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ELISA试剂盒的操作说明
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
ELISA试剂盒详细操作步骤： 1．取出试剂盒室温平衡30min，取出血样放至室温； 2．配标准品：取150uL标准品加入150uL标准品稀释液稀释，依次稀释5次； 3．加样：分别于各反应孔中加入标准品50uL，样品40UL，标准品做复孔，样品做3孔； 4．分别于样品孔中加入10UL抗体； 5．标准品和样品孔中分别加入50uL链酶亲和素-HRP，盖上封板膜,轻轻震荡混匀，37℃温育60min； 6．配洗涤液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用； 7．洗涤：小心揭开封板膜，弃去液体，甩干，每孔加200uL洗涤液，静置30s后弃去，如此重复5次，拍干； 8．显色：每孔先加入显色剂A 50uL，再加显色剂B 50uL，轻轻震荡混匀，37℃避光显色6min； 9． 终止：每孔加入终止液50uL，终止反应（此时蓝色立即转为黄色）； 10．测定：以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度。测定应在加终止液10min之内进行； 11．保存结果，收拾桌面； 12．分析处理数据。 ELISA试剂盒注意事项： 1. 取出板条前恢复到室温后再打开外包装袋，实验中不用的板条立即放回包装中，密闭封口，其余不用试剂应盖好； 2. 实验操作中请使用一次性的吸头，避免交叉污染； 3．实验板孔加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应孔的孵育时间一致； 4．洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在滤纸上充分拍干，勿将滤纸直接放入反应孔中吸水； 5．试剂盒内试剂请在保质期内使用，不同批号试剂不要混用； 6．1000pg/ml以上的结果为非线性的，根据此标准曲线无法得到的结果。大于1000pg/ml 的样品应以标准稀释缓冲液稀释后重做。在结果分析时，结合考虑相应的稀释度
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大鼠透明质酸（HA）ELISA检测试剂盒操作方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
大鼠透明质酸(HA)ELISA检测试剂盒操作方法 参数规格： 用途：用于测定血清、血浆、组织和相关液体样本中的含量或者活性 特异性：本试剂盒可同时检测天然或重组的，且与其他相关蛋白无交叉反应 规格：96T/48T 存储条件： 2-8℃（频繁使用时）；-20℃（较长时间不用时） 适用范围：仅用于科研实验，禁用于临床 有效期：6个月 更多ELISA试剂盒上海酶远生物有限公司提供免费ELISA检测试剂盒代测，快速检测一周内出结果，各种指标齐全，数据报告、公正、真实。 质粒提取原理: 质粒是细胞内的一种环状的小分子DNA，是进行DNA重组的常用载体。作为一个具有自身复制起点的复制单位独立于细胞的主染色体之外，质粒DNA上携带了部分的基因信息，经过基因表达后使其宿主细胞表现相应的性状。在DNA重组中，质粒或经过改造后的质粒载体可通过连接外源基因构成重组体。 从宿主细胞中提取质粒DNA，是DNA重组技术中zui基础的实验技能。分离质粒DNA有三个步骤：培养细菌使质粒扩增，收集和裂解细菌，分离和纯化质粒DNA。 在质粒提取过程中，由于机械力、酸碱度、试剂等的原因，可能使质粒DNA链发生断裂。所以，多数质粒粗提取物中含有三种构型的质粒：共价闭合环状DNA（cccDNA）： 质粒的两条链没有断裂；超螺旋开环DNA（ocDNA）： 质粒的一条链断裂；松弛的环状分子线形DNA（lDNA）： 质粒的两条链均断裂；线性分子质粒DNA的分子构型 。 质粒DNA琼脂塘凝胶电泳模式图可分为：松弛线性的DNA； 松弛开环的OC构型； 超螺旋的SC构型。由于琼脂糖中加有嵌入型染料溴化乙锭，因此，在紫外线照射下DNA电泳带成橘黄色。 道中的SC DNA走在zui前沿，OC DNA则位于凝胶的zui后边；道中的L DNA 是经核酸内切限制酶切割质粒之后产生的，它在凝胶中的位置介于OC DNA 和 SC DNA 之间。 大鼠透明质酸(HA)ELISA检测试剂盒操作方法 操作流程： 实验开始前，请提前配置好所有试剂，试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。每次
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甲氨蝶呤药物分析过程
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
甲氨蝶呤为抗叶酸类抗肿瘤药，主要通过对二氢叶酸还原酶的抑制而达到阻碍肿瘤细胞的合成，而抑制肿瘤细胞的生长与繁殖。 药物分析 方法名称： 甲氨蝶呤原料药－甲氨蝶呤－液相色谱法 应用范围： 本方法采用液相色谱法测定甲氨蝶呤原料药中甲氨蝶呤的含量。 本方法适用于甲氨蝶呤原料药。 方法原理： 供试品经流动相溶解并定量稀释，进入液相色谱仪进行色谱分离，用紫外吸收检测器，于波长302nm处检测甲氨蝶呤的峰面积，计算出其含量。 试剂： 1. 乙腈 2. 7.0%枸橼酸溶液 3. 2.0%无水磷酸氢二钠溶液 仪器设备： 1. 仪器 1.1 液相色谱仪 1.2 色谱柱 十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，理论塔板数按甲氨蝶呤峰计算应不低于1000。 1.3 紫外吸收检测器 2. 色谱条件 2.1 流动相：乙腈 7.0%枸橼酸溶液 2.0%无水磷酸氢二钠溶液=10 10 80 2.2 检测波长：302nm 2.3 柱温：室温 试样制备： 1. 对照品溶液的制备 精密称取甲氨蝶呤对照品适量，加流动相溶解并定量稀释成每1mL中约含0.1mg的溶液，即为对照品溶液。 2.供试品溶液的制备 精密称取供试品适量，加流动相溶解并定量稀释成每1mL中约含甲氨蝶呤0.1mg的溶液，即为供试品溶液。 操作步骤： 分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10mL，注入液相色谱仪，用紫外吸收检测器于波长302nm处测定甲氨蝶呤（C20H22N8O5）的峰面积，计算出其含量。
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大鼠B因子（BF）ELISA检测试剂盒目前厂家/报价
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
大鼠B因子(BF)ELISA检测试剂盒目前厂家/报价 酶联免疫吸附实验（ELISA）基本原理: 1971年Engvall和Perlmann发表了酶联免疫吸附剂测定（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）用于IgG定量测定的文章，使得1966年开始用于抗原定位的酶标抗体技术发展成液体标本中微量物质的测定方法。这一方法的基本原理是：①使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性。②使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性，又保留酶的活性。在测定时，把受检标本（测定其中的抗体或抗原）和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开，zui后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化变为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据颜色反应的深浅刊物定性或定量分析。由于酶的催化频率很高，故可极大地地放大反应效果，从而使测定方法达到很高的敏感度。 “ELISA试剂盒"实验操作流程（具体请参照说明书）： ① 加抗体包被 → 4℃过夜，洗涤三次、抛干 ② 加待检抗原 → 37℃ 30分钟，洗涤三次、抛干 ③ 加酶标抗体 → 37℃ 30分钟，洗涤三次、抛干 ④ 加底物液 → 37℃ 15分钟，加终止液 ⑤ 用ELISA检测仪测定OD值我公司拥有完善的售前、售中、售后服务，以及实验技术指导服务，欢迎您上海酶远ELISA试剂盒，第二季度八五折优惠，可为您节省时间提供免费代测服务。 “ELISA试剂盒"特点：① 准确度高，灵敏度高，特异性强；② 检测时间短；③ 操作简便；④ 安全可靠，。 产品优势： 选上海酶远“ELISA试剂盒"，拥有质保价廉服务三重优势！ 优势一：用途 1、将酶催化反应的放大作用和抗原抗体亲和反应的高度专一性、特异性相结合，以酶标记的抗原或抗体作为主要试剂进行免疫测试，所以具有很高的灵敏度。 2、实现了在细胞或亚细胞水平上示踪抗
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Cas9基因敲除服务
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
CRISPR (clustered, regularly interspaced, short palindromic repeats)是一种来自细菌降解入侵的病毒 DNA 或其他外源 DNA 的免疫机制。在细菌及古细菌中，CRISPR系统共分成3类，其中Ⅰ类和Ⅲ类需要多种CRISPR相关蛋白（Cas蛋白）共同发挥作用，而Ⅱ类系统只需要一种Cas蛋白即可，这为其能够广泛应用提供了便利条件[1]。 目前，来自Streptococcus pyogenes 的CRISPR-Cas9系统应用。Cas9 蛋白（含有两个核酸酶结构域，可以分别切割DNA 两条单链。Cas9首先与crRNA及tracrRNA结合成复合物，然后通过PAM序列结合并侵入DNA，形成RNA-DNA复合结构，进而对目的DNA双链进行切割，使DNA双链断裂。 由于PAM序列结构简单（5’-NGG-3’），几乎可以在所有的基因中找 到大量靶点，因此得到广泛的应用。CRISPR-Cas9系统已经成功应用于植物、细菌、酵母、鱼类及哺乳动物细胞，是目前zui的基因组编辑系统[1]。 通过基因工程手段对crRNA和tracrRNA进行改造，将其连接在一起得到sgRNA（single guide RNA）。融合的RNA具有与野生型RNA类似的活力，但因为结构得到了简化更方便研究者使用。通过将表达sgRNA的原件与表达Cas9的原件相连接，得到可以同时表达两者的质粒，将其转染细胞，便能够对目的基因进行操作 CRISPR与RNAi的区别： 方法 靶标 质粒构件 基因下调 基因敲除 基因定点突变或多点突变 基因组改变 遗传密码子改变 表型改变 RNia(siRNA,shRNA mRNA(转录水平） 简单 YES NO NO NO NO CRISPR DNA序列（基因组水平） 简单 YES YES YES YES YES TALEN DNA序列（基因组水平） 复杂 YES YES YES YES YES 技术优势： ※操作简单，靶向性更高。 ※可实现对靶基因单个位点或多个位点同时敲除。 ※也可同时对多个靶基因进行敲除。 ※可应用于任何物种。 ※CRISPR/Cas9系统是由RNA调控的对DNA的修饰，其基因修饰可遗传。 ※拥有CRISPR/Cas9腺病毒/慢
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分析ELISA试剂盒进口大鼠操作应用领域
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
ELISA试剂盒进口大鼠不仅适用于临床标本的检查，而且由于一天之内可以检查几百甚至上千份标本,因此，也适合于血清流行病学调查。ELISA法是免疫诊断中的一项新技术，现已成功地应用于多种病原微生物所引起的传染病、寄生虫病及非传染病等方面的免疫诊断。也已应用于大分子抗原和小分子抗原的定量测定，根据已经使用的结果，本法不仅可以用来测定抗体，而且也可用于测定体液中的循环抗原，所以也是一种早期诊断的良好方法。因此ELISA法在生物医学各领域的应用范围日益扩大，可概括四个方面： 1、免疫酶染色各种细胞内成份的定位。 2、研究抗酶抗体的合成。 3、显现微量的免疫沉淀反应。 4、ELISA试剂盒进口大鼠定量检测体液中抗原或抗体成份。 操作流程如下： （1）待测样品孔中每孔加入待测样品100μl，每种样品设3个平行孔；设两个阴性对照孔，每孔加未处理组的细胞裂解液100μl；另设一个空白对照孔，加入纯细胞裂解液100μl。 （2）酶标板置4℃，包被过夜。 （3）洗板：吸干孔内反应液，用洗涤液过洗一遍（将洗涤液注满板孔后，即甩去），之后将洗涤液注满板孔，浸泡1-2分钟，间歇摇动。甩去孔内液体后在吸水纸上拍干。重复洗涤3-4次。 （4）阴性对照孔每孔加入PBS 50μl，样品孔及空白孔每孔加入1：500稀释的兔抗人AIF抗体工作液50μl。 （5）酶标板置37℃培养箱的湿盒内，孵育60min。 （6）洗板，同（4）。 （7）每孔加1：5000稀释的HRP-标记的山羊抗兔抗体工作液 100μl。 （8）酶标板置37℃培养箱的湿盒内，孵育60min。 （9）洗板，同（4）。 （10）每孔加TMB显色液 100μl，轻轻混匀10s，置37℃暗处反应15-20min。 （11）每孔加100μl 2mol/L H2SO4终止反应。 （12）分别测450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2，zui终测得的OD值为两者之差（W1-W2），以减少由容器上的划痕或指印等造成的光干扰。 （13）数据处理：ELISA试剂盒进口大鼠在得出标本（S）和阴性对照（N）的 OD值后，计算S/N值。S/N≥2.1为阳性判定标准。
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亮发光杆菌微生物的培养基本原理
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
亮发光杆菌微生物的培养特征是指微生物培养在培养基上所表现出的群体形态和生长情况。一般可用斜面、液体和半固体培养基来检验不同微生物的培养特征。它们培养在斜面培养基上，可以呈丝线状、刺毛状、串珠状、疏展状、树枝状或假根状。生长在液体培养基内，可以呈混浊、絮状、粘液状、形成菌膜、上层清晰而底部显沉淀状。穿刺培养在半固体培养基中，可以沿接种线向四周蔓延；或仅沿线生长；也可上层生长得好，甚至连成一片，底部很少生长；或底部长得好，上层甚至不生长。利用微生物的培养特征，可以作为它们的种类鉴定和识别纯培养是否污染的参考。 检验微生物的培养特征，或进行其他微生物学实验时，接种过程必须保证不被其他微生物所污染，为此，除工作环境要求尽可能地避免或减少杂菌污染外，熟练地掌握各种无菌操作接种技术是很重要的。 器材 亮发光杆菌，枯草芽孢杆菌，大肠杆菌(Escherichia coli)，金黄色葡萄球菌，白地霉（Geo-trichum candidum），蕈状芽孢杆菌（Bacillusmycoides），粘质沙雷氏菌（粘质赛氏杆菌， Serratia marcescens）； 肉膏蛋白胨斜面培养基，肉膏蛋白胨液体培养基，半固体肉膏蛋白胨培养基，接种环，接种针，无菌吸管，酒精灯等。 操作步骤 1．斜面接种 （1）在肉膏蛋白胨斜面试管上，用记号笔写上将接种的菌名、日期和接种者。 （2）点燃酒精灯或煤气灯。 （3）将菌种试管和待接种的斜面试管，用大拇指和食指、中指、无名指握在左手中，并将中指夹在两试管之间，使斜面向上，成水平状态。在火焰边用右手松动试管塞，以利于接种时拔出。 （4）右手拿接种环通过火焰烧灼灭菌（参照实验一），在火焰边用右手的手掌边缘和小指，小指和无名指分别夹持棉塞（或试管帽），将其取出，并迅速烧灼管口。 （5）将灭菌的接种环伸入菌种试管内，先将环接触试管内壁或未长菌的培养基，达到冷却的目的，然后再挑取少许菌苔。将接种环退出菌种试管，迅速伸入待接种的斜面试管，用环在斜面上自试管底部向
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抗原elisa试剂盒实验遇到一些故障及具体处理方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
抗原ELISA试剂盒试验以灵敏度较高、特异性较好的特点在临床上得到了广泛的应用，但操作中的各个环节对试验的检测效果影响较大，如不注意，有可能导致显色不全、花板等结果。ELISA试剂盒包含以下各组分：已包被抗原或抗体的固相载体（免疫吸附剂）；酶标记的抗原或抗体（结合物）；酶的底物；阴性对照品和阳性对照品（定性测定中），参考尺度品和控制血清（定量测定中）；酶联物（结合物）及标本的稀释液；洗涤液；酶反应终止液。ELISA中有三个必要的试剂：免疫吸附剂、结合物和酶的底物等。 一、选择试剂 选择质量优良的检测试剂，严格按照试剂说明书进行操作，操作前将试剂在室温下平衡30-60分钟。 二、加样 可能原因： 1）血清或血浆标本分离不好即进行加样； 2）手工操作中，加样板过多造成加样后放入孵箱前等待时间过长(特别是室内温度较高时)； 3）加完标本再加酶试剂时酶溅出孔外。 解决办法： 1） 标本为血清：将血液先自然存放1-2小时后，再用3000rmp离心15分钟；标本为血浆：必须使用含抗凝剂的血液标本收集管，采血后必须立即颠倒采血管混合5-10次，放置一段时间后，3000rpm离心15分钟；若在几天内检测，可放在2-8℃冰箱中，若要贮存，则置于-20℃的低温冰箱内。 2) 加样后及时放入孵箱。 3) 加酶试剂后用吸水纸在酶标板表面轻拭吸干。 4) 如果采用AT或其他全自动加样，选择FAME或其他后处理仪器加酶试剂。 5) 标本较多时，请分批操作。 三、孵育 可能原因： 1) 孵育时未贴封片或加盖，使标本或稀释液蒸发，吸附于孔壁，难于清洗彻底； 2) 孵育时间人为延长，导致非特异性结合紧附于反应孔周围，难以清洗彻底。 解决办法： 1) 贴封片或加盖； 2) 按抗原ELISA试剂盒说明步骤严格控制操作时间。 四、洗板 可能原因： 1) 采用手工洗板，孔与孔之间液体交叉。 2) 采用半自动洗板机洗板时，洗液量不足，导致洗板不彻底；洗板针堵塞，抽吸不完全；洗板不畅，导致洗板效果差。 3) 反应板过多造成洗板等待时间长
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羊源性成分核酸检测PCR-荧光探针试剂盒标本的稀释原则
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
羊源性成分核酸检测PCR-荧光探针试剂盒首先通过文献检索的方式了解待测样本的大致含量，确定适当的稀释倍数。只有稀释至标准曲线的范围内，检测的结果才是准确的。稀释的过程中，应做好详细的记录。zui后计算浓度时，稀释了“N”倍，标本的浓度应再乘以“N”。标准品的稀释原则：2瓶，每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml，盖好后静置10分钟以上，然后反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为300 pg/ml，做系列倍比稀释后，分别稀释300 pg/ml，150 pg/ml，75 pg/ml，37.5 pg/ml，18.5 pg/ml，9 pg/ml，4.5 pg/ml，样品稀释液直接作为标准浓度0 pg/ml，临用前15分钟内配制。如配制150 pg/ml标准品：取0.5ml(不要少于0.5ml)300 pg/ml的上述标准品加入含0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。羊源性成分核酸检测PCR-荧光探针试剂盒生物素标记抗体的稀释原则：临用前以生物素标记抗体稀释液稀释，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制(每孔100μl)，实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如10μl生物素标记抗体加990μl生物素标记抗体稀释液的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。辣根过氧化物酶标记亲和素的稀释原则：临用前以辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液稀释，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制(每孔100μl)，实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如10μl辣根过氧化物酶标记亲和素加990μl辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液 的比例配制，轻轻混匀，羊源性成分核酸检测PCR-荧光探针试剂盒在使用前一小时内配制。
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超声辐射力结合靶向超声微泡评价小鼠肾缺血再灌注损伤
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
目的：探讨超声辐射力促进靶向微泡粘附提高肾缺血再灌注（IR）损伤检测的敏感性及可行性。方法：制作小鼠肾缺血再 灌注模型及正常对照组，并根据再灌注后1、3、6、12、24 h分别分为IRlh、IR3 h、IR6 h、IR12 h、IR24 h组。各组再根据有无超声辐 射力作用随机分为单击靶向微泡（MBICAM）组和靶向微泡+超声辐射力组（MBICAM+USRF）组。结果：MBICAM组和MBICAM+USRF组在对照 组肾脏均未见明显显影增强，肾脏声强度（VI）值无显著差异（6.47±0.42对6.45±0.62，P=0.923）。肾脏IR损伤不同时间窗下均 可见显影增强，并且随着时间的推移，显影强度逐渐增高。MBICAM+USRF组缺血再灌注各时间窗肾脏VI值较MBICAM组显著增大，两者之间均存在显著性差异（P均=0.000）。IR12 h和IR24 hVI值之间无显著差异（P=1.000），其余各组之间均存在显著差异 （P
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elisa酶联免疫试剂盒说明书室内质量控制程序
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
一、elisa酶联免疫试剂盒说明书*条件下的测定误差*条件下已知值质控血清变异（optimal conditions variance,简称OCV）的测定：在本实验室*条件下（包括操作者、试剂、仪器等）检测质控血清20-30次，测得结果计算，求出该组数据的均值和标准差（SD）表示该实验室的*工作质量。现举例说明HBsAg ELISA法检测时OCV的测定。使用的质控制血清为临界血清，HBsAg浓度为5ng/ml。在该实验室中选择素质、操作zui熟练的技术员进行认真地专门测定，选用*的试剂盒，检测之前，将恒箱、加样器等认真校正、调校正、调试，使用新的加样吸头等，即在*、的条件下进行检测。除质控血清外同时测定阴性对照品和阳性对照品。并作双份测定，得出2个吸光值（A值），求出X。连续作20次，求出20个X，即X1……X20。从这20个数据中，求出OCV的X和SD。二、已知值的血清在常规检验条件下的误差ELISA质量控制--室内质量控制程序常规条件下已知值质控血清变异的测定：做常规检验的技术人员，在常规检验的条件下，将质控血清放在常规检测样本中，进行20次检验，结果计算同OCV法。一般认为RCV的SD在OCV的SD两倍范围内可以接受。若太大应该查找原因，使其向OCV的SD值靠近。在改进实验室条件后（例如较正加样器，纠正洗板操作，调正温育温度等），重新进行RCVK的测定。如果RCVK的SD值更小，说明OCV不是*条件下测定的，应重新再测OCV。elisa酶联免疫试剂盒说明书常规条件下，RCVK肯定要比OCV大。通过质控控制各项条件，使RCVK的数据尽可能接近OCV值。RCVK的数据反映该实验室日常工作的质量，用于作质控图，对室内检验的结果进行控制，每日检验的结果，报告能否发出。三、未知值的血清在常规检验条件下的误差ELISA质量控制--室内质量控制程序常规条件下，未知值质控血清变异（routine conditions variancl-unknown value 简称RCVU）的测定：有时为了避免主观性，再作RCVU测定。测定步骤同RCVK，但检测的操作者不知质控血清的定值，或在操作者不知哪份是质控血汪清的
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转化细胞培养器械的清洗操作步骤
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
1.转化细胞清洗 (1)玻璃器皿的清洗 步骤：按浸泡→刷洗→浸酸→冲洗等四步程序进行。 ①浸泡：新购进的玻璃器皿常带有灰尘，呈弱碱性，或带有铅、碑等有害物质，故先用自来水浸泡过夜、水洗，然后再用2%~5%盐酸浸泡过夜或煮沸30min，水洗。要领：培养用后的玻璃器皿要立即泡入清水中，使下道刷洗工作能顺利进行。用后的玻璃器皿常带有大量的蛋白质附着，干涸后不易刷洗掉，用后要立即用清水浸泡。 ②刷洗：用软毛刷、洗涤剂，刷去器皿上的杂质，冲洗晾干。要领：浸泡后的玻璃器皿用毛刷沾洗涤剂去器皿上的杂质、刷洗次太多，会损害器皿的表面光洁度，洗涤剂有使pH上升的趋势，所以易选用软毛刷和洗涤剂。禁止用去污粉。因其中含有砂粒。会严重破坏玻璃器皿的光洁度。特别注意刷洗瓶角部位。酸浸之前要把洗涤剂冲干净。 ③浸酸：将器皿浸泡于清洁液24h，如急用也不得少于4h。清洁液由重铬酸钾、浓硫酸及蒸馏水配制而成，具有很强的氧化作用，去污能力很强。经清洁液浸泡后，玻璃器皿残留的末刷洗掉的微量杂质可被完全清除。 ④冲洗：先用自来水充分冲洗，吸管等冲流10min，瓶皿需每瓶灌满、倒掉，反复10次以上。然后再经蒸馏水漂洗3次,不留死角。晾干或烘干备用。对已用过的器皿，凡污染者必先经煮沸30min或放3%盐酸中浸泡过夜，未污染者可不需灭菌处理，但仍要刷洗、清洁液浸酸过夜，冲洗等。 矽酸钠洗液 贮存液(×100) 砂酸纳80克加偏磷酸钠9克加热溶在1000ml水中。使用时用水稀释100倍，将器皿放入煮沸20min，冷却后冲洗，再用2%HCl浸泡2h后，自来水冲洗。矽酸钠洗液较清洁液安全，但价格较贵。 (2)转化细胞塑料器皿清洗 自来水充分浸泡→冲洗→2%Na0H浸泡过夜→自来水冲洗→2%~5%盐酸浸泡30min→自来水冲洗→蒸馏水漂洗3次 →晾干→紫外线照射30min(或先用75%酒精浸泡、擦拭，再用紫外线照射30min)。凡能耐热的塑料器皿，经101.3kPa(121.3℃)高压灭菌。 (3)胶塞等橡胶类处理 新购置者先经自来水冲洗→2%NaOH煮沸15min→ 自来
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介绍在细胞培养过程中经常用到的培养用液有哪些
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
一、干细胞平衡盐溶液(balanced salt solution,BSS):主要是由无机盐、葡萄糖组成，它的作用是维持细胞渗透压平衡，保持pH稳定及提供简单的营养。主要用于取材时组织块的漂洗、细胞的漂洗、配制其他试剂等。zui简单的BSS是Ringer。D-Hank"s与Hank"s的一个主要区别是前者不含有Ca2+、Mg2+，因此D-Hank"s常用于配制胰酶溶液。Earle平衡液含有较高的NaHCO3(2.2g/L),适合于5%CO2的培养条件，Hank"s平衡液仅含有0.35g/L NaHCO3，不能用于5%CO2的环境，若放入CO2培养相，溶液将迅速变酸，使用时应注意。 配制溶液应使用双蒸水或去离子水。如果配方中含有Ca2+、Mg2+，应当首先溶解这些成分。配好的平衡盐溶液可以过滤除菌或高温灭菌。 二、消化液:取材进行原代培养时常常需要将组织块消化解离形成细胞悬液，传代培养时也需要将贴壁细胞从瓶壁上消化下来，常用的消化液有胰酶(Trypsin)溶液和edta溶液，有时也用胶原酶(collagenase)溶液。 1.胰酶溶液：胰酶活性可用消化酪蛋白的能力表示，常见有1：125和1：250，即一份胰酶可消化125或250份酪蛋白。组织培养用胰酶溶液一般配制成0.1-0.25%浓度，配制时要用不含Ca2+、Mg2+及血清的平衡盐溶液(如前面的D-Hank"s)，因为这些物质会对胰酶产生抑制作用。胰酶作用及溶解的*pH是8-9，配制胰酶溶液应将液体调至pH8左右，充分溶解，过滤除菌。过滤后可以再调只pH7.5，也可不调。 使用细胞清洗液配制胰酶消化液：含0.5%胰酶的细胞清洗液(100ml细胞清洗液加0.5g胰酶)，过滤除菌，分装于4度保存。 2.EDTA溶液：EDTA溶液也常用来解离干细胞，它的作用机制是破坏细胞间的连接。对于一些贴壁特别牢固的细胞，还可以用EDTA和胰酶的混合液进行消化。EDTA溶液的使用浓度为0.02%，配制时应加碱助溶，配制后可过滤除菌，也可高温消毒灭菌。 3.胶原酶溶液：胶原酶在上皮类细胞原代培养时经常使用，胶原酶作用的对象是胶原组织，因此不容易对细胞产生损伤。胶原酶的使用浓度为0.1-0.3mg/L或200000U/
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