哺乳动物原代细胞培养的β-半乳糖苷酶(分光光度测定)
发布时间:2022-05-04     作者:德尔塔   分享到:
【产品介绍】:
哺乳动物原代细胞培养的β-半乳糖苷酶(分光光度测定) 试剂和器材: 1.反应缓冲液:5g/L聚乙二醇辛基苯基醚(Triton X-100)、0.05mol/L柠檬酸钠-磷酸盐缓冲液,pH4.3; 2.终止液:0.25%甘氨酸-NaOH,pH10; 3.底物:6mmol/L对硝基苯基-β-半乳呋喃糖苷溶于缓冲溶液中; 4.微量离心机,带1.5—2.0ml小管; 5.分光光度计(可见波长)带1ml比色皿; 紫外-可见分光光度法测定酶活 酶活测定:以ONPG为底物测定β-半乳糖苷酶活力。 酶活定义:以ONPG为底物,37℃保温酶解,每分钟释放lμmol/L邻硝基酚的酶量,定义为1个酶活力单位。 实验方法: 1.每次检测,将0.5ml底物与沉淀于微量离心小管中的膜组分或50μl膜的混悬液混合; 2.如第1步设置空杯样,立即加入终止(缓冲液)1ml; 3.37℃孵育检测液30min; 4.加入1ml的终止(缓冲液)到检测液中; 5.在微量离心机中离心1—2min,去除任何沉淀物质; 6.读出在410nm波长下检测液相对于空白样的吸光值;