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大肠杆菌培养基的灭菌方法及操作原理

发布时间:2022-04-02     作者:德尔塔   分享到:

【产品介绍】:

1、大肠杆菌培养基高压灭菌某些培养基(如MEM)可进行高压灭菌,例如清大天一的MEM培养基中的MD605、MD609等。这类培养基一般不含有L-谷氨酰胺和碳酸氢钠,一般是在培养基高压灭菌后加入L-谷氨酰胺和碳酸氢钠的无菌的液体。另外可用耐高压的谷氨酸盐(如L-丙氨酰-L-谷氨酰胺)代替L-谷氨酰胺。可高压灭菌的培养基在121℃、15psi,15分钟的条件下完全可达到灭菌效果及营养成分的zui小损失,不需将灭菌时间延长。为保证高压灭菌的效果,灭菌设备的验证很关键。2、过滤除菌目前培养工作中采用的培养用液包括人工合成培养液、消化用酶等,常含有维生素、蛋白质、多肽、生长因子等物质,这些物质在高温或射线照射下易发生变性或失去功能,因而上述液体多采用过滤消毒以除去细菌。可供过滤灭菌使用的滤膜很多,其材料多为polyethersulphone(PES)、尼龙、多聚碳酸盐、醋酸纤维素、硝酸纤维素、PTFE、陶瓷等。目前常用的滤器有Zeiss滤器、玻璃漏斗式滤器和针式微孔滤器。其中,Zeiss滤器为不锈钢的金属结构,中间夹有一层石棉制成的一次性纤维滤板。滤板具有一定的厚度,可承受一定的压力,因此是过滤粘稠液体较理想的滤器。滤板有不同的规格,进口的型号为EKS,EKS2,EKS3等。国产的有甲1、甲2、甲3等,其中以EKS3及甲3过滤除菌的效果较好,但因孔径很小,过滤速度较慢。Zeiss滤器可分为抽滤式或加压式抽滤式滤器与抽滤瓶相连,真空泵抽气形成负压以过滤液体,大肠杆菌培养基其效率不如加压式。由于抽气造成负压抽吸,操作使用时要防止倒流而引起污染,因此要注意避免将出、入管道接错;停止抽气时应使用气体缓慢回流,要先用止血钳夹住抽气管再关机,防止气体回流。加压式滤器的容器为密闭式,加入待过滤的液体后,通以气体(常用N2、O2),形成压力将液体滤过,效果较佳。使用时注意压力不能过大,不应超过0.2kg/cm2。另外,由于使用的滤板为石棉,滤过的液体内有时可能混有少许杂质,因此在过滤前应先以少量生理盐水湿润滤板。Zeiss滤器的清洗比玻璃滤器简单,滤板属一次性,使用后即可弃去,以自来水将金属滤器初步冲洗,用洗涤剂刷洗干净,自来水冲净,蒸馏水漂洗2-3次,晾干包装。消毒前将滤板装好,旋钮不要拧得太紧,消毒后立即将旋钮拧紧以保证过滤除菌的效果。此外,也可在石棉滤板上加一层滤膜,以增加过滤效果。玻璃滤器为玻璃结构,以烧结玻璃为滤板固定于玻璃漏斗上,可用于过滤各种培养液体。只能采用抽滤式。根据滤板孔径的大小分为G1-G6六种规格型号,其中只有C5及C6可用以过滤除菌,一般都使用C6型,但过滤速度较慢。玻璃滤器的使用方法与抽滤式Zeiss滤器相同,但清洗过程比较繁琐。玻璃滤器使用后及时用自来水冲洗滤器表面的剩余物,然后用单蒸水浸泡,除去滤板内堵塞杂物,若用滤膜则将滤膜丢弃,加4N盐酸浸泡12小时以上,用自来水冲洗,再用单蒸水抽滤2次,双蒸水(或去离子水)抽滤冲洗、包装、121℃高压蒸汽灭菌20分钟。大肠杆菌培养基也可用5%的洁消精浸泡20分钟后,再按上述方法冲洗和灭菌。