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人激肽释放酶2 酶联免疫分析试剂盒使用说明书
作者：德尔塔 日期：2022-05-04
本试剂盒仅供研究使用。 检测范围： 96T 30pg/ml-800pg/ml 使用目的： 本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中激肽释放酶2(KLK2)含量。 实验原理 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人激肽释放酶2(KLK2)水平。用纯化的人激肽释放酶2(KLK2)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入激肽释放酶2(KLK2)，再与HRP标记的激肽释放酶2(KLK2)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的激肽释放酶2(KLK2)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人激肽释放酶2(KLK2)浓度。 试剂盒组成 1 30倍浓缩洗涤液 20ml×1瓶 7 终止液 6ml×1瓶 2 酶标试剂 6ml×1瓶 8 标准品（1600pg/ml） 0.5ml×1瓶 3 酶标包被板 12孔×8条 9 标准品稀释液 1.5ml×1瓶 4 样品稀释液 6ml×1瓶 10 说明书 1份 5 显色剂A液 6ml×1瓶 11 封板膜 2张 6 显色剂B液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1个 标本要求 1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融 2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。 操作步骤 1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。 800pg/ml 5号标准品 150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液 400pg/ml 4号标准品 150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液 200pg/ml 3号标准品 150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液 100pg/ml 2号标准品 150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液 50pg/ml 1号标准品 150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释
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基础过滤概念和过滤专有名词简述
作者：德尔塔 日期：2022-05-04
基础过滤概念和过滤专有名词简述 选择属性适当的滤器不仅可以帮助获得准确的实验结果，也可以加速研发的过程。然而面对如此众多的滤器类型，如何确保选择正确呢？Whatman就基础过滤概念和专有名词进行汇编，让客户对各种产品选择有一个清楚地认识，从而能更加快速地做出选择判断。 含灰量 空气中900℃下点燃纤维素滤器可对其含灰量进行测量。对于比重应用中尽量减少含灰量非常必要，而且含灰量测定对于一般纯度水平的判断也非常有用。 化学兼容性 确保滤器介质以及滤器外壳(如适用)的完整性不会因暴露于某种化学物质而受到破坏这一点非常重要。除此之外，暴露于这些化合物还应不会引起滤器上的纤维或颗粒脱落，或者增加萃取物的产生。接触时间的长短，温度，浓度和操作压力都会影响到兼容性。Whatman提供了一张化学兼容性表以帮助客户选择滤膜(见340页)。 深层过滤器 深层过滤器的一个普遍性质即能将颗粒截留在过滤介质的表面或内部。所有传统的纤维过滤器(无论是由纤维素、硅酸盐玻璃微纤维或其他纤维物质生产)都属于深层过滤器，并且通常都具有良好的载量。 Herzberg法 Whatman采用Herzberg流速检测方法对其滤器系列产品进行液体流速测定。将预过滤的脱氧水以恒定静压头(10 cm)加载到检测滤器上。测定的流速一般每100 ml需要数秒。流速也 可通过改良ASTM法进行测定，该方法将折叠成四分之一圆的滤纸固定在金属环上。然而目前认为该方法不如Herzberg检测可靠或稳定。 亲水性 由于亲水滤器具有对水的亲和性，因此理论上可被任何液体浸润。该滤器常用于水性溶剂以及兼容的有机溶剂。 疏水性 这些滤器对水有排斥，因此适合于过滤有机溶剂，以及通气和气体过滤。 液体流速 实际过滤应用中，液体的流速取决于多个因素，其中很多因素与被过滤的固体/液体的性质相关。为了能对各种滤器的性能进行比较，需要一种标准化的环境设置，使得能对特定滤
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Trabecular cell monolayer culture
作者：德尔塔 日期：2022-05-04
Trabecular cell monolayer culture Originally described in 1979 and more recently modified by Stamer et al primary trabecular monolayer cell culture has been a cornerstone for investigation of the molecular and biochemical functions in this distinct cell type. The trabecular meshwork accounts for most aqueous outflow resistance in the anterior chamber of the human eye.1 It is believed that the interplay between the endothelial-like cells of this tissue (trabecular cells) and the surrounding extracellular matrix are responsible for maintaining the resistance necessary for preservation of the aqueous outflow pathway. The trabecular cells are phagocytic cells, actively removing debris such as pigment granules, erythrocytes, and pseudoexfoliation material from the aqueous outflow system. They also are involved in the production and turnover of extracellular matrix. 1. The trabecular meshwork was dissected from human donor eyes and subjected to extracellular matrix digestion with solution of primary cell isolation. 2. The cells were pelleted and resuspended in primary cell culture system containing penicillin-streptomycin (100 U/mL) and 10% FBS (DMEM-FBS). 3. Cells were placed in a T25 flask and grown to confluence at 37°C in 5% CO2 in primary cell culture system (passages 3–7). 4. The confluence of cell cultures was determined by observation of cell density at 100× magnification with an inverted light microscope. 5. Cultures were considered confluent when cell expansion had reached a point where cells touched each other on all sides and no intercellular gaps were pres
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微液流控制系统
作者：德尔塔 日期：2022-05-04
显微液流控制系统 要在纳升或微升层级对液体进行控制，MFCS（显微液流控制系统）是不错的选择，该系统消除了标准注射泵和蠕动泵在微小体积范围内发生的滞后、平衡时间长和脉冲调制的问题。目前有三种系统可供选择，并可以根据客户实验情况定制和简便升级。以下这篇文章涵盖了流体系统的可用选项。 MFCS可以应用在以下领域： 液相色谱研究，芯片实验室，μTAS系统，药物转运，生命科学，质量测试和流变力研究。 建立自己的MFCS： 1、第一步：决定实验所需的压力范围。 2、第二步：决定所需通道数量。压力范围和通道数量将决定需要哪种定制平台（低压，高压或者负压）。 注意：确定通道数量以及每个通道压力后，系统可以随时升级来增加新的通道或者压力范围。 3、第三步：选择一个流体连接装置。有三种附件可以供选择：FLFLOWELL、FL-FLUIWELL 和FL-ELECTROWELL。 三种可定制平台 ● 低压型-FL-MFCS-FLEX ○ 四种通道压力：0-25 mbar,0-69 mbar,0-345 mbar 或者 0-1000 mbar。 ○ 通道数量1-8个，可混合配置不同通道（不同压力范围的通道） ○ 具有最高的精确度和稳定性 ● 高压型-FL-MFCS-100 ○ 通道压力范围：0-7bar (0-100 PSI) ○ 通道数量：1-4个 ○ 具有最高的动态压力范围和相当高的精确度和稳定性。 ● 负压（真空）型-FL-MFCS-VAC ○ 适用于抽出流体的真空微流体压力泵 ○ 真空通道压力有三种：0-25 mbar, 0-69 mbar,或者0-345 mbar。 ○ 通道数量：1-8个 ○ 可混合配置（不同压力范围的通道） ○ 具有最高的精确度和稳定性 流体连接装置 选择好系统的配置之后，可以选择一种以下列出的流体连接装置。 ● FL-FLOWELL – Flowell系统包括三个流量计，四个可以加压和连接电脑的储液池。Flowell 系统带有加压能力的三个流量计可以监测通道中的液体流量。 带有放大能力的精确传感器与模数转换器和CMOS芯片上的信号处理器的相连接。储液池则能直接与芯片连接或者外置。使用一个
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海尔Eco-BioBank生物样本库整体解决方案
作者：德尔塔 日期：2022-05-04
整体集成特点：样本库前期整体设计+样本库资源信息化管理+样本库安全管理+样本库存储方案；为生物样本库专业用户提供高效、便捷的一站式服务 图（从左至右）：样本库布局、通风、散热、供电设计；样本库资源管理信息系统 ；样本安全监控系统 图：组织生物样本低温储存设备 1】样本库前期整体设计 为用户提供整体设计，包括： 1、在基建阶段就对样本库的电力供给、排风散热、空调负荷大小进行设计 2、充分考虑人流、物流的走向，污染、非污染区的隔离控制 3、设备的合理布局，避免出现事后摆放混乱或空间浪费的情况 2】样本库存储设备 优势：绿色、高效、便捷 1】节能、降噪：海尔超低温冰箱专利的四层保温、四门独立密封设计和超静音高效压缩机的应用将综合能耗比提升，为样本的大规模集中保存提供节能、静音的使用环境； 2】高效、便捷：为用户提供最大的单台样本存储量（2英寸冻存盒，600个，累计60000个）的同时，单位样本的存储成本较经济； 3】样本库存储方案 4】生物样本资源管理系统 可提供用户自定义的条码管理、患者及亲属信息管理、检验及病理信息管理、随访信息管理、3D实物操作界面、组织架构管理和更加严格的权限管理及决策系统，其中决策系统是用来呈现用户最关注的信息，帮助用户第一时间了解整个样本存储的状态。 ECO-BioBank样本安全解决方案 系统由YB04型采集与传输智能设备及海尔智能组网软件组成。整个传输网络以海尔自主知识产权的智能组网技术为基础，用户可以快速建立完全自适应、可升级、易扩展的高度智能化无线数据传输网络，尤其适用于冷链等无人监控系统、满足工业和企业级用户短距离(300米～5000米)、高可靠数据传输无线网的需求。 详细信息请访问海尔生物医疗网站： 或咨询0532-88936018/6019/6040
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Keratocyte isolation (corneal fibroblasts)
作者：德尔塔 日期：2022-05-04
Keratocyte isolation (corneal fibroblasts) Corneal keratocytes (corneal fibroblasts) that this corneal layer is specialized fibroblasts residing in the stroma, representing about 85-90% of corneal thickness, are built up from highly regular collagenous lamellae and extracellular matrix components. Keratocytes play the major role in keeping it transparent, healing its wounds, and synthesizing its components. In the unperturbed cornea keratocytes stay dormant, coming into action after any kind of injury or inflammation. Some keratocytes underlying the site of injury, even a light one, undergo apoptosis immediately after the injury. The corneal stroma matrix consists primarily of collagen I, V, VI, and XII; the proteoglycan decorin, which contains a single dermatan sulfate side chain; and the proteoglycans lumican, keratocan, and osteoglycin/mimecan. Keratocytes may play a role in different corneal disorders. According to comparative research, their functions drastically diverge from the norm in keratoconus, the most frequent form of corneal dystrophy. In keratoconic corneas they have been shown to commit apoptosis far away from any epithelial injury; a hypothesis exists that presents excessive keratocyte apoptosis as a major pathological event in keratoconus. According to one study, patient's keratocytes have decreased levels of one of the alcohol dehydrogenase subforms, they secrete significantly less superoxide dismutase 3, according to another. Keratocyte Isolation 1. Bovine keratocytes were isolated using a modification of a sequential primary cell digestion
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反渗透膜在食品加工和生物工程中的应用
作者：德尔塔 日期：2022-05-04
反渗透膜在食品加工和生物工程中的应用 反渗透在食品加工和生物工程领域的应用包括工艺用水处理、产品有效成分回收、脱水浓缩以及物质分离等４个方面。选择膜法对食品和生物产品浓缩、分离和回收是由该技术固有的过程优势所决定的，如反渗透可在常温下闭合回路中操作，从而减少了空气中氧对料液的影响及蒸发过程的热降解问题；反渗透操作只是加压输送过程，工艺简单，无溶剂相变，大大节约了能源等；尤其在附加值高的稀溶液中微量成分的回收浓缩等方面，其他方法有很多困难，而反渗透是可行的。 乳制品蛋白质、氨基酸及多糖的分离与浓缩是反渗透技术在本领域内最主要的应用，采用反渗透直接或间接（对超滤后的渗透液）处理牛奶和乳清在欧美已经非常普遍，一套7000m2膜面积（管式为主）的反渗透工艺约需投资6000万美元其他应用包括在食品加工中糖、酸、碱等食品加工化学品的回收,果汁（番茄汁、橙汁、苹果汁、葡萄汁等）的浓缩，多糖与蛋白的分离，中药有效成分的提取，芳香物质的回收以及发酵中的醇水分离等，其中很多已工业化应用。 膜技术在食品加工和生物产品中的应用关键在于解决使用中的膜污染问题，一般通过膜组器设计、工艺匹配和清洗等渠道解决。值得注意的是分离应用中往往要求膜对盐的截留率较低，而对有机物完全截留，如糖、氨基酸与盐的适当分离以及染料与盐的分离等，此时，纳滤是一种很有发展前景的主流技术，这也是近年来纳滤膜研制日益成为重点的原因之一。一般而言，在工艺应用上单靠反渗透或纳滤技术一个单元来解决所有问题的想法是不现实的，多工艺的组合往往是工业化最有效的思路，如反渗透/纳滤与薄膜蒸发、电渗析、结晶、渗透蒸发以及促进传递等方式的合理组合。 反渗透/纳滤技术已经成为现代工业中的主导技术之一。虽然世界上生产膜的厂商及研制单位很多，但现状是排在前列的四五个主要跨国公司拥有了世界上90%以上的产量和市场，而在1998年全世界仅反渗透膜市场的销售量
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Culture of retinal endothelial cells and pericytes
作者：德尔塔 日期：2022-05-04
Culture of retinal endothelial cells and pericytes Isolation of retinal microvessels 1. Eyes were obtained and transported on ice. 2. Eyes were cut circumferentially 3 mm posterior to the limbus, the vitreous humor was removed, and the retina was exposed and transferred to solution of primary cell culture medium. 3. Retinas were homogenized by two gentle up/down strokes in a 15 ml Dounce homogenizer (type A pestle). 4. The homogenate was filtered over an 88-m sieve, and large vessels were removed with forceps from the retentate. 5. The remaining retentate was digested in 0.066% collagenase (142 units/mg) and 0.033% bovine serum albumin in PBS for 45 min at 37°C. 6. The homogenate was subjected to centrifuga- tion (1000 x g, 2 min), and the pellet was resuspended in solution of primary cell culture medium, supplemented with 20% fetal bovine serum (FBS), and transferred to culture dishes coated with the indicated components. 7. After allowing 3 hr for cell attachment, the media were removed and replaced with the indicated culture media. Matrix and media components 1. Fibronectin was obtained from several commercial sources and was also prepared from human plasma. 2. All preparations of fibronectin were used at concentrations of 100 μg/ml and yielded similar results. 3. Hyaluronic acid (grade I) was used at a concentration of 100 μg/ml. 4. Experiments with the combination of fibronectin and hyaluronic acid used 100 μg/ml of each component. 5. Gelatin and pig skin gelatin were used at concentrations of 0.2%. 6. Falcon six-well plates were coated with thes
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化学试剂的纯度划分
作者：德尔塔 日期：2022-05-04
化学试剂的纯度划分化学试剂的纯度目前在我国仍然划分为： 国标试剂：该类试剂为我国国家标准所规定，适用于检验、鉴定、检测 基准试剂（JZ，绿标签）：作为基准物质，标定标准溶液。 优级纯（GR，绿标签）（一级品）： 主成分含量很高、纯度很高，适用于精确分析和研究工作，有的可作为基准物质。 分析纯（AR，红标签）（二级品）： 主成分含量很高、纯度较高，干扰杂质很低，适用于工业分析及化学实验。 化学纯（CP，蓝标签）（三级品）： 主成分含量高、纯度较高，存在干扰杂质，适用于化学实验和合成制备。 实验纯（LR，黄标签）： 主成分含量高，纯度较差，杂质含量不做选择，只适用于一般化学实验和合成制备。 教学试剂（）：可以满足学生教学目的，不至于造成化学反应现象偏差的一类试剂。 指定级 （ZD），该类试剂是按照用户要求的质量控制指标，为特定用户订做的化学试剂。 高纯试剂（EP）：包括超纯、特纯、高纯、光谱纯，配制标准溶液。 此类试剂质量注重的是：在特定方法分析过程中可能引起分析结果偏差，对成分分析或含量分析干扰的杂质含量，但对主含量不做很高要求。 色谱纯（GC）：气相色谱分析专用。 质量指标注重干扰气相色谱峰的杂质。主成分含量高。 色谱纯（LC）：液相色谱分析标准物质。质量指标注重干扰液相色谱峰的杂质。主成分含量高 指示剂（ID）：配制指示溶液用。 质量指标为变色范围和变色敏感程度。可替代CP,也适用于有机合成用。 生化试剂（BR）：配制生物化学检验试液 和生化合成。质量指标注重生物活性杂质。可替代指示剂，可用于有机合成 生物染色剂（BS）：配制微生物标本染色液。 质量指标注重生物活性杂质。可替代指示剂，可用于有机合成 光谱纯（SP）：用于光谱分析。 分别适用于分光光度计、原子吸收光谱、原子发射光谱 电子纯（MOS）：适用于电子产品生产中，电性杂质含量极低。 当量试剂（3N、4N、5N）：主成分含量分别为99.9%、99.99%、99.99
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技术指导：对盐雾试验的思考及与实际的密切联系
作者：德尔塔 日期：2022-05-02
盐雾试验是一种主要利用盐雾试验设备所创造的人工模拟盐雾环境条件来考核产品或金属材料耐腐蚀性能的环境试验。它分为二大类，一类为天然环境暴露试验，另一类为人工加速模拟盐雾环境试验。人工模拟盐雾环境试验是利用一种具有一定容积空间的试验设备——盐雾试验箱，在其容积空间内用人工的方法，造成盐雾环境来对产品的耐盐雾腐蚀性能质量进行考核。它与天然环境相比，其盐雾环境的氯化物的盐浓度，可以是一般天然环境盐雾含量的几倍或几十倍，使腐蚀速度大大提高，对产品进行盐雾试验，得出结果的时间也大大缩短。如在天然暴露环境下对某产品样品进行试验，待其腐蚀可能要1年，而在人工模拟盐雾环境条件下试验，只要24小时，即可得到相似的结果。 人工模拟盐雾试验又包括中性盐雾试验、醋酸盐雾试验、铜盐加速醋酸盐雾试验、交变盐雾试验。 中性盐雾试验（NSS试验）是出现最早目前应用领域最广的一种加速腐蚀试验方法。它采用5%的氯化钠盐水溶液，溶液PH值调在中性范围（6～7）作为喷雾用的溶液。试验温度均取35℃，要求盐雾的沉降率在1～2ml/80cm².h之间。 醋酸盐雾试验（ASS试验）是在中性盐雾试验的基础上发展起来的。它是在5%氯化钠溶液中加入一些冰醋酸，使溶液的PH值降为3左右，溶液变成酸性，最后形成的盐雾也由中性盐雾变成酸性。它的腐蚀速度要比NSS试验快3倍左右。 铜盐加速醋酸盐雾试验（CASS试验）是国外新近发展起来的一种快速盐雾腐蚀试验，试验温度为50℃，盐溶液中加入少量铜盐—氯化铜，强烈诱发腐蚀。它的腐蚀速度大约是NSS试验的8倍。 交变盐雾试验是一种综合盐雾试验，它实际上是中性盐雾试验加恒定湿热试验。它主要用于空腔型的整机产品，通过潮态环境的渗透，使盐雾腐蚀不但在产品表面产生，也在产品内部产生。它是将产品在盐雾和湿热两种环境条件下交替转换，最后考核整机产品的电性能和机械性能有无变化。
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Morris水迷宫实验准则（1）
作者：德尔塔 日期：2022-05-02
实验原理（水迷宫的发展史，以及简单的实验原理和应用领域，以及在我国的发展情况和国内外的主要厂家） Morris水迷宫的组成（主要分为硬件和图像采集，软件） 硬件准则（国内外文献提及到的硬件准则，我们主要针对国内文献提及到的） 实验流程准则（实验细节） 统计方法学准则（遵循统计学原理） 评价指标的准则（实验数据的解释） 实验适用范围准则（实验适用四个领域，与水迷宫的10个优点） 一、实验原理 20世纪80年代初,英国的心理学家Morris和他的同事利用大鼠在盛有水和牛奶混合物的不透明水池中搜索目标物的方法,研究大鼠的海马等脑区受到损害后的学习、记忆和空间定向以及认知能力时取得了令人瞩目的结果。这种装置不但构思新颖、实验设计合理以及方法简便和实用,而且便于观察和记录动物入水后搜索藏在水下平台所需的时间、采用的策略和它们的游泳轨迹,从而可分析和推断动物的学习、记忆和空间认知等方面的能力。虽然起初的实验对象为大鼠，但此后该迷宫系统成为评估啮齿类动物空间学习和记忆能力的经典程序，广泛运用于神经生物学、药理学等领域的基础和应用研究中。它能较客观地衡量动物空间记忆、工作记忆以及空间辨别能力的改变。因此,这种研究方法很快就引起各国神经科学家的关注,并将此法称为Morris水迷宫法。国外有许多生产Morris水迷宫的公司，比如说德国的TSE公司，美国的Sandiegoinstruments公司等等；20世纪80年代末,中国科学院心理研究所建立了我国第一个Morris水迷宫实验室,并于90年代初建立了Morris水迷宫图像自动采集和处理系统。国内随后出现了许多Morris水迷宫生产厂家，比如说有上海欣软、北京药研所等等，但是从国际到国内，Morris水迷宫的硬件设备，软件系统，实验方法，以及实验数据的处理方法都不尽相同，因此，从Morris水迷宫法的发明到现在已有20余年的历史了，应该制定一套比较标准的实验准则了。 二、Morris水迷宫的组成 Morris实验系统由水迷宫装置、水迷宫图像自动采集和软件
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免疫学实验比较
作者：德尔塔 日期：2022-05-02
免疫学三大工具，免疫组化、Western、ELISA，分别用于定位，定性和定量。 IHC（免疫组化Immunohistochemistry） 是融合了免疫学原理（抗原抗体特异性结合）和组织学技术（组织的取材、固定、包埋、切片、脱蜡、水化等），通过化学反应使标记抗体的显色剂 (荧光素、酶、金属离子、同位素)显色，来对组织（细胞）内抗原进行定位、定性及定量的研究(主要是定位)。样本是细胞或组织，要在显微镜下观察结果，可能出现膜阳性、质阳性和核阳性。 ELISA（酶联免疫吸附试验Enzyme linked immunosorbent assay） 用到了免疫学原理和化学反应显色，待测的样品多是血清、血浆、尿液、细胞或组织培养上清液，因而没有用到组织包埋、切片等技术，这是与免疫组化的主要区别，操作上 开始需要将抗原或抗体结合到固相载体表面，从而使后来形成的抗原-抗体-酶-底物复合物粘附在载体上，这就是“吸附”的含义。 WB （蛋白质印迹Western Blot） 先要进行SDS-PAGE，然后将分离开的蛋白质样品用电转仪转移到固相载体上，而后利用抗原-抗体-标记物显色来检测样品，可以用于定性和半定量。 对于IHC来说，定位是免疫组化最大的优势。该方法可在组织和细胞中进行抗原的准确定位，因而可同时对不同抗原在同一组织或细胞中进行定位观察，这样就可以进行形态与功能相结合的研究，相比于其他蛋白检测方法，免疫组化具有定位较直接准确、定性灵敏度高，是定位检测分析**方法对病理学领域开展深入研究是十分有意义，尤其对于有些因子的转位研究十分有用。 WB与IHC技术相比，定量可能更加准确；当然WB也可定性和定位（通过提取膜蛋白或核蛋白、胞浆蛋白分别检测其中抗原含量，进而间接反映它们的定位），但敏感性远远低于IHC。 ELISA与免疫组化技术相比，定量最准确，是分泌性蛋白检测**方法之一。尤其对于微定量分析多个样本非常有用，所用试剂和样品量很少，结果精确。IHC针对性比较强，而且一般是以组织或者细胞为样本，而ELI
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引物设计重点因素及设计技巧
作者：德尔塔 日期：2022-05-02
引物设计重点因素及设计技巧 想把引物合成的比较好，除了前引物和后引物的Tm不能相差太大，我们还要重点考虑以下因素： 一、GC含量 引物的GC含量一般为40-60%，以45-55%为宜，过高或过低都不利于引发反应。有一些模板本身的GC含量偏低或偏高，导致引物的GC含量不能在上述范围内，这时应尽量使上下游引物的GC 含量以及Tm 值保持接近（上下游引物的GC含量不能相差太大），以有利于退火温度的选择。如果G-C比例超出，则在引物的5’端增加As或Ts；而如果A-T比例过高，则同样在5’端增加Gs或Cs。但也有认为：原来普遍认为PCR引物应当有50%的GC/AT比率的观点其实是不对的，以人基因组DNA为模板，用81%AT的引物可以产生单一的、专一的、长250 bp，含有70% AT的产物。完全没有必要复杂地去计算产物和引物的解链温度，PCR引物的GC/AT比率应当等于或高于所要放大的模板的GC/AT比。产物中GC含量**大于引物中的GC含量。 二、Degeneracy 多义性 当设计多义引物时应尽量减少引物多义性，这样会带来更好的特异性，应尽量避免3末端的多义性，因为这里即使一个碱基的错配都能阻止引物延伸。 三、3’ End Stability 3 末端稳定性 引物稳定性影响它的错配效率，一条理想的引物应该有一个稳定性较强的5 末端和相对稳定性较弱的3 末端。如果引物3 稳定性强，有可能在即使5 末端不配对的情况下造成错配，形成非特异性扩增条带（secondary bands） 。而3 末端稳定性低的引物较好的原因是在引物发生错配时，由于3 末端不太稳定引物结合不稳定而难以延伸。 四、GC Clamp GC钳 引物与目的位点的有效结合需要有稳定的5 末端。这一段有较强稳定性的5 末端称为GC钳。它保证引物与模板的稳定结合。选择有合适稳定性的引物能在确保不产生非特异性条带的前提下尽量降低退火温度。 五、Secondary Structures二级结构 二级结构是引物设计中必须考虑的一个重要因素。二级结构能显著影响反应中能与模板正确结合的引物数量，发卡结构的存在能限制引物与
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Isolation and cultivation of endothelial progenitor cells (EPCs)
作者：德尔塔 日期：2022-05-02
Isolation and cultivation of endothelial progenitor cells (EPCs) Circulating bone marrow (BM)–derived endothelial progenitor cells (EPCs) are recruited to the site of tissue regeneration and substantially contribute to neovascularization and re-endothelialization after acute vascular injury. Intravenous infusion of EPCs after ischemia was shown to improve neovascularization and cardiac function in both animal models and pilot clinical studies. Conversely, BM-derived EPCs participate in the pathogenesis of various diseases, such as cancer, retinopathy, and atherosclerosis. Impaired recruitment of BM-derived endothelial and hematopoietic precursor cells is known to block both tumor angiogenesis and growth. Injection of BM cells promotes injury-associated retinal angiogenesis. BM-derived progenitors also contribute to the formation of the microvasculature in allograft arteriosclerotic lesions. Therefore, EPCs have both physiologic and pathologic roles; thus, they have been widely considered for establishing new therapeutic strategies for the treatment of angiogenesis-related diseases. The number of circulating EPCs may limit the ultimate magnitude of angiogenesis therapies and, therefore, strategies that are based on the administration of ex vivo–expanded populations of EPCs harvested from the patient's circulating blood appear promising. 1. Human umbilical cord blood (HUCB) samples (∼50 mL each) were collected from fresh placentas with attached umbilical cords by gravity flow. 2. EPCs were isolated by density gradient centrifugation over Biocoll (Biochrom, Berlin,
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Isolation of stromal vascular cells from human adipose tissue
作者：德尔塔 日期：2022-05-02
Isolation of stromal vascular cells from human adipose tissue Stromal stem cells proliferate in vitro and may be differentiated along several lineages. The scarcity of stromal stem cells in tissues and the lack of reagents required obtaining freshly isolated cells of high purity and in quantities required for extensive analysis. In human bone marrow, for example, only 0.001–0.01% of nucleated cells form CFU-Fs. Adipose tissue is easy to obtain in large quantities and harbors a large number of cells with CFU-F ability; therefore, it should provide a readily available source of stromal stem cells in numbers sufficient to study their biology without having to resort to cell culture. 1. Adipose tissue was obtained by liposuction from abdominal, hip, and thigh regions of healthy female donors aged 18–39. 2. The stromal vascular fraction (SVF) was separated from adipose tissue using a procedure modified. 3. Lipoaspirate (300–400 ml) was washed with primary cell culture system containing antibiotics (100 IU/ml penicillin and 100 IU/ml streptomycin) and 2.5 μg/ml amphotericin B. 4. Washed adipose tissue was digested for 2 h on a shaker at 37°C in primary cell isolation system. 5. Floating adipocytes were aspirated from pelleted SVF cells after centrifugation at 400 × g for 10 min. 6. Pellets were resuspended in red blood cell lysis buffer (2.06 g/l Tris base, 7.49 g/l NH4Cl, pH 7.2) for 10 min at room temperature. 7. After resuspending SVF cells in primary cell culture system containing 2% fetal bovine serum (FBS), tissue clumps were allowed to settle for 1 min. 8. Suspe
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