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细胞凋亡的机制有哪些？
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
细胞凋亡是指人体自身为维持内环境稳定，由基因控制的细胞自主、有序的死亡，它与细胞坏死不同，细胞凋亡不是一件被动的过程，而是主动过程，是为更好地适应生存环境而主动争取的一种死亡过程。 细胞凋亡的机制有哪些？ （一）氧化损伤：氧自由基的损伤。各种氧化剂（H2O2等）可直接诱导凋亡，抑制SOD的活性也可导致凋亡。 机制：1、氧自由基激活P53基因；2、活化多聚ADP核糖转移酶；3、攻击细胞膜上的不饱和脂肪酸，直接造成细胞膜的损伤；4、激活Ca2+/Mg2+依赖的核酸内切酶；5、引起细胞膜结构破坏，使Ca2+通透性增加；6、活化核转录因子NF-κB，AP-1等，加速细胞凋亡相关基因的表达。 （二）钙稳态失衡 机制：1、激活Ca2+/Mg2+依赖的核酸内切酶；2、激活谷氨酰胺转移酶，利于凋亡小体形成；3、激活核转录因子；4、Ca2+在ATP配合下暴露核小体之间的酶切位点，有助于DNA内切酶切割DNA. （三）线粒体损伤： 机制：线粒体内、外膜之间的通透性转换孔（PTP）在凋亡诱导因素作用下由正常情况下的关闭状态转为开放，使细胞凋亡的启动因子从线粒体逸出。
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细胞培养常见问题及其解决办法
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
细胞培养常见问题及其解决办法 1. 如何选用特殊细胞系培养基？ 培养某一类型细胞没有固定的培养条件。在MEM中培养的细胞，很可能在DMEM或M199中同样很容易生长。总之，MEM做粘附细胞培养、RPMI-1640做悬浮细胞培养是一个好的开始。 2. 何时须更换培养基？ 视细胞生长密度而定， 或遵照细胞株基本数据上之更换时间，按时更换培养基即可。 3. 可否使用与原先培养条件不同之培养基？ 不能。每一细胞株均有其特定使用且已适应之细胞培养基，若骤然使用和原先提供之培养条件不同之培养基， 细胞大都无法立即适应， 造成细胞无法存活。 4 可否使用与原先培养条件不同之血清种类？ 不能。血清是细胞培养上一个极为重要的营养来源，所以血清的种类和品质对于细胞的生长会产生极大的影响。来自不同物种的血清，在一些物质或分子的量或内容物上都有所不同，血清使用错误常会造成细胞无法存活。 5 何谓FBS, FCS, CS, HS ? FBS (fetal bovine serum) 和FCS (fetal calf serum) 是相同的意思， 两者都是指胎牛血清， FCS 乃错误的使用字眼， 请不要再使用。CS (calf serum) 则是指小牛血清。HS (horseserum) 则是指马血清。 6 培养细胞时应使用5 % 或10% CO2？或根本没有影响？ 一般培养基中大都使用HCO3-/CO32-/H+ 作为pH 的缓冲系统，而培养基中NaHCO3 的含量将决定细胞培养时应使用的CO2 浓度。当培养基中NaHCO3 含量为每公升3.7 g 时，细胞培养时应使用10 % CO2；当培养基中NaHCO3 为每公升1.5 g 时， 则应使用5 % CO2 培养细胞。 7.Hank's 蛋白酶(HBS)要在空气中使用，不需要CO2培养箱。原因是什么？Hank's 蛋白酶(HBS)和Earle's蛋白酶(EBS)有什么本质的功能差别？ HBS和 EBS 的主要差别在于氢钠的水平,在Eagles (2.2g/L)中比在Hanks (0.35g/L) 中高。氢钠需用高水平的CO2平衡，以维持溶液的PH值。Eagles液在空气水平的CO2 中，溶液会变碱，Hanks液在CO2培养箱中会变酸。如果希望在CO2培养箱中保存组织，需要用Eagl
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配对抗体的制备与筛选
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
配对抗体指的是可以同时结合在一个抗原分子上的两个抗体。配对抗体，一般应用于双抗夹心法 ELISA 实验。 抗体配对的原理 通常情况下，一个抗原分子拥有多个抗原决定簇，将抗原注射入动物体内进行免疫，针对不同的抗原决定簇会产生不同的抗体。产生的抗体具有特异性与专一性，即一个抗体分子只会特异性地结合一个抗原决定簇。两个针对不同抗原决定簇的抗体，有可能同时结合到抗原分子上。如果两个抗体同时结合到同一个抗原分子上，那么这两个抗体就是配对抗体。 配对抗体的制备与筛选 需要注意的是，即使两个抗体针对的是不同的抗原决定簇，也并不意味着这两个抗体分子一定可以同时与抗原分子结合。当一个抗体与抗原结合后，有可能会导致其他结合位点（抗原决定簇）构型的改变，从而导致其他的抗体无法正常结合到抗原上。位阻效应的存在，也可能使两个结合位点距离较近的抗体无法同时结合在抗原上。因此想要得到可以同时结合在抗原分子上的配对抗体，在制备出抗体后，还需要对得到的抗体进行筛选。这就意味着，要制备配对抗体，要完成以下两步工作：抗体的制备；配对抗体的筛选。 抗体制备 为了便于后续的筛选，制备的抗体应为单克隆抗体，通常利用杂交瘤技术进行单克隆抗体的制备。 注意：如果单克隆抗体很少，很可能会找不到可以配对的抗体，因此，在免疫动物的时候，应多免疫几只动物，以获得更多的单克隆抗体。 配对抗体的筛选 通常，配对抗体筛选的方法是双抗夹心 ELISA 法。筛选的原理为：在得到了单克隆抗体后，从中取出两种单克隆抗体，一种作为捕获抗体，另一种作为标记抗体（HRP 酶标记），将捕获抗体包被在抗原板上，先加入抗原，孵育后洗去未结合的抗原，再加入标记抗体 孵育后洗去未结合的标记抗体，最后加入显色液显色。如果可以显色，说明标记抗体与抗原特异性结合，该捕获抗体与标记抗体为一对配对抗体。如果不能显色，说明标记抗体不能与抗原结合，从而被洗脱，该捕获抗体与标记抗体不是配对抗
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27个细胞传代培养常见问题汇总
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
1、一般拿到细胞后，应该注意什么? 收到细胞先不开盖,用酒精将整个细胞瓶外壁进行消毒，放在培养箱静置若干小时后(看细胞密度而定)在倒置显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照(建议收细胞时的培养基拍一张照片，观察培养基的颜色和是否有漏液情况，显微镜下拍细胞100X，200X各两张)，排除细胞本身污染的情况。 2、何时须更换培养基? 视细胞生长密度而定，常规细胞2-3天更换培养基。 3、细胞何时进行传代较好? 一般情况下细胞生长至完全汇合后就应该传代，所有细胞生长都有一个要求不宜生长过密(也就是常说的长老了)，但有接触抑制的细胞，在汇合前就必须进行传代，这类细胞一般在密度70-80%就进行传代，否则会引起细胞分化。 4、贴壁细胞如何进行传代? 去掉原T25培养瓶里面的培养基，T25瓶加3-4 ml PBS洗1-2次;弃PBS，再加1.5 ml的Trypsin-EDTA (1X)消化液消化细胞，显微镜下观察，待细胞变圆，细胞间隙明显，部分细胞刚开始脱离瓶壁，加4 ml左右完全培养液混匀终止消化，将细胞小心吹打下来，1000 rpm/min室温离心5min;弃上清，细胞沉淀用完全培养液重悬，按要求分瓶(视细胞密度而定1:2-1:3，1:3-1:6，1:6-1:8)，每T25瓶补足培养基至5-6 ml，37℃、5%CO2孵箱培养。 5、悬浮性细胞应如何传代处理? 一般仅需持续加入新鲜培养基于原培养角瓶中，稀释细胞浓度即可，若培养液太多时，将细胞悬液移入离心管中，1000 rpm/min 室温离心5 min。弃上清，细胞沉淀用完全培养液重悬，按要求分瓶(视细胞密度而定1:4-1:8)，每T25瓶加完全培养液至4-5 ml，37℃、5%CO2孵箱培养。有些悬浮细胞趋于成团生长，此时细胞生长状态良好，当补液时，需避免反复吹打。 6、贴壁细胞传代如何使用胰酶? 一般使用trypsin-EDTA浓度为0.25% trypsin-0.53 mM EDTA.2Na或0.05%trypsin-0.02 mM EDTA.2Na。消化液浓度过高时，易造成培养基中细胞碎片增多，黑渣子增多，常规细胞传代时建议用0.05%的胰酶进
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细胞爬片的特点和注意事项
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
爬片又名细胞爬片，是指让玻片浸在细胞培养基内，细胞在玻片上生长，主要用于组织学，免疫组织化学，病冻切片，细胞涂片，原位杂交等。 细胞爬片特点 1.玻片表面经过TC处理，双面均可使用. 2.γ射线灭菌,保证无菌. 3.使用便捷,只需打开包装,将爬片放入孔板内,将细胞悬液滴到爬片上即可培养. 4.爬片厚度为0.17mm,直径为8mm/14mm/20mm/25mm.分别适用于48孔细胞培养板/24孔细胞培养板/12孔细胞培养板/6孔细胞培养板 5.强吸附：该玻片表面具有yong久的阳离子电荷,可以通过静电作用吸附冰冻切片组织或细胞,使之粘附在玻片上,进而在玻璃和切片组织之间形成共价键.因此，无需粘黏剂或者蛋白包被，该玻片也能牢固的粘附切片或细胞。 操作注意事项 使用细胞爬片时(比如在六孔板中放入爬片,六孔板的孔底面积往往会比爬片面积多出一部分,加细胞悬液时常常就是细胞铺满整个孔底,有时细胞生长边集现象,就是靠近壁边缘密度要高些,这样处于中央玻片上爬的细胞数量就可能相对较少。比较好的做法是将玻片放入孔板的孔内后,加细胞悬液时只滴到玻片上,一直滴到液体布满整个玻片又不会溢出玻片边缘(因为液体表面张力作用可以很容易做到这一点。),放在培养箱里,等细胞贴壁后,取出,再滴加培养基布满整个孔底,继续培养,这样玻片上的细胞生长的密度就会很集中. 细胞爬片怎么保存 细胞爬片有三层包装,在超净台无菌的状态下打开包装.未用完的爬片按原先包装方式再包装起来即可. 友情提示 该爬片表面带有正电荷,请勿用手触摸,以免使用效果不佳. 玻片经过γ射线灭菌后,透明玻片颜色会略变为淡茶色,属正常现象.
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TAE与TBE有何区别，怎么选择？
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
相关原理： 缓冲液在电泳过程中的一个作用是维持合适的pH。电泳时正极与负极都会发生电解反应，正极发生的是氧化反应（4OH--4e->2H2O+O2)，负极发生的是还原反应（4H++4e->2H2)，长时间的电泳将使正极变酸，负极变碱。一个好的缓冲系统应有较强的缓冲能力，是溶液两极的pH保持基本不变。 电泳缓冲液的另一个作用是使溶液具有一定的导电性，以利于DNA分子的迁移，例如，一般电泳缓冲液中应含有0.01-0.04mol/L的Na+离子，Na+离子的浓度太低时电泳速度变慢；太高时就会造成过大的电流使胶发热甚至熔化。 电泳缓冲液还有一个组分是EDTA，加入浓度为1-2mmol/L，目的是螯合Mg2+ 等离子，防止电泳时激活 DNA酶，此外还可防止Mg2+离子与核酸生成沉淀。 TAE&TBE TAE是使用广泛的缓冲系统。其特点是超螺旋在其中电泳时更符合实际相对分子质量（TBE中电泳时测出的相对分子质量会大于实际分子质量），且双链线状DNA在其中的迁移率较其他两种缓冲液快约10%，电泳大于13kb的片段时用TAE缓冲液将取得更好的分离效果，此外，回收核酸片段时也易用TAE缓冲系统进行电泳。TAE的缺点是缓冲容量小，长时间电泳（如过夜）不可选用，除非有循环装置使两极的缓冲液得到交换。 TBE的特点是缓冲能力强，长时间电泳时可选用TBE，并且当用于电泳小于1kb的片段时分离效果更好。TBE用于琼脂糖凝胶时易造成高电渗作用，并且因与琼脂糖相互作用生成非共价结合的四羟基硼酸盐复合物而使核酸片段的回收率降低，所以不宜在回收电泳中使用。 怎么选择： 对于分辨率要求不高时，使用TAE和TBE均可；对于分辨率要求比较高时，较低浓度的胶有利于提高大分子量核酸的分辨率，此时宜使用TAE；而较高浓度的胶有利于提高小分子量核酸的分辨率，此时宜使用TBE。
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沙丁胺醇检测卡检测原理及使用步骤
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
沙丁胺醇检测卡用于快速检测猪尿、组织样(畜禽肉)、饲料中的沙丁胺醇残留，灵敏度为5μg/kg，沙丁胺醇快速检测卡检测过程只需要5分钟，适用于各类企业及检测机构。 检测原理: 沙丁胺醇检测卡应用竞争抑制免疫层析的原理，样本中的沙丁胺醇在侧向移动的过程中与胶体金标记的特异性单克隆抗体结合，抑制了抗体和NC膜检测线上沙丁胺醇-BSA偶联物的结合。如果样本中沙丁胺醇含量大于5μg/kg，检测线不显颜色，结果为阳性；反之，检测线显红色，结果为阴性。 沙丁胺醇检测卡使用步骤: (1)测试前请完整阅读使用说明书，并将未开封的检测卡和待检样本溶液回复至常温； (2)从包装袋中取出检测卡后请尽快使用； (3)将检测卡平放，用滴管吸取待检样品溶液，滴加3滴(约75µL)于加样孔中，加样后开始计时； (4)结果应在5-8分钟读取，其他时间判读无效； (5)读取结果时，检测卡水平置于观察者正面，如右图所示。
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基因甲基化的相关说明
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
DNA甲基化是指甲基供体（S-腺苷甲硫氨酸，SAM）在DNA甲基转移酶（DNMT）的作用下，将甲基添加到DNA分子的碱基上，以胞嘧啶-鸟嘌呤二核苷酸（CpG）中的胞嘧啶5位碳原子和甲基间的共价结合尤为常见，CpG中胞嘧啶由此被修饰为5甲基胞嘧啶（5mC）。DNA甲基化修饰后在离体状态表现出更强的惰性，如亚硫酸氢钠可使非甲基化的胞嘧啶转变为尿嘧啶，而不能改变甲基化的CpG中的胞嘧啶；在活体状态表现为基因表达活性的降低。因此，高甲基化状态意味着基因表达的失活/抑制/沉默，而低甲基化状态意味着基因表达的激活/活化。肿瘤细胞的DNA甲基化状态在全基因组水平上呈现广泛的低甲基化特征，导致原癌基因的活化，基因组不稳定性增加；但在抑癌基因、修复基因等启动子区的甲基化状态是升高的，即高甲基化，从而导致了相应抑癌基因等的表达受到抑制。且发现肿瘤细胞的高甲基化基因多发生于启动子区的CpG岛，而正常细胞启动子区的CpG岛多处于非甲基化状态。 在包括肺癌在内的绝大多数肿瘤以及诸如阿尔兹海默病、心衰等非肿瘤性疾病的患者的基因组水平均发现了DNA甲基化的异常。由于人类基因组包含近四万个基因，大量研究发现许多疾病均可能存在特异性的甲基化谱，甚至在疾病的不同阶段甲基化谱也不尽相同；此外，据研究肿瘤细胞发生CpG岛高甲基化的频率远高于基因突变。因此，通过对患者样本进行特定一组基因或全基因组的甲基化水平检测，理论上可以诊断疾病、辅助进行分级分期的判断甚至筛选敏感化疗药物。 基因甲基化异常是肿瘤发生尤为常见的表观遗传变化之一，肿瘤的发生表现为基因组整体甲基化水平降低（癌基因）和CpG岛局部甲基化水平的异常升高（抑癌基因）。 人SHOX2、RASSF1A基因甲基化检测试剂盒可以检测人SHOX2基因和RASSF1A基因甲基化，辅助临床肺癌的早期诊断，提高肺癌患者生存率。
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收到细胞后如何操作？
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
1.首先，观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象。若有，请及时与Procell技术支持联系。2.用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分贴壁细胞会有少量从瓶壁脱落，将细胞置于细胞培养箱内静置培养，隔天再取出进行观察。3.仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等。4.可将培养瓶内多余的培养基转移至50ml无菌离心管中，备用；细胞传代时，可以将该培养基按照一定比例和客户自备的培养基混合使用，让细胞逐渐适应培养条件。5.确认细胞状态良好后，应及时将细胞冻存，再进行后续的实验，避免后期实验失误可能发生细胞污染或死亡而导致的细胞丢失。6.建议客户收到细胞后前3天，100X、200X、400X各拍3-5张细胞照片，记录细胞状态，便于和Procell技术支持沟通交流。
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热门CTLA4&PD1/L1双靶点抗体活性检测细胞模型
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
T细胞在癌症、感染和自身免疫性疾病相关的不同类型的免疫反应中都发挥着至关重要的作用。T细胞与抗原呈递细胞的特异性相互作用往往决定了T细胞的命运并调节其抗肿瘤反应。基础及临床研究发现了许多调节T细胞功能的免疫调节分子，其中，表达在T细胞上的免疫检查点分子通过激活信号（共刺激分子）或抑制信号（共抑制分子）调节T细胞功能，在免疫系统中起着核心作用。目前，靶向T细胞功能的免疫检查点抗体疗法已经获得了激动人心的疗效，取得了很大的成功，其中包括针对程序性细胞死亡蛋白1（PD-1）及其配体PD-L1的Pembrolizumab， Durvalumab以及抗细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4（CTLA–4）的Ipilimumab等单抗药物已广泛运用于黑色素瘤、转移性尿路上皮癌、膀胱癌，肺癌等各种肿瘤患者。 靶点简介 在迄今发现的免疫检查点分子中，CTLA-4抑制T细胞的作用机制是为人们最深入了解的机制之一。CTLA-4，又称CD152，是一种跨膜糖蛋白，可与CD28竞争性地结合抗原呈递细胞上的CD80（B7-1）和CD86（B7-2）蛋白，当与配体结合时，可作为T细胞激活的“关闭”开关，针对CTLA4的单抗Ipilimumab是一个被成功用于黑色素瘤患者的免疫检查点药物。 PD-1（也称为CD279），是一种T细胞表面受体，通过与配体其PD-L1和PD-L2的相互作用对抑制T细胞活性起着重要作用。与CTLA-4信号类似，PD-1结合其配体抑制T细胞增殖，细胞因子如干扰素-γ（IFN-γ）、肿瘤坏死因子和白细胞介素2（IL-2）的产生，并减少T细胞的存活，但与CTLA-4不同的是，它主要调节组织和肿瘤内的效应T细胞活性，而不影响淋巴器官中的T细胞活化。 药物研发现状 尽管通过抗体药物对免疫检查点信号阻断在癌症**中取得了显著的成功，但目前，大多数患者仍不能从单一靶点的阻断中获益。例如，虽然临床上针对PD-1和CTLA-4通路的抗体药物，已被用于多种癌症适应症，但大多数患者单一使用PD-1或CTLA-4阻断剂并无效果。因此，针对一种以上的免疫检查点抗原的抗体组合疗法被认为是一种
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如何摆脱qpcr苦恼，得到更好的结果
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
什么是荧光定量PCR？ 指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个 PCR进程，使每一个循环变得“可见”，最后通过Ct值和标准曲线对样品中的DNA(or cDNA)的起始浓度进行定量的方法。 定量PCR原理？ 与传统PCR一样,反应在温度模块里循环进行；理论上每经过一个循环目的基因的数量都会增加一倍；每个循环结束后,定量PCR仪器通过不同的滤光片记录荧光信号；在扩增过程中,荧光信号随着PCR产物的增加而增强。 定量PCR体系？ 普通的PCR体系；模板,引物,dNTPs，buffer，Taq酶；加入各种类型的荧光染料。 在做Real time PCR时，对于SYBR Green I染料法和Taqman探针法都可以，但是二者有区别。SYBR Green I染料法是利用SYBR Green I结合双链DNA来检测PCR产物，可用于监测任意双链DNA序列的扩增，但是必须考虑非特异性扩增。因成本相对低，是目前较常用的)。但是由于SYBRGreen I可以与所有的双链DNA结合，包括非特异性的双链DNA序列，因此可能会产生假阳性信号。 图1：SYBR染料法原理图 Taqman探针法使用荧光探针检测PCR扩增过程中产生的特异PCR产物：特异性荧光信号的产生，需要探针与目标序列进行特异性的杂交；探针可以标记不同的报告基团，因此可以在一个反应管中进行二条序列扩增完整的探针。5′端荧光基团吸收能量后将能量转移给临近的3′端荧光淬灭基团(发生荧光共振能量转移)；退火，探针与模板结合，引物在聚合酶作用下进行延伸反应，遇到探针时发挥3′-5′外切酶活性将探针切碎到反应体系中；报告基团与淬灭基团距离变大，在激发光的作用下发荧光。实验结果重复性好，价格高。 图2：TaqMan探针法原理图 说了这么多，不知道小伙伴们对qPCR的理解是不是清晰多了呢?qPCR作为一种简单便捷的定量技术，应该是小伙伴们常用的技术了。虽然听起来简单但做起来却没有想象的那么简单，事实上，实验室做一个样本检测QPCR需要1~2个小时，这个时候不仅试剂盒重要，检测能力也很重要，希望这篇文章能
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为什么你的细胞生长缓慢？
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
细胞生长缓慢的常见原因: (1)培养基可能缺乏细胞生长所需的某种因子。 通常情况下，当小伙伴购买细胞，并没有按照ATCC或国内细胞库推荐的方法制备培养基，使用实验室兄弟姐妹使用的培养基来培养细胞。解决方法一般是按照推荐的方法制备培养基，或直接购买培养细胞的培养基。(B)细菌、支原体、真菌等污染:虽然培养基中通常添加双抗体(青霉素和链霉素)，但如果无菌操作观念不强，仍有可能造成污染。处理方法:如果有冷冻细胞，可以丢弃污染细胞。当然，丢弃并不是随意的，扔进垃圾桶。应按照实验室生物安全规定进行。然后复苏培养物，建议培养箱完全消毒。 如果不冷冻，而且这种细胞非常珍贵，常用的**方法是药物**:细菌污染加5-10倍的抗生素;真菌污染加抗真菌药物;支原体污染再加上抗支原体药物，具体药物可以咨询技术支持，他们会更加专业。 (C)许多细胞的生长依赖于密度。如果传代后细胞密度过小，也会影响细胞生长。这段时间没有什么特别好的，就是更换液体。如果细胞培养瓶为T75，则可以消化、离心、复苏，然后接种到T25瓶中。 (4)冷冻细胞中添加DMSO(二甲基亚砜)的量不正确，没有逐渐梯度冷却。下一次恢复后的细胞总是坏的。处理方法:按推荐的冷冻保存方法制备冷冻液。部分细胞适合10% DMSO，部分细胞适合5% DMSO;严格遵循渐变冷却的原则，细胞恢复后迅速解冻。 (5)换液间隔时间太长。一些小伙伴真的把细胞“佛”系生长。当他们想到它的时候，才会换下液体，相信一个句子。“你已经是一个成熟的细胞了。你应该学会养活自己，成长”。在这种情况下，细胞培养瓶中积累了大量的细胞代谢废物，影响细胞活性。推荐:勤奋点 (6)细胞的“消化”时间不宜过长，减少对细胞的损伤;此外，EDTA一般添加到胰腺酶中，螯合钙离子，影响细胞粘附。**方法:控制细胞“消化”时间，尽量去除干净的胰蛋白酶和EDTA。 PH值:细胞需要在一定的PH值下生长，这个小朋友知道。但是很多时候PH值是我们忽略的东西，这也
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大孔树脂与凝胶型树脂的区别介绍
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
大孔树脂介绍： 大孔树脂是一类有大孔结构的高分子吸附树脂，具有良好的大孔网状结构和较大的比表面积，是20世纪60年代发展起来的新型有机高聚物吸附剂，目前已在环保、食品、医药等领域得到了广泛应用。 凝胶型树脂介绍： 由纯单体混合物经缩合或聚合而成的，外观呈透明状的均相凝胶结构的离子交换树脂统称为凝胶型树脂。该类树脂一般采用悬浮共缩聚或共聚合工艺合成球状基体，再经化学反应活化处理，导入离子交换基团而制成。 大孔树脂与凝胶型树脂的区别： 大孔树脂骨架部分的性质与凝胶树脂基本相同，但大孔树脂具有长久且孔径较大的物理孔结构。这一特性使大孔树脂在耐污染、机械强度、抗氧化性等使用性能方面比凝胶树脂更具优势，但大孔树脂的交换容量一般会相对较低，且制造成本相对较高。 主要区别为孔隙度不同 1、凝胶型树脂的孔隙度很小，一般都在3nm以下。严格来讲，这些孔隙并不是真正的孔，而是交联与水合多聚物凝胶结构之间的距离，它随运行条件的变化而改变，在干燥状态下的凝胶型树脂中，这种“孔”实际上是不存在的； 2、大孔型树脂则不同，它的“孔”大于原子距离，而且不是凝胶结构的一部分，可称得上是真正的孔，其大小及形状不受环境条件影响而改变，因而在水溶液中不显示溶胀。
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血清的这些常识你知道吗？
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
牛血清是细胞培养中用量大的天然培养基，含有丰富的细胞生长必须的营养成份，常用于动物细胞的体外培养，具有极为重要的功能。 一、血清的成分 血清是由血浆去除纤维蛋白而形成的一种很复杂的混合物，其组成成份虽大部分已知，但还有一部分尚不清楚，且血清组成及含量常随供血动物的性别、年龄、生理条件和营养条件不同而异。血清中含有各种血浆蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生长因子、激素、无机物等，这些物质对促进细胞生长或抑制生长活性是达到生理平衡的。 二、血清的功能 1.提供对维持细胞指数生长的激素，基础培养基中没有或量很少的营养物，以及主要的低分子营养物。 2. 提供结合蛋白，能识别维生素、脂类、金属和其他激素等，能结合或调变它们所结合的物质活力。 3.有些情况下结合蛋白质能与有毒金属和热原质结合，起到解毒作用。 4.是细胞贴壁、铺展在塑料培养基质上所需因子来源。 5.起酸碱度缓冲液作用。 6.提供蛋白酶抑制剂，使在细胞传代时使剩余胰蛋白酶失活，保护细胞不受伤害。 三、不同血清之间的差异 市场上各种血清产品角龙混珠，一不小心,你可能就使用了品质不好的血清。血清按照采血时间可分为胎牛血清，新生牛血清和小牛血清，三者的优劣顺序为:胎牛,血清>新生牛血清>小牛血清。 一般细胞建议使用胎牛血清培养，部分细胞可使用新生牛血清培养，小牛血清则不建议用于细胞培养。 四、血清选购的注意事项 1.产品关键指标 (1)低内毒素 内毒素是所有细胞培养的大敌,对细胞培养的影响性早在将近三十年前就被广泛讨论和重视.。内毒素会改变细胞外形，影响下游生物途径反应，抑制酵素活性等，低内毒素对细胞培养作用重大。 (2)血红蛋白 根据血红蛋白含量的不同表现出黄色、淡黄色、橘红色、微红色等。细胞培养用血清的标准是血红蛋白含量不高于20mgldL，颜色越红，数值越高;反之，数值越低。品质好的一般呈琥珀色，偏红一般生产工艺较差 (3)微生物指标 包括细菌、霉菌、支原体、噬
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细胞培养中黑点的问题~~
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
24、培养中常出现一些黑点，是污染吗? 首先肉眼观察培养液是否变浑浊，如果变浑浊，基本可以确定是污染;如果肉眼观察培养液没有变浑浊：在显微镜下观察黑点大小和形状是否规则，是否运动，是做布朗运动还是呈直线型快速移动。如果黑点大小不规则，做布朗运动，黑点可能是细胞碎片(可能是细胞状态不佳或者消化过度引起的)，也可能是血清反复冻融产生的蛋白沉淀引起的，也可能是细胞的代谢产物。如果黑点大小一致，快速移动，很可能是细菌污染。 25、如何预防细胞培养中黑点的产生? 掌握细胞传代的最佳时机，不要细胞长老了再传代;掌握好消化时间，防止消化过度产生细胞碎片;减少血清等试剂的冻融次数;将培养液的PH调到最佳;严格控制水质和器皿的清洁。 26、黑点已经产生了，如何进行处理? 如果判定黑点是污染，请及时将细胞处理后丢弃。其他情况，可参照以下进行： 如果是悬浮细胞：收集细胞上清慢速离心(500-600 rpm/min，5-6 min)并更换新的培养瓶;如果是贴壁细胞：将细胞用PBS洗2-3遍，洗的时候，轻轻拍打培养瓶，让贴壁不牢的碎片和颗粒脱落，再弃去PBS，消化时先加低浓度的胰酶如0.05%胰酶消化1 min左右，让细胞间隙中的颗粒和碎片脱落下来，去掉低浓度胰酶，然后正常消化细胞，将收集的细胞悬液慢速离心(500-600 rpm/min，5-6 min)并更换新的培养瓶，并可以尝试适当增加血清浓度进行培养。 27、培养用dish,flask是否相同？ 不同厂牌的dish或flask，其所coating的polymer不同，制造程序亦不同，虽对大部分细胞没有太大之影响，惟少数细胞则可能因使用厂牌不同之dish或flask而有显著之生长差异。
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