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ELISA试剂盒复孔检测时该如何稀释！
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
设计ELISA复孔检查时，是对同一个样品作两次稀释，再分别加到板上的两个孔，还是只稀释一次，然后吸取两次分别加到两个孔？前者似乎把稀释时的误差也考虑到了，但做出来的结果两个孔相差挺大的。而较常使用的是哪种稀释方法？ 为了减小ELISA试剂盒误差，是先稀释再加样。而针对这位客户所遇到的疑问，上海沪鼎技术人员是这样解说的： 1. 前者测的是稀释和移液的误差，后者只有移液误差。 2. 一般都是稀释一次，分两孔吧。同浓度的分复孔。 3. 由于是从同一原液稀释，一般不考虑稀释误差(稀释误差是存在的)，都是稀释到想要的倍数直接分孔(而不是一一稀释，这样可以使稀释误差减小)。 4. 复孔是为了排除移液体积，板的影响，以及其他系统误差的，要求复孔的浓度是一致的。稀释后分孔能满足此要求，一一稀释不能。 沪鼎小提示：在ELISA实验中设复孔，目的是为了减少本次实验的系统误差对实验数据带来的影响，有条件的话复孔的数量可以增加，系统误差更小。
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Ausbian进口特级胎牛血清为何能经得住各种难养的细胞考验
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
初次接触细胞培养时经常会疑惑这种细胞用什么品牌好呢?其实这个问题的答案可以很简单，也可以很复杂。本文威正翔禹|缔一生物为您分析Ausbian进口特级胎牛血清为何能经得住各种难养的细胞考验。 优势： 内毒素含量极低
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血清的质量如何鉴定
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
血清是我公司主营产品之一，质量保证，价格优惠。血清质量高低取决于两方面因素：一是取材对象，二是取材过程。用于取材的动物应健康无病并且在的出生天数之内，取材过程应严格按照操作规程执行，制备出的血清要经过严格的质量鉴定。 1、 如何储存和解冻血清才不会使产品质量受损? 将血清从冷冻箱取出后，先置于2～8℃冰箱使之融解，然后在室温下使之全融。但必须注意的是，融解过程中必须规则地摇晃均匀。 长时间储存在2-8℃时，血清中的各种蛋白和脂蛋白（如冷凝集素、纤维蛋白原、玻粘连蛋白等）可能聚集而形成沉淀或可见的混浊。因此，推荐在-20℃以下储存血清，并避免反复冻融。 我们建议血清应保存在-2O℃。若存放于4℃时，请勿超过一个月。若一次无法用完一瓶，建议无菌分装血清至恰当的灭菌容器内，再放回冷冻。 2、血清中包含絮状沉淀，它们是什么，怎么处理? 沉淀包含纤维蛋白和脂蛋白。这是正常特性，不会影响产品性质。要除去沉淀，离心血清（400g，1-2分钟）或者简单的让其沉淀在瓶子底部，将血清小心的转移到另一个无菌瓶里（一般不建议采用过滤的方法除去沉淀，因为沉淀会堵塞滤膜而无法过滤）。大多情况轻轻摇动沉淀并加热至37℃就会再溶解。所以，使用产品时要摇动并加热血清至37℃，沉淀会自然消失。 3、 如何避免血清中产生沉淀? 按如下操作可避免沉淀的产生： （1）解冻血清时，请随时将之摇晃均匀，使温度及成分均一，减少沉淀的发生。 （2） 血清分装冻存时，须规则摇晃均匀（小心勿造成气泡），使温度与成分均一。 （3） 勿直接由-20℃直接至37℃解冻，因温度改变太大，容易造成蛋白质凝结而发生沉淀。 （4） 勿将血清置于37℃太久，否则血清会变得浑浊，同时血清中许多较不稳定的成份也会因此受到破坏，从而影响血清的品质。 （5） 血清的热灭活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以无须做此步骤。 （6） 若必须做血清的热灭活，请遵守56℃，30分钟的原则，并且随时摇晃均匀。温度过高，时间过
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ELISA的基本原理是什么,您还不知道吗?
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
ELISA即酶联免疫吸附试验，是一种常用的固相酶免疫测定方法。Engvall 和Perlmann于1971年zui先应用该法进行了IgG定量测定，并命名为"enzyme linked immunosorbent assay (ELISA)"。 ELISA的基本原理是：1.使抗原（或抗体）结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性；2.使抗原（或抗体）与某种酶联结成酶标抗原（或抗体），而且此酶标抗原（或抗体）既保留其免疫活性，又保留其酶活性；3.测定时将受检标本（抗体或抗原）和酶标抗原（或抗体）按不同步骤与固相载体表面的抗原或抗体进行反应，再用洗涤方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其它物质分开，zui后结合在固相载体上的酶量与标本中受检的抗体或抗原量成一定比例；再加入酶反应底物后，底物被酶催化后变为有色产物，根据其颜色反应的深浅进行定性或定量分析，以了解被测标本中抗体或抗原含量。
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恒远告诉您:细菌转化的操作步骤
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
细菌转化 操作步骤 （1）事先将恒温水浴的温度调到42℃。 （2）从-70℃ 超低温冰柜中取出一管（100μl）感受态菌，立即用手指加温融化后插入冰上，冰浴5~10min。 （3） 加入5μl连接好的质粒混合液（DNA含量不超过100ng），轻轻震荡后放置冰上20min。 （4） 轻轻摇匀后插入42℃水浴中1~2min进行热休克，然后迅速放回冰中，静置3~5min。 （5） 在超净工作台中向上述各管中分别加入500μl LB培养基（不含抗菌素）轻轻混匀，然后固定到摇床的弹簧架上37℃震荡1h. （6） 在超净工作台中取上述转化混合液100~300μl，分别滴到含合适抗菌素的固体LB平板培养皿中，用酒精灯烧过的玻璃涂布棒涂布均匀（注意：玻璃涂布棒上的酒精熄灭后稍等片刻，待其冷却后再涂）。 （7） 如果载体和宿主菌适合蓝白斑筛选的话，滴完菌液后再在平板上滴加40μl 2% X-gal，8μl 20% IPTG，用酒精灯烧过的玻璃涂布棒涂布均匀。 （8） 在涂好的培养皿上做上标记，先放置在37℃恒温培养箱中30-60min直到表面的液体都渗透到培养基里后，再倒置过来放入37℃恒温培养箱过夜。 （9） 在被细菌污染的桌面上喷洒70%乙醇，擦干桌面，写实验报告。 （10）观察平板上长出的菌落克隆，以菌落之间能互相分开为好。注意白色菌斑。 上海德尔塔生物有限公司是一家全国性专业经销生化试剂，分子生物学试剂，免疫试剂，本公司经营品种多，质量好，价格合理，订货快速，交货及时，如需要订购我司ELISA检测试剂盒,ELISA检测试剂盒价格,进口ELISA检测试剂盒,培养基,培养基价格,进口培养基,elisa试剂盒,elisa试剂盒价格请电来咨询。
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怎样正确的复苏细胞
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
细胞冻存好了，接下来要注意什么问题呢?没错，就是记得到时间了，拿出来复苏。那么，细胞复苏的过程中又有哪些该注意的事项呢?细胞活力和形态检查的作用何在?不罗嗦了，请看下文： 活力检查 – 千万不要使用不健康的细胞，可能有污染(真菌、支原体等)，如果发现有污染毫不犹豫的丢弃! 形态检查 – 检查细胞的固有形态和生长行为。 好了，开始切入正题 冻存细胞： 补充新的培养液 – 在您开始冻存细胞的前一天补充新的培养液。 在细胞长至70%单层时收获细胞，计数活细胞数，用冻存液调整细胞密度 ~5 x106 cells/ml (根据不同的细胞类型调整) 冻存液 – 用冻存液洗细胞并用冻存液重悬细胞，有不同类型的冻存液，根据细胞类型选择zui合适的冻存液(常用的冻存液成分有): – 5-10% DMSO – 注意确保DMSO不含有其他的毒性物质。 – 5-15% 甘油 – 如果细胞在无血清培养基内生长，应在50%条件培养基内(细胞在无血清培养基内生长24小时)内冻存和复苏。 在冻存管上标记好细胞类型，日期，冻存人等信息，并保证每冻存管不超过1.5ml. 程序降温是保证冻存细胞活性的关键，使用 Mr. Frosty(找生物注一种装置)保证降温速度为1°-3°C，置于-80°C冰箱内过夜，如果没有Mr. Frosty装置，可以使用实验室常见的泡沫盒、棉花等(原文是实验室尿布，呵呵，不知道是什么鸟)。放入液氮罐之前记录冻存管的数量和位置。以zui快的速度转移冻存管知液氮罐内，因此，此步骤使用干冰，或者把冻存管浸入装有液氮的小盒内。此外还要注意，在冻存管上没有足够的空间记录细胞的详细信息，做好记录是非常非常重要的！ 还有一个zui重要的，一定要在异地的液氮罐内保存同样的一份细胞，以免其中的一个液氮罐出现问题! 细胞复苏-正确的复苏方式和正确的冻存方式同样重要，熟记以下要点： 当从液氮罐内取出细胞时，有可能会出现冻存管破裂的情况，使用保护面罩和防护服十分必要(找生物注国内这个方面做得非常
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组织培养用水的配制及保存的注意事项
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
组织培养用水的配制及保存溶液应注意以下事项： 1、配制溶液之原材料药品等都必须经过试用。药品一般采用化学纯的，标签要清楚以防混淆。 2、配制溶液时所用器具，如烧杯、容量瓶、量筒、漏斗等都应洗涮干净，zui后用蒸馏水或去离子水涮净、烤干备用。 3、称量药品力求：其误差应在0.1%之下，称量过程防止混淆。 4、配制平衡盐溶液的过程要严格按照配制方法顺序配制，主要是防止磷酸钙和碳酸钙的沉淀，当时就应处理完毕，如发生疑问的则不要使用，重新进行配制。 5、配制溶液用的水使用新鲜的制备时间长的水多会有变化，不宜使用。 6、配制溶液的过程，尤其是大量配制的溶液应做好记录，如批次、材料、份量、消毒、保存、使用情况、配制人等。 7、必须注意配制溶液的药品标签所注明的含结晶水的数量是否与配方相同，如不同则应经过计算，得到应加入的量。 8、每批溶液配成后均需经过试用方可大量使用。 9、配好的溶液应立即除菌处理，如高压灭菌、过滤或加抑菌物质，以防杂菌生长。 10、溶液保存过程预防杂菌和溶液变质失去效用，故一般保存在较低的温度中，如4℃冰箱（及低温冰箱），瓶栓应紧闭。 11、保存其间的溶液如发现细菌污染，或有问题时，则不应使用。
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ELISA试剂盒显色和比色分析
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
在ELISA试剂盒试验中各种酶标仪功能都会有所不同，所以在运用中应具体阅读说明书，再进行下一步操作。自从20世纪60-70年代面世以来，Elisa法得到*科研工作者的认可及推重，在欧美及我国取得很大的推行，尤其是国内生化范畴的长足发展。ELISA试剂盒有着准确性高、灵敏度高、特异性强等许多的长处，它在检测抗体、抗原等方面有很好的运用，深受广阔用户朋友的喜爱。但是，在试验过程中，也需求留意许多问题，特别是显色、比色问题。显色 ELISA试剂盒显色是ELISA中的终究一步温育反响，此刻酶催化无色的底物生成有色的产品。反响的温度和时刻仍是影响显色的要素。在一定时刻内，阴性孔可坚持无色，而阳性孔则随时刻的延伸而呈色加强。恰当提高温度有助于加快显色进行。在定量测定中，参加底物后的反响温度和时刻应按规则力求准确。定性测定的显色可在室温进行，时刻一般不需求严格控制，有时可根据阳性对照孔和阴性对照孔的显色恰当缩短或延伸反响时刻，及时判别。OPD（邻苯二胺）底物显色一般在室外温或37℃反响20-30分钟后即不再加深，再延伸反响时刻，可使本底值增高。OPD底物液受光照会自行变色，显色反响应避光进行，显色反响结束时参加停止液停止反响。OPD产品用硫酸停止后，显色由橙黄色转向棕黄色。TMB（四甲基联苯胺）受光照的影响不大，可在室温中置于操作台上，边反响观察成果。但为确保试验成果的安稳性，宜在规则的恰当时刻阅读成果。TMB经HRP作用后，约40分钟显色达高峰，随即逐渐削弱，至2小时后即可彻底消退至无色。TMB的停止液有多种，叠氮钠和十二烷基硫酸钠（SDS）等酶抑制剂均可使反响停止。这类停止剂尚能使蓝色维持较长时刻（12-24小时）不褪，是目视判别的杰出停止剂。此外，进口elisa试剂盒各类酸性停止液则会使蓝色转变成黄色，此刻可用特定的波长（450nm）测读吸光值。比色 比色前应先用洁净的吸水纸拭干板底附着的液体，然后将板正确放入酶标比色仪的比色架中。以软板为载体的试验，需先将板置于
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elisa试剂盒温育时间温度注意事项
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
elisa试剂盒温育时间温度注意事项在ELISA中一般有两次抗原抗体反应，即加标本和加酶结合物后。抗原抗体反应的完成需要有一定的温度和时间，这一保温过程称为温育(incubation)。elisa试剂盒温育时间温度注意事项温育时间：elisa实验属固相免疫测定，抗原、抗体的结合只在固相表面上发生。以抗体包被的夹心法为例，加入板孔中的标本，其中的抗原并不是都有均等的和固相抗结合的机会，只有zui贴近孔壁的一层溶液中的抗原直接与抗体接触。这是一个逐步平衡的过程，因此需经扩散才能达到反应的终点。在其后加入的酶标记抗体与固相抗原的结合也同样如此。这就是为什么ELISA反应总是需要一定时间的温育。温育温度：温育常采用的温度有43℃、37℃、室温和4℃(冰箱温度)等。37℃是实验室中常用的保温温度，也是大多数抗原抗体结合的合适温度。在建立ELISA方法作反应动力学研究时，实验表明，两次抗原抗体反应一般在37℃经1-2小时，产物的生成可达。为加速反应，可提高反应的温度，有些试验在43℃进行，但不宜采用更高的温度。抗原抗体反应4℃更为彻底，在放射免疫测定中多使反应在冰箱中过夜，以形成zui多的沉淀。但因所需时间太长，在ELISA中一般不予采用。温育保温：保温的方式除有的ELISA仪器附有特制的电热块外，一般均采用水浴，可将ELISA板置于水浴箱中，ELISA板底应贴着水面，使温度迅速平衡。为避免蒸发，板上应加盖，也可用塑料贴封纸或保鲜膜覆盖板孔，此时可让反应板漂浮在水面上。若用保温箱，ELISA板应放在湿盒内，湿盒要选用传热性良好的材料如金属等，在盒底垫湿的纱布，zui后将ELISA板放在湿纱布上。湿盒应先放在保温箱中预温至规定的温度，特别是在气温较低的时候更应如此。无论是水浴还是湿盒温育，反应板均不宜叠放，以保证各板的温度都能迅速平衡。室温温育的反应，操作时的室温应严格限制在规定的范围内，标准室温温度是指20-25℃，但具体操作时可根据说明书的要求控制温育。室温温育时，ELISA板只要平置于操作台上即
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常见细胞培养问题解答
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
1. 如果收到一管冻存的细胞，能直接把它放到液氮中保存吗？ 在很多情况下，干冰（-80°C）运输的细胞可以放回液氮，之后再进行快速解冻。然而，这样处理后可能降低细胞活力。对于一些敏感的细胞系，这可能使细胞复苏更加困难。这种现象被认为是由于温度变化导致的细胞内冰晶结构的改变。因此，建议细胞在收到后应尽快解冻和培养。减少在-80°C的储存时间，这种温度只用于运输。 2. 从液氮中取出细胞复苏时，应采取哪些安全措施？ 在液氮中的细胞冻存管如果没有完全密封，有液氮漏入，解冻时冻存管的气温急剧上升，可能会导致爆炸。因此，当从液氮中取出细胞时，建议佩戴护目镜和防护手套。复苏时，应将冻存管在37°C水浴中不断摇动，在1-2分钟内使冻存液完全融化。之后用酒精棉球擦拭冻存管外壁，再拿入超净台内，将细胞转移到已加入10ml培养液的离心管内，1000 rpm下离心5～10分钟，弃去上清液，加入适量培养液后接种于培养瓶中，置 5% CO2孵箱静置培养。 3、为什么应将细胞储存在液氮罐中的气相而非液相？ 细胞储存在液氮气相中更容易复苏。而在液氮的液相中，如果冻存管没有正确密封或有泄漏，细胞与液氮直接接触，会使细胞解冻后活力受到影响。 4、对于悬浮细胞，如何更换培养基？ 培养悬浮细胞可以只是简单地添加新鲜培养基（如果空间允许）或者通过离心（100×g 5分钟）从旧培养基中分离细胞，随后将沉淀的细胞再悬浮于新鲜培养基中。然而，对于大多数悬浮细胞系，简单添加培养基是更好的方法。无论哪种方法，都需要细胞达到其zui大饱和密度之前更新培养基。细胞的饱和密度在3×10 5至2×10 6之间，具体依赖于细胞系和培养条件（静置或搅动、氧合水平等）。细胞必须稀释至较低的细胞浓度以允许足够的营养物质恢复，使细胞保持对数生长。假如只是简单地更换培养基而不降低细胞密度，细胞就会迅速耗竭培养基并死亡。如果细胞被稀释到其zui小密度之下，则会进入滞后期，生长非常缓慢，
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观察亮发光杆菌有哪些形态？
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
常规宏观亮发光杆菌落形态学观察,主要观察菌落在其适合的培养基上的生长状况:细菌在固体培养基上的生长形态、大小、颜色是否均匀一致,菌落个体表面及边缘的生长状况;在液体培养基上的浑浊状况、沉淀状况、液面菌膜状况;半固体上穿刺接种后,观察细菌是否沿着接种线生长以及其生长状态是呈毛刷样生长还是均匀生长,上下生长是否一致.在鉴别培养基上培养,观察结果是否跟预期结果相同。 细菌的个体形态学观察,即通过显微镜观察.观察前细菌需要着色,要根据预先确定的观察项目选择与之相对应的染色方法,目前常用的染色方法包括革兰氏染色法、美蓝染色法、Ziehl—Neelsen染色法、姬姆萨染色法、鞭毛染色法、芽胞染色法等。 尽量挑选对数生长期的细菌进行染色观察,此时的细菌生长处于幼期,利于观察,因为一些陈旧细菌的染色结果会有变化,如本为革兰氏阳性菌经过长期搁置后染色结果可能为革兰氏阴性。 同时细菌培养时要注意培养基的挑选,一些细菌的特殊结构如荚膜、鞭毛、菌毛、芽胞等,其表达是需要在特定的培养基上才能正常发育,有的细菌如炭疽在一般的培养基上不形成荚膜,只在动物体内形成明显的荚膜,所以需先接种实验动物后用病料进行涂片镜检。 在镜检时观察细菌基本形态结构和大小及其排列状态、菌端形状、有无两极染色、有无形成芽胞和荚胞等。形态学鉴定辅以生化试验在细菌鉴定中具有重要的意义,生化试验是根据细菌培养过程中不同菌种所产生的新陈代谢产物各异,表现出不同的生长特性。 通过生物化学的方法来检测这些物质的存在与否,从而能够得到细菌的鉴定结果。如糖(醇)类代谢试验、氨基酸和蛋白质代谢试验、有机酸盐和胺盐利用试验、呼吸酶类试验、毒性酶类试验等。 血清型鉴定是根据细菌具有相对特异性的抗原结构这个特点进行微生物鉴定的特异方法.抗原的特异性程度又存在于属间细菌所共有的共同抗原,这种抗原的存在,能表明其属性。另一类特异性抗原只存在于特定的种、型,是确定细菌种、型的重要依据，通过专门的分型
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上海劲马分析Elisa抗原抗体的可逆性
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
前几期的技术文章中，为大家介绍了Elisa试剂盒的操作注意事项、基本原理、试剂盒的选择。在后期的文章内容中，我们会陆续为大家分享实验经验、操作技巧等内容，欢迎大家关注上海劲马实验设备有限公司商铺。下面来看看Elisa抗原抗体的可逆性分析： Ag·Ab的解离程度与K值有关。高亲和力抗体的抗原结合点与抗原的决定簇在空间构型上非常适合，两者结合牢固，不易解离。解离后的抗原或抗体均能保持原有的结构和活性，Elisa试剂盒因此可用亲和层析法来提纯抗原或抗体。在抗血清中，特异性的IgG抗体仅占总IgG中的极小部分。用亲和层析法提取的特异性抗体，称为亲和层析纯抗体，应用于免疫测定中可得到更好的效果。 抗原与抗体结合形成抗原抗体复合物的过程是一种动态平衡，其反应式为： Ag+Ab→Ag·Ab 抗体的亲和力(affinity)是抗原抗体间的固有结合力，可以用平衡常数K表示： K=[Ag·Ab]/[Ag][Ab] 咨询了解更多相关Elisa技术，欢迎您我公司业务员。上海劲马实验设备有限公司为您提供的高质量进口Elisa试剂盒种属涉及人、大鼠、小鼠、猪、犬、植物等，指标齐全，九折优惠！含票含运费，提供实验技术指导服务及代测服务。
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ELISA试剂盒实验课堂开课啦!快进教室吧
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
细节决定成败,我一直在强调细节的重要性。如果你想做得一手理想的实验结果，就必须对实验中的每一个步骤每一个细节都做到尽善尽美！今天的ELISA试剂盒实验课堂就是为大家分享一些实验中的细节！ 1：检验技师应具备从事实验室操作的基本素质和实践经验。能熟练操作实验仪器、器械，具有一定总结和分析问题的能力，对实验中出现的意外情况能及时妥善解决。 2：使用校对过的微量移液器，排除自然误差。移液器准确与否对定量检测尤为重要。 3：仔细阅读说明书，严格按照说明书要求进行规范化操作。不同批号的试剂不可混用。值得改进的地方，反复试验确定成立后才能改进。 4：洗涤彻底，如若洗板不彻底，酶结合物本底显色会呈现假阳性。洗涤液要新鲜，现用现配，陈旧的洗涤液会出现本底增高现象，也可能出现假阳性。 5：严控反应时间，反应时间过长，酶失活；反应时间过短，酶结合物不能与血清中的微生物抗原抗体充分结合，生成物结构松散不牢固，容易洗掉，都可能造成假阴性。 6：注意试剂盒保存期，过保存期的试剂不能使用。 7：评估试剂的实用性，试剂的稳定与否，对准确率的高低到头重要。在试剂启用前，应进行阴、阳对照及样品反复比照试验，判定试剂符合要求后方可使用。 8：严格掌握显色时间，显色时间过短，加入终止液反应终止后，底物结合物的量过少，易出现假阴性。超过显色要求时间后显色，应判为假阳性，这可能与试剂本身有关。加显色剂后立即显色，不可报阳性，这可能是本底显色的结果。 9：加样要准确、快速。如果加样不准确，酶生成物的量不能确定，直接影响显色结果。显色的深浅及A值的测定与加入显色剂和终止液的量有关，所以加样应慎重。要求在一定时间内加样完毕的实验，如果加样迟缓，便出现误差，而且试剂长时间暴露在外，尤其室温过高时，保存期会缩短甚至失效。 今天的课堂内容就是这些了，如果您实验中还有什么不懂的可以给我司来电，上海沪鼎拥有zui专业的技术人员为
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ELISA试剂盒热销季节神分析ELISA步骤
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
又到了试剂盒热销季节，我公司的业务员们与技术部人员正忙得不可开交，如果您购买了我司ELISA试剂盒之后有需要咨询的问题，可在右侧的在线客服中吴安排技术解决。要做出好的实验结果，得要在过程中加强注意，今天上海恒远带您来看“神分析ELISA步骤”。 注：在实验开始之前，请将试剂盒拿出来放在室温中过半个小时。 1.取所需用量包被微孔板条，设空白、阴性及阳性对照各2孔，未用的板条尽快密封，2～8℃保存。 2.阴性、阳性对照孔分别加阴性、阳性对照血清100μl；样品孔样本1：100稀释后加100μl；空白对照孔不加。 3.混匀，置37℃温浴30分钟。 4.扣去孔内液体，每孔加满洗涤液，静置60秒后弃去，重复洗涤5次，拍干。 5.每孔加酶标记物100μl(空白孔除外)。 6.置37℃温浴30分钟。 7.洗涤，同第5步。 8.每孔依次加显色剂A、显色剂B各50μl，混匀，37℃避光反应10分钟。 9.每孔加终止液50μl，混匀，置酶标仪450nm处测各孔A值(建议用双波长450nm、630nm)。 在ELISA步骤中，上海恒远还要提醒您相关安全性问题，操作时必须戴手套，穿工作衣，严格健全和执行消毒隔离制度。
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为什么人们不愿再用滋养层细胞的形式培养NK细胞？
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
NK细胞培养一直存在两种培养方式。一种是滋养层细胞培养方式，首先获得具有不分裂不增殖但仍保持代谢活性的滋养层细胞。该细胞通过基因工程技术进行改造，再经过钴60辐照，细胞膜表面稳定表达多种细胞因子，在多种细胞因子协同作用下，外周血单个核细胞中的自然杀伤细胞得到定向激活和扩增，该种培养方式的价格相对便宜，仅有3000元左右。从培养结果来看，细胞收获量可达到20亿/L的水平，NK表型阳性率达到80%-90%左右。另一种是NK细胞培养方式是纯因子细胞培养。顾名思义就是使用相应的细胞因子来刺激单个核细胞，向NK细胞方向诱导，并配合相应的细胞培养基，使NK细胞大量增殖。纯因子细胞培养技术以其安全性高而著称，其原因在于所使用的细胞因子，都是体内环境原本就存在的。培养过程相当于模拟体内环境，促进NK细胞的激活及大量增殖。日本在该项技术上走在前列。由于日本老龄化严重，因此抗衰老研究较多。NK细胞在抗衰老研究中的应用符合其严格的风险管理原则。因此国内使用的纯因子试剂盒多进口自日本。但由于技术壁垒，纯因子试剂盒的价格一直居高不下，多在6000元以上。 那为什么越来越多的人不愿再用滋养层细胞的形式培养NK细胞呢？虽然滋养层细胞培养方式从培养结果来看，细胞收获量可达到20亿/L的水平，NK表型阳性率达到80%-90%左右，价格便宜、效果稳定，但用户对此种培养方式实际是心存排斥的，主要原因是在培养过程中选用的滋养层细胞为肿瘤细胞。尽管从理论上讲，经过相应处理的肿瘤细胞已经不再具备增殖的可能性。但其潜在风险难以证明可以完全排除。另外，就是伦理方面的问题，将正常细胞与肿瘤细胞共培养，然后将培养后的NK细胞回输体内，确实存在难以克服的伦理障碍。正如上述原因，确实制约了滋养层培养技术的推广。
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