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波前传感器的技术革命 -----四波剪切干涉技术
作者：德尔塔 日期：2022-04-25
波前传感器的技术革命 -----四波剪切干涉技术 文：陈昌营，上海昊量光电设备有限公司技术工程师 摘 要： 波前传感器(波前分析仪)是自适应光学系统最重要的组成部件之一，决定了自适应光学系统最终的调制结果。同时波前探测器在激光、天文、显微、眼科等复杂自适应光学系统的波前像差检测，虹膜定位像差引导，大口径高精度光学元器件检测，平行光管/望远镜系统的检测与装调，红外、近红外探测，激光光束性能、波前像差、M^2、强度的检测，高精密光学元器件表面质量的检测等领域发挥着越来越重要的作用。法国PHASICS公司研发团队，突破传统技术的壁垒，成功研发出了世界上分辨率最高的四波剪切干涉技术波前探测器。本文简单介绍了波前传感器的原理和典型应用，以及四波剪切干涉技术原理，比较了剪切干涉技术的波前分析仪与传统哈特曼传感器的特点。 引 言： （Wave Front Sensor），按照其技术发展的历史可以分为三个阶段：第一阶段，1900年德国科学家哈特曼采用挖孔的光阑技术制作完成了世界上第一个可以用于检测波前的传感器。第二阶段，1971年R.K.Shack采用为透镜阵列研发成功了精度更高的夏克-哈特曼波前分析仪。2000年法国Phasics研发团队采用四波剪切干涉技术成功研发了基于技术（4-Wave Lateral Shearing Interferometry），该波前探测器具有高分辨率（400X300）、高动态范围（500 um）、消色差、高灵敏度、高相对精度（2nm RMS）、无需校正、体积小、操作简便等特点。上海昊量光电设备有限公司代理的法国phasics波前相差仪可以实时测量成像系统瞳面波前误差，然后将这些测量数据转换成自适光学系统的控制信号，并对成像系统的光学特性进行实时控制，实时校正入射光束波前变形，从而补偿又大气湍流引起的波前畸变，使物镜得到接近衍射极限的目标像。 四波剪切干涉技术原理： 剪切干涉技术基本原理是将待检测的激光波前分成两束，其中的一束相对于另一束横向产生一些错位，两束错位的光波各自保持完整的待测
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冷冻饮品中大肠埃希氏菌O157的检测
作者：德尔塔 日期：2022-04-25
夏天到了，全国各地又进入了“烧烤模式”。4 月 23 日，广州入夏；5 月 14 日，北京入夏；5 月 29 日，上海入夏。下图为中国气象网 8 月 3 日发布的一张高温区域图，红色代表的高温区域占据相当大的比例。 在炎炎夏日中，美味而且清凉的冷饮，可以让大家忘却酷暑炎热。市场上各种品牌的冰淇淋、冰棒、汽水、果汁等产品琳琅满目，极大地丰富了人民的物质生活。但是冷饮的保存需要注意，通常都需要 4℃ 冷藏保存，部分冰品还需要 -20℃ 低温保存。这些冷饮一旦融化后再复冻，里面就有可能会有细菌繁殖。 中国国家标准《GB 2759.1-2003 冷冻饮品卫生标准》对微生物含量做出了具体要求，下表为具体信息： 项目 菌落总数 （cfu/mL） 大肠菌群 （MPN/100mL） 致病菌 含乳蛋白冷冻饮品 ≤ 25000 ≤ 450 不得检出 含豆类冷冻饮品 ≤ 20000 ≤ 450 不得检出 含淀粉或果类冷冻饮品 ≤ 3000 ≤ 100 不得检出 食用冰块 ≤ 100 ≤ 6 不得检出 大肠埃希氏菌（E. coli）通常被称为大肠杆菌，这些细菌常寄居在人和动物的消化道，并随粪便排出体外，广泛分布在水和土壤中。大多数肠道杆菌属于正常菌群，当机体免疫力降低或侵入肠道外组织时，成为条件致病菌而引起疾病。肠出血性大肠杆菌（EHEC）是能引起人的出血性腹泻和肠炎的一群大肠埃希氏菌。以 O157:H7 血清型为代表菌株。根据相关标准，大肠埃希氏菌 O157 在冷冻饮品中不得检出。 根据相应标准，RephiLe 特别推荐下面的冷冻饮品中大肠埃希氏菌 O157 检测解决方案。检测方案按照国际标准在固体培养基表面分离得到的典型菌落，该菌落能产品吲哚反应以及使 O157 血清产生凝集： 一、仪器 干热灭菌箱和湿
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质粒DNA的大量提取、纯化及棉花的遗传转化
作者：德尔塔 日期：2022-04-25
实验试剂 1. STE [0.1 mol/L NaCI、10 mmol/L Tris-HCl (pH 8.0), 1 mmol/LEDTA (pH 8.0)] 2. 溶液I [50 mmol/L蔗糖、25 mmol/L Tris-HCl (pH 8.0), 10 mmol/L EDTA (pH8.0)] 3. 溶液II (0.4 mol/L NaOH和2%SDS等量混匀) 4. 溶液III (3 mol/L Kac, pH 4.8) 5. 异丙醇 6. 4 mol/L LiCI 7. RNase 8. 苯酚、酚-氯仿、氯仿 9. 乙醇 实验设备 1. 摇床 2. 制冰机 3. 高速离心机 4. 水浴锅 5. 超净工作台 6. 玻璃毛细管 7. 微量注射器 实验材料 棉花，转化农杆菌菌株 实验步骤 1. 37℃, 250 rpm摇菌500 ml。 2. 5000 × g离心5 min以收集菌体，用50 ml STE洗涤菌体一次。 3. 加入溶液I 20 ml悬浮菌体。 4. 加溶液II40 ml，轻轻将离心管颠倒几次，置冰浴20 min。 5. 加预冷的溶液III30 ml，将离心管颠倒几次，置冰浴10 min以上。 6. 10000 × g离心15 mm，取上清液加入0.6倍体积的的异丙醇，充分混匀后室温放置10 min以上。 7. 10000 × g离心10 min，弃上清。待沉淀干燥后用350ul水溶解，加350 ul 4 mol/L LiCI，混匀后室温放置10 min以上。 8. 10000 × g离心5 min，取上清液加入RNase至终浓度为100 ug/ml，37℃保温2h。 9. 用苯酚、酚-氯仿、氯仿各抽提一次。上清加0.1倍体积的3 mol/L NaAc (pH5.2)及2倍体积的无水乙醇。 10. 离心收集DNA沉淀，70%乙醇洗涤一次。干燥后溶于TE中备用。 11. 棉花的遗传转化:大量的质粒，用无菌水稀释成2 mg/ml的DNA溶液进行子房注射。注射在超净工作台上进行，注射针是玻璃毛细管，顶端直径约为0.1mm。将毛细管另一端紧紧套入10-20ul的微量注射器针头，吸取被注射的DNA样品6-12ul。注射时，将针头对准子房伸出的花丝部分进行。每个子房约注射0.2ulDNA。
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小鼠心脏组织蛋白样品的蛋白质组学分析
作者：德尔塔 日期：2022-04-25
实验步骤 1. 蛋白质双向电泳 1) 第一向固相pH梯度等电聚焦电泳 a. 上样：第一向等电聚焦采用胶内加样的方法进行。精确吸取一定量的蛋白样品(银染样品的蛋白上样量为140 ug计，考染样品为1.3 mg)加入重泡涨液(8 mol/L尿素，2%CHAPS，痕量滨酚蓝，20 mmol/L DTT，0.5 % IPG buffer)，使终体积达到350ul。混匀后均匀加在IPG胶条holder的正、负极之间。将预制IPG胶条(pH 3 -10 NL)除去保护膜，胶面向下，覆于holder中的样品之上；慢慢下压胶条，并前后移动，避免生成气泡。在胶条上方均匀封以1 ml覆盖油，盖上盖子。 b. 等电聚焦：将装有样品和IPG胶条的strip holder置一向电泳仪(IPGphorTM Isoelectric Focusing System)上进行等电聚焦。等电聚焦参数：0V电压下泡涨3h，30V电压下泡涨10 h，500 V电压下电泳0.5 h，2000V电压下电泳0.5 h，5000 V电压下电泳0.5 h，8000 V电压下电压20 h。 c. 胶条的平衡：第一向电泳结束后，取出IPG胶条平衡两次，每次15 min。平衡缓冲液(50 mol/L Tris buffer pH 8.8，6 mol/L尿素，30甘油，0.8 g澳酚蓝，20 mmol/L DTT，含2 % (w/v) SDS)可减少电内渗，有利于蛋白质从第一向转移到第二向。在第二步平衡中用100mmol/L碘乙酞胺代替DTT以除去第一步平衡时的DTT。平衡后的IPG胶条沿边缘用滤纸吸去多余的平衡液。 2) 第二向垂直SDS-PAGE 根据IPG conversion Kit的体积，配制大小为200 mmX200 mmX 1mm，浓度为12.5%T，3.3%C的均匀胶。将平衡好的IPG胶条移至凝胶上方，用0.5%琼脂糖电泳缓冲液封闭。电泳的缓冲液系统为Tris-Glycine-SDS系统(500 ml，SX，7.5 g Tris，2.5 g SDS，36 g Glycine)。一向胶条和二向胶接触面避免气泡产生；封胶温度不能过高，封胶时不要引入气泡。 电泳参数设置：14-15℃恒温下，以每胶条计 20 mA恒流电泳40 min 30 mA恒流电泳至澳酚蓝电泳到底部。 2. 染色 1) 银染法：将二向电泳完成后的SDS-PAGE转移至固定液(40%无水乙醇，10%冰醋酸)中，固定30 min；弃固定
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小鼠角质细胞的分离和培养
作者：德尔塔 日期：2022-04-25
实验试剂 HBSS： NaCl 8g/L KCl 400mg/L KH2PO4 60mg/L 无水Na2PO4 47.86mg/L 无水葡萄糖 1000mg/L NaHCO3 350mg/L 实验材料 妊娠期BALB/c小鼠 实验步骤 1. 将1~2天龄新生裸鼠窒息后，置于培养皿中，用1%碘聚乙烯吡咯烷酮液洗净裸鼠，流水彻底冲洗，然后用70%乙醇洗两次。小鼠应立即使用，若待处理的小鼠数量较多，可置冰上30min。 2. 去除小鼠的四肢和尾巴。 3. 将小鼠从尾巴至鼻子的皮肤作一简单切口，用大鼠牙齿镊轻轻将整个身体的皮肤剥下，用一把镊子夹住身体，另一把镊子拉开皮肤。 4. 将剥下的皮肤组织置于放在冰上的无菌培养皿表面，直至所有的皮肤收集完毕。 5. 用2把大鼠牙齿钳夹住皮肤组织，在含2.5%胰蛋白酶的HBSS无菌培养皿中漂洗皮肤组织（真皮组织在下），然后置4oC过夜。表皮不应淹没在胰蛋白酶液中。 6. 从胰蛋白酶处理液中取出组织，将表皮面朝下置于干燥的无菌细胞培养皿表面。表皮易于贴附于塑料上，真皮组织用组织钳扯去，鼠龄与此有影响，天龄越大，去其表皮越困难。 7. 用剪刀小心地将表皮残留物剪碎，置于含“常规”培养液（MEM含10%FCS，100IU/ml青霉素，100ug/ml链霉素，2~4mmol/L L-谷氨酰胺；每5只小鼠皮肤用10ml）的无菌烧瓶中，磁力搅拌器37oC剧烈搅拌45min。 8. 用4层无菌Nitex纱布（16um孔，Martin提供）过滤液体。当其他细胞通过时角质层细胞留在纱布的表面。 9. 用培养瓶将细胞洗下，培养基的用量约为一块皮肤10ml，将细胞接种于塑料细胞培养瓶中或玻璃盖玻片上，37oC培养4~12h。 10. 4~12h后观察培养皿表面的细胞群。 11. 将细胞转移至低钙培养液，角质细胞将开始繁殖。这种转移防止细胞的分层。低钙液由MEM（无钙）和10%螯合的FCS（同样含有正常水平的青霉素、链霉素）组成。螯合的血清按下法准备：每50ml血清需20g树脂，Chelex 100（Bio-Rad）。将树脂置于水中，40g/L，pH约为7.4，放置滤纸于漏斗上，过滤树脂。加入树脂于FCS中，搅拌60min。接着过滤使血清变得清亮，再用0.45ug
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葡萄糖在小鼠克隆胚胎发育中的作用
作者：德尔塔 日期：2022-04-25
实验步骤 1. 克隆胚胎制备和胚胎培养 卵母细胞在含有5.5mM葡萄糖的CZB培养液中培养。用含有5.5mM葡萄糖和2.5ug/ml 细胞松弛素B的HEPES-CZB液(HCZB)作为工作液，卵母细胞在此液中被去掉纺锤体-染色体复合体；用卵丘细胞作为核供体。用注射针反复吸入、吹出卵丘细胞，以除去其细胞膜和大部分细胞质，然后用注射针将裸卵的核注入去除纺锤体-染色体复合体的卵母细胞中。 孤雌胚胎所用的卵母细胞与用于制备核移植胚胎的卵母细胞来源相同。 孤雌胚胎和核移植胚胎用不含Ca2 、却含10mM Sr2 和细胞松弛素B的CZB培养液进行激活。所有步骤中都不使用二甲基亚砜，以避免其对克隆胚胎造成的不受控制的影响。单细胞正常受精胚胎是通过超排的(B6D2)F1雌鼠和(B6D2)F1雄鼠交配获得的。 所有胚胎用Whitten 培养液(MW)培养。之所以选择此培养液是因为利用(B6D2)F1小鼠卵母细胞制备的受精胚胎、孤雌胚胎和核移植胚胎在此种培养液中更利于它们除了二细胞期之外的胚胎发育。对正常胚胎发育有更好的促进作用的其他培养液，对克隆胚胎却有阻滞作用，所以不被采用。 2. 分析葡萄糖代谢 胚胎在WM中过夜培养，到单细胞后期或二细胞中期时用来进行葡萄糖代谢分析。我们利用[1-14C]葡萄糖、[6-14C]葡萄糖、[5-3H]葡萄糖，来分析葡萄糖代谢情况。使用[1-14C]葡萄糖时，14 CO2 经过戊糖磷酸途径或三羧酸循环释放。使用[6-14C]葡萄糖时，14 CO2仅通过三羧酸循环释放。使用[5-3H]葡萄糖时，3 H2O 仅通过糖酵解途径释放。14CO2和3H2O用一种装置收集然后通过一种方法进行量化。通过比较三种不同位置同位素标记的葡萄糖的代谢率，可以确定不同途径的代谢率。为了准备用于测量代谢的培养液，我们在真空条件下冷冻适量的[1-14C]葡萄糖、[6-14C]葡萄糖、[5-3H]葡萄糖，然后用不含葡萄糖的HCZB进行溶解。用冷的非放射性葡萄糖将溶液中葡萄糖的含量增加至4mM。 根据放射性物质的放射性强弱，将5-20枚胚胎放到1ml注射器的空心活塞中。注射针管中放有600ul 0
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移液器的来源及工作原理
作者：德尔塔 日期：2022-04-25
在遥远的一百多年前，实验室里的精英们开始用移液管来转移液体。所谓移液管，就是一根空心的玻璃管，上面标着一到N个刻度。把这根玻璃管插到液体里面，在管子的另一头用嘴（刚开始，我们的精英们只能用他们宝贵的嘴巴来干这个活）或洗耳球把液体吸到管子里，而上面的刻度则告诉我们里面有多少液体了。在吸满我们需要的量之后，用拇指把吸液的这一头堵上，然后把管子放到另外一个容器里，让管子里的液体流入这第二个容器中。这样我们转移液体的任务就搞定了！ 然而随着社会的进步，精英们发现这个管子实在不好用，又累又慢，而且还很不好清洗。于是偷懒的念头在脑子里积累，积累，然后爆发——于是移液器诞生了！也就是说，移液器和移液管的作用相同，仅有的几个区别是：一，准确性更高（基于和旧移液管相比，因为有些新移液管中的精英其准确性也是很不错的）；二，效率更高（易操作）；三，结构更复杂（移液管就是一根管子，而移液器则是由数十个部件组成）；四，功能更强大（除了移液外，很多移液器还有很多功能）；五，也是最重要的一点，价格更高！（高科技的价格肯定会高点的。） 移液器的工作原理 对于所谓的精密仪器，大多时候总要认真的介绍一下其深奥的原理，但是移液器的原理很简单——就是通过弹簧的伸缩力量使活塞上下活动，排出或吸取液体。 一般说来，移液器分为两种，一种是空气置换式；另一种是外置活塞式，常被作为特殊移液器，应用范围比较窄，这种类型的移液器可以用于移取粘稠度高的样品。 所谓空气置换式，就是下压活塞，把移液器下端内部的空气压出，之后在活塞上移的时候，移液器下端内部的气压就小于外部气压，这样在外部气压的作用下就可以把液体吸上来了。简而言之，就是空气出去，液体进来！ 而所谓外置活塞式，其实和针筒的道理一模一样，见过针筒的工作过程，也就大概能明白外置活塞式的原理了。有关移液器的工作原理有兴趣的用户可以查阅莱贝以前的文章，莱贝在《移液器选择和使用——移液器
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解析顶空进样器的工作原理
作者：德尔塔 日期：2022-04-25
顶空进样器是中一种方便快捷的样品前处理方法，其原理是将待测样品置入一密闭的容器中，通过加热升温使挥发性组分从样品基体中挥发出来，在气液（或气固）两相中达到平衡，直接抽取顶部气体进行色谱分析，从而检验样品中挥发性组分的成分和含量。使用技术可以免除冗长繁琐的样品前处理过程，避免有机溶剂对分析造成的干扰、减少对及进样口的污染。该仪器可以和国内外各种型号的气相色谱仪相连接。 顶空进样器概述 顶空进样器对于其它样品处理技术来讲，它消除了复杂的容易产生错误的步骤。能使您在较短的时间内获得大量有用信息。 顶空进样器特点 目前顶空分析方法有手工方式、气密针进样方式、平衡式加压系统、定量环加压系统、静态-动态补偿式这五种进样方式。下面就是这几种进样方式各自的特点。 一、手工方式（烘箱或水浴法）Manual Injection 1）样品加热后达到热平衡状态 2）用注射器将样品抽出 3）迅速拿到气相上进样分析 二、气密针进样方式Gas-Tight Syringe Injection 1）样品加热后达到热平衡状态 2）通过可加热气密针将样品抽出 3）移动到气相进样分析 三、平衡式加压系统Balanced-Pressure System 1）样品加热后达到热平衡状态 2）用导管通入载气加压 3）样品随载气一起进样 四、定量环加压系统Pressure-Loop System 1）样品加热后达到热平衡状态 2）加压将样品引入定量环 3）阀将样品打入传输通道进样 五、静态-动态补偿式——AutoHS顶空进样器 5.1、采用专利的技术为样品提取提供了更多的手段。 5.1.2、吹扫模式 5.1.3、恒定模式 5.1.4、多次顶空模式 5.1.5、温度渐进模式
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土地面积测量出现面积误差的处理方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-25
在基础土地利用信息系统的数据库中存储的海量多时态土地利用数据，一般通过地图数字化方式获取，而数字化数据的精度与质量直接影响系统应用分析的可靠性和应用目标的实现，同时影响土地利用的日常管理。在地图数字化(扫描矢量化)以及GIS数据采集和建库过程中，由于土地面积测量仪系统误差和数据采集时的误差导致土地利用面积与法律登记面积有差异。而已经进行土地登记过的面积也是通过一定的测量方法得到的，面积值也存在误差。如何消除或减弱这些误差的影响，保证土地利用面积的准确性，是GIS系统数据建库中的关键问题之一。长春市国土局在进行土地利用数据GIS建库时，遇到利用数字化方法获取地块的土地面积与法律登记面积存在差异问题，若不进行误差处理会给日常的管理工作带来一定的影响，不能充分发挥GIS的作用。针对这个问题，本文提出面积处理的方法并编制面积误差处理软件，从而保证建库数据的精度与质量。 面积误差处理： 1.独立地块的面积平差对于某些独立和单个地块，由于地块间相互不关联，可直接采用建立条件方程进行平差。 2. 多地块面积的整体平差处理在土地利用面积数字化过程中，一个区域(街坊)是由许多相邻地块构成的、没有缝隙的、相对独立的区域的集合。由于多个地块的存在，就产生了多个面积误差条件方程，并且地块间是相互关联的。若每一地块都进行单独平差，不考虑其相关性，平差后的结果是相邻地块间边界不完全重合，从而有缝隙或交叉，平差计算无使用价值，且破坏了相邻地块之间的相邻关系，其结果不能送入GIS库。 因此必须进行多地块面积整体处理，组成条件方程统一进行平差，通过平差计算求出各地块顶点数字化坐标观测值的改正数及相应的平差值。当观测数据量特别多时，可采用地块面积分级平差处理。 针对长春市国土局土地利用数据GIS建库时数字化地块的面积与法律登记面积之间存在差异的问题进行讨论，并建立面积误差的平差模型，通过实例计算与分析表明，建立
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旋转圆盘电极应用研究（一）
作者：德尔塔 日期：2022-04-25
旋转圆盘电极应用研究（一） PINE旋转圆盘电极的经典应用：氧还原反应（Oxygen Reduction Reaction, ORR）几乎是所有燃料电池、金属-空气电池的**阴极反应，也是许多金属腐蚀过程中的主要反应。 为什么旋转圆盘电极可以应用于ORR 旋转圆盘电极的优点就是电极溶液界面反应物的扩散层厚度与电极转速之间有着明确的函数应用，因此可以通过系统的改变反应的转速来调控反应物、产物的传质。对光滑电极上发生的可逆性不好的氧还原反应，可以通过简单的数学处理，完全排除传质的影响从而获得电极对反应的内在动力学参数。 Pine旋转圆盘电极氧还原研究应用案例 Angew. Chem. Int. Ed，Sulfur and Nitrogen Dual-Doped Mesoporous Graphene Electrocatalyst for Oxygen Reduction with Synergistically Enhanced Performance； Angew. Chem. Int. Ed，Nitrogen-Doped Ordered Mesoporous Graphitic Arrays with High Electrocatalytic Activity for Oxygen Reduction； NATURE MATERIALS，Co3O4 nanocrystals on graphene as a synergistic catalyst for oxygen reduction reaction； ACS Applied Materials & Interfaces，NiCo2S4@graphene as a Bifunctional Electrocatalyst for Oxygen Reduction and Evolution Reactions； Angew. Chem. Int. Ed， Nitrogen-Doped Carbon Nanosheets with Size-Defined Mesopores as Highly Efficient Metal-Free Catalyst for the Oxygen Reduction; Elsevier, An Efficient Bi-functional Electrocatalyst Based on Strongly Coupled CoFe2O4/Carbon Nanotubes Hybrid for Oxygen Reduction and Oxygen Evolution; pine旋转圆盘电极用于多铜氧化酶催化氧还原动力学研究; pine旋转圆盘电极用于金属掺杂聚吡咯碳化物PPY-M 的制备及其氧还原反应电催化活性的研究; pine旋转圆盘电极用于石墨烯的功能化修饰及其在氧还原电催化中的应用研究； pine旋转圆盘电极用于碳基无金属
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土壤养分速测仪的选用技巧
作者：德尔塔 日期：2022-04-25
在长期的农耕中人们总结出一套耕作的经验，在化肥施用盛行的今天，经验施肥的存在是十分普遍的。但是经验施肥也导致了养分的不平衡，这不仅降低了肥效，也降低了农田产量，更是会导致环境的污染，所以，平衡施肥，测土施肥都成为了国家要的农业技术。测土施肥需要依靠上壤养分分析,多年的实践经验表明,能否选择好土壤养分速测仪，常常是测土施肥成败的关键。 我们认为选择土壤养分速测仪应注意以下几个方面：国家对计量器具的生产有严格的管理,土肥仪属于计量器具,必须经计量产品监督检验部门对样机的性能、可靠性进行检验认定。例如滤光式光电比色土肥仪要检验仪器的稳定性、重复性、灵敏度和线性误差,还要检验仪器的耐震动、耐温度变化、绝缘安全性等。它必须符合国家检定规程”G179一90和电子测量仪器有关电源试验、环境试验和安全试验的要求,才能由计量管理部门颁发计量器具样机试验合格证书。在样机试验合格的基础上,技术监督部门还要对生产设施、人员技术水平、技术文件、检定条件、管理制度等生产条件进行考核,通过考核,才颁发计量器具制造许可证证书。 应该指出,样机试验合格证还只是说明仪器性能达到了国家检定规程的要求,对于土壤养分速测仪土壤养分测试而言,一般可以满足氮和钾的测定精度要求,而对于有机质和磷的测定精度却不能保证例如JJG179一90规定稳定性误差应小于1.5%,而当磷的含量低于10毫克/公斤,有机质含量低于10克/公斤时,稳定性误差只有低于0.5%(**低于0.3%,这是光栅式l类分光光度计的检定标准)才能符合农业部土壤分析技术规范对平行测定允差的要求.所以购仪器时要实地检查一个仪器的稳定性。检查的方法是:¹接通电源将仪器预热5一10分钟;º将仪器遮光盖盖上,调整仪器使显示器读数为零;观察仪器读数变化,三分钟内仪器最大和最小读数之差除以满量程读数,即为仪器的稳定性误差。俗话说仪器术怕不准就怕不稳,稳定性不合格的仪器是不能用的。
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土壤养分速测仪测定土壤养分前的取样方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-25
测土配方施肥技术是农民节本增收的重要途径，通过2年来的工作经验积累，我们发现在土壤和作物测试工作中，一般地说，采样误差常比现场操作误差、试剂误差、食品误差等偏大。所以一定要根据速测的目的和要求，注意采集有代表性或典型性的样品。土壤养分速测仪是测定土壤养分含量的重要仪器之一，其结果也十分准确可靠。 土壤养分速测仪在进行土壤养分速测时，通常用来化验的土样是少量的，而化验的结果却作为较大面积地块的代表。采样误差一般要比化验误差大的多。缩小采样误差的关键是采集的土样要有充分的代表性。一般先把采样区域划分为若干采样地块。同一采样地块里的地形、近期耕作施肥措施、作物长相和产量水平等应基本一致。每一采样地块的面积不应过大，一般不超过3.3hm2(50亩)。采样点的分布应尽量照顾到土壤的全面情况，不要太集中，不要在路旁、沟边、渠道附近和粪堆底等地方采样。因为这些地方不代表地块的平均肥力水平。 利用土壤养分速测仪的测定发现，上述采样方法在实际应用时，要结合当地的耕作和栽培方式进行。例如为了制定施肥方案，可在播种前或施肥前，在垄台上采样，取样深度应从垄台高度算起，横断垄向取0～20cm深的土样。如果在作物生育期，为指导追肥采样，则应考虑到作物根系范围，特别是玉米株间距离较大，播种时埯内施有口肥，根域附近或较远的地方地力差异大，因此要在植株附近(约10cm处)和两埯之间顺垄向多点、等量采样，然后混合。如果玉米和其他作物实行间种，为玉米追肥采样时，则只在间种玉米的地段取样。
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异氟烷吸入式麻醉在动物手术中的应用优势
作者：德尔塔 日期：2022-04-25
动物手术前的麻醉不仅是为了减少动物疼痛满足动物福利的要求，也是为了保证动物手术顺利进行。目前注射麻醉在我国的动物麻醉中最为普遍，其优点是不需要昂贵的设备，只需要注射器就行，但麻醉剂注射动物后，必须经肝脏代谢完后，动物才苏醒；剂量过大会造成动物麻醉过度死亡，剂量过小动物不能进入麻醉状态或进入麻醉状态比较慢。在发达国家，气体吸入式的麻醉非常普遍，与传统的药物注射麻醉方式相比，具有以下显著的共同优点： * 动物进入麻醉状态较快，苏醒也迅速，一旦停止麻醉，一般2分钟内动物即可苏醒 * 麻醉深度容易控制，若在手术过程中发现动物状态不佳，可马上停止麻醉或者快速充氧进行抢救，因此安全性非常好； * 动物的发病率和死亡率低，动物手术的成功率高； * 更重要的是，吸入式麻醉剂在体内不参与代谢，几乎完全由肺泡经呼吸排出，对实验结果不造成影响，研究成果易得到国际认可。 在具体的实际应用中，我们可以明显地看到异氟烷吸入式麻醉方式的优势，下面就一些典型的动物实验采用异氟烷麻醉方式的优势： 1. 套管慢性给药、微透析和光学刺激/生理信号记录（光遗传学） 导管植入颅内，待动物恢复后，首先拔出导管帽，然后植入注射内管（探针或光纤）、通过管路（光纤跳线）连接注射器（激光器）。然而，植入内管（探针或光纤）和连接管路（光纤跳线）这一过程（如图1、2和3所示），虽然花费时间很短，也就几分钟的时间，如果动物不麻醉，动物会挣扎，配合不好，导致无法插管（插入光纤）；如果在戊巴比妥钠、乌拉坦等注射麻醉后进行，操作容易进行，但是这些麻醉方式的维持时间很长，往往达3-5个小时，不利于后期做清醒自由活动动物的给药或光刺激，而且额外增加了使用这些麻醉剂带来的副作用，测得的指标不准确，影响实验结果的客观性和可靠性。然而，如果使用异氟烷吸入式麻醉，则避免了这些问题的发生，而且操作简单，只需将动物放置于实验平台上，带上麻醉面罩，即可开始进行操作。 图1 套管
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小麦总RNA的提取方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-25
实验步骤 1. 所有容器高温灭菌两次，DEPC高温灭菌，所有的试剂用DEPC配制，高温灭菌。 2. 在一灭菌2mL管中加入：5mol/L异硫氰酸胍0.7mL、苯酚0.4mL、NaAc(pH4.0) 0.1mL。 3. 称取0.2g小麦黄化苗的叶片，迅速在液氮中研磨成粉末，转入已准备好的离心管中，剧烈震荡。 4. 混匀，冰浴30min。 5. 4℃，12000rpm，10min。 6. 上清至另一离心管中加0.4mL氯仿，剧烈震荡。冰浴放置5min。 7. 4℃，12000rpm，10min。 8. 弃有机相(下层) 加入0.4mL氯仿和0.4mL酚，室温放置5min。 9. 4℃，12000rpm，10min，弃有机相，加入等体积异丙醇。-20℃放置1h。 10. 4℃，12000rpm，10min，沉淀用70%乙醇洗两次。 11. 室温稍干燥。 12. 沉淀加20μLDEPC水溶解(-20℃保存) 13. RNA电泳：1％琼脂糖胶20mL，8μL样品，1μL样品缓冲液，1μLSYBR，100V恒压电泳，测OD260和OD260／OD280。 注意事项 1. 步骤1目的是去除RNA酶(外源)的影响。高温灭菌两次可以破坏RNA酶的复性过程，虽然RNA酶极易复性，但两次连续的高温会打乱它的复性历程，从而使RNA酶失活。 DEPC是RNA酶的非竞争性抑制剂。DEPC可以与RNA酶的活性中心的组氨酸咪脞环上的N结合，从而使RNA酶失活。因为DEPC能与RNA的N结合，从而修饰RNA，所以必须将DEPC最终除去。在高温灭菌时，DEPC因高温分解而挥发。UV也能修饰RNA，实验时应避免。DEPC灭菌后称为DEPC水，它是不含DEPC的。实验过程中要勤换手套，必要时要在超净工作台中进行。 2. 必须提前准备好变性剂。异硫氰酸胍可以变性RNA酶，也可以破细胞。本试验不可以用酶法破细胞。因为蛋白酶K的适合的条件也可以使RNA酶有活性。 NaAc酸性可以使DNA在有机相(酚相)中，而在碱性条件下，DNA和RNA都在水相中，无法分离。苯酚用于抽提DNA和蛋白质。 3. 低温防止内源性RNA酶降解RNA。剧烈震荡是使所有的细胞散开，浸在变性剂中。低温的细胞在相对高温的液体中是会形成一团，这样就会使内部的RNA没有水解RNA的机会。小麦的黄化苗因为没有光
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成年猪胰岛分离纯化方法的优化
作者：德尔塔 日期：2022-04-25
实验试剂 胶原酶V，512 kut/mg(Sigma公司)，DNA酶(Sigma公司)，胎牛血清(Gibco公司)，RPMI1640培养液(Gibco公司)，Dextran(Pharmacia公司)，Hanks平衡盐溶液(Gibco公司)。 实验设备 离心机，注射器，显微镜，超净工作台等。 实验材料 成年杂种猪，猪龄12 mo，体质量150 kg左右，猪被屠宰放血后，在相对无菌条件下迅速取出胰腺，保存于4℃ Hanks液中送至实验室，热缺血时间少于10 min，冷缺血时间少于90 min。 实验步骤 1. 胰岛分离 胰腺取回后，置于超净工作台上，快速去除胰周组织、脂肪、血管及外科被膜，保留固有被膜。从胰头、胰体交界部横断胰腺，找到主胰管，用20 G套管针插入，缝合线结扎，尾部远端亦结扎切断，每次均取约15-20 g组织，注入4℃含Ca2 Hanks液配制的复合胶原酶溶液(1.5 g/L，内含DNA酶0.3 g/L)，注入量 = 胰质量×2，注射速度7 mL/min，3-4 min内完成，置入玻璃容器内，在38.5±0.1℃水浴中震荡消化，震速100 r/min，在消化过程中间断加入0.1 mmol/L的NaOH，使消化液pH值尽可能维持在7.8左右，从消化20 min开始每间隔4 min取样一次，双硫腙染色镜检，当胰腺组织被消化裂解成细沙状，镜检见大部分结构完整的胰岛从外分泌组织中脱落出来，立即用4℃冷Hanks液(含100 mL/L胎牛血清)终止消化，充分混匀后，用40目钢网过滤，收集消化后组织，4℃离心冼涤2次，去除脂肪等杂质细胞，取样镜检计数和观察消化后胰岛分离情况。 2. 胰岛纯化 用Dextran配制成密度为1.037，1.054，1.070，1.096，1.11 kg/L的不连续密度梯度液，依次将不连续密度梯度液各10 mL加入50 mL离心管中，最后将洗涤后的消化组织每0.5 mL与1.037 kg/L密度梯度液10 mL混匀，小心移至离心管中液体上层，形成不连续密度梯度。将2-4个离心管置入低温离心机中，先800 r/min离心5 min，然后2 500 r/min离心15 min，离心后在1.096-1.054 kg/L之间收集纯化的胰岛，4℃离心洗涤2次。分别取样镜检计数，估计纯度和行生物学活性及组织学鉴定。 3.
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