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实验室家具设计的基本要求
作者：德尔塔 日期：2022-04-26
实验室设计的目的是要建立有高效率、功能完善和考虑周全的实验室。在实验室设计时，应充分考虑影响实验室效率和安全的因素，如空间、实验室家具(实验台、通风柜、防静电工作台等）、通风设施、照明等。特殊实验室应按国家标准有关要求设计。 一、实验室设计要有合理化的空间 实验室设计时应根据实验功能模块及放置设备的需要。而考虑空间的合理化分配来决定布局。同时应从发展眼光确定实验室空间大小。 有很多因素影响到实验室空间的设计，如工作人员的数量、分析方法和仪器的大小。实验室应是灵活的，让工作人员感到舒适，又不产生浪费。 工作空间的大小应保证最大数量的工作人员在同一时间工作。应将有效的空间划分为清洁区（办公室、休息室、学习室），缓冲区（储存区、供给区、过道），污染区（工作区、洗涤区、标本储存区）。 实验室设计基本原则：人流、物流、气流要畅通；清洁区、缓冲区、污染区要分离。 在指定的实验区域，应控制工作人员数量和运输人员数量。在控制实验室通路的同时，还应设置一些预备区，如接受样品或标本，准许进入实验室人员和参观者的通道。通过工作人员、自动传输、风力系统或其他自动化系统运输样品或标本。还应充分考虑内部通信联络系统和警报器以便通知或报警（如灾害、火警、样本到达、或实验室其部分寻求帮助等）。 还应考虑实验室空间的扩展需要，将实验室设计为可向外扩展或者可以移动性，以满足实验室未来发展的空间有拓展的需要。运输和电脑网络系统分别用于实验室内和实验室与单位各科之间样品或标本运输和信息交流。国家的法律法规（有国家标准和行业标准等）在很大程度上影响到实验室设计，在整个实验室设计中应由建筑师提出有关法规的要求。 在制定空间分配计划前，应对仪器设备、工作人员数量、工作量、实验方法等因素作全面分析和对空间标准的要求进行评估，并计算区域的净面积和毛面积。特殊功能的区域根据其功能和活动情况不同决定其分配空间的不同。 二、实验室的
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使用新型ACQUITY UPC2 Torus色谱柱分析药物降解产物
作者：德尔塔 日期：2022-04-26
目的 展示新型ACQUITY UPC2® TorusTM 2-PIC色谱柱分析低浓度药物降解产物的性能。 背景 在药物化合物生产过程中，充分了解任何可能存在的降解产物极其重要，口服制剂尤为如此。由于这类样品的性质特殊，因此它们的分析极具挑战性。降解样品的分析结果中通常含有大量的峰，因此要对活性药物成分（API）和降解产物进行分离则十分困难。此外，参数不同，API还可能生成非预期的降解产物。通常情况下，可使用液相色谱进行分离。但是，另一项技术——超高效合相色谱（UltraPerformanceConvergence ChromatographyTM，UPC2®）的出现，使分析人员能够完成这类困难的分离工作。 解决方案 ACQUITY UPC2系统利用液态CO2作为流动相的优势，可对复杂样品（如，药物降解产物）进行分离。与反相色谱相比，UPC2技术可实现正交分离。借助UPC2平台提供的最新色谱柱技术——ACQUITY UPC2 Torus色谱柱，分析人员可对这类样品进行快速分析。本实验使用配备有新型ACQUTIYUPC2 Torus 2-PIC色谱柱的ACQUTIY UPC2系统对奥美拉唑药片（用于**胃酸反流和胃灼热）的降解产物进行了分析。这种由两级式键合技术制造的色谱柱具有2-氨甲基吡啶配体（2-PIC），与其它Torus色谱柱相比，这种固定相可提供稳定的保留和独特的选择性。在开发超临界流体色谱（SFC）方法时，ACQUITY UPC2 Torus 2-PIC色谱柱是很好的起始色谱柱。 如图1所示，实现了降解产物中奥美拉唑的分离。使用ACQUITY UPC2 Torus 2-PIC色谱柱后，多种降解产物（包括奥美拉唑硫醚）均可通过标准品进样或质谱进行定性。本文的分析中采用新型ACQUITY® QDa®检测器对奥美拉唑和奥美拉唑硫醚进行了定性。通过将UPC2与新型Torus色谱柱联用，分析人员可分离复杂基质，同时可将每次分析中有机溶剂的用量降至最低，有效降低了分析成本。 总结 本实验采用新型ACQUITY UPC2 Torus 2-PIC色谱柱对奥美拉唑制剂的酸性降解产物进行了分析，活性药物成分顺利的与所有降解产物分离。通过使用ACQUITY UPC2 Tor
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军团菌检测方法介绍
作者：德尔塔 日期：2022-04-26
军团菌是一种环境感染性致病菌，可引起急性呼吸道传染病，即军团菌病。军团菌分布极其广泛，医院、酒店等的供水系统、空调的冷却系统等各种水源均易于滋生、污染军团菌，并造成军团菌病传染的风险。即与水有关的地方均可能存在军团菌。 军团菌传播、感染有以下特点： 1、透过空气、水份感染，传播带季节性，超过50%病例在夏季发生。 2、滋生在医院、酒店的供水系统，通过过水龙头、浴室传播。 3、可通过空调的冷却系统，由通风口传播并感染对象。 军团菌属革兰氏阴性杆菌，专性需氧，无芽孢，无荚膜，军团菌需要半胱氨酸和铁，无半胱氨酸时，军团菌无法生长。生化特征还有不发酵也不氧化糖类，不还原硝酸盐，氧化酶实验阴性或弱阳性，尿素酶阴性，军团菌生长的最适pH为6.9-7.0，2%-5%CO2能促进部分菌株的生长。军团菌生长缓慢，易于被其它菌落覆盖。军团菌的菌落颜色多样，通常呈白色、灰色、蓝色或紫色，也能显深褐色、灰绿色、深红色。菌落整齐，表面光滑，在紫外灯下，有荧光。目前军团菌分为64种血清型及42个种。 二、军团菌的检测方法---ISO11731:1998 1.范围 本标准描述了一种用于军团菌分离和估计环境样品中军团菌数量的培养方法。该方法适用于所有环境样本，包括饮用水、工业用水和天然水以及沉淀物、沉积物和粘土/软泥等相关样本。 2.培养基和试剂 2.1：CP0020 BCYE平板（军团菌生长平板） 2.2：P0030 BCYE-CYS平板（BCYE无L-半胱氨酸平板） 2.3：CP0040 GVPC选择性平板（军团菌选择性平板） 2.4：酸处理缓冲液 3．取样 3.1取样容器 水样可采用玻璃、聚乙烯或类似容器。以前用过的容器应该清洗干净、扣干水分，121℃高压灭菌15min。如果容器不能经受高压灭菌，应在高于70℃的流动热水或流动蒸汽中处理至少5min。 3.2含生物防腐剂的样品 如果水样中含有或被认为含有氧化型生物防腐剂，应在取样时或取样前加入非活性试剂加以中和。如果水样中含有消毒剂，需在采样前或采样后加入中
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教您十招轻松搞定免疫荧光
作者：德尔塔 日期：2022-04-26
免疫荧光是标记免疫技术发展最早的一种，它是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术，通过将抗体与一些示踪物质结合，利用抗原抗体反应进行组织或细胞内抗原物质的定位。免疫荧光步骤包括，细胞固定和通透，封闭，孵育一抗，二抗等。除了这些基本步骤，以下建议可以帮助您获得更好的实验结果。 细胞固定和通透 为达到最佳的检测效果，细胞需要经过固定和通透。这些步骤非常关键，细胞和抗原需要保证最佳的结构，并利于抗体与抗原结合。通常情况下，需要通过以下步骤得以实现：细胞用2%-4%多聚甲醛固定，之后用0.1%皂角苷或0.02%的Triton X-100进行通透。前者是比较温柔的处理，但是对于核内抗原可能无效，需要用到Triton。使用皂角苷进行通透时，要注意它会引起细胞膜的可逆性通透，也就是除了在通透初期，在每个抗体孵育环节都需要进行通透。另外，细胞可以用冰甲醇进行同时固定和通透，可以避免去垢剂的使用。 抗体特异性 免疫荧光需要用到特异性非常强的抗体，可以避免高背景和不理想的蛋白定位结果。在大多数情况下，纯化抗体的效果很好，但是正确的对照可以帮助精准定位抗原。使用只有二抗染色的片子作为阴性对照，有利于减少降低背景干扰。 合适的抗体稀释比例 通过优化抗体稀释比例来优化染色，通常情况下1ug/ml的纯化抗体或者1:100-1:1000的抗血清足够达到特异性染色的结果。但在能保证低背景染色的前提下，可以通过增加浓度来提高信号强度。如果是第一次使用该抗体或测定某抗原，强烈建议浓度梯度实验。 优化缓冲液和封闭剂 尽管很多抗原在常见的Buffer如PBS中可以很好的被染色，但是对于某些目的抗原，更换一下含有不同离子的缓冲液，比如钙、镁、钾等，可以带来很大程度上的改善。Rockland可提供优化过的IHC用封闭缓冲液，同样适用于荧光染色实验。 选择正确的二抗 如果您需要做免疫实验，我们强烈建议您选择进行过预吸附的二抗进行单
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多肽常用的几种水解方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-26
虽然的氨基酸组成分析方法较多，且趋向更灵敏、更精确、更简便、更快速，但还没有一种方法可以单独适用于所有氨基酸残基的检测，并且很多因素如温度、时间、水解试剂、水解方法及样品中添加剂等对水解程度均有影响。常用的水解方法作简要介绍如下: 1酸性水解 酸性水解是应用最为广泛水解方法，可以使大多数氨基酸残基完全水解，最通用的水解剂是6 mol/L HCI。 条件:6 mol/L HCI、真空、110℃.水解时间为20-24h。即可用于液相水解模式也可用于气相水解模式。但在该条件下，天冬酰胺和谷氨酰胺分别被完全水解为天冬氨酸和谷氨酸，色氨酸则被完全破坏，半胱氨酸先用二硫代二丙酸、4一乙烯呲啶或碘代乙酸保护后水解方可测定，酷氨酸部分被水解液所破坏，丝氨酸和苏氨酸被部分水解。有些脂肪族氨基酸残基间的肽键难于裂解，可以通过延长水解时间如水解92h甚至120h来解决。 2碱性水解 碱性水解一般选用NaOH和KOH作为水解剂。该水解方法是HCI水解的互补法。因为碱水解时，多数氨基酸遭到破坏或外消旋化，仅色氨酸是稳定的。所以此法仅限于测定色氨酸。 3酶水解 用一组蛋白酶水解肽链，特别适用于对化学水解敏感的氨基酸如天冬酰胺和谷氨酰胺的测定。水解过程中氨基酸不发生消旋化，几乎可以保持所有的组成氨基酸不被破坏。但是因为酶水解条件温和，对天冬酰胺、谷氨酰胺等皆无破坏作用，且反应需要较长的时间，水解不完全，酶本身也是蛋白质，对样品的测定结果可能会有干扰。 微波辐射能水解，一般情况下190℃微波水解15分钟肽类即可完全水解，导致完全水解的时间大大缩短。在微波辅助酸水解和微波辅助酶水解中，水解时间可从过去的几十小时缩短到几十分钟。 总之，药物水解方式应根据其产品的性质、研究目的、可获得的样品量及少实验室的具体条件采取适宜的水解方法。
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主要玻璃器皿的使用注意事项
作者：德尔塔 日期：2022-04-26
1、量筒 用来量度液体体积，精确度不高。 使用注意事项： a. 不能在量筒内稀释或配制溶液。 b. 决不能对量筒加热，不能量取热的液体。 c. 不能在量筒里进行化学反应，不能在量筒里稀释溶液。 d. 读数时应将量筒垂直平稳放在桌面上，并使量筒的刻度与量筒内的液体凹液面的最低点保持在同一水平面。 e. 在量液体时，要根据所量的体积来选择大小恰当的量筒（否则会造成较大的误差）。 2、容量瓶 用于准确配制一定体积和一定浓度的溶液。 使用注意事项： a. 使用前检查它是否漏水。 b. 用玻璃棒引流的方法将溶液转入容量瓶。 c. 只能配制容量瓶上规定容积的溶液。 d. 容量瓶的容积是在 20℃时标定的，转移到瓶中的溶液的温度应在 20℃左右。 3、滴定管 用于准确量取一定体积液体的仪器。带玻璃活塞的滴定管为酸式滴定管，带有内装玻璃球的橡皮管的滴定管为碱式滴定管。 使用注意事项： e. 酸式、碱式滴定管不能混用。 f. 25mL、50mL 滴定管的估计读数为±0.01mL。 g. 装液前要用洗液、水依次冲洗干净，并要用待装的溶液润洗滴定管。 h. 调整液面时，应使滴管的尖嘴部分充满溶液，使液面保持在“0’或 “0”以下的某一定刻度。 i. 读数时视线与管内液面的最凹点保持水平。 4、蒸发皿 分无柄蒸发皿和有柄蒸发皿两种，规格以直径表示，有 60~150mm 等多种。 主要用途：蒸发液体、浓缩溶液或干燥固体物质。 使用注意事项：能耐高温，但不能骤冷，液体量多时可直接在火焰上加热蒸发。液体量少或粘稠时，要隔着石棉网加热。 5、表面皿 表面皿是玻璃制的，圆形状，中间稍凹，与蒸发皿相似。可以用来做一些蒸发液体的工作的,它可以让液体的表面积加大,从而加快蒸发.但是不能像蒸发 皿那样加热。可以作盖子，盖在蒸发皿或烧杯上，防止灰尘落入蒸发皿或烧杯； 可以作容器，暂时呈放固体或液体试剂，方便取用；可以作承载器，用来承载pH 试纸，使 滴在试纸上的酸液或碱液不腐蚀实验台
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影响96孔PCR仪均匀性的几大因素分析
作者：德尔塔 日期：2022-04-26
文章由东胜创新生物科技有限公司聂尚海博士原创编辑，仅供大家参考。 影响96孔PCR仪均匀性的几大因素分析 96孔PCR仪的均匀性是PCR仪的重要指标，也是实验人员非常关心的问题。造成各个孔位的温度不均匀的因素大致有以下几个： 1、 制冷半导体片的不均匀 2、 控温点的数量 3、 边缘效应及减弱办法 4、 散热器的散热均匀性 5、 模块的材料及形状 6、 升降温速度 一、 制冷半导体片的不均匀 现在的PCR仪大都是用半导体制冷片来控制温度的，其通电后一面热另一面冷，反向电极则热冷面反向。 半导体制冷片虽然是工业化生产，都几乎都是手工的生产的，因此每一片都有差别，大的生产商会根据用户的需要进行配对，如一台PCR仪要三片就三片配成大致相同的阻值。阻值一般是厂家写在每片制冷片上的（自己用万用表是量不准的，因为一通电其温度就变化，阻值就会改变） 因此半导体片的质量会影响PCR仪的均匀性。一般大的生产厂家出厂时问题不大，但使用一段时间后，半导体片的性能会下降，但下降程度并不一致，则温度差别就表现出来了。 最大的问题是维修。半导体片本身是不能维修的。一般PCR仪都是多片半导体，普通维修会只更换其中一片，这样就会造成新的跑得快，旧的跑得慢，温度差别就大了。如果每片半导体片下面都有各自的温度传感器，则可以补偿一些，如果是像AB的低端型号2720，4片半导体片只有一个温度传感器，则问题大了。当然更换半导体片后的装配也是技术性很强的活，不经过严格的培训是做不到家的。这也是为什么大厂一般不在现场维修，而是要返厂，并且是一次性更换一套半导体片，因此成本较高。东胜龙811也是一律返厂并成套更换的。 二、控温点的数量 一方面半导体片本身有一定的差异，另一方面使用一段时间后性能会下降，但下降程度并不一致，还有就是边缘的和中间的半导体片的反面散热不一致（后面会讲到），这些都会造成模块温度的不均匀。常用的解决办法是在每片半导体片下面安放温度传感器，并有相应的控制电路
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过氧化物酶标记测定细胞凋亡
作者：德尔塔 日期：2022-04-26
本实验用过氧化物酶标记测定了细胞凋亡。本方法可以用于福尔马林固定的石蜡包埋的组织切片、冰冻切片和培养的或从组织中分离的细胞凋亡测定。 实验原理 脱氧核糖核苷酸衍生物地高辛[（digoxigenin）-11-dUTP]在TdT酶的作用下，可以掺入到凋亡细胞双链或单链DNA的3-OH末端，与dATP形成异多聚体，并可与连接了报告酶（过氧化物酶或碱性磷酸酶）的抗地高辛抗体结合。在适合底物存在下，过氧化物酶可产生很强的颜色反应，特异准确的定位出正在凋亡的细胞，因而可在普通光学显微镜下进行观察。 毛地黄植物是地高辛的唯一来源。在所有动物组织中几乎不存在能与抗地高辛杭体结合的配体，因而非特异性反应很低。抗地高辛的特异性抗体与脊椎动物甾体激素的交叉反应不到1％，若此抗体的Fc部分通过蛋白酶水解的方法除去后，则可完全排除细胞Fc受体非特异性的吸附作用。 主要试剂 1. 磷酸缓冲液PBS（pH7.4）：磷酸钠盐50mM，NaCl200mM。 2. 蛋白酶K（200μg/ml，pH7.4）：蛋白酶K0.02g；PBS100ml。 3. 含2%H2O2的PBS缓冲液（pH7.4）：H2O22.0ml；PBS缓冲液98.0ml。 4. TdT酶缓冲液（新鲜配）：Trlzma碱3.63g用0.1NHCl调节pH至7.2，加ddH2O定容到1000ml；再加入二甲砷酸钠29．96g和氯化钴0.238g。 5. TdT酶反应液：TdT酶32μl；TdT酶缓冲液76μl，混匀，置于冰上备用。 6. 洗涤与终止反应缓冲液：氯化钠17.4g；柠檬酸钠8.82g；ddH2O1000ml。 7. 0.05％二氨基联苯（DAB）溶液：DAB5mg；PBS10ml，pH7.4,临用前过滤后，加过氧化氢至0.02%。 8. 0.5％甲基绿（pH4.0）：甲基绿0.5g；0.1M乙酸钠100ml。 9. 100％丁醇，100％、95％、90％、80％和70％乙醇，二甲苯，10％中性甲醛溶液，乙酸，松香水等。 10. 过氧化物酶标记的抗地高辛抗体（ONCOR）。 实验步骤 1. 标本预处理： 1）石蜡包埋的组织切片预处理：将组织切片置于染色缸中，用二甲苯洗两次，每次5min。用无水乙醇洗两次，每次3min。用95％和75％乙醇各洗一次，每次3min。用PBS洗5min
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细胞的纯化的两种方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-26
细胞的纯化的两种方法 细胞的纯化一般分为两种,即自然纯化很人工纯化.常用的纯化方法有,酶消化法,细胞因子依赖纯化法,机械刮除法,反复贴壁法,电烙筛选法. 体外培养的细胞源于人或动物或胚胎组织,体内的细胞都是混杂生长,每一种组织都有血管和间叶组织,因此,来源于上述组织的培养材料的原代细胞、传代细胞绝大多数都呈混合生长,既有上皮样细胞又有纤维样细胞,纤维样细胞又包括成纤维细胞、肌细胞、骨细胞、滑膜细胞等,混杂的细胞会直接影响实验结果,而利用体外培养细胞进行实验研究时,为了保证实验结果的可靠性、一致性、稳定性、和可重复性,要求采用单一种类细胞来进行实验,这样才能对某一细胞的功能、形态等变化进行一系列研究,因而培养细胞的纯化就成为实验研究的重要一步,甚至需要从混杂的细胞群中分离出单个细胞来进行培养和开展实验研究. 细胞的纯化： 细胞的纯化一般分为两种,即自然纯化很人工纯化.可根据不同细胞种类、来源、实验要求和目的选择采用.细胞的纯化的两种方法 一、自然纯化： 自然纯化是利用某一种类细胞的增殖优势,在长期传代过程中靠自然淘汰法,不断排挤其他生长慢的细胞,靠自然增殖的潜力,最后留下生长优势旺盛的细胞,达到细胞纯化的目的.但这种方法常无法按照需要和实验要求及研究目的来选择细胞.此法花费时间长,留下的往往是成纤维细胞.仅有那些恶变的肿瘤细胞或突变的细胞可以通过此方法而保留下来的,不断纯化而建立. 二、人工纯化： 人工纯化是利用人为手段造成对某一细胞生长有利的环境条件,抑制其他细胞的生长从而达到纯化细胞的目的.主要有以下5种方法. 1、细胞因子依赖纯化法： 是通过加入某些特殊的细胞因子而纯化出只依赖于这种细胞因子生长的细胞系.人和动物组织中某些细胞需要有特殊的细胞因子存在的环境才能长期存活和生长繁殖,如白细胞介素-2（IL-2）SHI 他细胞生长所必须的细胞因子,B细胞生长因子是B细胞的生长因子,体外培养中淋巴细胞若加入IL-2就可使T细胞
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上皮细胞的培养方法介绍
作者：德尔塔 日期：2022-04-26
上皮细胞的培养方法 上皮细胞包括腺上皮是很多器官如肝、胰、乳腺等的功能成分,又由于癌起源于上皮组织,故上皮细胞培养特别受到重视.但上皮细胞培养中常混杂有成纤维细胞,培养时生长速度往往超过上皮细胞,并难以纯化,同时上皮细胞难以在体外长期生存,因此纯化和延长生存时间是培养关键. 体内上皮细胞生长在胶原构成的基膜,因此培养在有胶原的底物上可能利于生长,另外人或小鼠表皮细胞培养在以3T3细胞为饲养层（用射线照射后）时,细胞易生长并可发生一定程度的分化现象.降低PH、Ca2+含量和温度,向培养基中加入表皮生长因子,均有利于表皮细胞生长. 以表皮细胞为例,用皮肤表皮和真皮分离培养法可获得纯上皮细胞,其法如下（黑木凳志夫 1981） 1、取材：外科植皮或手术残余皮肤小块,早产流产儿皮肤更好,取角化层薄者,切成0.5－1平方厘米小块. 2、置0.02%EDTA中,室温,5分钟. 3、换入0.25%胰蛋白酶中,4℃过夜. 4、分离：取出皮块,用血管钳或镊子将表皮与真皮层分开. 5、取出表皮,剪成更小的块后,置0.25%胰酶中,37℃,30—60分钟. 6、反复吹打,制成悬液. 7、培养：用80目不锈钢纱网滤过后,低速离心,吸去上清. 8、直接加入培养基（Eagle加20%小牛血清）制成细胞悬液,接种入培养瓶,CO2温箱培养.
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微生物菌种冷冻干燥和液氮保藏菌种技术
作者：德尔塔 日期：2022-04-26
冷冻干燥和液氮保藏菌种技术 －、安瓶管开封 1．用浸过70％酒精的脱脂棉擦净安瓿管。 2．用火焰将安瓿管顶端加热。 3．滴无菌水至加热的安瓿管顶端使玻璃开裂。 4．用挫刀或镊子敲下已开裂的安瓿管的顶端。 二、菌株恢复培养 1．用无菌吸管，吸取0.3～0.5ml适宜的液体培养基，滴人安瓿管内，轻轻振荡，使冻于菌体溶解呈悬浮状。 2．取0.1～0.2ml菌体悬浮液，移植于适宜的琼脂斜面／平板培养基上，剩余的菌液，注入适宜的液体培养基内，然后在建议的温度下培养。 3．若未能活化，或活化后有疑问时，请于收到菌种1个月内，通知保藏中心，经查证无误后，即免费补寄。 三、注意事项 1．菌种活化前，请将安瓿管保存在6一10℃的环境下。 2．厌氧菌的培养，如无特别说明，自开封至接种完成，均需以无氧气体充填，以保持厌氧状态。 3．某些菌种经过冷冻干燥保存后，延迟期较长，需连续两次继代培养才能正常生长，此时请将步骤二(2)重复一次。 液氮超低温保藏程序 1、容器的选择：使用带螺旋盖的2ml塑料安培瓶。 2、检查安培瓶是否渗漏：用0.05%的亚甲基蓝水溶液在4℃浸泡30-45分钟，冲洗干净，弃去含有蓝色染料的安培瓶，其余的安培瓶备用。 3、打印标签（激光打印）。 4、容器的灭菌：先用蒸馏水漂洗干净安培瓶，再用蒸馏水在灭菌锅中121℃浸泡灭菌15分钟，干燥并将打印好的标签放入安培瓶中，略拧紧螺旋盖，再行121℃灭菌30分钟。 5、保藏菌菌龄：处于最大生长量阶段或对数生长期后期。 6、保护剂：选用5-10%的甘油或二甲基亚砜作保护剂。 1）甘油的准备：在121℃灭菌15分钟，2-8℃贮存。甘油一般以两倍最终所需浓度的水溶液保存，然后与同等量的细胞悬液混合。若不用细胞悬液，则以最终所需浓度的水溶液保存。 2）二甲基亚砜：用0.22um的聚四氟乙烯过滤膜过滤除菌。过滤膜预先用甲醇和二甲基亚砜漂洗。无菌的二甲基亚砜以10-15ml装量2-8℃避光保存。 7、分装：在无菌条件下，将细胞悬液（从平板上打下直径为5cm
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多肽药物化学合成的两种分类方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-26
多肽合成的化学合成根据是否使用固相载体分为液相合成和固相合成两种方法。 1 多肽药物的液相合成: 多肽的液相合成主要在液体中进行，故称之为液相合成法，有逐步合成和片段组合两种策略。逐步合成简洁迅速，用于各种生物活性多肽片段的合成; 片段组合法为多肽合成提供了最有前途的路线，并已成功地合成了多种具有生物活性的多肽，其最大特点是易于纯制。 对于由较少氨基酸组成的多肽，采用液相合成法方便快速，纯度高，且能够大量合成。孙永强等以Fmoc为侧链氨基酸保护基团，逐步缩合合成了十肽曲普瑞林，并且合成的曲普瑞林具有较高的收率。功能化离子液体为载体液相合成技术在多肽合成反应中体现出了明显的优势: 反应的选择性、速度和收率得到了显著的提高，反应后处理方便，离子液体可回收使用等。徐中义等以功能化离子液体为载体成功地合成了ＲGD三肽，并且目标化合物不需要进一步的色谱纯化，产率为84%。此外研究还发现，一些氨基酸经过抗酸性和易于裂解的疏水基团修饰后，通过液相合成的多肽类药物更容易纯化和制备。Okada等以苄醇类疏水基团作为辅助支持物引入多肽的液相合成当中，并且成功地合成了克级的亮丙瑞林，比伐芦定，胃促生长素等多肽类药物。同样利用疏水标记辅助液相合成技术成功地合成了生长激素抑制肽-----生长抑素。 2 多肽药物的固相合成: 固相合成法是将氨基酸的C末端固定在不溶性树脂上，然后在此树脂上依次缩合氨基酸，延长肽链的多肽合成方法。自1963年Merrifield发展成功了固相合成法多肽合成以来，经过不断的改进和完善，到今天固相法已成为多肽和蛋白质合成中的一个常用技术，表现出了经典液相合成法无法比拟的优点。其中a－氨基用Boc( 叔丁氧羰基) 保护的称为Boc固相合成法，a－氨基用Fmoc( 9－芴甲氧羰基) 保护的称为Fmoc固相合成法。 现如今固相合成法已经广泛应用到多肽合成的各个领域中，对于＜30个氨基酸的多肽一般**固相合成法。石卫华等应用Fmoc固相合成法，以ＲinkAmide－AM
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多肽合成药物的基因重组技术
作者：德尔塔 日期：2022-04-26
基因的表达包括相应的mＲNA合成( 转录) 和蛋白质合成( 翻译) ， 在微生物体内进行外来基因的蛋白质生物合成依赖于微生物遗传物质和编码目标蛋白的重组DNA片段。具体步骤如下: 第1步，从供体中分离出编码蛋白的DNA片段; 第2步，将DNA分子插入到表达载体上; 第3步，将载体转染到宿主体内; 第4步，培养宿主组织，进行基因的扩增，mＲNA合成和多肽合成; 第5步，纯化重组多肽。通常根据宿主细胞的不同将多肽药物重组技术分为两类: ( 1) 多肽药物的真核表达; ( 2) 多肽药物的原核表达。 1 多肽合成药物的真核表达 真核表达的多肽具有定向性强、产品安全卫生、原料来源广泛和成本低等优点，可以得到质量高、疗效好的且活性与天然多肽相当多肽类药物。目前，真核宿主细胞主要有酵母菌、动物和昆虫细胞等，而酵母菌在真核表达中最常用。Cao等利用毕赤酵母细胞成功地表达了鸡 b－防御素6( AvBD－6)和脱半胱氨酸的AvBD－6－B生物活性肽，并在试验中发现二者均具有较强的抑菌作用。Guo等同样成功地在毕赤酵母细胞中表达了抗菌肽D，该多肽具有较强的抑菌作用，抗菌肽D的酵母表达对抗菌药物的发展具有重要的指导意义。苏彩霞等将乙型肝炎表面抗原( HBsAg) 基因前连接酿酒酵母信号肽，并将整个序列优化为汉逊酵母优选密码子，通过PCＲ技术进行合成，最终在汉逊酵母中成功地表达了重组HBsAg。 2 多肽合成药物的原核表达 原核表达系统中所应用的宿主细胞包括大肠杆菌、沙门氏菌、枯草芽孢杆菌等，其中大肠杆菌为最常用的原核宿主细胞。利用原核表达重组技术，可以大量高效地合成多种生物活性多肽，即可通过设计合适的DNA模板来控制多肽的序列，为多肽合成药物的基因合成奠定了基础。 Li 等在原核细胞BL21( DE3) pLysS中成功地表达了ChickenIFN－y ，并通过体外实验证明了ChickenIFN－y 具有较强的抗病毒活性，是原核宿主细胞应用于多肽合成的范例。Lu等利用重组技术将水蛭素基因与小泛素相关修饰物( SUMO) 融合，最后在大肠杆菌中高效
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总有机碳（TOC）技术原理
作者：德尔塔 日期：2022-04-26
总有机碳（TOC），由专门的仪器——总有机碳分析仪（以下简称TOC分析仪）来测定， TOC分析仪具有流程简单、重现性好、灵敏度高、稳定可靠、测定过程一般不消耗化学药品、基本上不产生二次污染、氧化完全等优点。 测定原理基于把不同形式的有机碳通过氧化转化为易定量测定的二氧化碳，利用二氧化碳与总有机碳之间碳含量的对应关系，从而对水溶液中TOC进行定量测定。根据工作原理的不同，可以分为燃烧氧化-非分散红外吸收法、电导法、气相色谱法、湿法氧化-非分散红外吸收法等，其中燃烧氧化-非分散红外吸收法只需一次性转化，流程简单、重现性好、灵敏度高，应用比较普遍。我国的国家标准GB13193-91就是采用的燃烧氧化-非分散红外吸收法。 TOC测定通常分为直接测定法和间接测定法。直接测定法一般是通过将无机碳（IC）除去后测定全碳（TC）的方法，适用于测定IC含量高的水样，但容易损失水样中挥发性的有机碳（POC）。 IC的处理方法采用酸化曝气处理法，将水样酸化至pH95%；在海水中，测得的DOC减少50%~75%，海水这种明显的不完全氧化是由于可溶性有机物分子粒径分布以及被氧化的化合物在自由基反应中活性减弱引起的。 高浓度的Cl-将干扰反应，导致所测得的DOC量偏低，这可以通过使用较高浓度的过硫酸盐或延长反应时间来解决，也可以加入Hg2+来络合Cl-。但是，随着温度的增加，过硫酸盐也会像重铬酸盐一样分解，且分解速率比氧化速率快。因此，为了缩短有机物与过硫酸盐的反应时间，应该增加氧化剂的浓度而不应升高温度。 （3）紫外光（UV）氧化 在紫外光（185nm）的照射下，液体样能连续不断的生成氧化剂。有报道只使用紫外光就能使所有的DOC被氧化，但颗粒物及胶体不能被完全氧化。现在，流动系统在TOC测定中的应用已非常普遍，许多商品分析仪都包括了紫外消解单元。紫外光氧化测定水和废水中的TOC已列为ISO标准和德国、美国、日本等国的标准方法。 为了得到更精确的结果，样品中的无机碳在注入紫外反应器前除去。
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生物毒性在线预警的必要性及毒性的判断方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-26
生物毒性在线预警的必要性 由于水的稀缺性，联合国于2010年宣布：获得纯净水是基本人权之一。在全球范围内，只能通过严格的水资源市场监管以及长期水质管理方面来确保实现这项权利。 无论是意外、疏忽大意或故意行为，少量有害物质就有可能污染一大片水域。河流、湖泊、水库以及饮用水水库和饮用水管网都有可能会受到影响。同时,水也是无数动植物的栖息地，因此，我们必须实施连续监控的测量系统加以保护。 对测量系统的要求高要求但具有可实现性测量系统必须持续、可靠运行，确保及时识别污染物质并立即采取对策。否则，有可能对人类和环境造成实质威胁。该系统也应该对绝大多数有毒物质敏感，例如：苯酚、卤代烃和不同的重金属复合物。氰化物等诸多物质即使在浓度较低的情况下也有着很大的毒性，因此，构成了极大的威胁。 最后也是最重要的是，重现性和可靠性为决定性因素：一旦出现了有毒物质，也要确保这些有毒物质不应损害测量系统。 毒性的定义及其判断方法 毒性可描述为某种物质对有机体的直接有害影响。在较低浓度的毒性物质存在的情况下也有可能产生这些影响，并且这些影响取决于培养时间和剂量。 市场上采用某些测试方法来检测毒性。然而，这些测试方法无法准确地查明到底存在何种毒素。利用鱼类、藻类或发光细菌，可测试水样对有机体是否存在毒性作用。这些方法存在的问题：许多有机体很难获得和培养。例如：水藻可在实验室中培养，但仅在其生命周期某个特定阶段适合用于测试。而且，许多指定的测试用有机体并不具备足够的敏感性，或者仅仅对特定物质敏感。例如：藻类对害虫反应强烈，然而，对其他物质则没有这么强的反应。此外，有机体有可能对毒素产生抗毒性，这当然有可能导致测试结果出现不准确的情况。由于对污染物质反应缓慢，因此，需要长期培养，这也是一个问题。一旦出现了毒素，整个测量系统通常会受损，这就意味着有必要更换测试用有机体。因此，这些方法在连续在线监测方面的应用具有局限
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