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磁珠法核酸提取过程中的6种常见误区
作者：德尔塔 日期：2022-04-22
文章来源：洛阳吉恩特生物科技有限公司 使用生物磁珠提取核酸，在国内还属于较为新颖的核酸提取方式，相比于传统的氯仿异戊醇抽提法和离心柱试剂盒法，这种方法还有很多人不慎了解，在使用磁珠法提纯核酸的过程中，也存在着一些误区。 误区一：磁珠使用的越多，提取效果越好 有很多老师喜欢在提取效果不佳的时候，增加磁珠的用量，认为磁珠多加一点，就能吸上更多的核酸，不得不说这种想法是不可取的。 磁珠的主要特点是既可以分散于液体中，也可以在外加磁场作用下以固态方式和液相分离，任何试剂体系，磁珠和液体的比例都应该是有一定阈值的，超过一定的比例，过多的磁珠将因为无法均匀分散于液体中，而丧失其分散的特性，也使得洗涤过程中无法充分增加核酸磁珠和液体接触的效率。而过量的磁珠也会吸附更多的杂质，对于除杂的效果影响非常大。甚至有些时候，过多的磁珠会吸附蛋白酶、溶菌酶等在液体体系中起主要作用的功能成分，导致整个试剂盒效率低下。有很多时候，在提取效果不佳的时候，减少磁珠使用量，反而是提升提取效果的最优途径。 通常情况下，磁珠法试剂盒给出的参考磁珠用量都是略微过量的，因此需要增加磁珠用量改善吸附效率的情况并不多，但如果确定是磁珠用量不足导致的提取效果不好，是可以在一定范围内通过增加磁珠用量来改善提取效果的。 以GNT-02系列磁珠为例，在提取常量样本（植物组织，全血等）时，通常用量为10ul/次；在提取微量样本（如血清游离DNA，口腔拭子等）时，磁珠用量为15~20ul/次。如需超过这个使用量，需要和技术工程师进行沟通。 误区二：试剂使用的越多，提取效果越好 裂解效果不好？多加点裂解液。洗涤效果不好？多加点洗涤液。这是很多客户在使用试剂盒中的惯性思维。 但是对于磁珠法而言，每增加一部分液体体积，就减少了更多的磁珠碰撞几率，而降低磁珠碰撞几率，会导致吸附率的大幅度下降。所以很多时候，虽然增加裂解液和洗涤液确实能够起到增强裂解和增强洗涤的作
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蓝白斑筛选及其原理介绍
作者：德尔塔 日期：2022-04-22
蓝白斑筛选是重组子筛选的一种方法： 是根据载体的遗传特征筛选重组子，如α-互补、抗生素基因等。现在使用的许多载体都带有一个大肠杆菌的DNA的短区段，其中有β-半乳糖苷酶基因（lacZ）的调控序列和前146个氨基酸的编码信息。在这个编码区中插入了一个多克隆位点（MCS），它并不破坏读框，但可使少数几个氨基酸插入到β-半乳糖苷酶的氨基端而不影响功能，这种载体适用于可编码β-半乳糖苷酶C端部分序列的宿主细胞。因此，宿主和质粒编码的片段虽都没有酶活性，但它们同时存在时，可形成具有酶学活性的蛋白质。这样，lacZ基因在缺少近操纵基因区段的宿主细胞与带有完整近操纵基因区段的质粒之间实现了互补，称为α-互补。由α-互补而产生的LacZ+细菌在诱导剂IPTG的作用下，在生色底物X-Gal存在时产生蓝色菌落，因而易于识别。然而，当外源DNA插入到质粒的多克隆位点后，几乎不可避免地导致无α-互补能力的氨基端片段，使得带有重组质粒的细菌形成白色菌落。这种重组子的筛选，又称为蓝白斑筛选。如用蓝白斑筛选则经连接产物转化的钙化菌平板37℃温箱倒置培养12-16hr后，有重组质粒的细菌形成白色菌落。 由α-互补产生的Lac+ 细菌较易识别，它在生色底物X-gal(5-溴-4氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷)下存在下被IPTG(异丙基硫代-β-D-半乳糖苷)诱导形成蓝色菌落。当外源片段插入到载体的多克隆位点上后会导致读码框架改变, 表达蛋白失活, 产生的氨基酸片段失去α-互补能力, 因此在同样条件下含重组质粒的转化子在生色诱导培养基上只能形成白色菌落。 在麦康凯培养基上，α-互补产生的Lac+细菌由于含β-半乳糖苷酶，能分解麦康凯培养基中的乳糖，产生乳酸，使pH下降，因而产生红色菌落，而当外源片段插入后，失去α-互补能力，因而不产生β-半乳糖苷酶，无法分解培养基中的乳糖，菌落呈白色。 蓝白斑筛选的分子生物学基础是建立在乳糖操纵子正负调控机制上的： 1、乳糖操纵子的组成：大肠杆菌乳糖操纵子含Z、Y、A三个结构基因，分别编码半乳糖
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AAV（腺相关病毒）的结构及生产过程介绍
作者：德尔塔 日期：2022-04-22
AAV的“诞生”，有它们就够了！ 在日常生活中，我们经常听到或者亲身参与到各种“圈”中，例如，时尚圈，娱乐圈，艺术圈，还有上海的各大商圈和可食用的甜甜圈，当然，对大多数人来说最熟悉的莫过于微信朋友圈了。话说，在基因**领域也有一个圈，小编暂且给它取名叫“病毒载体圈“，此圈中有这样一位傲娇的明星大咖，它不仅理化性质独特（可耐受冻融、65℃高温及多种有机溶剂），而且身怀绝技，同时有着极强的可塑性（分12种血清型和100多种突变体），深受广大科研和医学工作者的青睐。在如今的生命科学领域，追求它似已蔚然成风，那这位“病毒载体圈”的神奇新秀到底是谁呢？ 它，就是腺相关病毒（Adeno-Associated Viral Vector，AAV）。 AAV最初是在纯化的腺病毒液中发现的一种污染成分，故而得名。其复制增殖需要腺病毒或者疱疹病毒等辅助病毒的协助，所以AAV是一种复制缺陷型的病毒，归属于细小病毒科依赖病毒属。AAV是无包膜的单链线状 DNA 病毒，其基因组约4.7kb，两末端为反向末端重复序列（inverted terminal repeat sequence, ITR），ITR 序列之间为病毒蛋白编码区，包含两个开放阅读框架，产生复制蛋白Rep、衣壳蛋白Cap和包装激活蛋白AAP。 图1 AAV基因组的结构 AAV作为最早通过欧盟FDA认证的基因**载体，因其具有宿主范围广、非致病性、低免疫原性、长期稳定表达外源基因、良好的扩散性能和物理性质稳定等优点，已被广泛地应用于基础研究和临床试验中。而且，越来越多的临床试验证明了AAV载体的有效性和良好的安全性，使之成为基因**研究的热点，并被认为是介导基因**的理想载体之一。那么，如此受欢迎而又自带明星光环的AAV究竟从何而来？本期，小编就为大家带来AAV“诞生”的那些事。 在病毒型基因传递系统中，有一个很大的顾虑就是辅助质粒和载体质粒发生重组而恢复出野生型病毒。目前大多数生成重组腺相关病毒（rAAV）的实验方案均需要共转染一个载体质粒和一个表达病毒复制和结构基因的包装质粒到腺病毒(Ad)
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英国Apogee A50系列纳米级流式细胞仪在细胞外泌体、微囊泡研究中的应用
作者：德尔塔 日期：2022-04-22
外泌体是一种纳米级囊泡，几乎所有类型的细胞，包括癌细胞都可以释放外泌体。作为细胞间通讯的重要介质，外泌体介导了蛋白质和遗传物质的交换，越来越多的证据表明，宿主细胞或癌细胞分泌的外泌体参与了肿瘤发生，生长，侵袭和转移。并且免疫细胞和癌细胞自身通过外泌体进行通讯在调节肿瘤免疫中发挥了双重作用。 近年来的研究成果表明，外泌体循环微粒是促成心血管炎症、堵塞与损伤的因素。而过往由于常规设备在微小颗粒检测上的局限性，使循环微粒这一重要因素被排出在病因分析之列。普瑞麦迪公司引进的Apogee纳米级超高分辨率流式细胞仪，独有的80nm散射光分辨率及10nm的灵敏度，首次突破外泌体与微囊泡研究瓶颈，引领前沿科学研究大爆炸！ 1、微小循环微粒检测----创新性突破 针对常规设备在外泌体研究上的局限性，2013年2月份，伯明翰大学心血管科学研究中心的Shantsila E，Gregory Y. H. Lip和阿姆斯特丹大学血管医学系的Kamphuisen共同发表了题为“Circulating microparticles in Cardiovascular Disease:implications for atherogenesis and atherothrombosis”的综述性文章。 而在接触Apogee纳米级流式细胞之后的短短一个月即2013年4月份，伯明翰大学心血管科学研究中心（Gregory Y.H. Lip等）与西班牙穆尔西亚维尔根－达阿里克萨卡医院心血管中心，利用Apogee独有的80nm超高分辨率及10nm超灵敏性检测了所研究的循环微粒，获得了一些非常有价值的新数据，取得了意想不到的效果，并将该科研成果的论文“Small-size circulating microparticles in acute coronary syndromes: Relevance to fibrinolytic status, reparative markers and outcomes” 在《Atherosclerosis》杂志上成功发表 。 图1.心血管病相关循环微粒形成与运输途径 2、外泌体/微囊泡检测------高精准分析 （Journal of Extracellular Vesicles 2015, 4: 25530） 常规流式细胞仪做为一个强大的工具，被直接用于细胞外囊泡（EV）和外分泌体的
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药物分析实验室常用仪器设备介绍
作者：德尔塔 日期：2022-04-22
药物分析实验室仪器设备 药物分析（习惯上称为药品检验）是运用化学的、物理学的、生物学的以及微生物学的方法和技术来研究化学结构已经明确的合成药物或天然药物及其制剂质量的一门学科。它包括药物成品的化学检验，药物生产过程的质量控制，药物贮存过程的质量考察，临床药物分析，体内药物分析等等。 一、化学药检测实验室常用的仪器设备 （1）含量分析：液相色谱仪；近红外光谱仪； 离子色谱仪； 液质联用仪； 气相色谱仪； 色谱检测器等。 （2）理化常数：旋光仪； 自动电位滴定仪；天平 ；熔点仪 ；卡氏水分测定仪； 在线pH计等。 （3）特殊物质和基团检测：卡氏水分测定仪 ；TOC检测仪； 液相色谱仪； 原子吸收光谱仪； 离子色谱仪； 近红外光谱仪等。 （4）注射剂及特殊剂型相关检测：天平 ；水质分析仪； 药品稳定性试验箱； PH计；扫描电镜； 微波合成仪等。 二、中药检测实验室仪器设备 （1）含量分析：液相色谱仪； 色谱检测器； 气相色谱仪；不溶性微粒检测仪等 （2）限度检查：原子吸收光谱仪； 微波消解仪； 离子色谱仪； 液相色谱仪； TOC检测仪； 液质联用仪等。 （3）理化常数：微波合成仪 ；抑菌圈 ；感官智能分析； 气相色谱； 液相色谱 ；自动进样器等。 （4）特殊物质和基团的检测：红外光谱仪； 紫外分光光度计； 制备液相色谱 ；轴向压缩系统。 三、生物制品检测实验室常用设备 （1）含量分析：液相色谱； 液质联用 ；电化学工作站 ；大分子作用仪 ；DSC； 色谱检测器。 （2）理化常数：激光光散射仪； DSC ；流变仪； 激光粒度仪； 气相色谱 ；非对称场流。 （3）含量分析：原子吸收光谱； 液相色谱； 微波消解 ；色谱检测器 ；旋光仪 ；折光仪。 （4）限度检查：ICP-AES 四、药品包装材料检测常用仪器设备： （1）阻隔性能：水蒸气透过率； 密封试验仪 ；透氧仪； 透气性测试； 热封仪； 气调保鲜。 （2）机械性能：万能试验机 ；透气性测试 ；拉力试验机 ；扭转试验机
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行为学相关实验文献-恐惧、焦虑、抑郁情绪对小鼠机械性痛阈的影响
作者：德尔塔 日期：2022-04-22
恐惧、焦虑、抑郁情绪对小鼠机械性痛阈的影响 ［摘要］目的: 观察恐惧、焦虑和抑郁情绪对小鼠机械痛阈的影响。方法: 将 60 只 C57BL/6N 小鼠随机分为6 组，制备恐惧、焦虑和抑郁模型并分别设置对照组。通过小鼠在遭受电击环境中僵立时间和次数评价小鼠恐惧状态，采用高架十字迷宫、明暗穿梭箱和旷场试验观测小鼠焦虑状态，采用强迫游泳和强迫悬尾实验观测小鼠抑郁样行为。同时应用 Von Frey 纤维丝检测 3 种情绪模型小鼠的机械疼痛阈值。结果: 与对照组比较: 恐惧模型组的僵立时间和次数显著增加; 焦虑模型组在高架十字迷宫开放臂停留时间比例及明暗穿梭箱实验中穿梭次数显著减少，旷场试验记录小鼠周边活动路径与总路径之比显著增加; 抑郁模型组在强迫游泳和强迫悬尾实验中的不动时间显著延长。提示恐惧、焦虑、抑郁动物模型建立成功。Von Frey 实验结果显示，与对照组小鼠比较，恐惧小鼠组机械痛阈升高，而焦虑小鼠组和抑郁小鼠组机械痛阈显著降低。结论: 恐惧情绪可以升高小鼠机械痛阈，而焦虑和抑郁情绪则降低其机械痛阈。 ［关键词］恐惧; 焦虑; 抑郁; 行为实验; 机械痛阈 疼痛是最常见的临床症状之一，与多种疾病相关，并且影响疾病的进程和临床**效果。疼痛既对机体产生影响，也对患者的精神、心理产生影响。大量临床研究证明，患者情绪变化可对疼痛感觉产生明显影响，所以调整患者情绪可能成为**疼痛的重要辅助方法。另外，在疾病发生过程中，患者往往出现恐惧、焦虑、抑郁等多种负面情绪，这些情绪因素对机体疼痛的影响是疼痛研究的重要内容之一。本研究以C57BL /6N 小鼠作为对象，观察在不同的负面情绪下小鼠机械痛阈的变化，为探讨情绪改变对机械疼痛阈值的影响提供实验研究数据。 1 材料与方法 1． 1 实验动物 雄性 C57BL/6N 小鼠 60 只，体重 18 ～ 22 g，购自于上海杰思捷实验动物有限公司，饲养于南京中医药大学实验动物中心，实验期间所有动物自由进食饮水，昼夜交替时间为 1 h。 1． 2 实验仪器
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室内环境(TVOC)检测专用气相色谱仪配置方案
作者：德尔塔 日期：2022-04-22
室内空气检测（五项）仪器配置方案 总挥发有机化合物即TVOC的主要来源在室外，主要来自燃料燃烧和交通运输：而在室内则主要来自燃煤和天然气等燃烧产物、吸烟、采暖和烹调等的烟雾，建筑和装饰材料，家具，家用电器，清洁剂和人体本身的排放等。有近千种之多。在室内装饰过程中，VOC主要来自油漆，涂料和胶粘剂。据报道，室内TVOC浓度通常在0.2mg/m3到2mg/m3之间，而在不当装修施工中，甚至可高出数十倍。室内多种芳香烃和烷烃主要来自汽车尾气（76%-92%）。一般油漆巾TVOC含量在0.4-1.毫克/立方米。完莉莉等指出，由于TVOC具有强挥发性，一般情况下，油漆施工后的10小时内，可挥发出90%，而溶剂中的TVOC则在油漆风干过程只释放总量的25%。由于苯和苯系物是TVOC的重要组成，所以有些人只检测TVOC，而不检测苯，以及苯系物：然而，也有只检测总苯，而不检测TVOC：还有一些单位则两者都检测。这主要是取决于要求和条件。检测TVOC的技术设备要求较高，通常都采用气相色谱法，但也有采用傅里叶变换红外光谱法、荧光光谱法、离子色谱法和反射干涉光谱法等。它们都以微量和痕量水平出现，所以容易被忽视。它们主要来自于：有机溶液：如油漆、含水涂料、粘合剂、化妆品、洗涤剂、捻缝胶；建筑材料：如人造板、泡沫隔热材料、塑料板材；室内装饰材料：如壁纸、其他装饰品等；纤维材料：如地毯、挂毯和化纤窗帘；家用燃料和烟叶的不完全燃烧，人体排泄物。TVOC的检测原理为：用以TenaxTA作为吸附剂TVOC吸附管收集一定体积的空气样品，空气流中的挥发性有机化合物保留在吸附管中。采样后，将吸附管加热，能吸收挥发性有机物，待测样品随惰性载气进入毛细管气相色谱仪。在一定条件下的毛细管分离后，FID检测，工作站记录谱图和数据，用保留时间定性，峰高或峰面积定量。 室内环境(TVOC)检测专用气相色谱仪配置方案： 仪器名称 型号及规格 单位 数量 气相色谱仪（任选） 主机+FID+填充系统+毛细系统 台 1 主机+FID
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Esco台式摇床三偏心轴平衡技术浅谈
作者：德尔塔 日期：2022-04-22
Esco OrbiCult系列实验室摇床，采用先进的技术和环境友好设计，适用于广泛的实验类型，可提供良好的实验结果。为实验室样本制备应用提供更好的选择！ 什么是偏心轴？ 1.偏心轴的概念 外圆与外圆的轴线平行而不重合的工件，称为偏心轴。和它的名字一样，它的中心并非在轴线的中心，一般的轴，只能带动工件自传，但是偏心轴，不但能传递自传，同时还能传递公转。 2.偏心轴的应用 为了方便调节轴与轴之间的中心距，偏心轴通常运用在平面连杆机构三角带传动中。例如实验室台式摇床。 3.偏心轴的优点 ● 传动机构紧凑，能够得到比较大的轴距（摇摆幅度） ● 设计简单，成本较低 4.偏心轴的缺点 ● 运行状态下，摇床平台上各位置的样品震荡的均一性较差 ● 样品需均一放置，如不均一放置，传动机构容易磨损，影响使用寿命 ● 需要定期润滑、后期维护麻烦 Esco摇床三偏心轴平衡设计 Esco台式摇床，在传统的单偏心轴摇床机构上，采用了的三偏心轴平衡设计技术。 1.什么是三偏心轴平衡设计？ 顾名思义，三偏心轴设计，即为：将三个偏心轴承，组合在一起，成三角形排列。每个偏心轴承在自转传输动能的同时也参与供应整个系统的公转动能传输。 2.Esco台式摇床三偏心轴示意图 3.三偏心轴平衡设计的优点 ● 能够获得更大的承重 ● 能够获得更快的转速，转速调节精度高 ● 在高运行转速下，得到更好的平衡 ● 确保在运行状态下，摇床平台上各位置的样品震荡的均一性 ● 减少机构使用磨损，提高机构组建的使用寿命 ● 免维护，无需添加润滑剂和人为保养
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纳米金、量子点、荧光二氧化硅的优缺点
作者：德尔塔 日期：2022-04-22
由于金可与巯基之间形成很强的Au-S共价键，金纳米粒子可以很好的结合纳米技术和生物检测技术。金纳米粒子在水中形成的分散系俗称胶体金，以胶体金为标记物的免疫金和免疫金染色法，可以单标记或多重标记，并可以进行大分子的定性、定位以至定时量研究，已被广泛应用于医学和生物学的众多领域。人们对胶体金在功能化固体表面的化学组装行为也做了系统的研究。 有学者利用纳米金与多核苷酸聚合物构象的改变可以改变溶液颜色的特性，建立了用巯基化寡核核苷酸探针标记纳米金并检测特定多核苷酸序列的新方法，为特定DNA序列检测的研究和应用开辟了一个新领域，在DNA传感器以至DNA芯片的制作方面都有广阔的应用前景。 然而在胶体金溶液的应用过程中，还存在着纳米金溶胶稳定性受环境因素影响严重的问题，在电解质溶液中易形成不可逆聚集，从而影响其后续使用。 量子点也称半导体晶体。当半导体纳米粒子的尺寸与其电子空穴半径（约5~10nm）相接近时，由于电子波函数的量子限制效应，半导体纳米粒子能带的有效带隙随粒子的半径减少而增加，导致吸收光谱和荧光光谱的蓝移。光谱性质主要取决于半导体纳米粒子的半径大小，而与其组成无关。 通过改变粒子的大小可获得紫外到近红外范围内任意点光谱。标记生物分子的量子点是一种核壳结构的物质，它是一种量子点为核，在其外部使用另一种材料形成表面的薄层，此结构可得到较高的发光率和较好的光化学稳定性。与传统的染色分子相比，量子点有许多优点。小的无机晶体能随更多励磁循环和光散发，而一般的有机分子随力小且容易分解。所以，无机晶体的稳定性使研究人员能在更长是时间内观察细胞在组织中的活动。量子点最大的好处是它们的色彩更丰富、发光强度高和光化学稳定性好。除此之外，量子点还为生物医学领域提供了多色编码技术，使其在基因表达技术、高通量筛选和医学诊断方面又很大的发展前景。 但量子点也有其缺点：首先其合成条件十分苛刻，需要在高温、绝氧、绝水的条件下
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一体式真空过滤装置结构介绍及与传统产品的区别
作者：德尔塔 日期：2022-04-22
真空过滤装置通常用于实验室进行各种水溶液或溶剂的过滤，达到去除溶剂中杂质、除菌、澄清溶液等目的。传统的实验室过滤装置通常由一台真空抽滤泵和一套过滤瓶组成，可以满足一般的实验室抽滤需要，但是此类产品也存在占用桌面面积较大，配件组成较多、过于分散等缺点。针对上述缺点，全新开发的一体式实验室真空过滤装置VF204A有效避免了此类问题，改善了实验室过滤的效率和流程。 一体式的实验室过滤装置的结构不同于传统的产品，采用全不锈钢外壳，内置低噪音的无油式过滤真空泵。主机外壳带有延展的机台，机台上可放置过滤瓶。标配的过滤瓶采用了更为独特的设计，在其底部特别安置了磁石，可以牢固的吸附不锈钢机台表面，使整套过滤装置成为一个整体。 这种一体式过滤装置与传统产品相比具有以下不同之处： 1.过滤用真空泵内置在机壳内部，避免了灰尘吸入泵内、滤液侵蚀过滤泵等问题，为过滤泵提供了额外的保护，延长了使用寿命； 2.由于采用特殊设计讲过滤瓶固定在机台上，这样避免了晃动、误操作等外界因素而导致的过滤摔倒等问题。而对于传统抽滤产品来说，由于过滤瓶摔碎后期更换产生的费用往往也是一笔不小的开支，同事也耽误了试验进度； 3.一体式的方便一次性移动整套过滤装置，不用再逐一移动真空泵和瓶组，快捷高效。 详细产品讯息参见上海领德仪器有限公司网站。
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高原上的动物进化适应高原缺氧的环境的机制研究
作者：德尔塔 日期：2022-04-22
不同的动物有不同的机制。事实上，就人类来说，不同的高原民族的适应都不一样，更何况不同的物种呢。参见：高原生活的人类通过什么机制适应低压缺氧的环境？ - 雪山象的回答 低压造成的缺氧是高原环境对生物适应的最大阻碍。在高等动物中，调控对缺氧环境应对的核心通路就是HIF (Hypoxia-inducible factors，缺氧诱导因子）信号通路。这个通路的关键蛋白是HIF蛋白家族，包括多个成员，但最重要而且功能最强的是HIF1蛋白。HIF蛋白家族每个成员都是有alpha, beta两个亚基构成，这两个亚基都是由不同的基因编码，比如说HIF1蛋白的两个亚基就是分别由HIF1A, ARNT (HIF1B) 两个基因编码。只有两个亚基结合在一起，才会形成有功能的核转录因子，然后调节下游一系列与缺氧应对相关的基因，包括红细胞生成，新血管生成，血管舒张，一氧化氮合成，细胞呼吸等。 为了迅速应对突发缺氧事件，HIF1蛋白的调控非常独特。首先，无论缺氧与否，HIF1B基因恒定的表达和翻译，使得HIF1B蛋白 (beta亚基) 大量在细胞中积累。然而，HIF1A基因虽然同样恒定的表达与翻译，但是HIF1A蛋白 (apha亚基) 却无法在细胞中积累。因为PHD复合物监控着细胞內氧含量，不缺氧的情况下，PHD复合物传递信号给VHL等基因组成的泛素复合物，降解掉翻译出的alpha亚基，让它无法与beta亚基结合形成有功能的HIF1蛋白 (具体如下图所示)。但缺氧情况下，PHD复合物受到抑制，alpha亚基会立即积累并与beta亚基结合。这种机制的主要目的就是在突发缺氧的情况下，免除转录翻译以及蛋白积累的时间，迅速形成有功能的HIF1蛋白。 目前，对于动物的高原适应机制的研究，主要通过比较高原物种与它们的平原近亲之间的生理以及基因上的差异。由于并非所有物种都能找到平原对应近亲物种，而且并非所有高原动物都有比较高的研究价值，所以动物高原适应研究并不算非常多。目前有研究的物种包括以下几种： 牦牛： 牦牛是由平原上的黄牛进化而来的，而且牦牛和黄牛的亲缘关系非常
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舌尖上的iTRAQ：蛋白质组学研究选材四大原则
作者：德尔塔 日期：2022-04-22
不想当厨子的大夫不是个好科学家——尼古拉斯·黄黄 中国饮食文化博大精深，《舌尖上的中国》向世界展示了我们这个完美的吃货民族。一道成功佳肴，食材挑选有着非常严格的标准。在医学基础研究领域，实验与做菜亦有共通之处，做饭时如果偷懒，用煮过面条的汤煮馄饨，馄饨的卖相口感观感都大为降低。实验也如此，一是一，二是二，必要精确审慎，更不可以偷懒，变通条件。偷工减料一时爽，数据糟糕难重复，山寨病毒虽省钱，博士延期哭成狗。 做菜最重要的便是原材料的品质，放到嘴里之前，你永远不知道这道菜味道正不正，但新鲜优质的食材至少能提高这道菜的成功率，毕竟臭鱼永远无法煲出鲜汤。蛋白质组学研究亦如此，无污染无降解的合格样本是找到靠谱差异蛋白的前提！本期黄博即向大家介绍定量蛋白质组学高通量筛选技术中的一道硬菜——iTRAQ联合串联质谱技术——的样本选材。 iTRAQ 定量分析蛋白质的基本原理是利用iTRAQ试剂是可与氨基酸末端氨基及赖氨酸侧链氨基以共价键链接从而完成对肽段的标记，经过高效液相色谱分离，一级质谱和二级质谱分析，即可完成对样本中蛋白质的定性与相对定量。理论上讲iTRAQ实验每个样本需要的蛋白量至少300ug，然而实际上只要做过实验的人都能应该都能理解所有实验的成功率并非100%，特别对于iTRAQ这种流程复杂、对仪器稳定性依赖高的实验，因此保守起见，每次实验之前准备的蛋白量**满足两次独立实验，此为其一。其二，是样本准备阶段，单纯从实验技术角度出发，只要能从样本中提出蛋白即可进行iTRAQ实验，但对于实验的目来说，我们收集的样本是否真的符合要求？不一定！特别是对于临床收集的样本。 iTRAQ的优点之一是样本来源广泛，几乎所有收集的样本都可利用该技术进行蛋白质组的筛选，不管是寻找功能蛋白质、机制的探索，还是疾病Biomarker的筛选，一网打尽，尽快将样本转化成研究成果，避免这些珍贵的样本在冰箱中睡大觉。 样本形式多种多样，组织、细胞、血液（血清或血浆）、脑脊
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强迫游泳、悬尾和旷场实验相关-温阳解郁汤对抑郁模型大鼠HPA轴的影响
作者：德尔塔 日期：2022-04-22
温阳解郁汤对抑郁模型大鼠HPA轴的影响 摘要：目的：研究温阳解郁汤对慢性应激抑郁大鼠HPA轴的影响，初步探讨其抗抑郁作用的机制。方法：雄性Wistar大鼠，随机分为6组，正常对照组和模型对照组灌胃0.9%氯化钠溶液，温阳解郁汤高、中、低剂量组灌胃温阳解郁汤浓缩煎剂（8、6、4g/kg）、阳性药对照组灌胃盐酸氟西汀（3.33mg/kg），除正常对照组外其余各组在灌胃同时接受慢性不可预知温和刺激（CUMS）刺激并孤养28d。采用强迫游泳实验（FST）、悬尾实验（TST）、旷场实验（OFT）对各组大鼠进行行为学评价；q PCR检测大鼠下丘脑CRH m RNA和海马GR m RNA的表达；放射免疫法检测大鼠血中ACTH、CORT的含量；HE染色大鼠海马观察组织形态变化。结果：温阳解郁汤能够减少大鼠FST和TST不动时间，增加OFT穿格次数（P
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EconoTrace-饮用水中亚硝胺样品前处理方案
作者：德尔塔 日期：2022-04-22
一、 序言 众所周知，亚硝胺是一类高致癌的化合物，在我们的食品、消费品以及饮用水中广泛存在。特别是近年来，人们在饮用水、污水处理消毒后的水体及直接受工业源污染的水体中均发现了亚硝胺类的存在。由于亚硝胺类消毒副产品在水中含量低（通常＜1 ng/L），且大多数化合物具有水溶性，导致对于它们的分析比较困难，无论是对其分析检测方法、形成机制还是控制方法等方面的研究也都还存在很多盲点，加上其种类复杂多样及现有科学技术的限制，亚硝胺类的检测具有很大的挑战性。 目前，国内对于饮用水中亚硝胺类的分析方法还没有统一的标准，因此，本方法参考美国EPA Method521的样品前处理方法，利用FMS公司的Econotrace同步固相萃取系统对饮用水中亚硝胺进行富集萃取，并利用亚硝胺专属检测器进行检测，最终获得的回收率良好，适合饮用水中亚硝胺的检测。本方法中FMS公司的EconoTrace同步固相萃取系统与SuperVap氮吹浓缩系统联机使用，实现了固相萃取-浓缩全过程自动化，简化了固相萃取步骤，省去了诸多人工操作，使效率大幅提高，减少了人为操作误差。 二、 实验试剂和耗材 1. 活性炭固相萃取柱，2g 2. 二氯甲烷试剂（农残级） 3. 甲醇试剂（农残级） 4. 去离子水试剂（色谱级） 5. 含硫代硫酸钠萃取柱，2g 6. 实验室亚硝胺溶液样品（US-113N） 7. d6亚硝基二甲胺混合液样品（IST-760） 8. d14二丙基亚硝胺混合液样品（IST-770） 三、实验仪器 FMS EconoTrace同步固相萃取系统 FMS SuperVap氮吹浓缩系统 FMS 一步法样品浓缩管 亚硝胺检测器 四、EconoTrace同步固相萃取系统的设定程序 1. 使用5ml二氯甲烷进行对固相萃取柱进行活化 2. 完成后采用氮气吹扫干燥整个系统 3. 继续使用20ml甲醇对固相萃取柱进行活化 4. 完成第三步后，再通入10ml的去离子水活化固相萃取柱 5. 使用真空泵将样品注入固相萃取柱（为
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光化学法诱导脑缺血（MCAO）模型的建立
作者：德尔塔 日期：2022-04-22
背景：缺血性脑血管病严重危害人类的健康，建立一种与人脑梗塞类似的动物模型使之适合溶栓**研究具有重要的研究意义和实用价值。目前被广泛应用的“阻断大脑中动脉制备局部脑梗塞动物模型”方法，由于其存在侧支循环，受累的脑组织缺血程度常不一致，梗塞灶的大小和位置也有差异，加之大脑中动脉阻断需要一定的手术技巧，故其应用受到定的限制。加之大脑中动脉阻断需要一定的手术技巧，故其应用受到一定的限制。静脉注射微血栓栓塞脑内小动脉造成的脑梗塞，受血栓大小的影响，而且栓塞部位不易控制，也有其应用局限性。 自1984年Dietrich和Watson等首先报道，采用光化学法诱导脑梗死动物模型以来，建立该模型的方法逐渐得到发展、完善和成熟，现已成为一种重要的脑梗死动物型，并广泛用于脑梗死的神经生化、生理、病理，以及防治等方面的研究。这里我描述一种实验报告采用光化学法诱导脑梗塞模型的建立。 1. 材料准备 1.1 动物：成年大鼠，250g 1.2 试剂： 玫瑰红(Sigma Aldrich, Steinheim, D) 4%多聚甲醛(Merck KGaA, Darmstadt, D) 1.3 设备和耗材： 1.3.1 小动物麻醉、脑立体定位（生产厂家：瑞沃德公司） 1.3.2 显微外科手术器械包（型号：SP0003-R，生产厂家：瑞沃德公司） 1.3.3 561mm黄绿光激光器（型号：R-LG561-100-A5，生产厂家：瑞沃德公司）：用于对动物头部进行光刺激造模。 1.3.4 小动物保温箱（型号：912-001，生产厂家：LYON/USA），供动物手术后护理。 1.3.5 SMART3.0小动物行为视频追踪系统（生产厂家：Panlab/Spanish），供造模后通过动物行为评判神经功能。 1.3.6 脑模具（生产厂家：瑞沃德公司），供脑切片染色。 1.3.7 其他辅助设备和耗材（生产厂家：瑞沃德公司） 2.实验方法 STEP1： 动物麻醉和头部固定：动物经麻醉机诱导进入麻醉，移到定位仪装置进行头部固定和麻醉维持，稳定一会后，使用镊子夹足，测试麻醉的
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