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western blot激光近红外荧光检测的特点
作者：德尔塔 日期：2022-04-18
Western blot方法是生物实验室常用的蛋白检测方法之一，自从1979提出至今已有数十年的历史。常用的检测方法有化学发光法和荧光方法。NIR近红外荧光检测方法，印迹膜自发荧光较低，信噪比高。NIR荧光检测能获得高信噪比和高质量图片主要依赖于激发强度大，精密的激光光源和专业的光学元件。我们Azure C500和600成像系统带有双激光光源，我们来看下激光光源能给我们带来哪些好处。 1. 激光光源更容易达到染料的吸收峰 2.窄光谱激光减少光泄漏的产生 3.激光检测在更短时间内实现更高信噪比 4.激光检测具有较低的背景 如果您有带有激光激发的近红外荧光成像系统，那么您还可以进行很多其他实验哦，如下但不限于： ◐ 双色印迹膜成像：用于精准定量，满足期刊杂志需求 ◐ in-cell western检测实验：传统的western blot对于一些大分子量的蛋白检测具有局限性，近红外染料的问世，可以在细胞培养板上进行in-cell western检测，省去了电泳，转膜等等繁琐的步骤，根据孵育二抗所发出荧光信号进行检测；还可以用于药物筛选，FDA已经规定胰岛素和一些抗肿瘤药物的体外效价评价标准使用此方法 ◐ EMSA（凝胶迁移或电泳迁移率检测）实验：红外荧光技术可以解决EMSA实验中探针示踪问题，还可以进行双色标记检测竞争性结合； ◐ 活体成像：近红外荧光染料具有良好的组织渗透性、无毒性和无放射性等特点，可以真正无损伤的研究活体动物体内肿瘤的生长及转移，感染性疾病发生发展过程或者监控活体生物体内的细胞活动和基因表达，有效的研究观测转基因生理过程等。在这点上别拿我们家宝宝与轻（zhuan）奢（yong）品（jiqi）比，你懂的。 ◐ 组织切片成像：使用IRDye®抗体或荧光探针，根据标准的免疫组织化学实验协议进行标记，可以在宏观层面上进行实验分析，组织切片红外成像优势在于可以在使用显微镜之前宏观快速浏览感兴趣的部分；可进行两通道标记，进行多重标记检测；可对染色部位进行定量分析等。 ◐ 微印
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阿尔茨海默症的药物研发浅析
作者：德尔塔 日期：2022-04-18
又一次下起了雨，我从你的身旁经过，而你却忘记了我们初识的这一场相逢； 再一次走向你，我轻唤着你的名字，看到的却是你迷茫的脸庞； 这一次我牵起了你的手，向你诉说着我们曾经的过往，可你却不知道我是谁…… 你变得陌生而又呆滞，我知道这并不怪你，医生说，你得了阿尔茨海默症。 随着全球老龄化的进程加快，罹患老年痴呆的患者激增，全球每3秒就有一例新发痴呆患者。目前我国痴呆患者已超过1000万，居世界首位，并且以每年增加30万以上新发病例快速增长，已成为影响我国经济社会发展的重大公共卫生健康问题和社会问题。而阿尔茨海默症是引起痴呆的主要原因，约占痴呆患者总人数的三分之二以上。 阿尔茨海默病（以下简称AD）是全世界老年痴呆的主要原因，主要源于大脑皮层萎缩、脑白质稀疏和脑组织的病理改变。这些变化使大脑皮层及海马等部位广泛出现老年斑，神经原纤维缠结及神经元脱失，导致中枢神经纤维传递信息的通路阻塞，造成大量细胞病态衰老、变性坏死，从而使大脑形成记忆认知、行动的数据通路不畅，信息间有效传递失灵，使记忆和认知功能减退，理解障碍、记忆障碍，并伴随情绪异常等症状。 根据World Alzheimer Report 2018数据统计，2018年全球AD患者约为5000万人，带来的医疗卫生支出超过1万亿美元。AD的病理特征在于脑内细胞外的β-淀粉样蛋白（以下简称Aβ）沉积形成的炎性斑块和细胞内的微管相关蛋白Tau的过度磷酸化而形成的神经原纤维缠结。 作为一种损害大脑认知及行为改变的复杂疾病，阿尔茨海默病(AD)对患者及其家庭产生了巨大且日益严重的影响。目前，已上市用于**AD的药物仅能部分改善患者的记忆功能，但不能阻止疾病的发展，也无法影响该疾病的主要神经病理学标志，即老年斑和神经原纤维缠结。然而过去二三十年，基于最主流的AD假说（Aβ沉积和Tau蛋白假说），阿尔茨海默病的新药研发却屡遭挑战和挫折。 2018年和2019年初，有8种药物（主要是疾病修饰疗法） 的III期临床试验失败
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WSSV病毒受体对虾类白斑综合症起决定作用造成感染的过程
作者：德尔塔 日期：2022-04-18
Abbikine产品：Anti-GST Tag Mouse monoclonal antibody (A02030, Abbkine, Wuhan, China) 英文名：The polymeric immunoglobulin receptor-like protein from Marsupenaeus japonicus is a receptor for white spot syndrome virus infection 中文名：MjpIgR的聚合免疫球蛋白受体样蛋白是白斑综合症病毒感染的受体 作者单位：山东大学生命科学院，动物细胞和发育生物学省重点实验室 研究方向：动物细胞和发育生物学 杂志名称：PLoS Pathogens (2019) 影响因子：6.02 研究背景 病毒感染过程是一个非常复杂的相互作用，包括多个步骤。它从病毒体附着到宿主细胞膜开始，然后与受体特异性结合。病毒受体的结合使病毒可以将其基因组直接在质膜上释放到细胞中，或者通过内吞作用进入细胞。内吞作用是高度复杂和动态的，并且涉及内吞小泡的再循环，运输，成熟和融合。对于DNA病毒和一些RNA病毒，内吞病毒会从细胞质运输到细胞核中进行基因表达。为了进入宿主细胞的细胞质，病毒可以采取两种主要策略，受体介导的内吞作用和独立于内吞作用的受体介导的进入。病毒可以使用特定的细胞膜受体进入并感染宿主细胞，这决定了病毒可以感染的宿主特异性，组织嗜性和细胞类型。几类分子被脊椎动物中的不同病毒（例如唾液酸部分，整联蛋白和一些免疫球蛋白样超家族（IgSF）蛋白）用作受体。一些病毒使用各种类型的受体附着并进入细胞。例如，在哺乳动物中，丙型肝炎病毒（HCV）感染的受体包括硫酸肝素，低密度脂蛋白受体，转铁蛋白受体1，B型清除剂受体和闭合蛋白。 细胞粘附分子可分为四个蛋白质家族：整合素，选择素，IgSF和钙黏着蛋白。它们通常在细胞表面表达并具有多种功能。其中，IgSF是细胞表面和可溶性蛋白的大蛋白超家族，与识别，结合，粘附和免疫有关。 IgSF成员在顺序和功能上存在分歧；然而，成员的明确特征是存在一个或多个免疫球蛋白（Ig）样结构域。在脊椎动物中鉴定出的聚合免疫球蛋白受体是
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细胞形态异常，鱼骨图来帮忙（三）
作者：德尔塔 日期：2022-04-18
滴滴滴~BI中国市场部又来送福利啦 分析完内源和外源污染状况 还是没有找到原因？ 那么我们继续分析 根据鱼骨图鱼刺大小所代表的问题发生概率大小，接下来我们来谈谈实验操作过程中，有哪些因素会影响到我们的实验结果呢。 操作过程 操作过程又可细分为以下几类： 接下来我们将逐条进行分析↘ 操作人员 人体皮肤表面平均带有103~106/cm2的微生物，污染物可能由于操作人员及穿着衣物带入。进出细胞房需穿着合适的实验衣及更换专用的拖鞋，尽量降低粉尘、皮屑及附带之微生物的扬起及掉落，以免造成污染。 解决方案： 人体是细菌最大的携带者，进出细胞房应该这么做： 1.换专用实验衣：勤更衣，无菌无尘衣穿过六小时后，已可在每平方公分中采集到1-6个微生物。 2.戴口罩：减少讲话，因为口水中含107个微生物/ml，并且寄居在人体部分的支原体也会随之影响实验环境，所以应戴口罩操作。 3.戴手套：进入细胞房之前，应去除身上配戴所有与实验无关的随身物品，洗手，消毒，戴上手套，再使用75%酒精消毒。 细胞房出入口 无净化的室内空气可检测到浮游菌500~2000颗/cm3。 2015药典指导原则《9205药品洁净实验室微生物监测和控制指导原则》中，有规定不同洁净等级实验室的浮游菌和沉降菌数量要求。 解决方案： 1.按要求细胞房应为封闭、正压、洁净房间（1-10万级洁净度）。如受限于现况，可考虑医疗用移动式空气净化机，以净化空气。 2.如担心污染物外泄，细胞房还应设计为相对负压。 3.人员进出细胞房应有管制，经过培训才能进入操作，避免污染别人。 4.细胞房窗户不建议打开！打开窗户，许多细菌会乘机夹杂在空气中进入细胞房里。 ★细胞房内绝对不可穿拖鞋或凉鞋，以避免带入脚气霉菌。应该穿全包裹式鞋套或专用鞋子 生物安全柜 生物安全柜需尽量保持清洁及净空，非必要性的物品不要放在里面，容易扰乱操作柜内气流。使用前一定要使用消毒杀菌溶液进行擦拭[如75%酒精或Pharmacidal（不需擦拭，自然风干）]，实验过程中
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Western blot如何进行实验质控
作者：德尔塔 日期：2022-04-18
WB实验总做不好，那么如何进行WB实验质控呢？ 做过WB实验的小伙伴都经历过成像时忐忑不安，出来结果时的彷徨无措，为什么条带没有出啦，为什么背景这么高，为什么受伤的总是我，看着旁边小伙伴漂亮的结果图，心生羡慕嫉妒，那么小编给大家整理总结了如何进行WB的质控和注意哪些检查点。 蛋白样品： 准备好裂解液后，使用BCA或Bradford等检测方法仔细测量蛋白浓度。进行上样时，确保加入等量的蛋白样品，以确保公平比较，从而最大限度地减少上样误差。不要使凝胶过载！如果您的表达目标非常低，可选择加样孔体积大的凝胶，这样可提高上样量。 阳性和阴性对照： 这些质控对于证明您的结果有效至关重要。阳性对照通常是裂解物或组织提取物，其具有过度表达的蛋白。当您的阳性对照未能发出信号时，您知道该方法可能存在问题。如果您正在使用重组蛋白，那么包含内源形式靶标的阳性对照也是一个好主意。这将有助于理清与一抗相关的任何特异性问题。阴性对照同样也有价值，通常是不会产生目标的裂解物或组织提取物。**的阴性对照由敲除或未处理的细胞系制备。 内参对照： 有几种广泛可用的上样对照抗体，如GAPDH，actin 或 tubulin。由于这些蛋白表达丰度高，因此在适应低丰度目标的样品表达看到内参对照蛋白的过饱非常常见。这里最大的挑战是内参对照和靶蛋白在相同的样品稀释系列中通常具有不同的线性，影响定量的准确性，对于目的蛋白表达比较低的蛋白，可选择低表达的内参例如Lamin B1和HSP60等蛋白。此外，研究人员需要证明内参蛋白的表达不会因实验条件的变化而改变。 在第一个检测线性范围重叠的地方，蛋白质在该重叠区域内的定量将是很好的。然而，在后者中，它们不重叠，容易看出蛋白质浓度的变化如何影响一种蛋白条带强度，而不影响另一种蛋白质的条带强度。在这种情况下，定量是不准确的。 转移效率/总蛋白标准化： 转印完成后，**评估转移到膜上的蛋白量以及凝胶中剩余的蛋白量。通过评估整个蛋白范围，产生更广泛
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GITR靶点分子和B-hTNFRSF18（GITR）小鼠
作者：德尔塔 日期：2022-04-18
各位看官晚上好，一期一会的百奥赛图知识扩展课堂又来喽，今天小编带来一种视觉享受的分子，言归正传，GITR（glucocorticoid-induced TNFR-related protein）是TNF受体超家族成员 ，在多种肿瘤模型中可表现出抗肿瘤效果。GITR是目前免疫学家感兴趣的一种共刺激免疫检查点分子。 那么接下来，咱们就一起瞧瞧这个因吹斯汀的靶点分子吧~ 基因功能简介 TNFRSF18（TNF受体超家族成员18）也称为糖皮质激素诱导的TNFR相关蛋白（GITR），其在包括T细胞在内的许多免疫细胞上表达。作为T细胞的共同刺激信号，TNFRSF18在T细胞活化后被上调，进而促进T细胞增殖。已知CD25+/CD4+调节性T细胞可介导免疫耐受，而GITR激动剂抗体可逆转这种免疫耐受，并在多种肿瘤模型中显示出抗肿瘤作用。 Figure 1：Model of GITR–GITRL interaction dynamics during an immune response. 目前，GITR是免疫学家热衷研究的共刺激检查点分子，参与抑制Treg细胞的抑制活性，并延长效应T细胞的存活。百奥赛图开发的B-hTNFRSF18(GITR) mice人源化小鼠为科学家们研发该靶点抗体药物的有效验证提供了有力的工具。 品系信息 qRT-PCR分析 通过qRT-PCR技术分析肝脏组织的的GITR基因在 mRNA水平的表达情况。 在C57BL/6与B-hGITR小鼠中，GITR基因表达并无显著性差异(n=3)。 蛋白表达分析 通过流式细胞术分析了野生型（WT）C57BL/6和纯合B-hGITR小鼠的脾细胞。 在WT C57BL/6中可检测到小鼠GITR+细胞，而在纯合B-hGITR小鼠中可检测到人GITR+细胞。 通过流式细胞术分析了野生型（WT）C57BL/6和纯合B-hGITR小鼠的Treg细胞。 在WT C57BL/6中可检测到小鼠GITR+细胞，而在纯合B-hGITR小鼠中可检测到人GITR+细胞。 B-hGITR小鼠的白细胞亚群分析 从C57BL/6和B-hGITR小鼠（n=3）中分离出脾细胞。通过流式细胞术测试白细胞亚群的比例。 结果表明，纯合B-hGITR小鼠中白细胞亚群的表达谱与C57BL/6小鼠相似
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人 βAPP elisa检测试剂盒说明书
作者：德尔塔 日期：2022-04-18
人 βAPP elisa检测试剂盒说明书 1． 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。 2． 浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。 3． 各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间zui好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。 4． 请每次测定的同时做标准曲线，zui好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔*孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请zui后乘以总稀释倍数（×n×5）。 5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。 6． 底物请避光保存。 7． 严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准. 8． 所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。 9． 本试剂不同批号组分不得混用。 10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。
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肿瘤动物模型的构建
作者：德尔塔 日期：2022-04-18
癌症研究领域中公认的缺陷之一是缺乏能够研究癌变和癌症**的模型系统。为了评估在临床前和临床研究中癌症**的效果，通常使用人类肿瘤细胞系或患者源性肿瘤移植到免疫缺陷小鼠体内的肿瘤动物模型。肿瘤动物模型为临床试验提供了一个很好的替代方案，可以让研究者了解临床药物的作用机制，是药物进行临床试验前的至关重要一步。 本文介绍几种肿瘤动物模型，目前它们是研究热点，包括以下5类，但不限于此。 1.肿瘤细胞系异种移植模型（Cancer cell line-based xenograft , CDX） 常用免疫缺陷小鼠包括balb/c裸鼠（balb/c-nude），严重联合免疫缺陷小鼠（SCID）和非肥胖糖尿病/严重联合免疫缺陷小鼠（NOD-SCID）等。 常见模型构建方法是将肿瘤细胞悬液注射到免疫缺陷小鼠的原位/异位，观察和评估肿瘤的生长或转移情况。 2.人源性肿瘤异种移植模型（Patient-derived tumor xenograft , PDX） 人源性肿瘤异种移植模型（PDX）是直接将患者身上肿瘤（一般为原发性肿瘤）移植到免疫缺陷小鼠体内。 此模型可以避免肿瘤细胞出现严重的化学或机械损伤而对失巢凋亡（Anoikis）敏感。由于PDX小鼠来源于人类肿瘤，它们为癌症患者开发抗癌疗法和个性化药物提供了很好研究工具。 3.人源化异种移植模型 通过将患者肿瘤组织块/细胞和外周血或骨髓细胞共同移植到免疫缺陷小鼠中，构建了人源化异种移植模型。该模型重建了小鼠免疫系统，用于研究肿瘤环境和异种肿瘤基质之间的相互作用对肿瘤的发展和转移的影响。 此模型常用到的小鼠有NOD-SCID、NSGTM、NCGTM等 4.同种异体移植模型 同种异体移植模型来自包括基因工程小鼠模型(GEMM)或致癌物诱导模型的自发小鼠肿瘤的同种异体移植。这种模型可以使小鼠原发性肿瘤很好的在组织病理学和遗传图谱上反映出来，在肿瘤表型分化、微环境丰富度和癌症干细胞驱动等方面研究使用较多。 5.同系肿瘤模型 同系肿瘤模型是将来源于相同的近交系小鼠的永生化小鼠肿瘤细胞系进行同种异体
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细胞形态异常，鱼骨图来帮忙（四）
作者：德尔塔 日期：2022-04-18
DuangDuangDuang~ BI中国市场部又来给大家送福利啦 我们的鱼骨图分析即将接近尾声啦 大家有没有感觉收获颇丰？ 本期我们将继续介绍可能出现问题的部分---培养基 如下图所示： 接下来我们将从以下几点进行分析： 血清 不同批号血清内的成分和营养组成比例会不同，因此在实验过程中，需要经过测试来找寻合适的血清批次。当实验需要更换血清时，细胞需要有一段适应期。有些批号适合养神经细胞或间充质干细胞等。 解决方案： 1.建议少量换置，以使用体积1/3，1/2，2/3的方式渐进式置换。 2.提高血清比例增加营养让细胞更快速适应。 3.一次采购足量血清避免经常更换批号。 4.需注意购买血清的真伪，请务必从正规经销商处购买。如遇价格低廉或不明通路（未经冷链全程运送）都需提高警惕。 基础培养基 基础培养基以形态可分为干粉培养基和液态培养基。 干粉培养基：自行配置时，需要注意是否需另外添加营养物或必须物至培养基中（如：碳酸氢钠）并调整pH值。 液态培养基：使用不适合的培养基培养细胞，细胞仍可生长但特性会改变。培养基中常用的酚红（pH指示剂）本身有微弱雌激素作用，会刺激具有雌激素受器的细胞生长。 解决方案： BI提供不同细胞专用无血清培养基，各式基础培养基。（详情请戳此处） 添加因子 在临床及科学研究实验中，常需外加生长因子活化细胞或促进分化，建议**选购不含动物或人衍生物质的高活性，高纯度重组蛋白，以确保产品活性符合严格规范。 常见使用的添加因子如：细胞因子（Cytokine），这是一类小分子蛋白质或多肽类，这些因子可以帮助细胞生长，促进细胞活化，直接参与免疫调节作用和其他细胞因子的形成，也是细胞与细胞之间讯息传递的重要桥梁。在正常生理状况下细胞受到刺激后也会自然分泌因子，不同种类的细胞因子也会具有不同的免疫功能，然而过度的细胞因子分泌也可能会引发炎症反应，可直接、间接诱导或抑制细胞凋亡。 一些动物来源，组分复杂的添加剂，如动物源的基底
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lncRNA MIR100HG和miR100以及miR125b在CRC抗cetuximab的调控作用
作者：德尔塔 日期：2022-04-18
lncRNA MIR100HG-derived miR-100 and miR-125b mediate cetuximab resistance via Wnt/β-catenin signaling 来源于lncRNA MIR100HG的miR-100和miR-125b通过Wnt/β-连环蛋白信号通路调控结直肠癌的抗西妥昔单抗效果 结直肠癌（colorectal cancer ,CRC）无论是在发病率还是在死亡率中都是最高的三类癌症之一[1]，早期结直肠患者没有症状，所以需要通过肠镜和基因筛查的方法去诊断。西妥昔单抗（cetuximab）和帕尼单抗是表皮生长因子受体（EGFR）单克隆抗体，能够结合细胞外EGFR区域增强受体的内吞和降解，一般可与化疗药物联用**CRC。患者对cetuximab**的耐药和KRAS、NRAS、BRAF、EGFR的基因突变可能有关，文章通过研究lncRNA MIR100HG和其包含的2个miRNA，miR-100和miR-125b,对CRC和头部颈部鳞状细胞癌（HNSCC）细胞系对cetuximab耐药机制的研究，发现miR-100和miR-125b都能下调5个负调控Wnt-β-catenin信号的分子，来促进Wnt信号通路，从而促进癌细胞的耐cetuximab性能。同时发现MIR100HG的表达能促进miR-125b的表达，miR-125b的表达能抑制GATA6的表达，而GATA6的表达又能抑制HIR100HG的表达，而MIR100HG的高表达与CRC病人的耐cetuxima过程有关。该研究为**和诊断结直肠癌的耐cetuxima提供一定的参考意义。 补充：约有17.5%的miRNA来源于lncRNA,定义为lnc-pri-miRNA，对这种miRNA的转录形成机制感兴趣的童鞋可以看这篇文献(Microprocessor mediates transcriptional termination in genes encoding long noncoding microRNAs) 这篇文章的主要研究结果如下 1. 建立了抗cetuximab的肿瘤细胞 1）作者团队选用KRAS/NRAS/BRAF基因未突变的微卫星不稳定的结直肠癌细胞，HCA-7，同时采用3维细胞培养技术来建立抗cetuximab（CTX）的结直肠癌细胞团（CC-CR）。一个简单抗CTX细胞系的构建就需要4个月，经历不少于20次2维细胞培养和3维加药细胞培养的循环，科研果然是寂寞的重复！ 2）成功构建CC-CR后作者又通过一系类的验
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减肥药物研发靶点，推动化合物转化为成品药
作者：德尔塔 日期：2022-04-18
如果说有什么话题能够引起充满个性而又多样化的现代人的共鸣，那想必就是“减肥”了。对体重的严格把关已经成为现代积极健康的生活方式中不可缺少的一个环节。肥胖会影响美观，给正常的运动和生活造成负担，从身体健康的角度来说，过重的体重会增加体内脏器工作的负担，带来一系列的并发症，例如高血压、糖尿病、血脂异常等。在不久前的研究中亦指出，肥胖还容易增大罹患恶性肿瘤的概率；而心理健康方面，对体型的保持体现了积极向上的生活态度，自律的生活习惯并且能增强自信。 围绕“减肥”二字的市场，近年来也被无限开发，从减肥药保健品到健身节食，人们为了减肥不吝消费，寄希望于各种可能的途径，比如服用药物这类省时省力简单高效的快捷方法。然而从一个靶点的发现到一个成熟药物的生产上市，道路其实是漫长艰辛而又充满挑战的。尽管根据此发现而衍生的理论和预估前景都是流畅而乐观的，但在药物发现，药学研究，临床前和临床研究以及申报审批这些一层一层的复杂流程中，将是无数的难题与风险。一面是所有人类将会翘首企盼的“神仙”减肥药，一面是重重困难和风险，上海美迪西生物医药股份有限公司愿意在这条道路上帮助我们的客户，向成功迈进。 史上最强减肥药即将出现？ 当人们开始慢慢放弃“从容减肥”的神话的时候，就在前几天，权威生物科学杂志Cell发布了一篇文章，从神经学的角度去研究神经元与能量消耗之间的关系，发现令人惊喜。 我们已知哺乳动物的身体会对自身的体温有精准的调控，这种调控通过自发或被动的行为还有体液调节来控制能量的储存或释放。而体重的增减以及脂肪的消耗与堆积也是一种能量储存释放的方式，也就是说如果能够找到能量调控的机制或者特定通路当中的靶点，或许我们就可以找到破解现代人们永恒烦恼的方法了。 实验的过程大致分为以下几个阶段： 首先，通过运用iDISCO+方法对小鼠的大脑进行荧光染色全脑成像，发现在温度升高时大脑的一个区域DRN（中缝背核）在室内温度升高到38℃时
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Western Blot蛋白质磷酸化操作小贴士
作者：德尔塔 日期：2022-04-18
WB 是检测和定量磷酸化蛋白质的重要实验方法，然而大家一直都说磷酸化蛋白 WB 不好做！WB 磷酸化蛋白曝不出条带的时候，会特别沮丧。 Azure君在此给大家列出几点小建议，希望能帮助您改善一下实验结果。 1、样本是否表达： 查阅资料或通过预实验确定。 2、对照设置： 阳性和阴性对照。 总蛋白抗体对照，对于特定时间的特定样品，磷酸化和非磷酸化蛋白质的总和代表该特定蛋白质的总量。在相同的 WB 检测中， 磷酸化蛋白质的量增加通常伴随着非磷酸化蛋白质的降低。 3、内参设置： 根据实验选择合适的内参，如Actin、GAPDH 等 4、适当的提取方法： 蛋白质提取的方法不仅影响提取效率，还会影响蛋白的质量。建议采用裂解液裂解和超声破碎组合的方式，可确保整个样本充分裂解。 5、低温操作： 室温条件下，磷酸化蛋白很容易被蛋白磷酸酶降解。请勿反复冻融，操作时一定置于冰上。 6、加入抑制剂： 组织或细胞裂解时会释放出大量内源性蛋白磷酸酶，它会导致磷酸化蛋白的去磷酸化，因此，必须在裂解液中加入蛋白酶抑制剂和蛋白磷酸酶抑制剂。 7、最重要的一点： 检测时选择近红外荧光标记抗体，一次可检测多个蛋白，无需多次曝片，方便检测。一般磷酸化和总蛋白的条带位置十分接近，传统方式不易区分。 不同于其他产品，Azure C系列产品检测近红外时，采用的是激光光源。由于近红外荧光染料激发波长和发射波长非常靠近
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高产揭秘——中国科学家解析水稻分蘖角度调控机制的新进展
作者：德尔塔 日期：2022-04-18
2019年6月12日，中国科学院遗传与发育生物学研究所王永红研究组与李家洋研究组合作在 Molecular Plant 杂志上在线发表了题为OsBRXL4 Regulates Shoot Gravitropism and Rice Tiller Angle through Affecting LAZY1 Nuclear Localization的研究论文，揭示了水稻分蘖角度的调控新机制。 分蘖角度是禾本科植物的分蘖与主茎之间的夹角，与作物群体产量密切相关。解析水稻分蘖角度调控的分子机制对于改良水稻株型进而提高产量具有重要的理论意义和应用价值。 图1：OsBRXL4通过LA1调控水稻分蘖角度的工作模型 长期以来，研究人员主要通过遗传学手段发掘了调控水稻分蘖角度的主效QTL和调控基因。然而，分蘖角度是一个复杂的农艺性状，受到多种因素的共同调控，面对一些更具应用潜力的微效基因，单纯依靠传统的遗传学方法进行克隆非常困难。因此，寻求挖掘水稻分蘖角度调控基因的新方法成为了该领域亟待解决的重要问题。目前，已经克隆了多个调控水稻分蘖角度形成的关键基因，但对这些基因的调控机制及它们之间的遗传关系仍然缺乏系统深入的研究。 该研究通过酵母双杂交方法筛选鉴定到了LA1的互作蛋白Brevis Radix Like 4（OsBRXL4），OsBRXL4是植物特有的BRX家族成员。研究表明，水稻LA1的核定位对其功能发挥是必需的，与已经报道的拟南芥LA1的作用机制不同。OsBRXL4通过与LA1互作影响LA1的核定位，从而影响水稻的重力反应及分蘖角度。进一步研究结果显示，过量表达OsBRXL4可以减少LA1在细胞中的定位，导致水稻植株分蘖角度加大，呈现半散生的表型。该研究不仅鉴定到了调控分蘖角度的新组分，而且深入阐明了LA1与 OsBRXL4调控分蘖角度形成的新机制。 图2：通过放射性³H-IAA来研究不同水稻株型的IAA20表达水平 在该研究论文中，作者通过放射性³H-IAA研究水稻生长素的极性运输能力，利用珀金埃尔默的液闪仪MicroBeta进行定量。 关于珀金埃尔默： 珀金埃尔默致力于为创建更健康的世界而持续创新。我们为诊断、生
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浅析家兔在检查药品热原上的作用
作者：德尔塔 日期：2022-04-18
热原是能够导致机体发热的一类物质，可通过刺激哺乳动物体内产生诸如IL-1β、IL-6、TNF 等细胞因子的内源性致热原，引起人体发生发热、呕吐、休克甚至死亡。对一些药品如注射剂的热原检查，是保证输注药品安全的重要检验项目之一。在临床前毒性试验的特殊毒性试验研究中，热原检查法是检验药品及生物制品中热原的经典有效方法。由于家兔的体温变化非常敏感，它们对许多病毒和致病菌非常敏感，具有能客观反映各类药品中热原在生物体内引起发热情况的特点。通过家兔的预先感染，可以进行许多抗传染药物的研究，因此可以作为热原试验的实验动物模型，常作为研究发热、解热药和检查致热原。 热原检测是严格控制各种非肠道用药制品质量与安全性的重要技术手段。热原检查法是将一定剂量的供试品静脉注入家兔体内，在规定的时间内，观察家兔体温升高的情况，以判定供试品中所含热原的限度是否符合规定的要求。家兔是临床前动物实验采用的动物模型之一，它性情温顺、容易饲养、繁殖率高、价格低廉，且容易找到条件类似的对照兔组，因此在许多实验研究中可以替代狗进行各种实验和复制多种病理生理模型。 家兔热原检查法是世界许多国家检查热原的法定方法，也是我国生物制品热原检查的常规手段。我国比较常用的实验家兔品种有日本大耳白兔、新西兰白兔、青紫蓝兔和中国白兔四个品种。美迪西可以根据客户的需求提供各种有效的动物模型，用来检测药物的有效性。实验动物有非人类灵长动物、狗、小鼠、大鼠、家兔、豚鼠等各种种类。目前，其已经建立多个有效动物模型，并经过多方验证和长期实践考验。 日本大耳白兔，原产日本，用中国兔与日本兔杂交培育而成。新西兰白兔 原产美国，该兔于20世纪初在美国育成，也是美国用于实验研究较多的品种，已培育成近交品系。该品种性情温和，易于管理，广泛用于皮肤反应试验、热源实验等方面。青紫蓝兔原产于法国，因毛色与南美的青紫蓝绒鼠相像而得名。我国引入此兔年代较早，在国内分布较广
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涡度观测系统的操作及作用原理
作者：德尔塔 日期：2022-04-18
涡度相关系统采用涡动协方差原理，是一种微气象学的测量方法，利用快速响应的传感器来测量大气—下垫面间的物质交换和能量交换。是一种直接测算通量的标准方法,是测定生态系统物质、能量交换通量的关键技术。 涡度观测系统可以测量能量通量（显热通量、潜热通量、动量通量）和物质通量（CO2 / H2O / CH4 / N2O）以及一些空气动力学参数等,主要应用于边界层理论研究、大气扩散、能量收支研究、水分等物质收支等众多领域。 通量观测适用于森林、草地、农田、沙漠、城市、水域等各种下垫面环境，被广泛应用于中科院、林科院、气象局、海洋局及各科研领域对区域碳、水循环过程的研究；做为测算生态系统与大气间物质和能量交换信息的有效手段，为分析地圈-生物圈-大气圈的相互作用提供重要的数据基础，为大尺度、长期和连续的科学研究提供支撑。 Campbell的IRGASON集成开路红外CO2/H2O分析仪与三维超声风速仪为一体，专为测定涡度相关通量而设计，专利设计较单独的传感器更易安装，提高测量精度。IRGASON同步测量CO2/H2O，空气温度，大气压力，三维风速和超声空气温度。 点将科技作为专业的科学仪器服务商，一直坚持帮助科研工作者实现仪器利用最大化，坚持“心系点滴，致力将来”的核心价值观，致力于为国内外用户提供高品质的科研仪器和优质、全面的技术服务，欢迎前来咨询。
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