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Specim高光谱成像技术在植物研究中的应用
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
易科泰Specim高光谱成像技术 ——高光谱成像技术的领导者 Specim IQ手持式高光谱成像仪，集高光谱数据采集、数据处理和处理结果可视化呈现于一体，高光谱成像分析变得简单实用 FX10/FX17轻便型高光谱成像仪，世界上最轻便、成像速度最快的高通量高光谱分析仪器，400-1000nm/900-1700nm全面分析植物/作物光谱反射特性 SisuCHEMA高光谱扫描成像分析系统，高光谱化学组成分析工作站 高光谱成像分析全面解决方案，手持式、台式、样带扫描式、无人机遥感技术，与红外热成像、FluorCam叶绿素荧光成像技术集成方案 1 植物/作物高通量表型成像分析 2 植物/作物蛋白组学、代谢组学研究 3 植物/作物生理生态研究分析 4 种子质量与种子活力检测 5 种质资源筛选 6 作物根系成像分析 7 粮食、中草药品质品种检测 8 植物保护、作物胁迫生理响应研究分析 Specim IQ Specim FX10 Specim FX7 Specim PFD-V10E 波段范围 400-1000nm 400-1000nm 950-1700nm 400-1000nm 光谱分辨率 7nm 5.5nm 8nm 3nm 波段数量 204 224 224 768 空间分辨率 512像素 1024像素 640像素 1775像素 扫描速度(帧频) 330fps 330fps 670fps 100fps 信噪比 大于400:1 600:1 1000:1 680:1 重量 1.3kg 1.26kg 1.56kg 2.7kg 左图：Specim高光谱技术用于研究分析油菜对链格孢菌侵
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免疫组化的实验试剂及实验步骤
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
免疫组化的实验试剂及实验步骤-中国微生物菌种查询网 一、试剂 （1）PBS缓冲液（pH7.2～7.4）：NaCl 137mmol/L，KCl 2.7mmol/L，Na2HPO4 4.3mmol/L， KH2PO4 1.4mmol/L。 （2）0.01mol/L柠檬酸盐缓冲液（CB，pH6.0，1000ml）：柠檬酸三钠 3g，柠檬酸 0.4g。 （3）0.5mol/L EDTA缓冲液（pH8.0）：700ml水中溶解186.1gEDTA·2H2O，用10 mmol/L NaOH调至pH8.0,加水至1000ml。 （4）1mol/L的TBS缓冲液（pH8.0）：在800ml水中溶解121gTris碱，用1N的HCl调至pH8.0,加水至1000ml。 （5）酶消化液： a、0.1%胰蛋白酶液：用0.1%CaCl2(pH7.8) 配制。 b、0.4%胃蛋白酶液：用0.1N的HCl配制。 （6）3%甲醇-H2O2溶液：用30%H2O2和80%甲醇溶液配制。 （7）封裱剂： a 甘油和0.5mmol/L碳酸盐缓冲液（pH9.0～9.5）等量混合； b 油和TBS(或PBS)配制。 （8）TBS/PBS pH9.0～9.5，适用于荧光显微镜标本；pH7.0～7.4适合于光学显微镜标本。 二、操作流程 （1）脱蜡和水化 脱蜡前，应将组织芯片在室温中放置60分钟或60℃恒温箱中烘烤20分钟。 1)组织芯片置于二甲苯中浸泡10分钟，更换二甲苯后再浸泡10分钟； 2)无水乙醇中浸泡5分钟； 3)95%乙醇中浸泡5分钟； 4)70%乙醇中浸泡5分钟； （2）抗原修复 用于福尔马林固定的石蜡包埋组织芯片。 1)抗原热修复 在沸水中加入EDTA（pH8.0）或0.01M枸橼酸钠缓冲溶液（pH6.0）。盖上不锈钢高压锅的盖子，但不进行锁定。将玻片置于金属染色架上，缓慢加压，使玻片在缓冲液中浸泡5分钟，然后将盖子锁定，小阀门将会升起来。10分钟后，去除热源，置入凉水中，当小阀门沉下去后打开盖子。本方法适用于较难检测或核抗原的抗原修复。 2)煮沸热修复 电炉或者水浴锅加热0.01M枸橼酸钠缓冲溶液（pH6.0）至95℃左右，放入组织芯片加热10~15分钟。 3)微波热修复 在微波炉里加热0.01M枸橼酸钠缓冲溶液（pH6.0）至沸腾后将组织芯片放入，断电，间隔5~10分钟，反复1-2次。适用的抗原有：AR，Bax，Bcl-2，C-fos，X-jun，C-kit
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微生物生长检测方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
微生物的生长不同于其他生物的生长，微生物的个体生长在科研上有一定困难，通常情况下也没有实际意义。微生物是以量取胜的，因此，微生物的生长通常指群体的扩增。微生物的生长繁殖是其在内外各种环境因素相互作用下的综合反映。因此生长繁殖情况就可作为研究各种生理生化和遗传等问题的重要指标，同时，微生物在生产实践上的各种应用或是对致病，霉腐微生物的防治都和他们的生长抑制紧密相关。所以有必要介绍一下微生物生长情况的检测方法。既然生长意味着原生质含量的增加，所以测定的方法也都直接或间接的以次为根据，而测定繁殖则都要建立在计数这一基础上。微生物生长的衡量，可以从其重量，体积，密度，浓度，做指标来进行衡量。 微生物生长检测方法-中国微生物菌种查询网 生长量测定法 体积测量法：又称测菌丝浓度法。 通过测定一定体积培养液中所含菌丝的量来反映微生物的生长状况。方法是，取一定量的待测培养液（如10毫升）放在有刻度的离心管中，设定一定的离心时间（如5分钟）和转速（如5000 rpm），离心后，倒出上清夜，测出上清夜体积为v，则菌丝浓度为（10-v）/10。菌丝浓度测定法是大规模工业发酵生产上微生物生长的一个重要监测指标。这种方法比较粗放，简便，快速，但需要设定一致的处理条件，否则偏差很大，由于离心沉淀物中夹杂有一些固体营养物，结果会有一定偏差。 称干重法： 可用离心或过滤法测定。一般干重为湿重的10-20%。在离心法中，将一定体积待测培养液倒入离心管中，设定一定的离心时间和转速，进行离心，并用清水离心洗涤1-5次，进行干燥。干燥可用烘箱在105℃或100℃下烘干，或采用红外线烘干，也可在80℃或40℃下真空干燥，干燥后称重。如用过滤法，丝状真菌可用滤纸过滤，细菌可用醋酸纤维膜等滤膜过滤，过滤后用少量水洗涤，在40℃下进行真空干燥。称干重发法较为烦琐，通常获取的微生物产品为菌体时，常采用这种方法，如活性干酵母（activity dry yeast, ADY）,一些以微生
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发酵液废水处理设备工艺
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
发酵液废水处理项目简介： 发酵工业是以粮食和农副产品为主要原料的加工行业，主要包括柠檬酸、乳酸、味精、白酒、淀粉糖等行业，在众多行业中占据重要地位。但发酵行业所排放的废水污染却制约着发酵行业的可持续发展。该废水主要含有大量有机物如乳酸、柠檬酸、糖类、蛋白质等，具有高浓度、高粘度、难降解、酸性强等特性。因此，开发高效、节能的发酵液废水处理工艺及设备是十分必要的。 发酵液废水处理工艺流程： 设备离心萃取机工作原理： 混合传质过程：轻重两相溶液按一定比例分别进入下部混合室,从转鼓中心入口处由轮式搅拌浆和分散浆混合分散,此时两相液体得到了充分混合,使溶质由一相液体中传递到另一相液体中,从而完成了混合传质过程。 分离过程： 混合液在下转鼓中由筋板带动很快与转鼓同步回转,经环形挡流板借助上转鼓的离心吸力进入上转鼓。在转鼓中由幅板继续带动混合液同步回转,在离心力场下,两相互相分离,比重大的重相液体在向上流动过程中逐步远离转鼓中心而靠向鼓壁;比重小的轻相液体逐步远离鼓壁靠向中心。最终两相液体分别通过各自堰板进入收集室由引管接出机外,完成两相分离过程。 发酵液废水处理工程案例： 所在地：河南 选用机型：CWL650-M型离心萃取机 萃取级数：33级 处理量：56m3/h
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Surfactin菌株产量的定向启动子改造技术应用
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
SrfA是surfactin合成的功能基因，是一个长达26.2 kb大小的基因簇，因此，通过过表达该基因来强化surfactin的合成途径在技术上存在较大难度。该功能基因受到启动子PsrfA的调控，而启动子的强弱可以在一定程度上决定菌株的生产能力，因此，启动子替换被认为是提高原始菌株产脂肽的合理手段。 启动子改造促进产量提升的典型成功案例来自于对天然高产菌株的改造结果。Sun等通过同源重组的方法将B. subtilis fmbR中的启动子PsrfA替换成一个来源于B. subtilis的强诱导型启动子Pspac，得到了重组菌株fmbR-1；在IPTG (300μmol/L)诱导下重组菌株fmbR-1的产量是野生型出发菌株的10倍，产量达到3.86g/L；在无IPTG添加条件下，fmbR-1的产量也可以高达5倍左右。除了替换一些天然强启动子外，还可以替换一些人工合成的启动子。清华大学于慧敏课题组在surfactin的启动子改造方面也获得了显著成果。Song等分析了surfactin高产野生菌株B. subtilis THY-7的转录组数据，发现该菌株控制surfactin合成的原始启动子PsfrA是一个弱启动子，同时也发现了菌株自身的一些强启动子(PgroE、PsacB、PsacP)；令人惊讶的是用强启动子PgroE替换原始启动子PsfrA后，重组菌株不能合成surfactin；随后人工构建了3个杂合型强启动子Pg1、Pg2和Pg3用于改造B. subtilis THY-7菌株。 杂合型启动子Pg1融合了启动子PgroE的–35到–10序列和PsacB的RAT诱导元件序列，重组菌株THY-7/Pg1的产量达到了1.44g/L。杂合型启动子Pg2是在Pg1的基础上，在PgroE的–35到–10序列中间融合了一段lacO操纵子序列，重组菌株THY-7/Pg2的产量为5.98g/L。杂合型启动子Pg3是根据枯草芽胞杆菌的sigma因子70(σA)的–35到–10的保守序列以及点突变Pg2的2个碱基的基础上设计而来的，最终重组菌株THY-7/Pg3在5L发酵罐上(具有泡沫回收装置)发酵32h的产量达到了9.74g/L，表明改造后的菌株具有高产、高生产速率等优良性状。该重组菌株的surfactin产量也是目前报道的最高产量。 但是
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基于胚胎干细胞的同源重组技术
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
基因改造（包括敲除和敲进）小鼠已经成为现代生命科学基础研究和药物研发领域不可或缺的实验动物模型，在生命科学、人类医药和健康研究领域中发挥着重要的作用。今天呢，就给大家介绍最传统最稳定的基因改造技术：基于胚胎干细胞的同源重组技术。 Capecchi和Smithies早在在1989年根据同源重组（homologous recombination）的原理，首次实现了ES的外源基因的定点整合（targeted integration），即基因打靶（gene targeting），如果用外源抗性基因将基因上的一段重要序列替换掉，就成功将目的基因实现了基因敲除（gene knockout），利用这种ES的显微注射就可以制作出基因敲出小鼠（KO Mice: knockout mice）;由于这一工作，Capecchi和Smithies于2007年与Evans分享了诺贝尔医学奖。 图片来源[1] 是不是感觉很高级？那么，问题来了：到底什么是同源重组呢？ 首先，我们先了解一下什么是同源重组技术： 同源重组（homologous recombination）：是指发生在姐妹染色单体（sister chromatin) 之间或同一染色体上含有同源序列的DNA分子之间或分子之内的重新组合。在基因改造小鼠制作过程中，需要针对目的基因两端特异性片段设计带有相同片段的重组载体，将重组载体导入到胚胎干细胞后外源的重组载体与胚胎干细胞中相同的片段会发生同源重组，简言之，就是把想改造的部分各制备一段一模一样的DNA序列（同源臂），然后同源臂之内的部分就会被替换掉了，如图1所示： 图1. 基因敲除鼠制作同源重组原理示意图[2] 了解同源重组技术的原理，那基于该原理，如何制备出基因改造小鼠呢？接下来我们以基因敲除为例，为大家详细介绍一下基因敲除小鼠的制备流程： 图2. 基因敲除小鼠制备过程示意图[3] 01 打靶载体设计与构建 首先，第一步，要进行打靶载体的设计及构建。
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真空干燥箱先抽真空再加热的原因
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
真空干燥箱通常会与真空泵联接使用（见下图），为样品提供加热和真空环境。 WIGGENS系列真空干燥箱安全性能优异，含有易燃性溶剂情况下可以安全进行干燥。真空干燥箱和真空泵，是有严格先后启动顺序。 真空干燥箱为什么必须先抽真空再升温加热，而不是先升温加热再抽真空呢? 1.产品放入真空干燥箱里抽真空是为了去除样品中可以抽去的气体成分。如果先加热产品，气体遇热就会膨胀。对样品将是潜在威胁。真空干燥箱的箱体是密封的，箱体内的气体膨胀，会对箱体产生潜在威胁。 2.如果真空干燥箱按先升温加热再抽真空的程序操作，加热的空气被真空泵抽出去的时候，热量必然会被带到真空泵上去，从而导致真空泵温升过高，使真空泵效率下降。 3.加热后的气体导向真空压力表，真空压力表就会产生温升。如果温升超过了真空压力表规定的使用温度范围，就可能使真空压力表产生示值误差。 真空干燥箱正确的使用方法应该先抽真空再升温加热。待真空干燥箱达到了额定温度后如发现真空度有所下降时再适当加抽一下，这样做对于延长真空干燥箱的使用寿命是有利的。 WIGGENS真空控制器 通过配置真空控制器，用于精确控制真空干燥箱恒定的真空度。真空控制器可以在真空干燥箱到达设定真空度后，关闭真空泵。当真空度降低，需要再次启动真空泵时，真空控制器会再次启动真空泵。 真空控制器不仅可以精确的控制真空干燥箱的真空度。通过控制真空泵的间歇启动，可以有效延长真空泵的使用寿命。
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湿法分离钽铌工艺流程
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
萃取分离工艺过程是分离钽铌有效的方法之一,在整个工艺流程中是非常关键的。通过分离过程能够有效的将其他的金属杂质和钽铌分离开，同时实现钽与铌的萃取分离。因此,这一工艺过程控制运行的好坏,直接关系到zui终的效果。 钽铌湿法萃取分离工艺流程: 整个萃取分离工艺过程分为四段: 1、酸洗段：也叫钨铌分离段,有机相进料,采用分馏萃取过程,用酸洗液将杂质钨从负载有机相中洗掉,贫有机相萃取,以保证钽铌有较高收率。 2、反铌提钽段：就是钽铌分离段,有机相进料,仍采用分馏萃取过程,一般采用试剂硫酸配反铌剂,用精制有机萃取,大程度地保证钽、铌的分离效果。 3、反钽段,采用逆流反萃取过程,用纯水反萃钽。 4、有机再生段：精洗有机段,还是采用逆流反萃取过程,洗液的成分各厂家不一,目的是洗干净贫有机中杂质,避免在铌钽分离段中,有机相带进杂质影响铌产品的质量。 钽铌分离设备萃取槽： 萃取槽也叫混合澄清槽，是发展比较久且技术成熟的一种设备。在萃取分离工业生产过程中的应用也是十分广泛的。近年来，天一萃取技术人员不断研发新技术，在原有成熟技术基础上又做了改进，新的设备技术更加成熟。而且新的萃取槽设备级效率、产能、分离效果等方面都有了大幅度的提高。
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IRES 与 2A peptide在同时表达多个目标基因中的应用比较
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
IRES & 2A peptide大比拼 导读 Hello! 大家好！有一个问题不知道大家考虑过没有：为了研究单个基因的功能机制或实现多基因协同表达, 那这种同时表达多个目标基因该如何实现呢？ 实际上，目前广泛采用多顺反子表达方案,即利用内部核糖体进入位点(internal ribosome entry site,IRES)或自剪切多肽2A(self-cleaving 2A peptide,2A)等元件来连接多个基因,实现在单个载体上表达多个多顺反子的目的。 那么，IRES和2A peptide各有何特点呢？今天我们就来总结一下，让我慢慢道来~ IRES 首先，人们发现，虽然一般真核mRNA的翻译都需要5’帽子来介导核糖体结合，但真核生物和病毒中还存在一些例外情况，例如一些基因5端具有一段较短的RNA序列（约150-250bp），这类RNA序列能折叠成类似于起始tRNA的结构，从而介导核糖体RNA结合，起始蛋白质翻译，这段非翻译RNA被称为内部核糖体进入位点序列（Internal ribosome entry site, IRES）。 IRES元件具有不依赖帽子结构而独立募集核糖体的功能,进而可以启动下游基因的翻译。眼前一亮有没有？ 人们可以利用这个元件进行多顺反子的共表达。 Figure 1.A diagram of the Dicistroviridae RNA genome. Dicistroviruses are naturally dicistronic with two open reading frames that are translated by independent IRESs. The non-structural proteins are translated by the 5＇IRES whereas the structural proteins are translated by the IGR IRES. A genome-linked viral protein (Vpg) and the poly(A) tail (An ) are indicated[1]. 内部核糖体进入位点（IRES）是天然存在于一系列mRNA中的翻译增强子，当存在于目的基因之间时介导翻译的内部起始（图2）。因此，IRES可以通过设计类似于细菌操纵子的多顺反子表达盒，驱动由相同mRNA编码的几个基因的翻译。 处在IRES元件前后的两个基因相对独立,可以表达得到完整的目的
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转座子 Tol2 的转座机制与转座优势详述
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
转基因，岂能不知Tol2 ? Tol2转座子 提及转基因，大家首先映入脑海的是什么呢？转基因大豆？玉米？食用油？（对于那些一个都想不到的孩纸们，小编我只想哭晕在厕所）名词很熟悉，各大超市随处可见，可何为转基因，如何得到转基因产品？今天小编简单来跟大家聊一聊。 所谓转基因，顾名思义，就是外源基因整合进入宿主基因组，目前哺乳动物系统最常用的转基因技术主要包括Sleeping beauty(SB)，PiggyBac(PB)以及Tol2转座子系列，然而，其中的“明星转座子”当属Tol2！ 1、Tol2转座机制 Tol2转座子是Koga等人在日本青鳉鱼中发现，属于hAT转座子家族，全长4682bp，末端分别为17bp和19bp的反向重复序列，包含4个外显子（图1），编码蛋白含有649个氨基酸残基。 Tol2作为一个自主的转座元件，自身可以编码转座酶，且迄今为止，是在脊椎动物中发现的唯一具有自主转座活性的转座子[1]。将转座酶编码区序列部分缺失， 但保留转座酶识别和结合区域序列，Tol2便无法发生自主转座（图1）。 图1 Tol2转座子序列[1] 利用这一特性，可以以外源基因替代转座酶编码序列，构建Tol2转座载体，与转座酶cDNA载体质粒共转入宿主细胞，外源基因便会以“剪切-粘贴”的方式整合入基因组中且不会引起任何靶位点的重排和修饰[2], 如图2. 图2 Tol2转座机制[2] 2、Tol2应用 Tol2转座子具有不定向性，即在基因组中是随机插入，并无序列特异性，那既然Tol2都如此任性了，留之何用呢？ 起初，科学家们利用这一特性，将其作为基因捕获和增强子捕获的工具以进行突变体筛选，从而确定机体发育过程中重要功能基因的突变体。但随着科学技术的不断进步，自动化的基因高通量筛选鉴定早已不在话下，以为tol2会就此淘汰？不存在的！如今的tol2转座子依旧在建立稳定基因表达细胞系和转基因大、小鼠的制备等方面发挥着其独特的技术优势。 当然，实践是检验真理的唯一标准，2009年，Zoltán Ivics等[3]就为大
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百奥赛图带您解读B-hCTLA4/hOX40双免疫检查点人源化小鼠
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
双剑合璧的肿瘤药效检测利器——B-hCTLA4/hOX40双免疫检查点人源化小鼠 导读 随着肿瘤免疫疗法应用如火如荼地展开，不同抗体药物之间的联合用药开始被大家关注。而抗体药物联用的药效究竟如何？探究的过程中难免要用到双免疫检查点的人源化小鼠。今天就为大家介绍一种双免疫检查点人源化小鼠——B-hCTLA4/hOX40小鼠。 基因背景 细胞毒T淋巴细胞相关抗原4（CTLA4, cytotoxic T-lymphocyte-associated protein 4），又称CD152， 在T细胞的激活中起重要调节作用。CTLA4是第一个临床关注的免疫靶点，在免疫应答的负性调控方面发挥着重要作用。CTLA4抗体也是首个FDA批准用于**晚期黑色素瘤的抗体药物。 图1. CTLA4及其抗体在肿瘤免疫**过程中的作用[1] OX40，又名Tnfrsf4（Tumor necrosis factor receptor superfamily, member 4），主要在表达于激活的CD4+和CD8+T细胞表面，和OX40配体结合可以刺激CD8+T细胞的活化。通过OX40/OX40L信号的共激活效应，T细胞的功能，包括细胞因子的产生、增殖和T细胞的存活等作用被进一步加强。OX40抗体激活剂（Agonist）可降低肿瘤内Tregs，提高抗肿瘤活性。 图2. OX40促进T细胞增殖过程[2] 百奥赛图利用自主开发的B-hCTLA4/hOX40双人源化小鼠，为研究该靶点抗体药物的体内药效验证提供了有效的模型和有力的工具！ 基本信息 蛋白表达分析 图3. B-hCTLA4/hOX40人源化小鼠脾细胞活化及流式检测 结果显示：在C57BL/6小鼠中可检测到mCTLA4细胞。在B-hCTLA4/hOX40纯合鼠中，可检测到hCTLA4细胞。 图4. B-hCTLA4/hOX40人源化小鼠脾细胞活化及流式检测 结果显示：在C57BL/6小鼠中可检测到mOX40+细胞。在B-hCTLA4/hOX40纯合鼠中，可检测到hOX40+细胞。 参考资料： 1. https://gss3.bdstatic.com/7Po3dSag_xI4khGkpoWK1HF6hhy/baike/c0%3Dbaike150%2C5%2C5%2C150%2C50/sign=3cf5552b865494ee932f074b4c9c8b9b/241f95cad1c8a7860
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肿瘤移植模型——人源肿瘤细胞系异种移植CDX与人源肿瘤组织来源移植瘤PDX
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
问：什么是肿瘤移植模型？ 答：人的肿瘤移植到小鼠体内构建的人源化肿瘤模型 问：这种模型意义在哪？ 答：筛药，为人民服务。（请为伟大的小鼠致敬！） 问：为啥要构建肿瘤模型，不能跳过直接上临床？不也可以筛药吗？ 答：嗯，好主意，要不你先来好不好？ ....... 问：什么是CDX , PDX? 答：急什么，认真听小编讲就是了。 CDX 人源肿瘤细胞系异种移植（cell derived xenograft, CDX），即将体外传代培养的肿瘤细胞接种至免疫缺陷小鼠，接种部位常为皮下，静脉或原位。 话说早在20世纪90年代早期，美国国立癌症研究所（National Cancer Institute, NCI)就 依据来源于9种不同类型肿瘤（脑，结肠癌，白血病，肺，黑素瘤、卵巢癌、肾癌、乳腺癌和前列腺癌) 的60位癌症患者肿瘤细胞系，引入了一种"disease-oriented"的药物筛选策略，简单来说，就是先用人肿瘤细胞系进行高通量体外药物筛选，再用CDX模型进行体内验证，【Cancer Cell Lines for Drug Discovery and Development 】 由于CDX模型细胞系容易获得，有大量已发表的文献关于其基因组学、细胞功能学及药效反应的数据可供参考，建模成本低等优势，【PDX模型与肿瘤个体化用药指导】在当时可以说是风靡各大实验室。 但是2016年，NCI却决定从其药筛系统中让已经使用了25年的NCI60细胞系“退休！ 为什么会发生这种转变？！ 原来，研究者逐渐发现人源肿瘤细胞系经长期体外培养后， 其肿瘤细胞生物学行为及基因谱表达水平、 肿瘤异质性都与原始肿瘤组织存在较大的差异， 从而在预测临床药效方面不甚理想。有研究表明， 经此模型鉴定筛选的药物仅约 1/3在二期临床试验中验证有效【Relationships between drug activity in NCI preclinical in vitro and in vivo models and early clinical trials.】，【PDX 模型在肿瘤转化医学中的应用与发展】 不过嘛，长江后浪推前浪，退休了CDX，就会有更优秀的肿瘤
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单细胞分离策略的优缺点
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
据美国能源部微生物基因组学计划的主管Tanja Woyke介绍，研究人员使用几种方法分离单细胞，它们各有优缺点。 Quake曾使用微流体方法来分离一种称为TM7的无法培养微生物1。TM7是杆状的，于是Quake及其团队专门捕获口腔微生物群落中的杆状细菌。随后他们通过核糖体RNA来追踪所要的细胞。在35个分离的杆状细菌中，4个都证明是TM7，他们对其中一个进行测序。 Woyke认为，微流体方法有两个主要优势。第一，用户能够观察他们正在分离的细胞，这让他们能够选择特定的形态或表型，并将此信息与基因型相关联。第二是扩增效率。单拷贝的细菌基因组显然不够用来测序，因此需要全基因组扩增。但并非所有片段都能同等扩增，一些可能会丢失。“一些研究表明，如果反应体积越小，那么单细胞基因组的回收就越好，覆盖也更加均一，”Woyke说。 尽管如此，微流体策略通常是低通量的，且只有少数实验室能够接触到这种设备。一个商业化的选择是Fluidigm的C1™单细胞自动制备系统，这个微流体系统能够自动化分离和制备96个单细胞的测序文库。不过，它只适用于哺乳动物细胞，目前不支持细菌分离。 另一种单细胞分离方法是显微操作，其中研究人员使用操纵杆驱动的玻璃毛细管来挑选单个细胞，并依次转移到目的容器中。 Woyke表示，她偶尔会使用这种方法，主要是在处理低复杂度的样品时，在2010年发表的一篇文章中，她和她的同事对一种昆虫的细菌共生体进行测序，根据它独特的形态将其与另一种共生体分离2。“这就是主要优势，”Woyke说。“你可以看到细胞。”不过，显微操作的通量也非常低。若细胞能游动或有粘性，则很棘手。
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为什么采用剥夺杆式睡眠剥夺
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
为什么基于饲养笼式采用剥夺杆式睡眠剥夺 一．为什么要研究睡眠 睡眠是维持身体，心理和情绪健康的重要生理过程。因此，睡眠剥夺(SD)与不良后果相关并增加焦虑，免疫和认知障碍的风险。SD的特征在于增加的能量消耗响应和恢复后的睡眠反弹，其受到稳态过程的调节，而稳态过程又受到压力的影响。 二．对睡眠稳态进行评估的策略 睡眠剥夺(SD)是一种常用的方法策略，可以对睡眠稳态进行差异评佑，从而导致“睡眠债务”。 三．为什么采用剥夺杆式睡眠剥夺 睡眠剥夺的方法有很多种，包括慢速旋转轮睡眠剥夺、水平台睡眠剥夺、跑步机式睡眠剥夺等。大多数这些技术都是压力诱导，即使长期适应这种方法后压力水平可能会缓解。当长期睡眠剥夺后，动物表现出明确的生理性睡眠剥夺综合症，显著干扰自发行为。基于以上原因，我们实施了一种新型睡眠剥夺仪器，在标准实验室笼中采用间隙性的剥夺杆扫描进行触觉刺激来干扰自由行为的小鼠。该方法防止了人类接触和干预对睡眠剥夺的影响，并且在整个睡眠剥夺过程期间最小化身体活动。此外，该程序准确且可预测。 此外，用于记录脑电图(EEG)和肌电图(EMG)的束缚电缆可能导致持续的压力。实际上，最近的一项研究表明，电缆重量和柔韧性可能会影响小鼠的睡眠量和模式。遥测系统的发展不仅提供了无压力环境，而且提供了研究社交互动对小鼠睡眠影响的机会。 四．为什么基于标准实验室饲养笼 实验室动物从小都是在饲养笼中长大，基于实验室饲养笼使得动物能够保持在正常的社会环境中实施了一种相对无压力的方法来诱导动物睡眠剥夺模型，从而避免了外界环境及其他因素对睡眠剥夺的影响。 此外，基于饲养笼式的睡眠剥夺仪易于组装和清洗，设计更加地人性化。
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蛋白质检测和定量方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
蛋白质检测和定量方法 蛋白质定量方法最早出现在20世纪50年代早期，当时物理学家和化学家进入生物学领域，并将他们的技术应用于蛋白质的分析和测量。 Lowry蛋白质分析是第一个确定溶液中蛋白质总水平的生化分析。不久之后，该测定通过其他测量方法引入，包括紫外（UV）系统和氨基酸分析。所有这些方法都能够表征水中的蛋白质或非常温和的缓冲溶液。 随着蛋白质研究变得更加复杂，定量方法开始发展。 1976年，布拉德福德分析是在天然溶液中研究更多蛋白质并使用清洁剂或其他还原剂来保持蛋白质可溶性的垫脚石。然后将Lowry试验再培养至二辛可宁酸（BCA）测定（也称为Smith测定），这使其更适合用于蛋白质研究的溶剂中。 然而，蛋白质定量的最新创新已存在超过25年。小编将概述当前的蛋白质检测和定量方法，并讨论一种新的基于红外的技术，用于快速准确地测量痕量蛋白质。 当前现状 用于蛋白质和/或肽测定的一些最常用的方法包括氨基酸分析，紫外（UV）光谱，比色测定，十二烷基硫酸钠 -聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和光密度测定，基于免疫学的方法和质谱法。 氨基酸分析 氨基酸分析测量蛋白质中每种氨基酸的量，并被认为是蛋白质定量的黄金标准方法。该方法可以检测大多数氨基酸，检测范围为1 mg苯基硫代氨基甲酰基（PTC）和5 mg至10 mg茚三酮。该方法不像其他测定那样广泛使用，因为它昂贵，缓慢且需要技术专业知识。因此，氨基酸分析实验室经常被用作核心设施。 紫外光谱法 紫外光谱法测量样品中芳香族氨基酸的吸光度，是用于蛋白质检测和定量的最常用方法。可以测量任何类型的蛋白质，范围从205nm处的1mg至100mg和280nm处的20mg至1,000mg。紫外分光光度计相对便宜且易于使用。 比色分析法 通过显色试剂测定蛋白质浓度的比色测定。最常见的比色测定是染料结合和荧光方法。荧光方法包括NanoOrange试剂盒（在570nm处10ng至10mg）和CBQCA（在550nm处10ng至150mg），其通常比染料结合方法更敏感，包
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