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ELISA五种检测类型的优缺点比较
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
【进口ELISA试剂盒】可分有多种检测类型，是种广泛应用在测定液体样本中的蛋白、抗体、或激素的免疫分析技术。今天上午，我公司钱收到由技术部发来的ELISA技术，主要内容是“ELISA五种检测类型的优缺点比较”，下面分享给大家： 一、直接法(direct ELISA) 将抗原直接固定在固相载体上，加入酶标记的一级抗体，即可测定抗原总量，此一级抗体的特异性非常重要。 1.优势：操作手续简短，因无须使用二抗可避免交互反应。 2.缺点：试验中的一抗都得用酶标记，但不是每种抗体都适合做标记，费用相对提高。 二、间接法(indirect ELISA) 此测定方法与直接法类似，差别在于一级抗体没有酶标记，改用酶标记的二级抗体去辨识一级抗体来测定抗原量。 1.优势：二抗可以加强信号，而且有多种选择能做不同的测定分析。不加酶标记的一级抗体则能保留它zui多的免疫反应性。 2.缺点：交互反应发生的机率较高。 三、双抗体夹心法(sandwich ELISA) 被检测的抗原包被在两个抗体之间，其中一个抗体将抗原固定于固相载体上，即捕捉抗体。另一个则是检测抗体，此抗体可用酶标记后直接测定抗原的量；或不标记，再透过酶标记的二级抗体来测定抗原的量。这两种抗体必须小心选取，才可避免交互反应或竞争相同的抗原结合部位。 1.优势：高灵敏、高专一性，抗原无须事先纯化。 2.缺点：抗原一定得拥有两个以上的抗体结合部位。 四、竞争法(competitive ELISA) 样本里的抗原(自由抗原)和纯化并固定在固相载体上的抗原(固定抗原)一起竞争相同的抗体，当样品里的自由抗原越多，就可以结合越多的抗体，而固定抗原就只能结合到较少的抗体，反之亦然。经清洗步骤，洗去自由抗原和抗体的复合物，只留下固定抗原和抗体的复合物，拿来与只有固定抗原的对照组结果相比较，根据呈色差异就可计算出样品里的抗原含量。 1.优势：可适用比较不纯的样本，而且数据再现性很高。 2.缺点：整体的敏感性和专一性都较差。 五
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Elisa试剂盒挑选,上海恒远有妙招
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
在前面的内容中，我公司为大家介绍过如何选择试剂盒，但那些事根据试剂盒的品牌、性能、特点、厂家等方面作为选择因素的。今天上海德尔塔生物与您谈谈如何根据检测方法来选择，【Elisa试剂盒】挑选，上海恒远有妙招： 1.有些客户会用OVA(卵清卵白)做一些哮喘，过敏性肠炎的模型，然后会检测粘膜特异性的sIgA以及血清内里IgG，IgE等指标。建议做这些检测指标的朋友，选择sigma公司V级别的OVA，然后用这个来造模，自己包板摸条件，用OD值来比较抗体含量的变化。 2.Elisa检测方法简单，灵敏度高，Elisa适合检测血清或者培养上清的细胞因子、胰岛素、激素等排泄型的小分子卵白的定量检测；病原体抗原的定性与定量；评估自己制备的血清抗体的效价等。很多客户有个误区，拿来一个指标就想当然地尝试用Elisa去检测，是该检测活性的检测活性，该做western的做western。 3.对付一些小分子的检测，例如：前线腺素、糖皮质激素的检测，我的理解是要用竞争法Elisa去检测，也要购买采用这个方法的盒试剂盒。【Elisa试剂盒】一般细胞因子的检测，都是采用常规的夹心法Elisa检测，由于因子分子量比力大，一般10几个KD左右，很容易找到两个或多个抗原表位。 而小分子很难找到两个不通的表位，也就决定了包被抗体和检测抗体无法同时结合小分子并固相化。解决方案便是酶标板上包被二抗，每个孔加入一定量的酶标的小分子，然后加样品，再加不带标志的检测抗体，显色底物。样品的目标小分子的含量越高，吸光度越低。 我公司【Elisa试剂盒】产品仅供实验室科研使用，不适用于临床诊断。测定血清、血浆及相关液体样本中产品含量。产品质量保证，价格优惠合理，如有订购意向，欢迎您上海德尔塔生物业务员。
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细胞中出现的颗粒是个什么鬼?需要处理吗？
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
细胞培养的过程中，经常见到黑色的颗粒或小黑点，这种情况是怎么引起的呢？该怎么避免呢？那么今天上海恒远将为大家分析：细胞中出现的颗粒是个什么鬼?需要处理吗？原因： 黑点，大概有细胞本身带的，环境有的，还有人身上带进细胞间的， 还有就是血清和培养基。 解决办法： 1、如果小黑点有增殖趋势，那么就有可能是污染了，需要处理； 2、如果小黑点没有增殖趋势，且不影响细胞生长，也不影响实验的话，则可能 a、是「黑胶虫」，黑胶虫究竟是一种生物还是非生物，本身就存在争议。有人认为是从血清中来的一种原虫，也有人认为是细菌，或是真菌，也有人认为是血清中的蛋白的结晶。「黑胶虫」可寄生于动物细胞，也可以生存于培养基中，依靠细胞和培养基中的营养为生，并随细胞传代而传代。「黑胶虫」与细胞竞争性生长，开始时对细胞并没有什么影响，但当黑胶虫的数量多到一定程度的时候， 细胞生长就会受到影响直至死亡，严重影响了科研活动的开展和进行。以前（这个至少是 10 年以前），很多实验室在养细胞时用国产血清，那时的血清可能质量不过关，有所谓的「黑胶虫」，但是也没有明确的鉴定。但是现在的血清，即使国产的，稍大点的厂家，产品里这种现象就少见了。 b、是细胞碎片，或血清里德沉淀析出，在做布朗运动。 c、是核糖体，也可能是杂质 我司为广大客户提供高质量的免疫学和生命科学相关产品。质量可靠，被全国各大院校科研机构认可并为Elisa试剂盒标准品对照品长期供应商。我们将以专业执着，精益求精的精神服务于广大科研用户。
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恒远BIM试剂盒热销原因何在?吃瓜群众戳进来
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
前言：上海德尔塔生物主要代理的ELISA试剂盒品牌有BIM、R&D、TSZ，品牌及质量经各大院校实验室及科研所验证，品质保障、服务完善。2015年上海德尔塔生物与检测试剂生产商美国BIM公司签署代理协议，正式成为BIM中国合法授权的总生产厂家，并负责BIM产品在中国境内的推广销售及售后工作！我司BIM品牌ELISA试剂盒自上市以来广受科研者们的喜爱与支持。那么恒远BIM试剂盒热销原因何在呢? 原因一、质量可靠。在研发过程中选择测定方法，反复优化测定体系、测定条件和操作步骤，并且进行多种生物样品的实际测定验证，以确保测定的专一性、灵敏度、重复性和回收率；在生产过程中实行严格的质量控制。德尔塔生物实行先用后付方法，即用户满意后才付款。万一出现质量问题（非人为因素），我司及时免费提供新试剂盒。 原因二、操作简便快捷。首先，测定方法以分光光度法为主，并且可以用酶标仪测定，保证绝大多数用户都有相应的仪器和操作经验。其次，保证测定结果可靠的基础上科学简化操作步骤，例如，根据反应步骤配制工作液，显著减少了用户加液次数，尽量统一加试剂的体积，显著减少用户调移液器的次数等等。zui后，操作说明简洁明确，用户一看就懂。 原因三、价格合理、免费代测。恒远热销产品之BIM试剂盒将不定期会有感恩回馈新老客户活动，不但价格优惠还有好礼相送！购买我司ELISA试剂盒可以享受全程一对一技术指导，还可免费提供代检测等完善的售后服务（上海地区可上门取样）。 原因四、系列成套，便于用户选择。德尔塔生物紧跟研究热点，针对某个研究主题，优选测定指标，全面满足用户进行该主题研究的需要。 温馨提示：真正的*试剂盒应该符合这几个条件： 1.原料：每一盒试剂盒原料都应产自原品牌产地，保证、灵敏、特异的抗体、稳定的重复性和可靠性! 2.原厂：产品均应由生产厂家原工厂生产，绝无委托第三方生产，始终保持统一的高品质。 3.原品牌：品牌应是工厂绝非贴牌。 4.原装：整个生产过程原厂完
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PBS缓冲液配制方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
名称：PBS缓冲液含0.05%吐温－20的pH7.4的磷酸盐缓冲液（简称为PBS－T）配制方法为： 称取磷酸二氢钾（KH2PO4），磷酸氢二钠（Na2HPO4·12H2O），氯化钠（NaCl），氯*钾（KCl），吐温－20 ，加水。 PBS:Phosphate Buffered Saline PBS 1L配方pH7.4：磷酸二氢钾（KH2PO4）：0.27g，磷酸氢二钠（Na2HPO4）：1.42g， 氯化钠（NaCl）：8g，氯*钾（KCl）0.2g，加去离子水约800mL充分搅拌溶解，然后加入浓盐酸调pH至7.4，zui后定容到1L。高温高压灭菌后室温保存。
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ELISA测定标本采集不当所致由哪些引起的?
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
标本保存不当: 在冰箱中保存过久的标本，血清中IgG可聚合成多聚体、AFP可形成二聚体，在间接法ELISA测定中会导致本底过深、甚至造成假阳性；标本放置时间过长（如一天以上），有时抗原或抗体免疫活性减弱，亦可出现假阴性。为克服上述干扰，ELISA测定的血清标本宜为新鲜采集；如不能立即测定，5天内测定的血清标本可存放于4℃，1周后测定的血清标本应低温冻存；冻存后融解的标本，蛋白质局部浓缩，分布不均，应充分混合后再测定，但混匀时应轻柔，不可强烈振荡。 标本凝集不全: 在没有促凝剂和抗凝剂存在的情况下，正常血液采集后1/2~2h开始凝固，18~24h完全凝固。临床检验工作中，有时为了争取时间快速检测，常在血液还未开始凝固时即强行离心分离血清，此时的血清中仍残留部分纤维蛋白原，在ELISA测定过程中可以形成肉眼可见的纤维蛋白块，易造成假阳性结果。 标本受细菌污染: 因菌体中可能含有内源性辣根过氧化物酶，因此，被细菌污染的标本同溶血标本一样，亦可产生非特异性显色而干扰测定结果。 标本溶血: 由于各种人为原因引起的标本溶血，均可因红细胞破坏溶解时释放出大量具有过氧化物酶活性的血红蛋白，在以辣根过氧化物酶为标记的ELISA测定中，会导致非特异性显色，干扰测定结果。为克服上述干扰作用，标本采集时必须注意避免溶血。 标本采集解决的办法是血液标本采集后必须使其充分凝固后再分离血清，或标本采集时用带分离胶的采血管或于采血管中加入适当的促凝剂。
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如何从脂肪组织中提取总蛋白？
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
从培养的细胞和组织中提取总蛋白是实验室非常常见的实验步骤，从大多数类型的细胞和组织中提取总蛋白比较容易，但是从脂肪组织中提取高质量和高浓度蛋白质是非常困难的。脂肪组织有白色和棕色脂肪两种类型，被称为白色脂肪组织（WAT）和棕色脂肪组织（BAT）。脂肪组织中含有许多脂滴，蛋白质含量小于细胞总数的 2%。低蛋白含量使得从脂肪中分离高浓度蛋白挑战性。以下是几种从脂肪组织中提取蛋白的方法： A.RIPA 缓冲液提取法： 脂肪组织通过含有表面活性剂的缓冲液（例如 RIPA 缓冲液）匀浆，离心后，收集脂肪层下的液体组分为蛋白质，这种方法是相对简单的，但是蛋白质的产量非常低，因为表面活性剂经常导致蛋白质形成微小颗粒导致蛋白丢失。 B. 有机溶剂萃取 TCA 沉淀法： 有以下三种方法：1）脂肪组织通过蔗糖密度梯度离心，丙酮中加入三氯乙酸（TCA）-20℃ 过夜沉淀蛋白。2）脂肪组织用有机溶剂提取液裂解（CHCl3和甲醇的混合物），也如上用 TCA 沉淀。3）脂肪组织用有机溶剂提取液（TEF 和CHCl3匀浆，通过离心将水相和CHCl3相分离，将其上的水相和交界面去除，并通过离心蒸发干燥。以上三种方法的共同问题是操作繁琐，产量低。 C. 离心管柱提取法： 这种方法利用了一种新的蛋白质提取技术，脂肪组织通过无表面活性剂的缓冲液匀浆，水油乳状液通过简单的冷冻后，离心使其通过特殊的离心管柱（有孔径，表面性质被处理过的）提取。离心管柱的作用是快速，干净的从油相中分离出水相蛋白。Invent Biotechnologies Inc 公司利用技术生产的这种脂肪蛋白提取试剂盒可以从脂肪组织中提取全部的总蛋白，产量远远高于其他方法。
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ELISA试剂盒SCI文章载体的形状分析
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
ELISA试剂盒SCI文章载体的形状主要有三种：微量滴定板、小珠和小试管。为便于作少量标本的检测，有制成8联孔条或12联孔条的，放入座架后，大小与标准ELISA试剂盒SCI文章板相同。ELISA板的特点是可以同时进行大量标本的检测，并可在特制的比色计上迅速读出结果。现在已有多种自动化仪器用于微量滴定板型的ELISA检测，包括加样、洗涤、保温、比色等步骤，对操作的标准化极为有利。聚苯乙烯经射线照射后，其吸附性能特别是对免疫球蛋白的吸附性能增加，应用于双抗体夹心法可使固相上抗体量增多，但用于间接法测抗体时空白值较大。固相载体在ELISA试剂盒SCI文章测定过程中作为吸附剂和容器，不参与化学反应。中载体的材料很多，zui常用的是聚苯乙烯。ELISA试剂盒SCI文章聚苯乙烯具有较强的吸附蛋白质的性能，抗体或蛋白质抗原吸附其上后仍保留原来，加之它的价格低廉，所以被普遍采用。聚苯乙烯为塑料，可制成各种形式。在ELISA试剂盒SCI文章中，用作固相载体的小珠一般为直径0.6cm的圆珠，表面经磨砂处理后吸附面积大大增加。ELISA板孔的吸附面积约为200mm2，小珠均为1000mm2，将近ELISA板孔的5倍。吸附面积的增大即意味着固相抗原或抗体量的增加。再者，球型小珠的表面弧度更有利于吸附的抗原决定簇或抗体结合位点的暴露面处于反应状态，因此珠式ELISA的反应往往更为灵敏。小珠的另一特点是更易于使洗涤彻底，使用特殊的洗涤器，使小珠在洗涤过程中滚动淋洗，其洗涤效果远较板孔的浸泡式为好。但由于磨砂工艺的难度较大，小珠的均一性较差。ELISA试剂盒SCI文章以微量滴定板zui为常用，于EILSA的产品称为ELISA板，上标准的微量滴定板为8×12的96孔式。
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优良的菌种一般会具备以下六点特征
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
费氏弧菌发光杆菌生长整齐 同一品种，使用相同的培养基，在相同培养条件下，长速和长相应基本相同。 菌丝丰满 优良的原种，菌丝丰满、浓密、均匀。如菌丝干瘪、萎缩则不可使用。 菇香味浓郁 正常的原种，打开瓶(袋)口，可闻到浓郁的菇香味。如果气味清淡或无香味，甚至有一股异味，说明菌种有问题，不能使用。 无其他生物污染 费氏弧菌发光杆菌污染的真菌易于鉴别，有各类各色的孢子。细菌常被忽略，肉眼鉴别较难。 长速正常 不同品种、不同培养基、不同生长条件长速不同，但是每一个品种，在固定的培养基和培养条件下，有其固定的生长速度。 长相正常 费氏弧菌发光杆菌不同种类的菌种长相不同，但同一品种不同个体长相要一致，包括色泽和色素产生的早晚、菌落厚度、气生菌丝多寡、背面色泽等。
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检测抗原elisa试剂盒有效期方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
1.抗原elisa试剂盒内酶标条可拆卸，按实验需求可分多次使用。使用后的剩余ELISA检测试剂盒建议在实验后1个月内使用完毕。 产品过期时间以盒子上的标签为准，保质期内所有组分都确保是稳定的。 2. 所有试剂均按试剂瓶标签上所示保存。请注意，收到试剂盒后请尽快将标准品、检测溶液A、检测溶液B以及96孔板保存于-20℃。 3. 使用后的试剂盒：剩余试剂仍需按照试剂瓶标签所示，开封后的酶标板要加干燥剂后密封保存于-20℃，避免潮湿。 在客户收到产品之后，可以根据盒子上的生产日期来决定他的有效期。 抗原elisa试剂盒直接在2~8℃储存即可，但是对于开封后试剂盒要以怎样的方式保存呢？ 它的有效期是多久？ 我公司提供免费检测服务：使用我司方法的，只收取试剂盒的费用，其他辅助试剂全部免费。 我们将根据实验工作量和难易程度，双方协定实验周期，保质保量完成委托实验，并将实验结果和材料用特快专递免费寄送到您手中。 ELISA试剂盒主要分为以下系列： 1.自身免疫检测试剂盒 2.内分泌检测试剂盒 3.传染病检测试剂盒等等。 4.肝纤维化检测试剂盒 5.心肌梗塞检测试剂盒 6.细胞因子检测试剂盒 7.肿瘤标志物检测试剂盒 8.优生优育检测试剂盒 比如水中总无机氯含量测定，样品水中含有无机氯20mg/L，取100mL被测水样品，加入0.1mL浓度为10mg/mL的含无机氯标准样品，测定时忽略体积变化，如果测定出样品中无机氯为2.98mg/L，ELISA检测试剂盒则认为回收率为98%。 1、节省实验经费。 2、稳定的重复性和可靠性； 3、吸附性能好，空白值低，孔底透明度高的固相载体； 4、、灵敏、特异的抗体； 5、适用血清、血浆、组织匀浆液、细胞培养上清液、尿液等等多种标本类型； 抗原elisa试剂盒回收率 回收率是反应待测物在样品分析过程中的损失的程度，损失越少，回收率越高，如果作标液1PPM，就是1毫克/升，而作出标准数据为0.99毫克/升，就是说你是99%，这个与真实成分有密切的关系，说明方法的准确度。
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羊源性成分核酸检测PCR-荧光探针试剂盒质量控制疑问分析
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
羊源性成分核酸检测PCR-荧光探针试剂盒质量操控是监视全进程，ELISA试剂盒扫除差错，防止变化，维持标准化现状的一个办理进程。这一进程是经过一个反应环路进行的。对比或较对实践数据与预期值之间的区别，并阐明发生这一区别的因素。超出预订差错规模，报警系发出信号，ELISA试剂盒反应通道中止。采取行动，处理区别。恢复原状（原标准状态）的手法发挥作用。质量操控首要选用质控图进行。质控图是把某一查验的功能数据与所核算出来的预期的"操控限"进行对比的图。这种功能数据是在按规程正常进行时，按时刻次序而抽选出来的，其意图是检查查验进程中变异的"可清查"性因素。"可追逆"性的差错因素，是指除掉随机差错以外的别的因素。"操控限"是经过统计核算出来的，在后咱们将具体介绍。羊源性成分核酸检测PCR-荧光探针试剂盒实验中，查验同一样本达20次以上时，就会发现这组数据（指测定成果的吸光值）散布在均值两边，大部分集中在均值邻近。人ELISA试剂盒假如以测定值为横坐标，以呈现的频率为纵坐标作图，就可绘出一个呈钟形的曲线图。钟顶处为均值，别的值以均值为中心对称散布，这即是正态散布。正态曲线以下的面积称概率，常用样本的均数（X）和标准差（SD）来表明，其核算方法如下：均值、标准差和概率的关系如下：X±1SD，概率0.68X±2SD，概率0.95X±3SD，概率0.99。换言之，当ELISA试剂盒检查同一样本达必定次数后所得的一组数据，其间靠近均值（X）的±1SD规模内的数据，占该组数据的68%，在X±2SD规模内散布的数据占整体的95%，在X±3SD规模内散布的数据占整体的99%。当咱们要求查验成果在X±2SD规模内为合格时，将有95%的数据也许合格。准确度是指测定成果与真值（或靶值）接近的程度。准确度不能以数字表明，一般用不准确度来衡量。测定成果与靶值的违背程度称为偏差，它表明该项查验的不准确度。质控血清是已有靶值的血清，在每次的惯例查验中加入一份或数份，经过所得成果来了解本次查验的状况。质控血清查验的
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营养菌丝体的特化形态
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
1)微生物菌种假根（rhizoid）是Rhizopus（根霉属）等低等真菌葡萄菌丝与固体基质接触分化出来的根状结构，具有固着和吸取养料等功能。 2）葡萄菌丝（stolon）又称葡萄枝。毛霉目（Mucorales）真菌在固体基质上常形成与表面平行、具有延伸功能的菌丝，辰葡萄菌丝。zui典型的可在Rhizopus中见到。在固体基质表面的营养菌丝分化为葡萄菌丝，在其上每隔一段距离可长出深入基质的假根和伸向空间的孢囊梗，随着葡萄菌丝的延伸，不断形成新的假根和孢囊梗，这类真菌会随基质的存在而向四处快速蔓延，根本就不会形成像在其他真菌中常见的那样固定大小和形态的菌落。 3）吸器（haustorium）由几类专性寄生的真菌如绣目菌（uredinales）、霜霉目（peronosporales）和白粉菌目（erysiphales）的话的一些种所产生。吸器是一种只有在宿主细胞间隙间蔓延的营业菌丝上分化出来的短支，她可在侵入细胞内形成指状或者球状，丝状的构造。用以吸取宿主细胞内养料而不是其致死。 4)附着枝（adhesive branch）若干寄生真菌如asteridiella homalii-angustifolii（小光壳炱）和irenina（秃壳炱属）等，微生物菌种由菌丝细胞生出1-2个细胞的短枝，将菌丝附着于宿主体上，此即附着枝。 6）菌核（sclerotium）是一种形状，大小不一的休眠菌丝组织，在不良外界条件下，微生物菌种查询网可保存数年生命力，菌核形状有大有小，大的如茯苓（大如小孩头），小的如油菜菌核（形如鼠粪）。菌核的外层颜色深，坚硬，内层疏松，大多呈白色。 7)菌索（rhizomorph funiculus）菌索一般是有伞菌如armillaria mellea（假蜜环菌）等产生，为白色根状菌丝组织，功能为促进菌体蔓延和抵御不良环境，通常可在腐朽的树皮或地下发现。 8）密环（ring）和菌网（net）捕虫菌目（zoopagales）和一些半知菌的菌丝常会分化成菌环或网状的特化菌丝组织，用以捕捉线虫或其他微小动物，然后进一步从这类环或网上生出菌丝侵入线虫等体内，吸取养料。线虫是生存于土壤中危害植物根
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干粉细胞培养基的配制方式及注意事项
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
在干细胞培养基配制过程中，不同的培养基其溶解性可能有一定的差别，培养基配制过程中血清、碳酸氢钠及抗生素等的添加时间和用量、pH和渗透压的测定及酸碱度是否需要调节等，都可能影响zui终细胞培养基性能的发挥。 （1）配制常规过滤除菌粉末细胞培养基 1) 配制用水：通常选择制备的超纯水器过滤出的去热原（细菌内毒素
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原代细胞如何消除组织培养的污染
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
原代细胞当重要的培养污染时，研究者可能试图消除或控制污染。首先，确定污染物是细菌、真菌、支原体或酵母，把污染细胞与其它细胞系隔离开，用实验室消毒剂消毒培养器皿和超净台，检查HEPA过滤器。高浓度的抗生素和抗霉菌素可能对一些细胞系有毒性，因而，做剂量反应实验确定抗生素和抗霉菌素产生毒性的剂量水平。这点在使用抗生素如两性霉素B和抗霉菌素如泰乐菌素时尤其重要。下面是推荐的确定毒性水平和消除培养污染的实验步骤。①在无抗生素的培养基中消化、计数和稀释细胞，稀释到常规原代细胞传代的浓度。②分散细胞悬液到多孔培养板中，或几个小培养瓶中。在一个浓度梯度范围内，把选择抗生素加入到每一个孔中。例如，两性霉素B推荐下列浓度，0.25，0.50，1.0，2.0，4.0,8.0 mg/ml。③每天观测细胞毒性指标，如脱落，出现空泡，汇合度下降和变圆。④确定抗生素毒性水平后，使用低于毒性浓度2-3倍浓度的抗生素的培养液培养细胞2-3代。⑤在无抗生素的培养基中培养细胞一代。⑥重复步骤4。⑦在无抗生素的培养基中培养4-6代，原代细胞确定污染是否以已被消除。
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分析ATCC细胞培养技术注意事项
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
1.ATCC细胞实验进行前，无菌室及无菌操作台(laminar flow) 以紫外灯照射30-60 分钟灭菌，以70 %ethanol 擦拭无菌操作抬面，并开启无菌操作台风扇运转10 分钟后，才开始实验操作。每次操作只处理一株细胞株，且即使培养基相同亦不共享培养基，以避免失误混淆或细胞间污染。实验完毕后，将实验物品带出工作台，以70 % ethanol 擦拭无菌操作抬面。操作间隔应让无菌操作台运转10 分钟以上后，再进行下一个细胞株之操作。 2. 无菌操作工作区域应保持清洁及宽敞，必要物品，例如试管架、吸管吸取器或吸管盒等可以暂时放置，其它实验用品用完即应移出，以利于气流之流通。实验用品以 70 % ethanol 擦拭后才带入无菌操作台内。实验操作应在抬面之中央无菌区域，勿在边缘之非无菌区域操作。 3. 小心取用无菌之实验物品，避免造成污染。勿碰触吸管尖头部或是容器瓶口，亦不要在打开之容器正上方操作实验。容器打开后，以手夹住瓶盖并握住瓶身，倾斜约45° 角取用，尽量勿将瓶盖盖口朝上放置桌面。 4. 工作人员应注意自身之安全，须穿戴实验衣及手套后才进行实验。对于来自人类或是病毒感染之ATCC细胞应特别小心操作，并选择适当等级之无菌操作台(至少 Class II)。操作过程中，应避免引起aerosol 之产生，并避免尖锐针头之伤害等。 5. 定期检测下列项目： 5.1. CO2 钢瓶之CO2压力 5.2. CO2 培养箱之CO2浓度、温度、及水盘是否有污染(水盘的水用无菌水，每周更换)。 5.3. 无菌操作台内之airflow 压力，定期更换紫外线灯管及HEPA 过滤膜，预滤网(300小时/预滤网，3000 小时/HEPA)。 6. 水槽可添加消毒剂(Zephrin 1:750)，定期更换水槽的水 7. 认真按照操作规程进行实验，一般不大会导致污染，很多情况下是由于所用的试剂或培养基有污染而使实验失败，粉末培养基配制好后(加了血清)，一般在4度尽量不要超过1个月，如在-20度存放时间可长一些，但也不要超过3-4个月，可能对于永生化细胞株来说要求不是太高，但我在过去的4年里一直是作原代
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