如果不冷冻，而且这种细胞非常珍贵，常用的**方法是药物**:细菌污染加5-10倍的抗生素;真菌污染加抗真菌药物;支原体污染再加上抗支原体药物，具体药物可以咨询技术支持，他们会更加专业。 (3)许多细胞的生长依赖于密度。如果传代后细胞密度过小，也会影响细胞生长。这段时间没有什么特别好的，就是更换液体。如果细胞培养瓶为T75，则可以消化、离心、复苏，然后接种到T25瓶中。 (4)冷冻细胞中添加DMSO(二甲基亚砜)的量不正确，没有逐渐梯度冷却。下一次恢复后的细胞总是坏的。处理方法:按推荐的冷冻保存方法制备冷冻液。部分细胞适合10% DMSO，部分细胞适合5% DMSO;严格遵循渐变冷却的原则，细胞恢复后迅速解冻。 (5)换液间隔时间太长。一些小伙伴真的把细胞“佛”系生长。当他们想到它的时候，才会换下液体，相信一个句子。“你已经是一个成熟的细胞了。你应该学会养活自己，成长”。在这种情况下，细胞培养瓶中积累了大量的细胞代谢废物，影响细胞活性。 (6)细胞的“消化”时间不宜过长，减少对细胞的损伤;此外，EDTA一般添加到胰腺酶中，螯合钙离子，影响细胞粘附。**方法:控制细胞“消化”时间，尽量去除干净的胰蛋白酶和EDTA。 PH值:细胞需要在一定的PH值下生长，这个小朋友知道。但是很多时候PH值是我们忽略的东西，这也是想强调的一点。随着使用时间的增加，
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ELISA实验中出现复测原因分析
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
在ELISA实验过程中时常会出现复测现象，即我们时常说的"花板"现象，这种现象影响检验结果的正确判读，对工作造成一定的不利影响，一旦出现“花板”，实验结果必须放弃，重新进行，不仅浪费物料和时间，而且还会出现样本量缺少、交叉污染、报告延迟等一系列问题。 出现这现象的影响因素分析如下 1、标本因素 正确处理标本，防止大规模溶血、血浆层异物、使用一次性加样枪头，防止交叉污染。血清和血浆均可以用于检测，但血清的分离应在抽血后等血液完全凝固后再离心。 2、试剂因素 正确保存及使用有效试剂。使用过期试剂及底物接触金属容器、底物混合后放置时间较长均影响实验结果的准确性。选择试剂时应选择灵敏度高、特异性好、稳定性好，批间差小的试剂。不同厂家的试剂不能混用，包括底物和洗涤液。检测前应将试剂放置室温平衡半小时，洗涤液应现用现配，同时观察浓缩洗涤液中有无结晶，若有结晶应放37℃水浴中融化后才可使用。 3、技术人员操作因素 严格按照相关实验SOP操作实验。加样时应尽可能的垂直加样，并加在包被孔的底部（注：勿应用力过度破坏底部包被物质），不可加在孔的上部及外部。 4、温浴的因素 使用水浴箱作为温浴设备时，应注意水的深浅对结果的影响，当水浴箱中水的的实测温度37℃时，则水面温度可能只有34℃，空气温度更低，甚至只有二十多度，所以当水浴箱中水位过低时则酶标微孔板没有浸入水中，则反应温度会达不到37℃，相应的就会影响酶促反应。为防止边缘效应，酶标板应尽量浸入水中，以保证受热的均匀。水浴时，酶标板应封好，以免水滴滴入包被孔中，或阳性标本的蒸发。严格掌握温浴时间，不可为了早点出结果擅自缩短温浴时间。 5、洗板机的因素 废液瓶装满后应及时清空，以防止废液回流对管道的污染，而使洗涤不彻底，造成“花板”。洗板结束后应用蒸馏水彻底清洗管道，以防止废液在管道中的残留。同时应根据仪器维护保养程序，定期对洗板机进行维护保养。 6、酶标仪 酶标仪应安置在避光
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细胞凋亡的机制有哪些？
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
细胞凋亡是指人体自身为维持内环境稳定，由基因控制的细胞自主、有序的死亡，它与细胞坏死不同，细胞凋亡不是一件被动的过程，而是主动过程，是为更好地适应生存环境而主动争取的一种死亡过程。 细胞凋亡的机制有哪些？ （一）氧化损伤：氧自由基的损伤。各种氧化剂（H2O2等）可直接诱导凋亡，抑制SOD的活性也可导致凋亡。 机制：1、氧自由基激活P53基因；2、活化多聚ADP核糖转移酶；3、攻击细胞膜上的不饱和脂肪酸，直接造成细胞膜的损伤；4、激活Ca2+/Mg2+依赖的核酸内切酶；5、引起细胞膜结构破坏，使Ca2+通透性增加；6、活化核转录因子NF-κB，AP-1等，加速细胞凋亡相关基因的表达。 （二）钙稳态失衡 机制：1、激活Ca2+/Mg2+依赖的核酸内切酶；2、激活谷氨酰胺转移酶，利于凋亡小体形成；3、激活核转录因子；4、Ca2+在ATP配合下暴露核小体之间的酶切位点，有助于DNA内切酶切割DNA. （三）线粒体损伤： 机制：线粒体内、外膜之间的通透性转换孔（PTP）在凋亡诱导因素作用下由正常情况下的关闭状态转为开放，使细胞凋亡的启动因子从线粒体逸出。
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细胞培养常见问题及其解决办法
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
细胞培养常见问题及其解决办法 1. 如何选用特殊细胞系培养基？ 培养某一类型细胞没有固定的培养条件。在MEM中培养的细胞，很可能在DMEM或M199中同样很容易生长。总之，MEM做粘附细胞培养、RPMI-1640做悬浮细胞培养是一个好的开始。 2. 何时须更换培养基？ 视细胞生长密度而定， 或遵照细胞株基本数据上之更换时间，按时更换培养基即可。 3. 可否使用与原先培养条件不同之培养基？ 不能。每一细胞株均有其特定使用且已适应之细胞培养基，若骤然使用和原先提供之培养条件不同之培养基， 细胞大都无法立即适应， 造成细胞无法存活。 4 可否使用与原先培养条件不同之血清种类？ 不能。血清是细胞培养上一个极为重要的营养来源，所以血清的种类和品质对于细胞的生长会产生极大的影响。来自不同物种的血清，在一些物质或分子的量或内容物上都有所不同，血清使用错误常会造成细胞无法存活。 5 何谓FBS, FCS, CS, HS ? FBS (fetal bovine serum) 和FCS (fetal calf serum) 是相同的意思， 两者都是指胎牛血清， FCS 乃错误的使用字眼， 请不要再使用。CS (calf serum) 则是指小牛血清。HS (horseserum) 则是指马血清。 6 培养细胞时应使用5 % 或10% CO2？或根本没有影响？ 一般培养基中大都使用HCO3-/CO32-/H+ 作为pH 的缓冲系统，而培养基中NaHCO3 的含量将决定细胞培养时应使用的CO2 浓度。当培养基中NaHCO3 含量为每公升3.7 g 时，细胞培养时应使用10 % CO2；当培养基中NaHCO3 为每公升1.5 g 时， 则应使用5 % CO2 培养细胞。 7.Hank's 蛋白酶(HBS)要在空气中使用，不需要CO2培养箱。原因是什么？Hank's 蛋白酶(HBS)和Earle's蛋白酶(EBS)有什么本质的功能差别？ HBS和 EBS 的主要差别在于氢钠的水平,在Eagles (2.2g/L)中比在Hanks (0.35g/L) 中高。氢钠需用高水平的CO2平衡，以维持溶液的PH值。Eagles液在空气水平的CO2 中，溶液会变碱，Hanks液在CO2培养箱中会变酸。如果希望在CO2培养箱中保存组织，需要用Eagl
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配对抗体的制备与筛选
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
配对抗体指的是可以同时结合在一个抗原分子上的两个抗体。配对抗体，一般应用于双抗夹心法 ELISA 实验。 抗体配对的原理 通常情况下，一个抗原分子拥有多个抗原决定簇，将抗原注射入动物体内进行免疫，针对不同的抗原决定簇会产生不同的抗体。产生的抗体具有特异性与专一性，即一个抗体分子只会特异性地结合一个抗原决定簇。两个针对不同抗原决定簇的抗体，有可能同时结合到抗原分子上。如果两个抗体同时结合到同一个抗原分子上，那么这两个抗体就是配对抗体。 配对抗体的制备与筛选 需要注意的是，即使两个抗体针对的是不同的抗原决定簇，也并不意味着这两个抗体分子一定可以同时与抗原分子结合。当一个抗体与抗原结合后，有可能会导致其他结合位点（抗原决定簇）构型的改变，从而导致其他的抗体无法正常结合到抗原上。位阻效应的存在，也可能使两个结合位点距离较近的抗体无法同时结合在抗原上。因此想要得到可以同时结合在抗原分子上的配对抗体，在制备出抗体后，还需要对得到的抗体进行筛选。这就意味着，要制备配对抗体，要完成以下两步工作：抗体的制备；配对抗体的筛选。 抗体制备 为了便于后续的筛选，制备的抗体应为单克隆抗体，通常利用杂交瘤技术进行单克隆抗体的制备。 注意：如果单克隆抗体很少，很可能会找不到可以配对的抗体，因此，在免疫动物的时候，应多免疫几只动物，以获得更多的单克隆抗体。 配对抗体的筛选 通常，配对抗体筛选的方法是双抗夹心 ELISA 法。筛选的原理为：在得到了单克隆抗体后，从中取出两种单克隆抗体，一种作为捕获抗体，另一种作为标记抗体（HRP 酶标记），将捕获抗体包被在抗原板上，先加入抗原，孵育后洗去未结合的抗原，再加入标记抗体 孵育后洗去未结合的标记抗体，最后加入显色液显色。如果可以显色，说明标记抗体与抗原特异性结合，该捕获抗体与标记抗体为一对配对抗体。如果不能显色，说明标记抗体不能与抗原结合，从而被洗脱，该捕获抗体与标记抗体不是配对抗
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27个细胞传代培养常见问题汇总
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
1、一般拿到细胞后，应该注意什么? 收到细胞先不开盖,用酒精将整个细胞瓶外壁进行消毒，放在培养箱静置若干小时后(看细胞密度而定)在倒置显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照(建议收细胞时的培养基拍一张照片，观察培养基的颜色和是否有漏液情况，显微镜下拍细胞100X，200X各两张)，排除细胞本身污染的情况。 2、何时须更换培养基? 视细胞生长密度而定，常规细胞2-3天更换培养基。 3、细胞何时进行传代较好? 一般情况下细胞生长至完全汇合后就应该传代，所有细胞生长都有一个要求不宜生长过密(也就是常说的长老了)，但有接触抑制的细胞，在汇合前就必须进行传代，这类细胞一般在密度70-80%就进行传代，否则会引起细胞分化。 4、贴壁细胞如何进行传代? 去掉原T25培养瓶里面的培养基，T25瓶加3-4 ml PBS洗1-2次;弃PBS，再加1.5 ml的Trypsin-EDTA (1X)消化液消化细胞，显微镜下观察，待细胞变圆，细胞间隙明显，部分细胞刚开始脱离瓶壁，加4 ml左右完全培养液混匀终止消化，将细胞小心吹打下来，1000 rpm/min室温离心5min;弃上清，细胞沉淀用完全培养液重悬，按要求分瓶(视细胞密度而定1:2-1:3，1:3-1:6，1:6-1:8)，每T25瓶补足培养基至5-6 ml，37℃、5%CO2孵箱培养。 5、悬浮性细胞应如何传代处理? 一般仅需持续加入新鲜培养基于原培养角瓶中，稀释细胞浓度即可，若培养液太多时，将细胞悬液移入离心管中，1000 rpm/min 室温离心5 min。弃上清，细胞沉淀用完全培养液重悬，按要求分瓶(视细胞密度而定1:4-1:8)，每T25瓶加完全培养液至4-5 ml，37℃、5%CO2孵箱培养。有些悬浮细胞趋于成团生长，此时细胞生长状态良好，当补液时，需避免反复吹打。 6、贴壁细胞传代如何使用胰酶? 一般使用trypsin-EDTA浓度为0.25% trypsin-0.53 mM EDTA.2Na或0.05%trypsin-0.02 mM EDTA.2Na。消化液浓度过高时，易造成培养基中细胞碎片增多，黑渣子增多，常规细胞传代时建议用0.05%的胰酶进
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细胞爬片的特点和注意事项
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
爬片又名细胞爬片，是指让玻片浸在细胞培养基内，细胞在玻片上生长，主要用于组织学，免疫组织化学，病冻切片，细胞涂片，原位杂交等。 细胞爬片特点 1.玻片表面经过TC处理，双面均可使用. 2.γ射线灭菌,保证无菌. 3.使用便捷,只需打开包装,将爬片放入孔板内,将细胞悬液滴到爬片上即可培养. 4.爬片厚度为0.17mm,直径为8mm/14mm/20mm/25mm.分别适用于48孔细胞培养板/24孔细胞培养板/12孔细胞培养板/6孔细胞培养板 5.强吸附：该玻片表面具有yong久的阳离子电荷,可以通过静电作用吸附冰冻切片组织或细胞,使之粘附在玻片上,进而在玻璃和切片组织之间形成共价键.因此，无需粘黏剂或者蛋白包被，该玻片也能牢固的粘附切片或细胞。 操作注意事项 使用细胞爬片时(比如在六孔板中放入爬片,六孔板的孔底面积往往会比爬片面积多出一部分,加细胞悬液时常常就是细胞铺满整个孔底,有时细胞生长边集现象,就是靠近壁边缘密度要高些,这样处于中央玻片上爬的细胞数量就可能相对较少。比较好的做法是将玻片放入孔板的孔内后,加细胞悬液时只滴到玻片上,一直滴到液体布满整个玻片又不会溢出玻片边缘(因为液体表面张力作用可以很容易做到这一点。),放在培养箱里,等细胞贴壁后,取出,再滴加培养基布满整个孔底,继续培养,这样玻片上的细胞生长的密度就会很集中. 细胞爬片怎么保存 细胞爬片有三层包装,在超净台无菌的状态下打开包装.未用完的爬片按原先包装方式再包装起来即可. 友情提示 该爬片表面带有正电荷,请勿用手触摸,以免使用效果不佳. 玻片经过γ射线灭菌后,透明玻片颜色会略变为淡茶色,属正常现象.
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TAE与TBE有何区别，怎么选择？
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
相关原理： 缓冲液在电泳过程中的一个作用是维持合适的pH。电泳时正极与负极都会发生电解反应，正极发生的是氧化反应（4OH--4e->2H2O+O2)，负极发生的是还原反应（4H++4e->2H2)，长时间的电泳将使正极变酸，负极变碱。一个好的缓冲系统应有较强的缓冲能力，是溶液两极的pH保持基本不变。 电泳缓冲液的另一个作用是使溶液具有一定的导电性，以利于DNA分子的迁移，例如，一般电泳缓冲液中应含有0.01-0.04mol/L的Na+离子，Na+离子的浓度太低时电泳速度变慢；太高时就会造成过大的电流使胶发热甚至熔化。 电泳缓冲液还有一个组分是EDTA，加入浓度为1-2mmol/L，目的是螯合Mg2+ 等离子，防止电泳时激活 DNA酶，此外还可防止Mg2+离子与核酸生成沉淀。 TAE&TBE TAE是使用广泛的缓冲系统。其特点是超螺旋在其中电泳时更符合实际相对分子质量（TBE中电泳时测出的相对分子质量会大于实际分子质量），且双链线状DNA在其中的迁移率较其他两种缓冲液快约10%，电泳大于13kb的片段时用TAE缓冲液将取得更好的分离效果，此外，回收核酸片段时也易用TAE缓冲系统进行电泳。TAE的缺点是缓冲容量小，长时间电泳（如过夜）不可选用，除非有循环装置使两极的缓冲液得到交换。 TBE的特点是缓冲能力强，长时间电泳时可选用TBE，并且当用于电泳小于1kb的片段时分离效果更好。TBE用于琼脂糖凝胶时易造成高电渗作用，并且因与琼脂糖相互作用生成非共价结合的四羟基硼酸盐复合物而使核酸片段的回收率降低，所以不宜在回收电泳中使用。 怎么选择： 对于分辨率要求不高时，使用TAE和TBE均可；对于分辨率要求比较高时，较低浓度的胶有利于提高大分子量核酸的分辨率，此时宜使用TAE；而较高浓度的胶有利于提高小分子量核酸的分辨率，此时宜使用TBE。
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沙丁胺醇检测卡检测原理及使用步骤
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
沙丁胺醇检测卡用于快速检测猪尿、组织样(畜禽肉)、饲料中的沙丁胺醇残留，灵敏度为5μg/kg，沙丁胺醇快速检测卡检测过程只需要5分钟，适用于各类企业及检测机构。 检测原理: 沙丁胺醇检测卡应用竞争抑制免疫层析的原理，样本中的沙丁胺醇在侧向移动的过程中与胶体金标记的特异性单克隆抗体结合，抑制了抗体和NC膜检测线上沙丁胺醇-BSA偶联物的结合。如果样本中沙丁胺醇含量大于5μg/kg，检测线不显颜色，结果为阳性；反之，检测线显红色，结果为阴性。 沙丁胺醇检测卡使用步骤: (1)测试前请完整阅读使用说明书，并将未开封的检测卡和待检样本溶液回复至常温； (2)从包装袋中取出检测卡后请尽快使用； (3)将检测卡平放，用滴管吸取待检样品溶液，滴加3滴(约75µL)于加样孔中，加样后开始计时； (4)结果应在5-8分钟读取，其他时间判读无效； (5)读取结果时，检测卡水平置于观察者正面，如右图所示。
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基因甲基化的相关说明
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
DNA甲基化是指甲基供体（S-腺苷甲硫氨酸，SAM）在DNA甲基转移酶（DNMT）的作用下，将甲基添加到DNA分子的碱基上，以胞嘧啶-鸟嘌呤二核苷酸（CpG）中的胞嘧啶5位碳原子和甲基间的共价结合尤为常见，CpG中胞嘧啶由此被修饰为5甲基胞嘧啶（5mC）。DNA甲基化修饰后在离体状态表现出更强的惰性，如亚硫酸氢钠可使非甲基化的胞嘧啶转变为尿嘧啶，而不能改变甲基化的CpG中的胞嘧啶；在活体状态表现为基因表达活性的降低。因此，高甲基化状态意味着基因表达的失活/抑制/沉默，而低甲基化状态意味着基因表达的激活/活化。肿瘤细胞的DNA甲基化状态在全基因组水平上呈现广泛的低甲基化特征，导致原癌基因的活化，基因组不稳定性增加；但在抑癌基因、修复基因等启动子区的甲基化状态是升高的，即高甲基化，从而导致了相应抑癌基因等的表达受到抑制。且发现肿瘤细胞的高甲基化基因多发生于启动子区的CpG岛，而正常细胞启动子区的CpG岛多处于非甲基化状态。 在包括肺癌在内的绝大多数肿瘤以及诸如阿尔兹海默病、心衰等非肿瘤性疾病的患者的基因组水平均发现了DNA甲基化的异常。由于人类基因组包含近四万个基因，大量研究发现许多疾病均可能存在特异性的甲基化谱，甚至在疾病的不同阶段甲基化谱也不尽相同；此外，据研究肿瘤细胞发生CpG岛高甲基化的频率远高于基因突变。因此，通过对患者样本进行特定一组基因或全基因组的甲基化水平检测，理论上可以诊断疾病、辅助进行分级分期的判断甚至筛选敏感化疗药物。 基因甲基化异常是肿瘤发生尤为常见的表观遗传变化之一，肿瘤的发生表现为基因组整体甲基化水平降低（癌基因）和CpG岛局部甲基化水平的异常升高（抑癌基因）。 人SHOX2、RASSF1A基因甲基化检测试剂盒可以检测人SHOX2基因和RASSF1A基因甲基化，辅助临床肺癌的早期诊断，提高肺癌患者生存率。
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收到细胞后如何操作？
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
1.首先，观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象。若有，请及时与Procell技术支持联系。2.用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分贴壁细胞会有少量从瓶壁脱落，将细胞置于细胞培养箱内静置培养，隔天再取出进行观察。3.仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等。4.可将培养瓶内多余的培养基转移至50ml无菌离心管中，备用；细胞传代时，可以将该培养基按照一定比例和客户自备的培养基混合使用，让细胞逐渐适应培养条件。5.确认细胞状态良好后，应及时将细胞冻存，再进行后续的实验，避免后期实验失误可能发生细胞污染或死亡而导致的细胞丢失。6.建议客户收到细胞后前3天，100X、200X、400X各拍3-5张细胞照片，记录细胞状态，便于和Procell技术支持沟通交流。
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热门CTLA4&PD1/L1双靶点抗体活性检测细胞模型
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
T细胞在癌症、感染和自身免疫性疾病相关的不同类型的免疫反应中都发挥着至关重要的作用。T细胞与抗原呈递细胞的特异性相互作用往往决定了T细胞的命运并调节其抗肿瘤反应。基础及临床研究发现了许多调节T细胞功能的免疫调节分子，其中，表达在T细胞上的免疫检查点分子通过激活信号（共刺激分子）或抑制信号（共抑制分子）调节T细胞功能，在免疫系统中起着核心作用。目前，靶向T细胞功能的免疫检查点抗体疗法已经获得了激动人心的疗效，取得了很大的成功，其中包括针对程序性细胞死亡蛋白1（PD-1）及其配体PD-L1的Pembrolizumab， Durvalumab以及抗细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4（CTLA–4）的Ipilimumab等单抗药物已广泛运用于黑色素瘤、转移性尿路上皮癌、膀胱癌，肺癌等各种肿瘤患者。 靶点简介 在迄今发现的免疫检查点分子中，CTLA-4抑制T细胞的作用机制是为人们最深入了解的机制之一。CTLA-4，又称CD152，是一种跨膜糖蛋白，可与CD28竞争性地结合抗原呈递细胞上的CD80（B7-1）和CD86（B7-2）蛋白，当与配体结合时，可作为T细胞激活的“关闭”开关，针对CTLA4的单抗Ipilimumab是一个被成功用于黑色素瘤患者的免疫检查点药物。 PD-1（也称为CD279），是一种T细胞表面受体，通过与配体其PD-L1和PD-L2的相互作用对抑制T细胞活性起着重要作用。与CTLA-4信号类似，PD-1结合其配体抑制T细胞增殖，细胞因子如干扰素-γ（IFN-γ）、肿瘤坏死因子和白细胞介素2（IL-2）的产生，并减少T细胞的存活，但与CTLA-4不同的是，它主要调节组织和肿瘤内的效应T细胞活性，而不影响淋巴器官中的T细胞活化。 药物研发现状 尽管通过抗体药物对免疫检查点信号阻断在癌症**中取得了显著的成功，但目前，大多数患者仍不能从单一靶点的阻断中获益。例如，虽然临床上针对PD-1和CTLA-4通路的抗体药物，已被用于多种癌症适应症，但大多数患者单一使用PD-1或CTLA-4阻断剂并无效果。因此，针对一种以上的免疫检查点抗原的抗体组合疗法被认为是一种
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