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超低温冷阱配套应用于Parylene镀膜设备
作者：德尔塔 日期：2022-04-13
低温捕集器3种方式 在Parylene真空涂敷设备上，镀膜腔体与真空泵之间，需要低温捕集器。如下图。 常见的低温捕集器有以下3种方式： 1）液氮冷阱，是最经济的低温捕集方式，简单可靠，易于维护，费用低。但是液氮的供应受制约因素较多，另外在冷头里灌注液氮，不太方便。 2）超低温制冷机的冷头，替换液氮冷阱，是最常见的低温捕集方式。优点是直接替代液氮方式，用户容易理解和接受。缺点是冷头与制冷机之间，有不可拆卸的低温软管，损失部分冷量，若是低温状态下移动制冷机，容易损坏软管，造成制冷剂泄漏。与真空系统装配，占用空间较多。 3）超低温制冷机的冷阱，替换液氮冷阱，是更合理的低温捕集方式。将液氮冷头和真空罐一起去掉，从镀膜腔体的真空接口，采用真空软管，连接到超低温冷阱的真空接口，然后连到真空泵。超低温冷阱与超低温冷头相比，更加简单可靠，安装和维护更方便。 液氮冷头作为低温捕集器，捕集温度低，维护简单，但使用不便，常见于实验室里。 低温捕集器应用方式 在工业领域，常见的是采用超低温制冷机作为低温捕集器，温度范围在-80℃~-145℃，一般分为冷头和冷阱两种方式。 超低温冷头的方式，优点是直接替代液氮冷头，也正好利用了原设计的液氮冷头的附加真空罐。缺点是液氮冷头或超低温冷头，法兰接口都是非标，需要定制；超低温冷头的黑色连接软管，保温层相对不足，会损失一部分冷量，低温时也比较脆弱、严禁移动。 超低温冷阱的方式，不需要附加的真空罐，整机机构简单。从镀膜腔室，直接连接冷阱即可。不会有冷量的损失、坚固耐用；接口采用真空标准形式KF40或KF50，非常方便可靠，也是真空系统的常规设计方案。 下图左边是冷头的方式，黑色的低温连接管，低温时比较脆弱，有冷量损失。 下图右边是冷阱的方式，真空连接比较简单可靠，镀膜腔室——冷阱——真空泵。 下边的大图，是选用台式冷阱的设计示意图（已批量应用）。 相关产品 在超低温领域，长流仪器(Coolium instruments)是
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细胞培养自动化的优势和流程
作者：德尔塔 日期：2022-04-13
涉及细胞生物学、细胞信号传导、药物、蛋白质表达、癌症生物学、再生医学、纳米材料等科学领域的实验室严重依赖细胞培养物的使用。 已经建立了细胞培养自动化系统的方法，以执行建立、生长和维护细胞培养的过程，取代了以前大量依赖人工的系统。 自动化系统可以执行曾经由实验室技术人员负责的过程的所有关键部分，例如在液体中培养培养物、电镀培养物、稀释样品、将培养物放入孔中等等。这些自动化方法因其能够节省时间和资源以及提高样品的准确性和质量而广受欢迎。 如果没有自动化，通过细胞培养生产细胞和细胞产品是一个乏味且耗时的过程。在从细胞生长和收获到重新播种和分析的所有阶段，必须保持适合细胞的特定环境参数。必须仔细控制细胞生长的培养基，并控制冷冻和解冻速率以确保一致和可行的细胞系。 此外，使用这些细胞培养物的实验室技术人员需要接受全面培训，才能获得正确、彻底地进行这一过程所需的技能，没有任何错误，也不会污染培养物。在此过程中犯下的任何错误都可能代价高昂，尤其是在需要大量细胞培养时。出于这个原因，许多实验室，尤其是制药实验室，投资了细胞培养的自动化系统。由于严格的标准化要求和学术界和工业界对吞吐量的需求增加，自动化系统的使用几乎成为强制性的。 细胞培养自动化的优势 使用自动化细胞培养过程显着的优势是它取代了必须由合格人员使用仪器完成的重复性手动工作的时间。这意味着可以将熟练的实验室技术人员重新部署到他们的专业知识更有价值的业务领域。这节省了与人力相关的成本，并允许企业将其资源用于更有利可图的领域，例如研发。 使用自动化细胞培养过程的另一个关键优势是可以对机器进行编程以执行细胞培养任务，其精度高于人类所能保证的水平。此外，它们不受疲劳和粗心等人为因素的影响。这意味着自动化系统的错误率和污染率更低，从而提高了培养质量并降低了错误成本。此外，机器可以比人类工作得更快，而且不需要休息；因此，这使自动化系统能够
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EcoTech®多传感器碳源汇立体遥感监测方案
作者：德尔塔 日期：2022-04-13
在“3060双碳目标”时代背景下，易科泰生态技术公司推出EcoTech®多传感器碳源汇立体遥感监测方案，为我国早日实现双碳目标贡献力量。该方案由Ecodrone®空基无人机遥感成像系统和PhenoPlot®地面光谱成像监测系统组成，专为森林碳吸收量、植被碳氮损失与净汇、净光合作用、生物量、生态退化因子、生物多样性等碳源汇及生态系统监测研究领域提供全方位的空陆双基监测方案。 一、优势特点： 多传感器：高光谱成像、机载LiDAR、红外热成像、叶绿素荧光测量、环境因子监测等 同时相测量、多源信息融合 立体监测：陆空双基监测，点面结合、优势互补 兼顾“三高”：高现势性、高分辨率、高通量 建模反演：无人机遥感大数据+地面采样观测数据，既扩大了监测范围、又保证了监测精度 二、方案配置： （1）Ecodrone® UAS-8 Pro一体式高光谱-LiDAR-红外热成像遥感系统 自主研发共轴八旋翼高负载无人机遥感平台，有效负载≥20kg 同时搭载高光谱成像（VNIR或NIR）、激光雷达、红外热成像（或CWSI）三种成像单元 同步采集HSI、3D LiDAR、IRT、RGB四类遥感大数据 可飞行作业30分钟以上，有效覆盖面积超20公顷 高密度三维点云，精度2.5cm，3次回波，穿透性更强，充分保证了下位层植物的有效观测 可成像测量近百种植被光谱指数、冠层温度，获取分类点云、三维测量数据、DTM等专题数据 （2）PhenoPlot®轻便型近地遥感成像分析系统 专利产品：轻便可拆卸，单兵作业，适用于野外原位监测 双重控制：嵌入式操作系统+PC端GUI软件，无线控制，空旷环境下可达5km 组合命令：支持自定义Protocols，可设置10条以上，实现系统自动运行 传感器：400-1000nm/900-1700nm高光谱成像，224光谱通道；Thermo-RGB成像，温度灵敏度0.03℃；叶绿素荧光测量； Envis环境因子监测，高达150余种传感器可选 测量参数：NDVI、EVI、 PRI等反射光谱指数；植物多光谱荧光、稳态叶绿素荧光Fs等荧光参数； CO2、CH4等温室气体、其他环境参数等上百种指标 （3）选配手持式
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获得出色免疫荧光细胞图像的5个关键步骤
作者：德尔塔 日期：2022-04-13
最近高分辨率成像技术的发展使研究人员能够通过使用免疫荧光染色在其感兴趣的细胞和组织中可视化亚微米级甚至纳米级结构。然而，这需要在样品制备过程中进行仔细对步骤进行优化，以便获得清晰的图像，并且随着图像分辨率的提高，方案可能会变得更加苛刻。 尽管各种抗体制造商都提供了“最佳”方案，但遗憾的是没有可应用于所有样品类型的标准程序。事实上，大多数时候，研究人员需要通过反复试验找到最佳工作流程。 理论上，免疫荧光染色方案包括以下六个基本步骤：固定-透化-封闭-一抗孵育-二抗孵育以及图像采集。然而，在每一步都有许多小细节：当以一种或另一种方式完成时，可决定您是否获得良好的免疫荧光图像或糟糕的图像。 来自 Lewis 大鼠的骨髓间充质干细胞用抗兔 PCNA 抗体（以洋红色显示）、抗 α-微管蛋白抗体（以绿色显示）和鬼笔环肽（以红热显示）染色。使用 Leica SP8 共聚焦显微镜获取图像。 自2017年作为理学硕士学生进入研究环境以来，我一直在研究各种类型的间充质干细胞和胚胎组织，研究颅面再生和发育。此外，我一直沉浸在免疫荧光染色的世界中，拍摄了无数图像，包括我的第一篇出版物（Yamada et al., 2019）《牙科研究杂志》的封面艺术。在每年花费近300小时进行荧光成像后，我发现了适合我的细胞和应用的完美免疫荧光方案。我了解到，这里和那里的一些小调整真的会有所作为！ 在本文中，我将分享我的前5个基本但经常被忽视的优化步骤，这些步骤将改善您的免疫荧光细胞图像。 1. 了解您的目标蛋白并确定固定方案 首先要考虑的关键因素是决定为您的样品使用哪种固定剂。各种固定剂，包括醛类（例如，多聚甲醛：PFA）、酒精（例如，冰冷的甲醇）和酸基溶液（例如，三氯乙酸）已显示出与免疫荧光出色的相容性，但是这些固定剂中的每一种都有其优点和缺点。PFA和甲醇是很好的选择。您可以在文献中了解它们在固定特性方面的差异 (e.g. Eldred et al., 1983). 无论您选择哪
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以溶氧过程模拟为例讨论基于数字孪生的发酵工艺优化
作者：德尔塔 日期：2022-04-13
发酵过程的优化指的是在给定生产菌株的情况下，通过对宏观操作参数的调整，改变微生物细胞周围及细胞内的微观环境，进而达到最优的发酵效果。最优的工艺条件不但对产品质量、得率、下游分离提取的难易程度度等关系经济效益的指标有直接影响，还能减少废物排放，节约能源和水源。在实际应用中，为了确定最佳的工艺参数组合，往往需要进行大量实验。随着工业4.0概念的发展，计算机模拟的方法逐渐在行业中萌芽。借助各类机理模型和经验模型，我们完全可以让生物过程在计算机虚拟环境中“进行”，从而大大节省研发成本。同时，计算机模拟方法的建立，是模型预测控制的基础，可以克服传统反馈调节滞后性的劣势。更进一步，计算机模拟理论也是目前最前沿的概念---“数字孪生”的基础。此前，我们介绍过生物制造中的数字孪生概念。今天，我们以溶氧过程模拟为例，讨论数字孪生中动态数学模型的一个实施案例。 由于操作参数和工艺指标之间有着错综复杂的非线性关系，生物过程模拟并非易事，通常涉及到对传质、传热、传能和生化反应的模拟。图1列举了发酵过程主要操作条件对传质速率、底物浓度等中间参数以及细胞生长，产物形成等发酵指标参数的影响。 图1 补料发酵过程主要操作参数与菌体生长、产物形成之间的相互影响[1]。 以溶氧过程的计算机模拟为例，其计算分为至少两部分，一是氧传质速率的计算（OTR），二是微生物摄氧速率的计算（OUR），这一过程可以用如下公式描述： 图2a传氧速率、溶氧浓度与传质系数之间的关系。绿色箭头表示传质系数的增量，黄色箭头表示溶氧浓度的增量，蓝色箭头表示传氧速率的增量[1] 图2b 在传质系数一定的情况下，微生物细胞代谢状态对溶氧浓度和传质速率的影响。蓝色箭头表示耗氧量的下降，黄色箭头表示溶氧浓度的增加[1] 基于以上基本原理，我们搭建了溶氧过程的动态模型。模型后台运行在我们的服务器上，前端以可交互网页应用的形式展示。该网页应用包括三个分页面，其中Equilibriu
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核磁共振成像原理介绍之层厚（THK）
作者：德尔塔 日期：2022-04-13
核磁共振成像原理介绍-层厚 前面简单的介绍了核磁共振成像原理中的层面选择、线性梯度场等概念，下面简单介绍下核磁共振成像中的层厚（THK） 层厚是指成像层面在成像空间第三维方向上的尺寸。对于MRI. 层厚表示一定厚度的扫描层面。 层面的选取在实际临床操作中都是有一定厚度的。 我们把射频脉冲的频率范围称为带宽。带宽决定了层面的厚度。 因为射频脉冲的频率范围越大，对应符合拉莫尔频率的磁场范围就会增大，层面厚度增加。 注意:当发射射频脉冲时，只允许使一个层面中的质子产生磁共振，其他层面中任何一个质子不会产生磁共振。 除了带宽决定层面厚度外，梯度场Gz 也会对层厚产生影响，如果选取层面射频脉冲的带宽不变，不同的Gz，对应的厚度不同， Gz 变化快(斜率大) ，对应层面厚度小， Gz 变化慢(斜率小) ，对应层面厚度大。总之，层面厚度取决于层面选择梯度Gz 和射频脉冲的带宽。 层面厚度关系到层选方向的分辨率，层面薄， 则分辨率高; 层面厚，则分辨率低。 但层面不能太薄，由于我们还要将成像层面分成大量体素，层面太薄时每个体素内质子数量减少，各体素产生信号小，信噪比小，达不到高分辨率的目的。 通过以下两种方法降低层面的厚度: (1)使用窄带宽的射频脉冲。窄频率的带宽将激励更窄的磁场强度范围内的质子(图1) 。 (2) 增大梯度场的斜率(图2) 。 图1 带宽与层厚的关系 图2层厚与梯度的关系 层厚是图像质量的重要决定因素； 层厚的增加，使成像组织的体素体积增加， 相对于较薄的层面来说，体素内质子数量增加，信号强度增加，所以图像的信噪比将会增加，图像的表观改善。 但是，层厚增加了，信噪比增加的同时，空间分辨率降低，部分容积效应作用会显著。
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单细胞功能蛋白质组技术助力提高CAR-NK转染效率和细胞疗效
作者：德尔塔 日期：2022-04-13
截至目前，超过5种CAR-T细胞**产品获得美国FDA认证，批准上市。国内CAR-T产品也已获批上市。但CAR-T产品也存在着生产周期长、有细胞因子风暴及神经毒性副作用等挑战。 CAR-NK细胞被认为可能应对这些挑战，其发展引起了研究人员的极大兴趣——主要是因为相比传统的CAR-T细胞，CAR-NK细胞具有独特的优势。与CAR-T细胞不同，CAR-NK细胞可以应用于异体细胞**环境，这意味着它有潜力成为一种“现成的”**方法，并降低移植物抗宿主病(GVHD)的风险，解决了周期长，必须应对个体化需求的问题。CAR-NK细胞不像CAR-T细胞那样在体内长时间存活，从而降低了靶向正常细胞和非肿瘤细胞的风险。此外，由于NK细胞分泌的细胞因子相与T细胞不同，NK细胞造成细胞因子释放综合征(CRS)和神经毒性的风险较低。 更重要的是，CAR在NK细胞中的表达可以增加其固有的细胞杀伤能力，改善未修饰前NK细胞的**结果。已知未修饰的NK细胞临床前研究已经产生了很好的结果及安全性，但仍未转化为成功的临床实验，虽有多达50%的患者中产生了阳性反应，但其他实验报告的临床疗效还是有限。提示我们CAR修饰的NK细胞**可能是更好的**方案。 慢病毒NK细胞转染方案 限制CAR-NK细胞**发展的挑战之一是基因转染方式。逆转录病毒载体已被广泛研究，转染后在NK细胞中的效率约为27%-52%。以及转染后CAR-NK细胞活力低和突变的风险而受到限制。一种更安全的选择是用慢病毒(LV)转染，因为它提供了降低基因毒性和插入突变的风险。然而，其转染效率往往比逆转录病毒的转录效率要低得多。 CAR-NK细胞有几种类型的慢病毒(LV)正在开发中，最近人们对优化vesicular stomatitis virus-G (VSV-G)-pseudo typed LV(VSV-G LVs)的转染很感兴趣。 St. Jude儿童研究医院的研究人员于2021年6月在Cytotherapy杂志发表文章，研究表明，VSV-GLVs转染的NK细胞转染效率低和细胞活力低是由于toll样受体4(TLR4)通路的激活。 VSV-G激活TLR4信号通路 免疫系统使用模式识别受
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原代细胞的培养应用及分离注意事项
作者：德尔塔 日期：2022-04-13
原代细胞培养的应用： 1、为研究生物体细胞的生长、代谢、繁殖提供有力的手段； 2、为传代培养创造条件； 3、服务于临床实践，用于药物筛选等。 原代细胞培养之分离注意事项： 组织块培养法： 1)组织块接种后的前3天，在观察和移动的过程中，注意不要引起液体的振荡。要避免经常翻动和振动，否则组织块不易附着于瓶壁上或附着后也会脱落飘起。 2)加入的培养液不宜过多，避免浸泡的组织块受轻微的波动而脱落下来。 3)当细胞向外迁徙出来后要注意记录并去除漂浮的组织块和残留的细胞，它们产生的有毒物质会影响原代细胞的生长。 4)为促进组织块尽快粘贴在培养瓶皿上，可以在种植前先将胶原薄层涂在培养瓶底壁上。 原代细胞与细胞系有什么区别？ 根据传统定义，自组织第一次收获和接种的细胞被称为原代细胞 [Freshney, R.I. (1987). Culture of Animal Cells. A Manual of Basic Technique. (New York, Alan R. Liss, Inc.)]. 这类细胞直接从组织分离，生命周期有限，经数次传代后会逐渐停止生长。原代细胞在有限的生命周期内需掌握好细胞的最大生长空间，以保持细胞群中基因型和表型的一致性。 细胞系是不断生长、分化的细胞群，因其经过遗传改造，致使其具有无限增长的潜能。体外生长的细胞系用于医疗或科研。 但实际上，经过长时间、连续的传代培养后，细胞系随着代数的增加，细胞的基因型和表型都有可能发生改变。 需要指出的是，在不同的科研小组中这些术语的定义会有所不同。许多研究员不用细胞系这个词表示细胞群，除非细胞经过了遗传改造。
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斑马鱼等水生生物呼吸代谢测量全面解决方案
作者：德尔塔 日期：2022-04-13
易科泰生态技术公司提供水生生物呼吸代谢测量全面解决方案： 斑马鱼等鱼类（包括鱼卵及胚胎）呼吸代谢测量技术方案 贝类呼吸代谢测量技术方案 虾、蟹及昆虫等呼吸代谢测量技术方案 浮游动物呼吸代谢测量技术方案 微塑料积累及其代谢响应研究技术方案 荧光光纤氧气传感器技术，高灵敏度、高分辨率、免维护 “Stop-Flow”测量技术，可循环长时间测量分析 模块式结构，配置灵活，可客户定制，提供最佳测量方案 广泛应用于水产养殖种质资源表型分析研究、水体环境毒理学、水质生物检测、海洋与淡水鱼类及贝类等水生生物生理生态学研究等。 应用案例一： 随着城市化和工业化进程的逐步加快，由人类活动造成的水体污染和水体富营养化问题越来越多。对此，加拿大McMaster University和University of Waterloo两所大学的实验人员通过测量分析慢性暴露于低氧和（或）城市污水处理厂废水中鳉鱼的能量代谢，探讨了污水处理厂附近的压力源组合可能对鱼类的生理和健康产生的交互影响，结果表明：同时暴露于污水和缺氧的环境中会降低鳉鱼的标准代谢率（SMR）（参见下图）。在所有试验处理中，含氧量和污水处理之间存在显着的相互作用（p = 0.02），缺氧环境并没有影响到饲养在清洁水中的鱼的 SMR；但当鳉鱼同时暴露于缺氧和污水中时，中度和重度缺氧组的 SMR 分别降低了 37% 和 25%（图 1A），并且导致了显著的缺氧效应( p = 0.03)。此外在常氧环境下测量的静息代谢率 (RMR) 的变化趋势与标准代谢率( SMR)并不一致，缺氧环境和污水环境对不同对照组的RMR并没有统计学意义的影响（缺氧效应，p = 0.42；废水效应，p = 0.96；图 1B）。（PS：本研究中鳉鱼的能量代谢差异与体重变化无关，因为各实验样本之间的体重并没有显著差异，肝指数和Fulton’s K肥满度等指数也没有任何差异。研究成果发表在《Environmental pollution》，题目为“Exposure to wastewater effluent disrupts hypoxia responses in killifish (Fundulus heterocli
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国自然热点话题：肠道菌群研究思路解析
作者：德尔塔 日期：2022-04-13
人体是一个由自身细胞和共生微生物细胞构成的超级生物体，而微生物的数量和基因总数要比人类多得多，它们注定会对我们的健康产生重要影响。近年来，肠道微生物成为了一个热门研究方向，相关的研究成果更是频频登上各大顶级期刊。 肠道微生物研究为何成为热门研究领域？ 人体肠道微生物基因组作为人类的第二套基因组，与人类健康密切相关。大量的研究表明肠道微生物与包括心血管、肿瘤、神经、消化等多种疾病的发生发展密切相关，其因果关系也在逐步阐明中。 随着研究的深入，人们越来越认识到肠道微生物在疾病的诊断**、个性化营养等方面的重要意义，许多国家都加大了肠道菌群方向的科研投入，在全球范围启动了几项重大的研究计划，产生并积累了大量人类微生物宏基因组信息，为后续研究提供强大数据支持，也为产业化奠定了坚实的科研基础。 人类基因组计划的完成带动了精准医疗、基因靶向药、基因筛查、诊断和冶疗产业的迅猛发展。随着技术的逐渐成熟，肠道菌群相关的诊疗有可能成为医疗领域一股颠覆性的力量。 肠道微生物研究热门领域 1. 肿瘤 科学家们在上世纪90年代把传染性细菌幽门螺杆菌与胃癌联系起来。从那时起，科学家们开始发现一些可能与肿瘤的发生和发展相关的菌群。肿瘤免疫疗法是近几年来癌症**领域最成功的方法之一，目前主要分为两个分支：细胞**免疫和免疫检查点抑制剂**（ICB）。 免疫检查点分子是免疫系统中起抑制作用的调节分子，其对于维持自身耐受、防止自身免疫、以及通过控制免疫应答的时间和强度而使组织损伤最小化等至关重要。免疫检查点分子表达于免疫细胞上，将抑制免疫细胞功能，使机体无法产生有效的抗肿瘤免疫应答，肿瘤形成免疫逃逸。免疫检查点抑制剂类药物，可解除这种抑制作用，让免疫细胞重新激活工作，消灭癌细胞。 近来，许多研究表明一些肠道菌群的存在与ICB疗效的提高有关。为了弄清其中潜在的分子机制，Kathy D. McCoy团队筛选并研究了多种能显著提高ICB疗效的肠道菌群，发
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共聚焦显微镜的成像原理及应用
作者：德尔塔 日期：2022-04-13
什么是共聚焦显微镜？ 共聚焦显微镜是激光共聚焦扫描显微镜 LCSM 的简称，它显微成像主要采用 3D 捕获的成像技术，使其具有较高的三维图像分辨率。这 些都是 通过构建显微照片来实现的。在荧光显微镜使用过程中，由于需要高强度紫外光辅助成像，所以显微镜 内的汞弧灯产生的强光可能会导致令人不安的背景噪音，甚至会导致光漂白。 共聚焦显微镜原理是通过数码相机针孔的高强度激光来实现数字成像的技术，有效避免了荧光显微镜 所产生 的问题。 共焦显微镜原理 共聚焦显微镜中的图像是来自一个焦平面的光通过针孔数码相机聚焦拍摄，从而规避 来自其支点上方或下方的光。固定在设备上的激光连续聚焦在样品的选定区域，同时，被样品吸附的荧光染料也会被数码相机捕捉。共聚焦设备包含两个旋转镜头用来拍摄组图。 然后通过所累积的不同焦平面的图像序列，使用软件编译完整的 3d 图像。此图像可以在轴向（z 轴）和横向（x 和 y 轴）平面进行微调。这些细胞和其他矩阵的再现是通过使用双倒置的光锥照亮物体来实现的。 使用标准落射荧光显微镜所存在的问题是当遇到较厚的基质或标本时所表现出的荧光程度较大。大于 2 微米的样品发出的辐射会危及生成图像的准确性，从而损失成像的细节。而共聚焦显微镜则可以通过缩小激发范围并使用光学切片来消除背景噪声。 共聚焦显微镜的应用 ECM模拟凝胶的成像 细胞外基质 (ECM) 或属于所有细胞的非细胞成分，在细胞功能中是必不可少的。ECM 的弹性调节细胞的许多生物学功能，例如间充质干细胞的分化、粘附和迁移。 细胞生物学中常常通过水凝胶来模拟ECM。共聚焦显微镜的应用主要在于可与聚丙烯酰胺凝胶的压痕法结合使用。共聚焦自动图像成像可以有效测量 ECM 模拟中的压痕和穿孔。比如，共聚焦激光显微镜可以测量出 PAAM 凝胶组合物的深度和刚度。这种方法可以替代 AFM 纳米压痕法和微针法。 由于共焦成像可以可靠地探测大多数样品表面下方 0-200 µm 之间的任何位置。然而，重要的
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如何遏制HIV耐药性
作者：德尔塔 日期：2022-04-13
到2020年度，全球约有3770万HIV感染者，其中2750万人正在接受抗逆转录病毒疗法。HIV耐药将影响抗病毒药物在降低HIV感染率以及与HIV相关的发病率和死亡率方面的有效性。在向WHO报告的30项调查中，有21项调查的数据显示：在初治人群中，对奈韦拉平或依非韦伦的**前耐药率达到了10%以上，先前使用过抗病毒药物的人群也表现出耐药率较高的现象。在HIV母亲所生的婴儿中，有近一半的婴儿对奈韦拉平和/或依非韦伦产生了耐药。 第一代和第二代非核苷类药物耐药性的全球流行率促使我们需要快速过渡到基于第二代整合酶抑制剂（以多替拉韦为代表）的**方案。自2019年以来，世卫组织已建议使用多替拉韦作为针对所有人群的**一线和二线**药物。与目前使用的其他药物相比，它更加高效，便于服用，副作用更少，同时它也有很高的基因耐药屏障，因此更能支持长期**并保持疗效。现今，第3代非核苷类药物“艾诺韦林”的面世具有副作用小，疗效确切的优点，也逐渐被一些临床大夫所关注。 阻止HIV耐药的传播对于确保现有**方案长期疗效和持久性显得非常重要。由于耐药病毒的出现，所有HIV药物，包括较新药物类别的药物，都有部分或完全失效的风险。如果不加以预防，HIV耐药性将危及疗效，导致HIV感染人数的增加以及相关发病率和死亡率的提高。 为了阻止HIV的传播，政府、疾控和医务工作者都应促进HIV最佳**药物的可及性，通过VCT门诊提供持续性的随访和护理，并增加病毒载量及耐药检测的频率，以了解HIV**是否有效，并在确认**失败的情况下迅速更换**方案。 我国的高效抗HIV药物已进入医保时代，包括2种基于第2代整合酶抑制剂的3联单片合剂“必妥维”以及简化**方案的2联合剂“多伟托”，另外还有第3代非核苷类药物“艾诺韦林”的面世，以及重症住院患者需要的融合酶抑制剂“埃博韦泰”共4种药物。这无疑让临床医生针对不同患者有了更多更好的选择空间。 随着我院近期在院内开展的HIV耐药检测，相信将为有效控制HIV耐药打下坚实
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小鼠皮肤瘙痒模型的建立及抓痒行为学检测方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-13
动物瘙痒模型的建立及抓痒行为学评价方法 一.摘要 瘙痒是一种皮肤神经官能症疾患。临床上将只有皮肤瘙痒而无原发性皮肤损害者称之为瘙痒症。目前瘙痒的发病机制尚不确定，现有动物模型多只是反映瘙痒的某些特点，以西医指标评判为主。 二.造模动物 现用于制备瘙痒模型的动物有主要有小鼠、大鼠、豚鼠和家兔等，以小鼠、豚鼠更为常用。常选用成年动物，雌雄各半。 三.造模方法 1. 磷酸组胺诱发制备豚鼠瘙痒模型 1.1 原理 组胺受体是一类G蛋白偶联受体，通过激活瞬时感受器电位受体，继而激活一系列的细胞内信号传导，从而导致瘙痒。 1.2 方法 清洁级豚鼠，体质量250-280g，雌雄各半。实验前48 h先将豚鼠右后足背剪毛，脱毛剂脱毛，面积约1cm2。实验当日再将脱毛处皮肤用细砂纸轻轻擦伤，使之发红，以渗血但不出血为度。于创伤处涂抹0.05%的磷酸组胺30μL/只（或0.01%的磷酸组胺50μL/只），30min内豚鼠如不出现瘙痒反应（即舔右后足创伤部位的动作），需再涂抹1次组胺，如此重复操作，直至出现为止。记录涂抹组织胺的次数及累积用量。也可将磷酸组胺换成2%的5-羟色胺10μL，同上法制备豚鼠瘙痒模型。 2. 右旋糖酐诱发制备小鼠瘙痒模型 2.1 原理 右旋糖酐可诱导机体释放内源性组织胺，使小鼠产生皮肤瘙痒。 2.2 方法 SPF级昆明种小鼠，18-21g，雌雄各半。小鼠尾静脉注射0.025%右旋糖酐0.05mL/10g（1.25mg/kg）。以小鼠前爪搔抓头部、后爪搔抓躯干、嘴咬全身各部位作为瘙痒指征，模型成功。观察记录30min内小鼠搔痒次数及搔痒持续时间。 3.氨基吡啶（4-AP）诱发制备小鼠瘙痒模型 3.1 原理 4-AP可促机体肥大细胞释放组胺，导致小鼠发生瘙痒症状。 3.2 方法 小鼠模型：SPF级昆明种小鼠，18-21g，雌雄各半。选择小鼠背尾部作为注射部位，给小鼠背尾部皮下注射0.02%的4-AP溶液，0.1mL/只。小鼠持续的舔体后出现停顿计数1次，记录10min内各小鼠舔体次数。 4. 组胺和4-AP联用诱发制备小鼠瘙痒模型 4.1 原理 组胺受体是一类G蛋白偶联
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植物/藻类热耐受评估技术方案
作者：德尔塔 日期：2022-04-13
随着全球变暖的加剧，世界上越来越多地区的农业都开始面临热胁迫（heat stress）的威胁。因此，评估植物尤其是农作物的热耐受性（heat tolerance）并培育具有较高的热耐受性作物品种成为目前农业应对全球变暖的最紧迫任务之一。同时，温室效应造成的海水升温，也对海洋藻类造成了极大的影响，进而威胁到全球的生态安全。 虽然科学家对植物/藻类热胁迫的研究由来已久，但一直以来缺乏相应的仪器技术方案能够快速、直接、全面地对植物/藻类的热耐受性和热稳定性进行评估。易科泰生态技术有限公司利用国际先进植物热胁迫相关研究仪器技术与最新的科研成果，推出易科泰植物（包括藻类）热耐受性评估技术方案（抗高温胁迫检测技术方案）： 1.基于植物热耐受性/稳定性检测技术和叶绿素荧光技术的植物热耐受性（抗高温胁迫）测量检测技术方案，可选配智能LED培养箱、红外热成像分析等功能单元，全面实验分析植物热耐受性或抗高温胁迫性能 2.基于植物热耐受性/稳定性检测技术和叶绿素荧光技术的藻类热耐受性（抗高温胁迫）测量检测技术方案，并配置藻类培养与在线监测、藻类光合-呼吸测量监测等功能单元 3.大田高通量作物/植物热耐受性（抗高温胁迫）评估技术方案，采用SpectraScan近地遥感与EcoDrone无人机遥感技术，可选配手持式或便携式叶绿素荧光测量及光合仪等 以上功能单元均为国际一流的仪器技术。用户可根据研究需要灵活组配，还可搭配叶面积仪、植物生理生态原位监测系统等常规仪器。每个单元在各种植物藻类胁迫包括热胁迫研究中均有大量的文献与研究成果。感兴趣的老师请与我们联系索取相应研究文献。 下面介绍综合运用这一技术方案在植物/藻类热耐受评估的最新研究成果与应用案例： 一、拟南芥、马齿苋与蓝藻的热耐受评估 捷克帕拉茨基大学的研究人员最早应用这一技术方案对植物和藻类进行热耐受性评估，研究成果发表于2019年《New Phytologist》。热耐受性测量仪
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如何确保Cre-lox小鼠能够删除正确的基因
作者：德尔塔 日期：2022-04-13
许多表达Cre的品系在构建小鼠模型时均有着不明显或未表征的表型。 而其中的一些表型（包括意外表达模式和不可预测的删除效率）可能会让实验人员很难对实验作出解释，由此导致Cre-lox神话破灭。 那么，要如何解决这些问题呢？ 脱靶Cre表达 当Cre不在驱动Cre表达的启动子直接支配下表达在其他组织或器官中时，就会发生脱靶Cre表达。 如果Cre品系发生这种情况，而实验人员又无法发现，那么floxed小鼠基因可能会在意想不到的组织中被删除。 因此：需要充分了解cre品系的表达模式 首先，查阅已发表的文献，了解业界就Cre表达已检查了哪些组织和器官。当研究人员创建新的Cre品系时，势必会在启动子驱动Cre表达所在的组织中寻找Cre表达，但他们通常不会验证其他非靶组织中是否不存在Cre表达。 如果您的品系没有已知的Cre表达信息，则应在表达可见标志物（例如：β-半乳糖苷酶、碱性磷酸酶、荧光素酶、GFP或其他荧光蛋白）的众多Cre报告基因品系中选择一个品系，并将您的cre品系与之进行杂交。 只需一次杂交就能产生携带Cre转基因和Cre报告基因的小鼠，这样，您就可以检查您所希望的细胞中是否表达Cre。 生殖系中的脱靶Cre表达 生殖系中的脱靶Cre表达可能会特别棘手，因为您的鼠群中可能会出现所有细胞中都有完全重组的敲除等位基因的小鼠。 通常，生殖系表达Cre是因为减数分裂后卵母细胞中持续存在Cre RNA或蛋白质。 对于许多Cre品系（不是全部） 使用Cre阳性雄性小鼠进行育种可以避免删除生殖系中loxP等位基因。 可以设计在floxed小鼠外显子上游和下游区域退火的引物，通过PCR轻松监测鼠群的生殖系Cre表达。 这样，如果产生了完整重组敲除等位基因，则可扩增较小产物（图1）。 对所有繁育小鼠进行基因分型，从鼠群中剔除已删除等位基因的所有小鼠。 （图1：位于两个loxP位点两侧的引物（绿色）将会在删除等位基因后扩增获得较小产物） LoxP位点重组效率低下 Cre重组l
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