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细胞培养需要哪些条件因素？
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
1．无菌环境 无毒和无菌是体外培养细胞的要条件。细胞在活体内，解毒系统和免疫系统可抵抗微生物或其他有害物质的入侵，但细胞在体外培养的过程中，缺乏机体免疫系统的保护而丧失对微生物的防御能力和对有害物质的解毒能力。为保证细胞能在体外环境中生长繁殖，必须要确保无菌工作区域、良好的个人卫生、无菌试剂和培养基以及无菌操作。 常见的微生物污染有支原体、细菌、真菌。支原体无致死毒性，可与细胞长期共存，对细胞有潜在影响，但体积小，不易鉴别，可借助于地衣红或Hoechst33342染色来进行检测。细菌增殖快，在短时间内即可大量扩增，并产生毒素杀死细胞。真菌的种类繁多，肉眼可见，漂浮于培养液面上，可呈丝状、管状或树枝状等。 2.合适的温度 般哺乳类与禽类细胞在体外培养的适宜温度是37～38℃，不适宜的环境温度会影响细胞的生长。细胞对低温的耐受能力要强于对高温的耐受能力，在低温下，细胞的代谢活力及核分裂能力降低。若温度不低于0℃，虽然细胞代谢受到影响，但无损伤作用；25～35℃时，细胞以缓慢的速度生长；但若被置于40℃数小时，则不仅不利于细胞生存、生长，甚至可导致其死亡。 3．气体环境与pH 细胞的体外培养需要理想的气体环境，氧气、二氧化碳是细胞生存的必要条件。氧气参与细胞的三羧酸循环，为细胞生存、代谢与合成提供能量；二氧化碳既是细胞的代谢产物，是细胞生长的必需成分，又与维持培养液的pH有关。大多数细胞适宜的pH范围往往是7.2～7.4。在开放式培养中，以5%的二氧化碳气体比例为宜。 4.适宜的渗透压 高渗溶液或低渗溶液会引起细胞发生褶皱、肿胀、破裂。因此，渗透压是体外培养细胞的重要条件之。多数体外培养的细胞对渗透压都有定的耐受能力，实际应用中，260～320mmol/L的渗透压可适用于大多数细胞。
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科研血清实验技能
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
问题一：如何贮存和冻结血清才不会使产品质量受损? 答：将血清从冷冻箱取出后，先置于2～8℃冰箱使之融解，然后在室温下使之全融。但有必要注意的是，融解过程中有必要规矩地摇晃均匀。长时刻贮存在2-8℃时，血清中的各种蛋白和脂蛋白（如冷凝集素、纤维蛋白原、玻粘连蛋白等）可能聚集而构成沉积或可见的混浊。因而，推荐在-20℃以下贮存血清，并防止反复冻融。主张血清应保存在-2O℃。若存放于4℃时，请勿超过一个月。若一次无法用完一瓶，主张无菌分装血清至恰当的灭菌容器内，再放回冷冻。 问题二：血清中包含絮状沉积，它们是什么，怎样处理？ 答：沉积包含纤维蛋白和脂蛋白。这是正常特性，不会影响产品性质。要除掉沉积，离心血清（400g，1-2分钟）或许简单的让其沉积在瓶子底部，将血清当心的 转移到另一个无菌瓶里（一般不主张选用过滤的办法除掉沉积，由于沉积会堵塞滤膜而无法过滤）。大多情况轻轻摇动沉积并加热至37℃就会再溶解。所以，运用 产品时要摇动并加热血清至37℃，沉积会天然消失。 问题三：如何防止血清中发作沉积？ 答：按如下操作可防止沉积的发作： （1）冻结血清时，请随时将之摇晃均匀，使温度及成分均一，削减沉积的发作。 （2）血清分装冻存时，须规矩摇晃均匀（当心勿形成气泡），使温度与成分均一。 （3）勿直接由-20℃直接至37℃冻结，因温度改变太大，简单形成蛋白质凝结而发作沉积。 （4）勿将血清置于37℃太久，否则血清会变得污浊，一起血清中许多较不稳定的成份也会因而受到破坏，从而影响血清的品质。 （5）血清的热灭活非常简单形成沉积物的增多，若非必要，能够无须做此步骤。 （6）若有必要做血清的热灭活，请遵守56℃，30分钟的原则，并且随时摇晃均匀。温度过高，时刻过久或摇晃不均匀，都会形成沉积物的增多。
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靶向唾液酸化**中枢神经系统疾病
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
唾液酸结合免疫球蛋白型凝集素(Siglecs)是一种膜受体，优先在免疫细胞上表达，识别唾液酸化的蛋白质、脂质和rna。唾液酸和通过SIGLECs的信号在免疫系统动态平衡以及神经系统发育、可塑性和修复中的重要作用被越来越多地认识到。唾液酸化功能失调和Siglec功能障碍导致中枢神经系统(CNS)的几种慢性疾病，目前的**选择非常有限。 虽然目前只有几种针对SIGLEC的疗法正在进行临床试验，但该领域已成为糖生物学和药物开发中活跃和活跃的领域之一。该综述重点介绍了近年来唾液酸和Siglec在中枢神经系统病理中的作用，并阐明了以唾液酸为基础和Siglec为靶向的神经疾病**方法的发展面临的机遇和挑战。 哺乳动物细胞的糖萼上装饰着末端唾液酸或神经氨酸，它们组成了一个具有九个碳骨架的单糖家族。它们的命名与他们的发现有关：Gunnar Blix于1936年从唾液粘蛋白中分离出它们，Ernst Klenk于1941年从中枢神经系统糖脂中分离出它们。布利克斯在希腊语中唾液(σίαλον)一词之后引入了“唾液酸”一词，而克伦克则创造了“神经氨酸”一词来表示唾液的神经元来源。当他们的关系变得清晰时，这两个术语都已经确立了，现在这两个术语可以互换使用。唾液酸化模式的生理作用是复杂的，但可以广泛地归因于结构和受体结合功能。 首先，低聚物和唾液酸化糖结构聚合物的高度负电荷和亲水结构形成水合壳，其增加其载体分子的流体动力学体积并防止细胞的不希望的相互作用。这种水合壳功能使细胞运动和可塑性。唾液酸暴露在末端糖萼上，带着高度的负电荷，也支持了对细胞膜表面分子的掩蔽，从而调节了组织对免疫细胞的识别位置。 其次，唾液酸化的糖蛋白和糖脂本身是几种受体的配体，其中许多受体具有信号功能，如SIGLECs。大多数这些特定的相互作用受取代基对唾液酸基,具体联系唾液酸的定义潜在的糖链或潜在的唾液酸分子之间和唾液酸的形式,即N-acetylneuraminic酸(Neu5Ac)(见术语)o r N-glycolylneuraminic酸(Neu5Gc),以及o -乙酰化衍生物。 人类只
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如何延长对照品保存期？
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
对于开封使用后的对照品要求是一次性使用的，但不同对照品，不同对待，开封后保存条件、使用时间都有限制。 开封后是否适合再使用，则需要看对照品的均匀性和稳定性，观察鉴定后对照品均匀，稳定性保持不变，那么这样的一般有效期较长，常见对照品保质期为3个月-1年左右。 如何延长对照品保存期？ 一、正确使用对照品 1、正确开启 大部分对照品都是使用玻璃安瓿保存，一般开启安瓿时可轻震敲，将内物尽量沉于底部，切割时应将安瓿平置或向下斜置，双手拇指顶住颈部发力，避免玻璃碎片混入对照品。 2、使用后密封 一般来说对照品使用后需要密封，根据对照品的区别在不同环境下密封，对于易吸潮的对照品，如奥美拉唑等，若用于含量测定，应启开后立即使用，剩余部分日后可用于鉴别，不过不建议进行含量测定。 3、过期后单独放置 对于过期的标准品、对照品，如欲继续保存，则需单独放置，以免混淆。必要时，亦可应急使用，可用于鉴别。如用于定量，则需有溯源核查数据保证。 二、合格贮存对照品 对照品的贮存环境很重要 常见的对照品一般都是选择在室温2-8摄氏度，低温下进行保存的，但一般对照品应按说明书规定的条件妥善保存，比如维生素E等需避光低温保存，暴晒过后就容易挥发以及不稳定。 要注意对照品的使用期限，过期、变质的对照品不宜再使用。开瓶后建议短期内用完，避免开瓶后长期不用，同时，在重复使用过程中应尽量避免对照品的分解、污染或吸潮。
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细胞培养中为什么要加入胎牛血清？
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
一、胎牛血清的功能 血清的成分十分复杂，既有协助物质运输的蛋白、营养物质，还有促进细胞生长的激素和因子等，正因为血清这种天然成分的复杂性，使得血清在细胞培养过程中发挥了多种功能： 1.提供维持细胞生长的激素，促进所培养细胞的生长； 2.弥补基础培养基中没有或含量很少的营养物质； 3.提供结合蛋白，促进细胞识别和利用维生素、脂类和其他激素等； 4.某些情况下结合蛋白质能与有毒金属和热原质结合，起到解毒作用； 5.促进细胞贴壁，提供可促进细胞铺展在塑料培养基质的因子； 6.起酸碱度缓冲液作用； 7.提供蛋白酶抑制剂，使细胞消化时残留的胰蛋白酶失活，保护细胞不受伤害。 二、胎牛血清有哪些重要的技术性指标？ 1.内毒素：标准为不高于10EU/mL。内毒素是细菌破碎后细胞壁的成分，因此内毒素含量的高低可表现出采血到生产系列过程中的无菌操作情况。 2.总蛋白含量：胎牛血清总蛋白含量般范围是30-50mg/mL，数值偏高，说明采血的牛龄偏大，不是胎牛，数值偏低，表明血清可能掺水了。 3.血红蛋白：标准为不高于30mg/dl，颜色越红，数值越高。 4.pH：7.0~8.0。 5.微生物：包括细菌、霉菌、支原体、噬菌体、各类病原性病毒等。 6.免疫球蛋白（IgG）：免疫球蛋白的数值能完全体现出采血时的牛龄情况，新生牛的血清中容易产生IgM，IgG的含量也偏高，进口胎牛血清不含IgM，另外IgG的含量也较低。
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细胞坏死和细胞凋亡的区别
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
细胞程序性死亡 概念： 细胞程序死亡(programmed cell death，PCD)也常常被称为细胞凋亡，是生物体发育过程中普遍存在的，是一个由基因决定的细胞主主动的有序的死亡方式。具体指细胞遇到内、外环境因子刺激时，受基因调控启动的保护措施，包括一些分子机制的诱导激活和基因编程，通过这种方式去除体内非必需细胞或即将发生特化的细胞。 而细胞发生程序性死亡时，就像树叶或花的自然凋落一样，凋亡的细胞散在于正常组织细胞中，无炎症反应，不遗留瘢痕。死亡的细胞碎片很快被巨噬细胞或邻近细胞清除，不影响其他细胞的正常功能。 凋亡细胞的主要特征是(参见表)： ①染色质聚集、分块、位于核膜上，胞质凝缩，最后核断裂，细胞通过出芽的方式形成许多凋亡小体; ②凋亡小体内有结构完整的细胞器，还有凝缩的染色体，可被邻近细胞吞噬消化，因始终有膜封闭，没有内溶物释放，故不会引起炎症; ③凋亡细胞中仍需要合成一些蛋白质，但是在坏死细胞中ATP和蛋白质合成受阻或终止; ④核酸内切酶活化，导致染色质DNA在核小体连接部位断裂，形成约200bp整数倍的核酸片段，凝胶电泳图谱呈梯状; ⑤凋亡通常是生理性变化，而细胞坏死是病理性变化。 理论意义： 程序性细胞死亡在生物发育和维持正常生理活动过程中非常重要.在发育过程中，细胞不但要恰当地诞生，而且也要恰当地死亡。 例如，人在胚胎阶段是有尾巴的，正因为组成尾巴的细胞恰当地死亡，才使我们在出生后没有尾巴.如果这些细胞没有恰当地死亡，就会出现长尾巴的新生儿.从胚胎、新生儿、婴儿、儿童到青少年，在这一系列人体发育成熟之前的阶段，总体来说细胞诞生得多，死亡得少，所以身体才能发育.发育成熟后，人体内细胞的诞生和死亡处于一个动态平衡阶段，一个成年人体内每天都有上万亿细胞诞生，同时又有上万亿细胞“程序性死亡”.两者处于一种动态平衡中，使人体器官维持合适的细胞数量得以正常运作的，正是“程序性细胞死亡”机制
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Seahorse XF 细胞线粒体压力测试技术服务
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
Seahorse XF 细胞线粒体压力测试 Seahorse XF 细胞线粒体压力测试全面了解线粒体功能 1、实验背景 安捷伦 SeahorseXF 细胞线粒体压力测试通过在 Seahorse XFe 和 XF 细胞外流量分析仪上直接测量细胞的氧消耗速率（OCR）来表征线粒体功能的关键参数。它是基于培养板的活细胞实验，能够实时监测 OCR。 实验使用 XF 传感器探针板内置的加药孔在实验过中将呼吸作用的调节剂加入细胞孔中，从而得到反映线粒体功能的关键参数。实验试剂盒里的调节剂为寡霉素（Oligomycin），羰基氰-4（三氟甲氧基）苯腙（Carbonyl cyanide-4 (trifluoromethoxy)Phenylhydrazone，FCCP），鱼藤酮（Rotenone）。 对线粒体功能进行评估使研究人员能够进一步了解代谢在细胞生理学，疾病病理学和病因学中的关键作用。SeahorseXF细胞线粒体压力测试是测量细胞线粒体功能的金标准，被广泛应用。本实验为了解线粒体功能障碍的原因和深入理解代谢途径，信号和表型提供了视角。 Seahorse XF 细胞线粒体压力测试词汇表： 基础呼吸（Basal respiration）：用来满足细胞ATP需求和线粒体质子渗漏的氧消耗。表示细胞在基础条件下的能量需求。 ATP产生（ATP Production）：加入ATP合酶抑制剂寡霉素后减少的氧气消耗速率，代表基础呼吸中被用来驱动ATP产生的部分。表示用来满足细胞能量需求的线粒体ATP产生。 H+（质子）渗漏（H+ (Proton) leak）：与 ATP产生不偶联的基础呼吸的剩余部分。质子渗漏可以被看作是线粒体损伤的标志，也可被看作是一种调节线粒体ATP产生的机制。 最大呼吸（Maximal respiration）：加入解偶联剂FCCP之后获得的最大氧气消耗速率。FCCP通过刺激呼吸链以最大能力运转模拟生理的“能量需求”，导致底物（糖，脂肪和氨基酸）的快速氧化以应对这一代谢挑战。显示细胞能够达到的最大呼吸速率。 备用呼吸能力（Spare respiratory capacity）：这个测量指标表示细胞应对能量需求的能力以及细胞呼吸与其理论最大值的差距
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Seahorse XF实时ATP速率测定技术服务中常见问题
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
实验背景 细胞三磷酸腺苷(ATP)的产生速率是一种描述细胞代谢的信息含量很高的测量，因为 ATP是细胞内普遍存在的主要能量货币。细胞的代谢调控使细胞根据ATP需求的变化调整ATP产生的变化来维持总的细胞内的ATP水平。 安捷伦Seahorse XF实时ATP速率测定被设计用来测量活细胞总的ATP产生速率。更重要的是，这个实验能够区分哺乳动物细胞内两条主要的产生ATP的代谢途径线粒体氧化磷酸化（OXPHOS）和糖酵解ATP的产生。 常见问题 如果检测液中含有不同的氧化底物（不同的P/O值），mitoATP产生速率如何计算？ 为了将ATP偶联的呼吸转换为线粒体的ATP产生速率，在电子传递链末端每还原一个氧原子，ADP磷酸化为ATP的化学计量学必须得到确定。不同的底物理论上最大的P/O值不同，并且依赖于化学计量学/底物氧化通路，以及F1F0 ATP合酶的效率。在标准的XF实验条件下，细胞被供给底物混合物（主要是葡萄糖，丙酮酸和谷氨酰胺），且通常内源性底物储备（糖原，脂肪酸，其他氨基酸）可用于线粒体氧化。因此，用几种细胞系进行了测试并确认P/O值2.75准确代表了外源性和内外源性氧化底物混合物的平均P/O值。 当进行诱导的XF实时ATP速率测定时，诱导的速率是如何计算和报告的？ 在XF实时ATP速率诱导实验中Summary Printout和Measure Sheet中的 Average Assay Parameter Calculations显示的Induced Rate(s)是用急性注射和寡霉素注射之间所有测量的平均值计算的。然而，每个时间点的诱导速率可以从Kinetic Rate Data（Measure Sheet）中获得。 XF实时ATP速率测定中定义的XF ATP速率指数是什么？ XF ATP速率指数是mitoATP产生速率与glycoATP产生速率的比值（即mitoATP rate/glycoATP rate）。这个比值是一个细胞代谢表型的定量指标。代谢指数大于1代表大于50%的细胞ATP来自线粒体的ETC/氧化磷酸化，而指数小于1表示大于50%的总ATP是糖酵解途径产生的。因为代谢指数是比值测量，所以它对于代谢表型的改变或
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细胞能量代谢服务Seahorse XF实验中常见问题之一
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
Qustions&解答Answers Seahorse XF 实验常见问题及解答 01可以使用超出保质期的探针板或重复使用探针板吗？ Agilent 无法保证因使用超出保质期的探针板或重复使用探针板而得到的实验数据质量(有效性)，为得到最佳的、最真实的数据，请使用有效期内的探针板及其它消耗品。 02探针板水化超出水化时间怎么办？ Agilent建议将探针板放入37℃无CO2培养箱中水化过夜以得到最优结果。最短水化时间是37℃水化12小时。探针板最长水化时间是37℃水化72小时，但由于液体蒸发需要补充(或更换)校准液，因此37℃无CO2培养箱务必放置水盘保证湿度。 03Fluxpak各种探针板有什么区别？ 探针板是Fluxpak的组成部分，一个Fluxpak包含探针板、水化板、校准液和细胞培养微孔板。以上各消耗品数量因所购Fluxpak类型而不同。探针板不能单独订购，必须通过订购Fluxpak来购买，但细胞培养板和校准液可单独购买。订购前，需要了解使用机器的型号及所需要的实验次数，订购与之配套的Fluxpak。 04计划明天做实验，我今天要做些啥？ 实验前一天，打开主机，打开电脑，同时点开Wave软件，确保是Connected的状态，水化探针板，贴壁细胞提前接种到Seahorse的细胞培养板里。 05探针板水化听说有二步，是这样吗？ 是的，96孔探针板，实验前一天，用无菌水；第二天做实验前，弃去无菌水，更换上37℃预热好的校准液，再放置无CO2恒温箱孵育1小时，这样二步法水化，避免了探针头上的小气泡；24机型探针板一步法水化即可，但是还是建议用之前手动排一下气泡； 06一次实验可以只使用探针板其中的一部分吗？ 为了将所有药物或化合物成功地注入细胞培养孔中，Agilent建议水化整个探针板并因需要将相同字母标注的全部加药孔注入药物（请参考实验流程中关于加载药物的注意事项）。背景孔的加药孔也必须加上药物，保证所有的A加药孔体积一致，B、C、D孔同理，否则会造成打药失败； 07实验中为何必须设置背景
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细胞能量代谢服务Seahorse XF实验中常见问题之三
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
Qustions&解答Answers Seahorse XF 实验常见问题及解答 29 Seahorse数据分析软件Wave可以免费下载安装吗？ 是的，可在安捷伦找到Wave软件下载，并且免费下载安装。 30 Seahorse XF 仪器模板选项中没有想检测试剂盒的模板怎么办？ 可在桌面板wave软件中将相应实验模板先导出到 U 盘中，再导入XF 仪器模板库即可。 31 Seahorse数据分析软件导出选项中没有对应的report generator？ 当软件导出选项中无相应的report generator时，请移步到Agilent细胞分析软件下，下载最新wave分析软件，也可以在对应试剂盒的菜单中下载对应的report generator。 32 Seahorse Wave 分析软件，我的电脑怎么都安装不上，怎么办？ 当软件无法安装时，可采用 Seahorse Analytics云分析， 这是一款网页形式的 Seahorse XF 数据分析软件，用户可以通过任何一台电脑安全地存储、访问和分析数据。极大地简化了用户的数据分析流程 33 Seahorse XF 实验后，是否需要做归一化处理呢，有哪些方法呢？ 功能生物数据的归一化是原始数据展示和后续分析工作流程中的关键因素，以确保对结果的准确一致的解析。XF 代谢分析在这方面也是如此，大多数实验需要进行某种形式的归一化。无论是比较不同的细胞类型、基因修饰还是化合物处理，都必须根据共同的参数将数据归一化以便正确比较。 常用的方法，蛋白定量，细胞成像计数，核DNA的检测等。 34 购买的Fluxpak包装，为啥细胞板总是多几块呢？ Agilent 充分考虑到实验中的各种情况，如果你发现细胞种的过密了或者发生了污染，那么就需要更换新的细胞板重新铺板。 35 Seahorse相关试剂存储条件是怎么的呢？ Agilent 基础培养基类，请4℃避光保存，避免冻结。FAO和谷氨酰胺需要存放在-20℃；板子及常见的试剂盒，室温存储即可。 36 Seahorse XF 相关试剂盒的说明书在哪呢，有中文的吗？ Agilent 一直提倡遵循环保理念，当您收
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常见问题解惑---慢病毒
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
常见问题解惑---慢病毒 一、慢病毒是什么？ 慢病毒是逆转录病毒的一种，具有逆转录病毒的基本结构和特性：整合入宿主细胞基因组，长期表达，可用于转基因动物制备；但也有不同于逆转录病毒的组份和特性：比逆转录病毒具有更高的滴度，不仅可以感染分裂期细胞，更重要的，还能感染非分裂期的细胞。 吉凯提供的慢病毒为“zx”性病毒，即病毒感染目的细胞后不会再感染其他细胞，也不会利用宿主细胞产生新的病毒颗粒。慢病毒中的毒性基因已经被剔除并被外源性目的基因所取代，属于假型病毒。但该病毒仍然具有可能的潜在的生物学危险 二、慢病毒如何稀释？ 慢病毒使用时，先将病毒从-80℃冰箱取出，冰浴融化，可使用D-hanks，PBS，生理盐水或培养基进行稀释。 三、慢病毒生物安全性如何？ 重组慢病毒的生物安全等级被确定为II级，需要在生物安全级II级的条件下进行慢病毒操作实验。 四、慢病毒如何保存？慢病毒的滴度单位是什么？ 慢病毒长期保存则需放置于-80℃或更低温度的环境中。在-80℃环境中慢病毒可以稳定存放6个月以上。尽可能避免反复冻融，否则会降低病毒滴度。亚载提供的慢病毒的滴度单位是TU/ml (transduction units/ml) ，即每毫升中含有具有生物活性的慢病毒颗粒数。如：慢病毒滴度为 1E+8 TU/ml，即每毫升病毒液中含有1E+8个具有生物活性的慢病毒颗粒。 五、慢病毒使用安全注意事项有哪些？ 1.病毒操作时建议使用生物安全柜。 如果使用普通超净工作台操作病毒，请不要打开排风机； 2.病毒操作时请穿实验服，带口罩和手套；操作病毒时特别小心不要产生气雾或飞溅。如果操作时超净工作台有毒污染，请立即用1%的SDS溶液擦拭干净； 3.如需要离心，应使用密封性好的离心管，或者用parafilm膜封口后离心，而且尽量使用组织或细胞培养室内的离心机； 4.用显微镜观察细胞感染情况时应遵从以下步骤：拧紧培养瓶或盖紧培养板，用70%乙醇清理培养瓶外壁后拍照，离开显微镜实验台之前，用70%乙醇清理显微镜载物台
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Western blot检测样本收集运送注意事项
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
样本运输条件及保存条件 组织样本: 1. 组织样本应立即放置-20℃。 2. 运输过程采用液氮，干冰，市内运输可选用冰袋。 3. 样本量不低于100 mg。 4. 请告知组织种属和类型，如肝,脾等。 细胞样本 1. 有严格时间节点的实验需客户自行裂解样本，提取蛋白，采用干冰运输。 2. 客户离心搜集好的细胞、悬浮细胞、贴壁细胞都需用冰袋维持4℃运输，不可使用干冰和液氮。 3. 所提供细胞量不低于106。 特殊样本 1. 全血采用冰袋维持4℃运输，严禁用干冰和液氮运输，血清和血浆可采用液氮，干冰，冰袋运输。 2. 植物组织应采用干冰或液氮运输，防止植物褐化，氧化。 3. 客户处理好已经变性的样本，液氮，干冰，冰袋均可运输。
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黄连解毒汤对Aβ1-42诱导AD大鼠学习记忆能力
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
目的 ：探讨黄连解毒汤对 β淀粉样蛋白（β）诱导阿尔茨海默病（）模型大鼠学习记忆能力和胆碱能系统的影响。结果 ： 与正常组比较，模型组动物脑组织皮质区神经元坏死、海马区锥体细胞或颗粒细胞坏死、排列紊乱和炎性细胞浸润等病理改变明显，大鼠逃避潜伏期延长、逃逸平台次数降低、有效区域停留时间、有效区域游泳路径均减少（P，P），血清中 ，浓度降低（P），海马中 ，，含量，α蛋白，α表达降低（P）；与模型组比较，黄连解毒汤中剂量组逃避潜伏期变短（P），逃逸平台次数、有效区域游泳路径、有效区域停留时间增加（P，P），血清 ，含量和海马AchE，，α表达上升（P），海马 α蛋白表达升高明显（P）；高剂量组有效区域有效区域停留时间延长（P）；逃逸平台次数增加，血清 ，含量和海马 ，，α蛋白，α表达上升（P）。结论：黄连解毒汤可显著改善 β诱导 大鼠学习记忆能力，其作用机制可能与改善 β所导致的胆碱能系统损伤，增强胆碱能系统功能有关。
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细胞收样注意事项
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
客户提供细胞需满足以下要求： (1)需要我公司进行传代培养的细胞，需告知细胞名称、培养条件等信息，目前我公司对无细胞名称的细胞将不提供冻存服务，无培养条件的细胞将无法提供及时的传代培养等操作，敬请知晓； (2)客户提供的可直接进行实验的细胞，需保证细胞量，具体细胞量可根据实验咨询技术人员，流式检测样品需提供荧光信息； (3)寄送冻存细胞需用液氮或者干冰保存运输； (4)寄送培养细胞需拧紧培养瓶，封口膜封好，常温运输，严禁冰冻，长途运输需装满培养基； (5)客户提供的细胞需保证细胞的生长状态，细胞状态以我公司技术人员收到细胞后的观察状态为准，敬请知晓。 客户提供实验中的相关试剂，需提供以下信息： (1)提供厂家货号、保质期、保存条件等信息； (2)客户配制好药品需提供名称、浓度、安全性等信息； (3)请告知具体的实验方案要求； (4)分组明确（具体分组、作用时间、浓度）； (5)具体实验内容要明确（处理之后的细胞做何种检测）； (6)细胞和试剂的来源备注明确。 客户提供组织进行细胞分离需满足以下要求： (1)组织分离需提前告知，并预约时间； (2)确保提供组织样品必须新鲜（当天取材，一般从取材到运输到我公司的时间不超过4 h为宜）； (3)组织样本只能在常温或4度条件保存或运输，严禁冰冻； (4)需提供足够的组织量； (5)有特定分离方法要求的需提供说明； (6)血液样本需用抗凝管保存； (7)提供的血样或者组织需提供来源说明（特别是病人组织，我公司暂不能接受具传染性的样本）。
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如何正确的操作细胞冻存？
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
1.冷冻保存方法: (1)传统方法:冷存管置于4C10分钟-->-20C30分钟-->-80C 16~ 18小时(或隔夜)-->液氮槽vaporphase长期储存。 -20C不可超过1小时，以防止胞内冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80C冰箱中，惟存活率稍微降低些。 (2)程序降温:利用已设定程序的等速降温机以-1~-3C/分钟之速度由室温降至(-80C以下) -120C，再放在液氮槽vaporphase长期储存。适用于悬浮型细胞与hybridoma之保存。 (3)HAKATA无血清细胞冻存： 加入HAKATA无血清细胞冻存液制成悬液，直接冻于-80°C，可保存≥5年。 2.操作步骤: (1)冷冻24-48小时更换半里或全里培养基，使细胞处于指数生长期。 (2)配制冷冻保存溶液(使用配制):另取离心管，加入培养基、血清，逐滴加入二甲基亚矾(DMSO)至20%浓度，即制成双倍的冻存液，置于室温下待用。 (3)离心收集培养之细胞，用加血清的培养基重悬起细胞，取少里细胞悬浮液(约0.1m1)计数细胞浓度及冻存活率。 (4)取与细胞悬液等里的冻存液，缓慢逐商加入细胞悬液，并晃动试管，制成细胞冻存悬液( DMSO醉后浓度为5~ 10%)，使细胞浓度为1~5x 10*cells/ml，混合均匀，分装于已标示完全之冷冻保存管中，1~ 2nl/mal,并取.少里细胞悬浮液作污染检测。严密封口后，注明细胞名称、代数、日期。然后进行冻存。
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