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大肠杆菌培养基的灭菌方法及操作原理
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
1、大肠杆菌培养基高压灭菌某些培养基（如MEM）可进行高压灭菌，例如清大天一的MEM培养基中的MD605、MD609等。这类培养基一般不含有L-谷氨酰胺和碳酸氢钠，一般是在培养基高压灭菌后加入L-谷氨酰胺和碳酸氢钠的无菌的液体。另外可用耐高压的谷氨酸盐（如L-丙氨酰-L-谷氨酰胺）代替L-谷氨酰胺。可高压灭菌的培养基在121℃、15psi，15分钟的条件下完全可达到灭菌效果及营养成分的zui小损失，不需将灭菌时间延长。为保证高压灭菌的效果，灭菌设备的验证很关键。2、过滤除菌目前培养工作中采用的培养用液包括人工合成培养液、消化用酶等，常含有维生素、蛋白质、多肽、生长因子等物质，这些物质在高温或射线照射下易发生变性或失去功能，因而上述液体多采用过滤消毒以除去细菌。可供过滤灭菌使用的滤膜很多，其材料多为polyethersulphone（PES）、尼龙、多聚碳酸盐、醋酸纤维素、硝酸纤维素、PTFE、陶瓷等。目前常用的滤器有Zeiss滤器、玻璃漏斗式滤器和针式微孔滤器。其中，Zeiss滤器为不锈钢的金属结构，中间夹有一层石棉制成的一次性纤维滤板。滤板具有一定的厚度，可承受一定的压力，因此是过滤粘稠液体较理想的滤器。滤板有不同的规格，进口的型号为EKS，EKS2，EKS3等。国产的有甲1、甲2、甲3等，其中以EKS3及甲3过滤除菌的效果较好，但因孔径很小，过滤速度较慢。Zeiss滤器可分为抽滤式或加压式抽滤式滤器与抽滤瓶相连，真空泵抽气形成负压以过滤液体，大肠杆菌培养基其效率不如加压式。由于抽气造成负压抽吸，操作使用时要防止倒流而引起污染，因此要注意避免将出、入管道接错；停止抽气时应使用气体缓慢回流，要先用止血钳夹住抽气管再关机，防止气体回流。加压式滤器的容器为密闭式，加入待过滤的液体后，通以气体（常用N2、O2），形成压力将液体滤过，效果较佳。使用时注意压力不能过大，不应超过0.2kg/cm2。另外，由于使用的滤板为石棉，滤过的液体内有时可能混有少许杂质，因此在过滤前应先以少量生理盐水湿润滤板
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细胞常见的保存方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
原代细胞保存温度越低，保存时限更长；温度越低，对细胞伤害越大；低温也不怕，我有防冻剂（e.g.甘油）。下面的表格就是五种常见保存细菌细胞的方法和大约时限。 保存条件 温度°C 大约时间 琼脂平板 4 4-6周 （AgarPlate） 穿刺培养基 4 3周-1年 （stabculture） 冰冻 -20 1-3年 超低温冰冻 -20 1-10年 冻干 ≤4 15年+ 但是，具体到你用的那一种菌用什么方法保存能够保存多长时间，就要视情况而定了，并没有一个*答案，上表中所列出来的时限一般来说是适用大部分细菌样本的。小编如果要保存一个细胞样本，一般不会费时费力来查这个表的，那怎么办？问师兄，找师姐咯~ 短期保存 上表中的琼脂平板和穿刺培养基都适合于短期保存。这两种方法都保存在4度冰箱，为避免杂菌，用塑料或封口膜（parafilm）对平板或培养瓶进行封口，这样可以拒绝冰箱内本身存在的杂菌、霉菌入侵样本，也可以防止自己的培养基过快失水而变得干燥。小编就曾有一盘放在4度冰箱的菌落样本，忘记了封口，一个月后，菌落和琼脂都变成了木乃伊T_T 长期保存 长期低温冰冻必然会导致部分细胞死亡，而且很多时候我们要把原代细胞样本拿来重新接种做实验，所以解冻再冻的过程也会导致细胞死亡。那么起始样本的细胞浓度就要达到一定的高度，这样在以后保存的过程中就算死亡一些细胞，我们也还有很多有效细胞可以用，一般来说这个起始细胞密度要达到
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细胞死亡的检验方式
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
ATCC细胞发生凋亡时具有固有的形态特征,如细胞核表现缩小、染色质边缘化、凝集,凋亡晚期还会出现由核碎片与胞质内的部分细胞器混合在一起,且被细胞膜包裹形成的凋亡小体。DNA特异性染料(如Hoechst33342、Hoechst33258和DAPI等)可以与DNA的A-T碱基区进行非嵌入式结合,从而使细胞核着色,在紫外光激发时会出现明显的荧光。通过荧光显微镜或激光共聚焦显微镜可以观察细胞染色质的形态学变化、膜结构及通透性的改变,从而鉴别凋亡细胞、正常细胞及坏死细胞。细胞凋亡的形态学检测结果直观,至今仍是判定细胞是否发生凋亡的金标准,但观察凋亡细胞的形态特征耗时费力,不适于大量凋亡样本的检测。细胞凋亡的DNA化检测DNAladder提取凋亡细胞的基因组DNA,经电泳后染色观察可见180bp～200bp及其不同倍数的弥散状DNA条带,即DNAladder。DNAladder被视为经典的检测细胞凋亡的指标,但DNA凝胶电泳特异性虽高而灵敏度偏低,不适于检测ATCC细胞凋亡初期DNA链的轻微损伤。TUNEL检测法TUNEL法是一种将分子生物学和免疫组织化学相结合的原位检测凋亡细胞DNA的方法。其基本原理为:细胞发生凋亡时核酸内切酶被激活,染色质或DNA被核酸内切酶切割后产生180bp～200bp的含3′-OH末端的片断,脱氧核苷酸末端转移酶将结合有荧光素的核苷酸(dUTP)标记到缺口3′-OH的末端,依次加入HRP抗荧光素抗体和HRP显色底物DAB,凋亡细胞显色明显,而正常细胞没有DNA断裂或者只有少量的DNA发生断裂,故不被显色。TUNEL法因其灵敏高而被广泛用于各种凋亡细胞的检测,由于在坏死细胞内也可能存在DNA,所以只有DNA链普遍断裂才能证明细胞发生凋亡。另外,在TUNEL法具体试验操作过程中,需要摸索细胞的固定及消化时间,以提高该技术的敏感性和获得较低的背景值。ELISA检测法应用ELISA方法也可以检测DNA,在凋亡的早期DNA发生断裂,核小体释放进入细胞质中,核小体是染色质的基本单元,通过ELISA检测凋亡细胞释放到细胞质中的核小体从而确定细胞凋亡程度。此方法既可定性又可以定量,而且适合
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ELISA试剂盒试验原理解析
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
elisa技能流程ELISA试剂盒的根底是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶符号。结合在固相载体外表的抗原或抗体仍坚持其免疫学活性，酶符号的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。在测定时，ELISA试剂盒受检标本（测定其间的抗体或抗原）与固相载体外表的抗原或抗体起反响。用洗刷的办法使固相载体上构成的抗原抗体复合物与液体中的别的物质分隔。再参加酶符号的抗原或抗体，也经过反响而结合在固相载体上。此刻固相上的酶量与标本中受检物质的量呈必定的份额。参加酶反响的底物后，底物被酶催化成为有色产品，产品的量与标本中受检物质的量直接有关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。因为酶的催化功率很高，间接地扩大了免疫反响的结果，使测定办法到达很高的灵敏度。 ELISA可用于测定抗原，也可用于测定抗体。
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ELISA试剂盒的一些注意事项
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
ELISA试剂盒注意事项说明： 1. 中、英文说明书可能会有不一致之处，请以英文说明书为准。 2. 试剂盒保存：-20℃（较长时间不用时），2-8℃（频繁使用时）。 3. 浓洗涤液低温保存会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。 4. 刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。 ELISA试剂盒室内质量控制误差： 1 适当条件下的测定误差。 2已知值的血清在常规检验条件下的误差。 3未知值的血清在常规检验条件下的误差。 ELISA试剂盒技术中要注意的问题： 1、封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。 2、底物请避光保存。 3、严格按照技术说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准。 4、所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。 5、本试剂不同批号组分不得混用。 6、如与英文说明书有异，以英文说明书为准。
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ELISA试剂盒直销价格突破创新
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
ELISA试剂盒直销应用双抗体夹心法测定标本中植物酯酶水平。用纯化的植物酯酶抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入酯酶，再与HRP标记的酯酶抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。 ELISA试剂盒直销在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色，颜色的深浅和样品中的植物酯酶呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中植物酯酶浓度。采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融，不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的活性。 ELISA试剂盒直销分别设空白孔标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品zui终稀释度为5倍），加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。植物ELISA试剂盒厂家上海直销用封板膜封板后置37℃温育30分钟，将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用。 ELISA试剂盒直销以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数。ELISA试剂盒直销或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。
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BIM小课堂:ELISA试剂盒抗原Z常用的方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
BIM小课堂:ELISA试剂盒抗原zui常用的方法： 1、将特异性抗体与固相载体连接，形成固相抗体：洗涤除去未结合的抗体及杂质。 2、加受检标本：使之与固相抗体接触反应一段时间，让标本中的抗原与固相载体上的抗体结合，形成固相抗原复合物。 3、洗涤除去其他未结合的物质。 4、加酶标抗体：使固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合。彻底洗涤未结合的酶标抗体。 5、此时固相载体上带有的酶量与标本中受检物质的量正相关。 6、加底物：夹心式复合物中的酶催化底物成为有色产物。 7、根据颜色反应的程度进行该抗原的定性或定量。 ELISA试剂盒科研研究已进入全新时代，爱好生物研究的学者越来越多。不管您是花几百还是上千，甚至上万去购置试剂，这都是zui简单的*步。您之后需要付出更多的是大量的时间和精力，再加上您的耐心和用心，才有可能把这条路走的更远。 上海恒远致力于提供生命科学领域的技术服务，提供实验技术服务，为广大科研工作者大大节省了重复劳动的时间和精力，我们有过硬的技术咨询和完善的售后服务，为您解决后顾之忧。
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劲马揭开:ELISA背景深及全部呈有色原因是什么?
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
七月初，清华大学的杨老师在我司购买了3个elisa试剂盒，前段时间，杨老师反馈ELISA背景深，全部呈有色，问是什么原因？希望能得到技术员的解答。我司技术员有着多年的ELISA酶联免疫法的操作经验，有着丰富的实验经历，为杨老师解答了心中的疑问，深受杨老师的赞扬！就杨老师的问题，我司技术员做了以下分析： ELISA实验中，背景深，全部呈有色（通常的Elisa背景值OD
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细胞培养用途
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
基础细胞培养基通常指基础合成培养基，主要成分为氨基酸、维生素、碳水化合物、无机盐、辅助物质。据不同细胞和研究目的，选用合适培养基,还可补加新成分。如杂交瘤中常用DMEM加丙酮酸钠、2-巯基以醇（相当于胎牛血清可透析组分的作用）。 细胞培养的用途包括： 1、科学研究：药物研究开发与基础研究 药物研究与开发 （1）新药筛选：如化学合成药物药效研究、中药有效成分筛选与鉴定等。 （2）疫苗研究与开发：如病毒性疫苗的研究与开发（肝炎病毒疫苗、艾滋病疫苗等）、肿瘤疫苗(多肽疫苗)等。 （3）基因工程药物研究与开发：如干扰素研究与开发，细胞生长因子研究与开发等。 （4）细胞工程药物研究与开发：生物活性多肽研究与开发，人参皂甙、紫杉醇等生物活性成分研究与开发。 （5）单克隆抗体制备：包括诊断用单克隆抗体，**用单克隆抗体。 基础研究 （1）药物作用机理 （2）基因功能 （3）疾病发生机理 2、生物制药 （1）疫苗生产：如病毒性疫苗（肝炎病毒疫苗、艾滋病疫苗等）、肿瘤疫苗(多肽疫苗)等。 （2）基因工程药物生产：如在临床医学中具有**价值的一些细胞生长因子如干扰素、粒细胞生长因子、胸腺肽等。 （3）诊断用和药用单克隆抗体生产。 （4）细胞工程药物生产：生物细胞内的一些生物活性多肽，生物活性物质等。
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免疫血清（抗血清）常见种类
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
免疫血清亦称抗血清（antiserum）是一种含有多克隆抗体的血清。通过注射抗血清可以传递被动免疫（passive immunity）**许多疾病。目前*能够**埃博拉病毒患者的方法就是通过注射前一个患者的抗血清到体内。抗血清种类很多，包括抗毒素、抗菌血清、抗病毒血清、抗Rh血清等。 （1）抗毒素，将类毒素多次免疫动物（常用马）后，采取动物的免疫血清，经浓缩纯化后制得。主要用于**细菌外毒素所致疾病。常用的有白喉抗毒素、破伤风抗毒素。 （2）抗菌血清，在本世纪40年代以前曾用抗肺炎、抗百日咳、抗炭疽等抗菌血清**有关疾病。自从磺胺类药物和抗生素大量应用后，已极少应用于临床**。但对一些耐药菌株引起的感染，可用抗菌血清**。如对绿脓杆菌引起的感染的**。 （3）抗病毒血清，用病毒免疫动物，取其血清精制而成。目前对病毒病的**尚缺乏药物。故在某些病毒病的早期或潜伏期，可考虑用抗病毒血清**。如用抗狂犬病毒血清与抗狂犬疫苗同时对被狂犬严重咬伤者进行注射，可防止狂犬病的发生。 （4）抗Rh血清，能作用于Rh阳性（Rh+）红细胞，临床上常用提纯的抗Rh球蛋白预防Rh新生儿溶血症（见Rh免疫球蛋白）。 上海恒远是国内的、的科研试剂供应单位,产品齐全,价格透明,现货促销elisa试剂盒，血清，标准品厂家，抗体等试剂产品。专业经销ELISA试剂盒多年,产品质量有保证,售后服务有保障!
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为何细胞培养牛血清？
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
血清是由血浆去除纤维蛋白而形成的一种很复杂的混合物，血清组成及含量常随供血动物的性别、年龄、生理条件和营养条件不同而异。血清中含有各种血浆蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生长因子、激素、无机物等，这些物质对促进细胞生长或抑制生长活性是达到生理平衡的。科研人员选择用牛血清做细胞实验的理由有如下几点： 1.提供对维持细胞指数生长的激素，基础培养基中没有或量很少的营养物，以及主要的低分子营养物。 2. 提供结合蛋白，能识别维生素、脂类、金属和其他激素等，能结合或调变它们所结合的物质活力。 3.有些情况下结合蛋白质能与有毒金属和热原质结合，起到解毒作用。 4.是细胞贴壁、铺展在塑料培养基质上所需因子来源。 5.起酸碱度缓冲液作用。 6.提供蛋白酶抑制剂，使在细胞传代时使剩余胰蛋白酶失活，保护细胞不受伤害。 上海德尔塔生物科技有限公司主营：Elisa试剂盒,人Elisa试剂盒,大鼠Elisa试剂盒,小鼠Elisa试剂盒,生物试剂,血清,抗体,培养基,标准品,国产血清、GIBCO胎牛血清等。种属齐全，价格优惠。期待您的与合作！
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关于动物血清的常见问题及处理方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
血清是细胞培养中zui重要的元素之一。在实验室操作中要注意及处理方法： 1. 血清保存: 建议血清应保存在-5℃至-2O℃。然而，若存放于4℃时，请勿超过一个月。若您一次无法用完一瓶，建议您无菌分装血清至恰当的灭菌容器内，再放回冷冻。 2. 解冻血清的方法: 建议您将血清从冷冻箱取出后，先置于2～8℃冰箱使之融解，然后在室温下使之全融。但必须注意的是，融解过程中必须规则地摇晃均匀。 3. 血清解冻后发现有絮状沉淀物出现，该如何处理? 血清中沉淀物的出现有许多种原因，但zui普遍的原因是由于血清中脂蛋白的变性所造成，而血纤维蛋白(形成凝血的蛋白之一)在血清解冻后，也会存在于血清中，亦是造成沉淀物的主要原因之一。但这些絮状沉淀物，并不影响血清本身的质量。 若您欲去除这些絮状沉淀物，可以将血清分装至无菌离心管内，以400g稍微离心,上清液即可接着加入培养基内一起过滤。我们不建议您以过滤的方法去除这些絮状沉淀物，因为它可能会阻塞您的过滤膜。 4. 为什么要热灭活血清? 加热可以灭活补体系统。激活的补体参与溶解细胞事件，刺激平滑肌收缩，细胞和血小板释放组胺，激活淋巴细胞和巨噬细胞。在免疫学研究，培养ES细胞，昆虫细胞和平滑肌细胞时，推荐使用热灭活血清。 5. 有必要做热灭活吗? 实验显示，经过正确处理的热灭活血清，对大多数的细胞而言是不需要的。经此处理过的血清对细胞的生长只有微小的促进，或完全没有任何作用，甚至通常因为高温处理影响了血清的质量，而造成细胞生长速率的降低。而经过热处理的血清，沉淀物的形成会显著的增多，这些沉淀物在倒置显微镜下观察，像是“小黑点”，常常会让研究者误以为是血清遭受污染，而把血清放在37℃环境中，又会使此沉淀物更增多，使研究者误认为是微生物的分裂扩增。 因此我们建议您，若非必须，您可以不需要做热处理这一步。如此一来，不但节省您宝贵的时间，更确保血清的质量! 6. 为什么储存在冰箱中的胎牛血清会出现沉淀? 胎牛血清没有预老化，
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动物细胞培养的基本概念
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
高等生物是由多细胞构成的整体，在整体条件下要研究单个细胞或某一群细胞在体内（in vivo）的功能活动是十分困难的。但是如果把活细胞拿到体外（in vitro）培养进行观察和研究，则要方便得多。活细胞离体后要在一定的生理条件下才能存活和进行生理活动，特别是高等动植物细胞要求的生存条件极其严格，稍有不适就要死亡。所以细胞培养技术（cell culture）就是选用*生存条件对活细胞进行培养和研究的技术。 动物细胞的生存环境与植物细胞差别很大，因而二者的培养方法很不相同。 细胞培养方式大致可分为两种（图2-25）：一种是群体培养（mass culture），将含有一定数量细胞的悬液置于培养瓶中，让细胞贴壁生长，汇合（confluence）后形成均匀的单细胞层；另一种是克隆培养（clonal culture），将高度稀释的游离细胞悬液加入培养瓶中，各个细胞贴壁后，彼此距离较远，经过生长增殖每一个细胞形成一个细胞集落，称为克隆（clone）。一个细胞克隆中的所有细胞均来源于同一个祖先细胞。此外，为了制取细胞产品而设计了转鼓培养法，使用大容量的圆培养瓶，在培养过程中不断地转动，使培养的细胞始终处于悬浮状态之中而不贴壁。 目前实验室中常用的几种细胞系 细胞系名称 细胞类型 来源 3T3 成纤维细胞 小鼠 HeLa 宫颈癌上皮细胞 人 BHK21 成纤维细胞 叙利亚仓鼠 PtKl 上皮细胞 袋鼠 L6 成肌细胞 大鼠 PCI2 嗜铬细胞 大鼠 SP2 浆细胞 小鼠 SP2／0 骨髓瘤浆细胞 小鼠 CHO 卵巢细胞 中国地鼠 正常细胞培养的世代数有限，如人胚成纤维细胞可传30-50代，相当于150-300个细胞增殖周期。癌细胞和发生转化的细胞则能无限培养下去，所谓转化即是指正常细胞在某种因子的作用下发生突变而具有癌性的细胞。目前世界上许多实验室所广泛传用的HeLa细胞系就是1951年从一位名叫Henrietta Lacks的妇女身上取下的宫颈癌细胞培养而成，此细胞系一直延用至今。 原代培养（primary culture）：也叫初代培养，指直接从体内取
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费氏弧菌发光杆菌保藏方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
费氏弧菌发光杆菌保藏方法（一）斜面冰箱保藏法这是蘑菇菌种的一种短期保存法，因为它简单易行，不需特殊设备，并能随时观察保藏菌种的情况，因此也是常用的菌种保藏方法。１、保藏方法 蘑菇菌种斜面冰箱保种一般使用PDA斜面培养基即可。菌种移接后，放在22-24℃温度下培养,要勤检查,当菌丝健壮地长满试管时,及时挑选无污染的培养斜面,棉塞用硫酸纸包扎后放置在4℃的冰箱中保藏。一般2-3个月转管一次。２、注意事项：由于斜面冰箱保藏是在4℃下进行,微生物单孢分离物活动并未停止,需要经常转管移接,因此对于保藏所用的斜面菌种质量要求较高，其菌丝形态、菌落特征应保持原有特性，操作人员必须对斜面菌种质量应具有有一定的鉴别能力，所挑选的菌种才能适合保藏，其次菌种的菌龄不能太幼也不能太老，否则冰箱保藏后转管扩接易造成退化。再则冰箱温度应控制在2-4℃之间,尽量恒温使菌丝体处于稳定的生理状态。（二）粪草管冰箱保藏法１、保藏方法：粪草管的培养基是由腐熟麦秆粉100,腐熟牛粪粉25,麸皮8, 石膏粉1%,碳酸钙2%,含水量65%左右,pH7.5制备而成,调配后装入试管中,经高压灭菌后,接入菌种块,放在22-24℃温度下培养。要勤检查是否有污染，当菌丝健壮地长满草基试管时，及时挑选生长正常无污染的试管，棉塞头用硫酸纸包扎后放置在2-4 ℃的冰箱中,该保藏方法为中期保藏，一般2-3年转管一次。２、注意事项：由于粪草管可保藏2-3年时间,因此如何防止粪草管的水分损失是该保藏方法时间长短的关键所在,一方面培养基含水量不能低于62%, 另一方面棉塞用硫酸纸包扎后可加些蜡进行封口,防止水分蒸发。 再则有条件应把试管保藏在具有保湿的冰柜或冰库中，温度控制在2-4℃,湿度控制在90%左右。（三）液体石蜡保藏方法液体石蜡防止培养基水分蒸发，隔绝斜面费氏弧菌发光杆菌与 空气接触，抑制菌丝的单孢分离物，可能使其处于休眠状态，推迟细胞衰老，延长菌丝的保藏，一般可保藏5-7年，是一种中长期的菌种保藏方法。１、保藏方法：液蜡保藏
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抗原elisa试剂盒实验步骤及注意事项
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
抗原elisa试剂盒操作步骤 1. 加样：标准品设定5个浓度点10个孔，每个浓度设定平行孔，加入50微升不同浓度的标准品，空白孔设定1个孔加入50微升蒸馏水（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔，在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品zui终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。 2. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。 3. 配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用。 4. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。 5. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。 6. 温育：操作同2。 7. 洗涤：操作同4。 8. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟. 9. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。 10. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。 注意事项： 1．抗原elisa试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。 2． 浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。 3． 各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。 4． 请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔*孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请zui后乘以总稀释倍数（×n×5）。 5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。 6． 底物请避光保存。 7． 严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准. 8． 所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。 9． 本试剂不同批号组分
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