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生物实验室胎牛血清使用问题汇总
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
血清在使用过程中，有很多的具体注意事项，现阐述如下： 1、血清的保存方法。 建议血清应保存在-5℃至-20℃。假如存放于4℃，请勿超过个月。若血清瓶次无法用完，建议无菌分装至恰当的灭菌容器内，再放回冷冻，避免反复冻融。 2、在培养基中添加了血清和抗生素后，是否可以长期保存? 因为些抗生素和血清中的基本成分在解冻后就开始降解，所以新鲜培养基中添加了血清和抗生素后，应该在两到三周内使用完毕。 3、如何解冻血清才不会使产品质量受损? 血清从冷冻箱取出后，先置于2～8℃冰箱融解，然后在室温下全融。解冻血清时，必须在融解过程中规则地摇晃均匀，使温度及成分均，减少沉淀的发生。 推荐在-20℃以下储存血清，并避免反复冻融。因为长时间储存在2-8℃时，血清中的各种蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纤维蛋白原、玻粘连蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可见的混浊。 请勿将血清置于37℃太久。若在37℃放置太久，血清会变得混浊，同时血清中许多较不稳定的成分也会因此受到损害，而影响血清的质量。 4、血清解冻后为何会有絮状沉淀物出现，该如何处理? 沉淀包含纤维蛋白和脂蛋白。这是正常特性，这些絮状沉淀物，并不影响血清本身的质量。 血清中沉淀物的出现有许多种原因，但普遍的原因是由于血清中脂蛋白的变性所造成，而血纤维蛋白(形成凝血的蛋白之)在血清解冻后，也会存在于血清中，亦是造成沉淀物的主要原因之。 去除这些絮状沉淀物，可以将血清分装至无菌离心管内，以400g,1-2分钟稍微离心,上清液即可接着加入培养基内起过滤。我们不建议您以过滤的方法去除这些絮状沉淀物，因为它可能会阻塞您的过滤膜。 大多情况轻轻摇动沉淀并加热至37℃就会再溶解。所以，使用产品时要摇动并加热血清至37℃，沉淀会自然消失。 5、如何避免沉淀？ 按如下操作可避免沉淀的产生： 1)解冻血清时，请随时将之摇晃均匀，使温度及成分均，减少沉淀的发生。 2) 血清分装冻存时，须规则摇晃均匀(小心勿造成气泡)，使温度与成分均
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牛羊布病快速检测卡的原理和试验方法介绍
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
布鲁氏菌病(也称布氏杆菌病,简称布病)是由布鲁氏菌引起的以感染家畜为主的传染病,世界动物卫生组织(OIE)将本病列为必须通报的传染病之一。牛羊作为主要的基层畜产品养殖，及早发现解决牛羊布病，才能有效提升基层畜产品的整体质量安全。 牛羊布病快速检测卡采用胶体金免疫层析试验（GICA）原理制成，样本加入到加样孔后与胶体金标记物一起沿层析膜移动，若样本中存在羊布病抗体则与胶体金标记物及检测线上的抗原结合而显示紫红色，若样本中不存在羊布病抗体则不产生颜色反应。 试验方法： 1.用配套吸管吸取已准备好的样本，垂直而缓慢的滴加1滴血清或者2滴全血或者2滴奶样到样本稀释液中（注意：该步骤很关键，样本切不可多加），混匀后待用。 2.撕开检测卡铝箔包装袋，取出检测卡，放于平整、洁净的台面上,使用袋内吸管吸取步骤1得到的待测液2-3滴（约60ul）缓慢滴加到加样孔内。 3.室温下放置10-15分钟判断结果,15分钟后结果只作参考。
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细胞生长缓慢有哪些影响因素？
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
细胞生长缓慢是实验人员在培养细胞时常遇见的问题，那么究竟是哪些因素影响？又如何改善呢？ 一.个别人的培养体系出现问题 1.检查你所培养的细胞是否存在污染。 （a）如果培养细胞未添加抗生素(必须添加!),细胞污染则是不可避免的。 1）用肉眼和显微镜进行检查 2）如果细胞被污染则要弃掉。 （b）由于支原体污染不容易觉察到，因此必须定期检测 （c）检测可能污染的途径和原因 2.检查你用于培养细胞的培养基和血清(例如:是否批次不同或厂商不同)。如果你常规使用的是粉剂或10X储存液，而现在购买的培养基更换为1X液体，而随后证明问题就出自于此，处理方法请参见下则分享内容。 3.如果问题与培养基无关，那么很可能还是细胞的问题。 （a）复苏另一支冻存的细胞，并且与正在培养的细胞加以比较。两种细胞的培养应分开，以免在培养之初就产生污染。随后按（b）~ （d）步的方法做排查。 （b）对传代培养的细胞进行计数，并绘制生长曲线与以前培养该细胞的资料进行比较，检查是否有下列改变: 1）传代时是否接种密度过低。 2）细胞传代是否过于频繁。 3）传代前细胞平台期是否过长。 （c）是否更换了胰蛋白酶或其他分离剂的批号?检查批号和供应商。 （d）是否细胞分离过程中严重损伤了细胞?应检测: 1）胰蛋白酶(其他消化试剂)消化时间是否过长。 2）消化液的浓度和活性是否过高、过强。 3）胰蛋白酶消化时、孵箱温度是否过高。 4）吹打消化细胞时是否过于用力。 5）细胞是否对EDTA过于敏感(如果添加了EDTA)， 6）胰蛋白酶稀释是否有误。 7）是否使用了一批劣质的胰蛋白酶消化液。 二.问题较为普遍，其他人也遇到同样的困难 检查共用的设备和试剂 温室和孵箱温度 1.温度和温度设定不准。 （a）自动调温器损坏。 （b）开关孵箱门过于频繁。 （c）孵箱门未关紧。 (d)风扇损坏造成散热不均。 用便携式温度表重新标定孵箱温度。 2.孵箱湿度不能维持 （a）水盘中未加水， （b）孵箱有渗漏
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胎牛血清在细胞培养中起到的作用
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
血清是一种很复杂的混合物，其组成成份虽大部分已为人所知，但还有一部分尚不清楚，而且血清组成及含量常随供血动物的性别、年龄、生理条件和营养条件不同而异。 1.蛋白质是牛血清中主要成份。除包括可携带金属离子、脂肪酸和自身是激素类蛋白外主要还有白蛋白，球蛋白。纤维粘连素细胞促进细胞附着；α2巨球蛋白抑制胰蛋白酶的作用；胎牛血清中含胎球蛋白促细胞附着；转铁蛋白能结合铁离子，减少其毒性和被细胞利用。 2.多肽：血小板促生长因子能促细胞分裂，是多肽家庭的主要成员，是主要的促细胞增殖因子；成纤维细胞生长因子、表皮细胞生长因子、神经细胞生长因子等，血清中含量虽很少，但对细胞生长也有一定作用。 3.激素：激素对细胞的作用是多方面的。胰岛素：促进细胞摄取葡萄糖和氨基酸，与促细胞分裂有关。类胰岛素生长因子：能与细胞表达的胰岛素受体结合，从而有胰岛素同样的作用。促生长激素：促细胞增殖效应。 4.其他成本：氨基酸、葡萄糖、酮酸等对多种营养成分的合成培养基意义不大。与蛋白相结合状态的微量元素对细胞培养有意义。 胎牛血清是一种性状、外观 浅黄色澄清、无溶血、无异物稍粘稠液体。胎牛血清应取自剖腹产的胎牛；新牛血清取自出生24小时之内的新生牛；小牛血清取自出生10－30天的小牛。 由于胎牛从未接触过外界， 与新生牛和小牛血清相比，抗体含量明显降低，故抗体与培养细胞发生交叉反应的风险也较低，是理想的细胞生长补充剂。本文缔一生物为您具体分析胎牛血清在细胞培养中的作用。 1. 提供对维持细胞指数生长的激素，基础培养基中没有或量很少的营养物，以及主要的低分子营养物。 2. 提供结合蛋白，能识别维生素、脂类、金属和其他激素等，能结合或调节它们所结合的物质活力。 3. 有些情况下结合蛋白质能与有毒金属和热原质结合，起到解毒作用。 4. 是细胞贴壁、铺展在塑料培养基质上所需因子来源。 5. 起酸碱度缓冲液作用。 6. 提供蛋白酶抑制剂，使在细胞传代时使剩余
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细胞培养实验中有什么需要注意的？
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
细胞培养注意事项 1. 实验进行，无菌室及无菌操作台(laminar flow) 以紫外灯照射30-60 分钟灭菌，以70 %ethanol 擦拭无菌操作抬面，并开启无菌操作台风扇运转10 分钟后，才开始实验操作。每次操作只处理一株细胞株，且即使培养基相同亦不共享培养基，以避免失误混淆或细胞间污染。实验完毕后，将实验物品带出工作台，以70 % ethanol 擦拭无菌操作抬面。操作间隔应让无菌操作台运转10 分钟以上后，再进行下一个细胞株之操作。 2. 无菌操作工作区域应保持清洁及宽敞，必要物品，例如试管架、吸管吸取器或吸管盒等可以暂时放置，其它实验用品用完即应移出，以利于气流之流通。实验用品以70 % ethanol 擦拭后才带入无菌操作台内。实验操作应在抬面之中央无菌区域，勿在边缘之非无菌区域操作。 3. 小心取用无菌之实验物品，避免造成污染。勿碰触吸管尖头部或是容器瓶口，亦不要在打开之容器正上方操作实验。容器打开后，以手夹住瓶盖并握住瓶身，倾斜约45° 角取用，尽量勿将瓶盖盖口朝上放置桌面。 4. 工作人员应注意自身之安全，须穿戴实验衣及手套后才进行实验。对于来自人类或是病毒感染之细胞株应特别小心操作，并选择适当等之无菌操作台(至少Class II)。操作过程中，应避免引起aerosol 之产生，，例如DMSO 及TPA 等，并避免尖锐针头之伤害等。 5. 定期检测下列项目：5.1. CO2 钢瓶之CO2 压力5.2. CO2 培养箱之CO2 浓度、温度、及水盘是否有污染(水盘的水用无菌水，每周更换)。5.3. 无菌操作台内之airflow 压力，定期更换紫外线灯管及HEPA 过滤膜，预滤网(300小时/预滤网，3000 小时/HEPA)。 6. 水槽可添加消毒剂(Zephrin 1:750)，定期更换水槽的水 现在做细胞培养实验的实验室越来越多，如果打算开展或者已经开展的单位或者实验室更要做到以下几点。 1、选择正确的培养基 在养细胞之，就要了解，你所养细胞的来源以及种类和名称，查阅一定量的文献，确定所需培养液种类以及是否需要添加特殊成分，常用的细胞培养
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细胞运输方式有哪几种
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
由于培养细胞株(系)的商品化，细胞培养室之间的交流、交换和购买已成为生命科学研究中的一个重要组成部分，培养细胞的运输成为研究工作的一个重要环节。如果不了解所要细胞的性状、培养液特点及培养注意事项，运输时不注意使用特殊容器或温度等，就可能影响细胞的生长，或出现差错，或导致培养失败等。装运细胞的主要方法如下所述：1)冷冻储存运输法这是一种利用特殊容器内盛液氮或干冰的运输方法。保存效果较好，但缺点是比较麻烦，不宜长时间运输，多需空运，代价较大。2)充液法此种方法较为简单。一般选择生长良好的细胞，以生长1/3～1/2瓶底壁为宜，去掉旧培养液，补充新的培养液至瓶颈部，保留微量空气，拧紧瓶盖，并用胶带密封，放在一运送盒内，用棉花等做防震防压处理。运输时间需4～5 d，一般放在贴身口袋即可，到达目的地后倒出多余的培养液，只需保留维持生长所需的培养液置37℃培养，次日传代。如果在市内运输或仅需数小时运输路程，也可将细胞附着面朝上，或把培养液全部倒掉放在胸部口袋运送。靠附着于细胞表面的培养液，可使细胞短时间不受损。
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ELISA试剂盒操作问题集锦,你不会的都在这里了
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
ELISA试剂盒操作问题集锦,你不会的都在这里了 试剂盒是我们实验室常见的耗材之一，就好每天都在用的试剂盒可能是影响你实验的关键因素。试剂盒使用有哪些需要注意的跟小析姐一起来看看吧。 试剂盒在国内有许多种叫法,例如:ELISA检测试剂盒、ELISAKit、酶联免疫试剂盒、酶联免疫吸附测定试剂盒、酶联免疫分析试剂盒、酶免试剂盒等,比较常见的叫法是ELISA检测试剂盒、酶联免疫吸附测定试剂盒等;ELISA试剂盒适用于体外定性检测人血清或血浆中的抗人类戊型肝炎(HEV)病毒IgM抗体ELISA检测,自从60-70年代问世以来,得到科研工作者的认可及推崇,在欧美及中国获得很大的推广,尤其是国内生化领域的长足发展。ELISA生物试验是一种敏感性高,特异性强,重复性好的实验诊断方法。由于其试剂稳定、易保存,操作简便,结果判断较客观等因素,已广泛应用在免疫学检验的各领域中。 为了保证ELISA试剂盒实验质量,我们需要掌握一些小技巧以助于实验的成功,那么ELISA试剂盒的操作技巧您知道吗? 如若掌握了这些实验技巧之后,在做ELISA实验中,试验起来会更熟练,大大的降低了实验过程中的风险,ELISA试剂盒实验的入门新手掌握了这些知识后,操作起来都会快的多。 ELISA试剂盒17个相关操作技巧如下: 1.切记在加酶试剂后用吸水纸在酶标板表面轻拭吸干。 2.合理安排检测量,以免反应板过多造成洗板等待时间长。 3.在吸取液体时,要用量程和需要量接近的枪去吸,减少误差。 4.务必做双孔实验,这样才既能保证数据的准确性,又能反映出试剂盒的精密度。 5.样品稀释液应用加液器加注,并经常校对其准确性。 6.为防止样品蒸发,试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内,酶标板加上盖或覆膜。 7.未使用完的酶标板或者试剂,请于2-8℃保存。过氧化物酶标记抗人IgG工作液请依据所需的量配置使用。请勿重复使用已稀释过的过氧化物酶标记抗人IgG工作液。 8.ELISA试剂盒实验中,加样后及时放人孵箱,标本较多时,要分批操作。
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细胞培养不好怎么办？
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
培养细胞不贴壁 可能原因 1.胰蛋白酶消化过度； 2.支原体污染； 3.培养基pH值过碱（NaHCO3分解）； 4.细胞老化； 5.接种细胞起始浓度太低或太高。 解决方法 1.缩短胰蛋白酶消化时间或降低胰蛋白酶浓度； 2.分离培养物，检测支原体。清洁支架或培养箱。如发现支原体污染，丢弃培养物； 3.使用无菌醋酸溶液调整pH值或充入无菌CO2； 4.启用新的保种细胞； 5.调节最佳接种细胞浓度。 悬浮细胞成簇 可能原因 1.培养液中含钙,镁离子； 2.支原体污染； 3.蛋白酶过度消化使得细胞裂解； 4.DNA污染。 解决方法 1.用无钙镁平衡盐溶液洗涤细胞，轻巧吹吸2.细胞获得单细胞悬液； 3.分离培养物，检测支原体； 4.DNasel处理细胞。 培养细胞生长缓慢 可能原因 1.由于更换不同培养液或血清； 2.培养液中一些细胞生长必须成分如谷氨酰胺或生长因子耗尽或缺乏或已被破坏； 3.培养物中有少量细菌或真菌污染； 4.试剂保存不当； 5.接种细胞起始浓度太低； 6.细胞已老化； 7.支原体污染。 解决方法 1.比较新培养液与原培养液成分，比较新血清与旧血清支持细胞生长实验，让细胞逐渐适应新培养液； 2.换入新鲜配置培养液，或补加谷氨酰胺及生长因子； 3.用无抗生素培养液培养，如发现污染，丢弃培养物； 4.血清需保存在-10到-20℃。培养液需在2-8℃避光保存。含血清完全培养液在2-8℃保存，需在1周内用完； 5.增加接种细胞起始浓度； 6.换用新的保种细胞； 7.分离培养物，检测支原体。清洁支架和培养箱。如发现支原体污染，丢弃培养物。 培养细胞生长不好 可能原因 细胞本身的状态 1. 细胞传代次数多，细胞老化； 2. 细胞的接种量：接种量过低，细胞生长缓慢； 3. 细胞传代时间过晚：细胞中毒，影响传代后的细胞生长； 4. 胰酶消化时间过长或过短：时间过长，细胞死亡；时间过短，细胞未完全分离而成团，细胞死亡； 5. 细胞的冻存与复苏：慢冻速溶。
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有哪些细胞培养，对内毒素水平格外敏感
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
胎牛血清主要的作用就是提供基本的营养物质以及提供接触和伸展因子，它是采自5-8个月胎龄牛胚胎中的胎血。此时胎牛各脏器正处生长分化阶段，血中含有丰富的生长发育因子，非常适合各种细胞的培养，一旦胚胎发育完全这些因子自动消失。因此8个月胎龄以上的牛胚胎，已接近足月，不能作为胎牛血清的原料来使用。 有下列情况者，对血清内毒素应格外留意筛选： 1.养干细胞时，干细胞对内毒素非常敏感，如果血清中内毒素≥3EU/ml时，干细胞很容易死亡。很多使用者，在血清在试用前，就通过提早审核该批次《检测报告》，以决定是否入围进行试用。 2.养免疫细胞时，过高的内毒素可诱导免疫细胞释放炎症因子，抑制小鼠红细胞集落的形成等。 3.基因敲除相关的细胞实验，培养的细胞要尽可能保持其原始状态，任何引导细胞衰老或凋亡的试剂，都会让后续的实验结果“失之毫厘，谬以千里”。在准备血清和其他试剂时，选择极低的内毒素（≤1EU/ml），对实验至关重要； 4.原代培养、杂交瘤融合、细胞转染，或者肝细胞、神经细胞、内皮等难养细胞的扩增，这些都需要挑选好的血清给细胞以有力支持。因此，挑选更低的内毒素，是保证实验顺利的步。 5.实验室有些细胞，需要长期培养、长期冻存，或者经常复苏、经常培养的，血清会经常或长时间作用于细胞。为保证细胞的健康，都应该选用更低内毒素的血清，以避免内毒素长久对细胞的毒性影响。 总之，血清中内毒素含量过高，更容易导致细胞“亚健康”，造成数据不准，或细胞状态不良、老化、甚至死亡，导致试验中断失败。血清中的内毒素越低越好。
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细胞传代培养实验常见问题详解
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
01 一般拿到细胞后，应该注意什么? 收到细胞先不开盖,用酒精将整个细胞瓶外壁进行消毒，放在培养箱静置若干小时后(看细胞密度而定)在倒置显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照(建议收细胞时的培养基拍一张照片，观察培养基的颜色和是否有漏液情况，显微镜下拍细胞100X，200X各两张)，排除细胞本身污染的情况。 02 何时须更换培养基? 视细胞生长密度而定，常规细胞2-3天更换培养基。 03 细胞何时进行传代较好? 一般情况下细胞生长至完全汇合后就应该传代，所有细胞生长都有一个要求不宜生长过密(也就是常说的长老了)，但有接触抑制的细胞，在汇合前就必须进行传代，这类细胞一般在密度70-80%就进行传代，否则会引起细胞分化。 04 贴壁细胞如何进行传代? 去掉原T25培养瓶里面的培养基，T25瓶加3-4 ml PBS洗1-2次;弃PBS，再加1.5 ml的Trypsin-EDTA (1X)消化液消化细胞，显微镜下观察，待细胞变圆，细胞间隙明显，部分细胞刚开始脱离瓶壁，加4 ml左右完全培养液混匀终止消化，将细胞小心吹打下来，1000 rpm/min室温离心5min;弃上清，细胞沉淀用完全培养液重悬，按要求分瓶(视细胞密度而定1:2-1:3，1:3-1:6，1:6-1:8)，每T25瓶补足培养基至5-6 ml，37℃、5%CO2孵箱培养。 05 悬浮性细胞应如何传代处理? 一般仅需持续加入新鲜培养基于原培养角瓶中，稀释细胞浓度即可，若培养液太多时，将细胞悬液移入离心管中，1000 rpm/min 室温离心5 min。弃上清，细胞沉淀用完全培养液重悬，按要求分瓶(视细胞密度而定1:4-1:8)，每T25瓶加完全培养液至4-5 ml，37℃、5%CO2孵箱培养。有些悬浮细胞趋于成团生长，此时细胞生长状态良好，当补液时，需避免反复吹打。 06 贴壁细胞传代如何使用胰酶? 一般使用trypsin-EDTA浓度为0.25% trypsin-0.53 mM EDTA.2Na或0.05%trypsin-0.02 mM EDTA.2Na。消化液浓度过高时，易造成培养基中细胞碎片增多，黑渣子增多，常规细胞传代时建议用0.05%的胰酶进行消
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使用胰酶时，有哪些注意事项
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
胰酶的作用原理是什么呢？ 胰酶是一种蛋白酶，酶切位点是肽链的Lys或Arg两个残基的羧基端肽链，通过在特定位置上降解蛋白，使细胞膜上和培养皿结合处蛋白降解，从而使两者分离。这时细胞在自身内部细胞骨架的张力以及培养液表面张力的作用下成为球形。 使用胰酶时需注意哪些细节问题？ 在使用胰酶（Trypsins）细胞消化液的过程中要特别注意避免消化液被细菌污染。胰酶细胞消化液消化细胞时间不宜过长，否则细胞铺板后生长状况会较差，做流式时的CD Marker也可能会下降。胰酶进行分装时尽量分装成多瓶，并遵守3次左右用完和只装2/3体积的原则。因为冷冻保存时液体体积会膨胀，多次使用同一瓶胰酶反复冻融会降低消化效果并可能造成污染。胰酶适用于消化细胞间质较少的软组织和传代细胞，如胚胎、上皮、肝、肾等组织，但对于纤维性组织和较硬的癌组织效果较差。胰酶消化效果主要与pH值、温度、胰酶浓度、组织块大小和硬度有关。 注意：不是细胞全部成间隔分布很离散的单个圆形才表示消化好了。 一般肉眼观察贴壁细胞层，只要能移动了，多半呈沙状移动就可以了，这时就应该停止消化。 如何选择正确的细胞消化试剂？ BI提供动物来源的传统胰酶及基因工程生产的重组胰蛋白酶。 动物胰酶普遍用于血清培养，不同的细胞加入胰酶的成分和浓度不一样。贴壁不牢和半贴壁细胞尽量使用浓度0.05%不含EDTA的胰酶且不需要放在培养箱孵育，这样易于控制，对细胞的伤害也降低。对于难消化的细胞就需要使用含EDTA的0.25%的胰酶，而不是无限地延长消化时间。重组胰酶用于无血清培养。重组胰酶具有与动物源性胰蛋白酶相同的酶学性质，但是不含任何动物源成分，可替代胰蛋白酶使用（常用于细胞**）。 EDTA和胰蛋白酶各有什么作用呢？ 许多人不用胰蛋白酶，只用EDTA，或者用胰蛋白酶/EDTA联合作用。胰酶切割ECM（负责粘连和附着的蛋白），而EDTA通过螯合Ca2+，抑制Integrin的贴壁活性，所以EDTA的作用更加温和。
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ELISA试剂盒实验操作技巧您知多少?
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
试剂盒在国内有许多种叫法，例如：ELISA检测试剂盒、ELISAKit、酶联免疫试剂盒、酶联免疫吸附测定试剂盒、酶联免疫分析试剂盒、酶免试剂盒等，比较常见的叫法是ELISA检测试剂盒、酶联免疫吸附测定试剂盒等；ELISA试剂盒适用于体外定性检测人血清或血浆中的抗人类戊型肝炎（HEV）病毒IgM抗体ELISA检测，自从60-70年代问世以来，得到科研工作者的认可及推崇，在欧美及中国获得很大的推广，尤其是国内生化领域的长足发展。ELISA生物试验是一种敏感性高，特异性强，重复性好的实验诊断方法。由于其试剂稳定、易保存，操作简便，结果判断较客观等因素，已广泛应用在免疫学检验的各领域中。为了保证ELISA试剂盒实验质量，我们需要掌握一些小技巧以助于实验的成功，那么ELISA试剂盒的操作技巧您知道吗？ 如若掌握了这些实验技巧之后，在做ELISA实验中，试验起来会更熟练，大大的降低了实验过程中的风险，ELISA试剂盒实验的入门新手掌握了这些知识后，操作起来都会快的多。 ELISA试剂盒17个相关操作技巧如下： 1.切记在加酶试剂后用吸水纸在酶标板表面轻拭吸干。 2.合理安排检测量，以免反应板过多造成洗板等待时间长。 3.在吸取液体时，要用量程和需要量接近的枪去吸，减少误差。 4.务必做双孔实验，这样才既能保证数据的准确性，又能反映出试剂盒的精密度。 5.样品稀释液应用加液器加注，并经常校对其准确性。 6.为防止样品蒸发，试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内，酶标板加上盖或覆膜。 7.未使用完的酶标板或者试剂，请于2-8℃保存。辣根过氧化物酶标记抗人IgG工作液请依据所需的量配置使用。请勿重复使用已稀释过的辣根过氧化物酶标记抗人IgG工作液。 8.ELISA试剂盒实验中，加样后及时放人孵箱，标本较多时，要分批操作。按说明步骤严格控制操作时间，防止孵育时间人为延长，导致非特异性结合紧附于反应孔周围，难以清洗彻底。 9.剩余样品及废弃物应经121℃高压蒸汽灭菌30分
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胎牛血清的基础知识
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
胎牛血清（FBS）是指通过封闭的采集系统从牛胎儿的血液中提取的血清。血清又是什么呢？血清是血液自然凝结后剩下的琥珀色血液部分；通常通过离心进一步精制，以去除残留的血细胞。不含血细胞、纤维蛋白及凝集因子等，含有多种对细胞生长必需的营养因子及大分子物质。 胎牛血清可以用在哪里？ 胎牛血清（FBS）用作真核细胞体外细胞培养的生长补充剂 。动物血清（牛血清和其它动物血清）都用于细胞培养，其中使用最广泛的是胎牛血清（FBS）。 FBS含有生长因子和极低水平的抗体，因此在许多不同的细胞培养应用中具有多功能性。在FBS中发现了1000多种成分，包括蛋白质，电解质，脂质，碳水化合物，激素，酶和其他不确定的成分，这些成分在许多培养条件下对于支持细胞生长都是必需的。 制造环境中的学术和工业研究人员以及科学家都在其细胞培养基中使用胎牛血清（FBS）进行调查，包括生物技术研究/生产，疫苗制造，克隆和动物诊断。 胎牛血清能够用在人兽疫苗及生物技术药物的科研、工业生产和质量控制领域。胎牛血清通常用于人源细胞系和原代细胞培养。 胎牛血清的优点是什么？ 与其它类型血清相比，胚胎期动物血清含有更多的生长因子，及较少的gamma球蛋白含量。此外，跟新生动物血清和成体动物血清相比，胚胎期血清含有更低浓度的补体。补体具有溶解细胞的副作用，还会干扰免疫检测。 如何保存胎牛血清？ 胎牛血清一般是在-5°到-20°之间冻存，2°到8°之间融化。一个比较好的办法是，将胎牛血清分装到50ml管中，这样做就避免了反复冻融对血清造成的危害。偶尔一些试管等分的血清在冷冻温度下保持液态。 这是由于缺少成核中心，就是一些引发结晶（冷冻）的颗粒物质。只需用手指轻弹管子，它们就会立即固化。 血清融化后常出现沉淀，可能是血清蛋白变性造成的。简短离心即可除去沉淀，并且，这些沉淀一般不会影响血清质量的。
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香菇多糖的性质及用途
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
香菇多糖是一种宿主免疫增强剂，其主要有效成分是香菇，提取自优质香菇子实体的有效活性成分。 香菇多糖的性质： (1)化学组成：香菇多糖是一种以β-D(1→3)葡聚糖残基为主链，侧链为(1→6)葡聚糖残基的葡聚糖。 (2)性质：香菇多糖为灰白色粉末，大多为酸性多糖，溶于水、稀碱，尤其易溶于热水，不溶于乙醇、丙酮、乙酸乙酯等有机溶剂，其水溶液呈透明黏稠状。 香菇多糖的用途： 1.香菇多糖在医药领域的应用 香菇多糖在**胃癌、结肠癌、肺癌等方面具有良好疗效。作为免疫辅助药物，香菇多糖主要用来抑制肿瘤的发生、发展与转移，提高肿瘤对化疗药物的敏感性，改善患者的身体状况，延长其寿命。 香菇多糖与化疗剂联合使用，有减毒、增效的作用。化疗药物杀伤肿瘤细胞的选择性较差，对正常细胞也具有杀伤作用，产生毒副作用，造成化疗不能按期按量进行；由于化疗的剂量不足，常引起肿瘤细胞的耐药性，成为难治性癌症，影响疗效。化疗过程中服用香菇多糖，可以增强化疗的疗效，并减轻化疗的毒性作用；同时，化疗过程中患者的白细胞下降的发生率、胃肠毒性、肝功能损害及呕吐的发生明显降低。这充分说明了香菇多糖与化疗并用可以增效、减毒，并增强患者机体的免疫功能。 香菇多糖配合其他药物**慢性乙型肝炎，可提高乙肝病毒标志物的转阴作用，减少抗病毒的药物的副作用。此外，香菇多糖可用于**结核杆菌感染。 2.多糖在保健食品领域的应用 香菇多糖是一种特殊的生物活性物质，是一种生物反应增强剂和调节剂，它能增强体液免疫和细胞免疫功能。香菇多糖的抗病毒作用机制可能在于其提高感染细胞免疫力，增强细胞膜的稳定性，抑制细胞病变，促进细胞修复等功能。同时，香菇多糖还具有抗逆转录病毒活性。因此，香菇多糖是一种有待 此文章由上海尚宝生物为您提供
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细胞冻存相关实验操作详解
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
一、怎样冻存动物细胞? 一个实验室得到一个新的细胞株后，首先要把该细胞株培养扩增后冻存起来。细胞冻存首先可以在由于污染等情况丢失细胞时有备份可用，另外几乎所有细胞在培养传代的过程中发生一定程度的变异，为了保持实验结果的一致，一般细胞在培养几十代以后就不能再使用了，需要将冻存的，传代较少的细胞化冻培养再使用。 细胞冷冻过程有四个要点：细胞的收获、保护剂的使用、冷冻速率和储存环境。 (1) 细胞的收获 用来冻存的细胞一般选择在细胞约铺满 90% 的时候，这时细胞生长状态好，细胞数量也多，并且在收获细胞前 24 小时换一次培养液。收获用来冻存的细胞开始时方法和平时一样，用 100xg 离心 5 分钟收集细胞再重悬，活细胞记数。稀释或浓缩到细胞保存的最终细胞浓度的二倍(一般是 400-1000 万 细胞 /ml )，加入已经配好的等体积的培养液保护剂混合溶液中轻轻混匀，分装到冻存管，冷冻保存。 (2) 保护剂的使用 细胞冻存中， 一般使用DMSO 作为保护剂。在细胞冻存中， DMSO 使用的最终浓度一般是 5-15% ，某种具体细胞的冻存液中的DMSO浓度可以从ATCC查到。对特别敏感的细胞特别是杂交瘤细胞在冻存时使用 95% 血清和 5%DMSO 可能会好些。保护剂在使用时先用培养液或血清配成最终浓度的2倍，再与等体积的悬浮细胞的培养液混合。 (3) 细胞冻存的速率 细胞的冷冻速率最适控制在让细胞有足够的时间脱水而又不被过度脱水导致细胞损害。对大多数细胞来说，每分钟降 1 至 3 ℃是合适的。通常的操作是把细胞先在-20℃1-2个小时，再放入 -80℃冰箱过夜(如果没有-80℃冰箱，可以用干冰替代)，再转入液氮罐或低于 -130℃的冰箱长期保存。 (4) 储存环境 细胞长期保存温度是 -130 ℃或更低。液氮罐中气态层温度在 -140℃至 -180℃之间，细胞可保存在气态层或浸入液氮中，如果可能**保存在气态层，因为这样可避免由于有液氮进入冻存管而在拿出细胞时引起爆炸(但是这样液氮罐内只能存储少量液氮，需
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