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细胞凋亡检测（实验简介,实验目的,实验原理,实验所需试剂,方法步骤）
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
细胞凋亡检测实验简介 凋亡检测主要用于以下实验过程：1.研究不同类型的病理标本，包括肿瘤细胞和组织； 2.从促进肿瘤细胞凋亡基因**的角度进行临床诊断和**，新药开发，生物制品开发，肿瘤放疗和化疗以及探索； 3.进行相关疾病的早期发现以及放疗和化疗效果评估等实验。 1.凋亡检测实验的目的： 1.掌上细胞凋亡细胞的形态特征 2.通过实验通过用荧光探针对细胞进行双重标记来检测正常的活细胞，凋亡细胞和坏死细胞的方法。 2.细胞凋亡检测实验的实验原理： 根据其性质，来源和生物学意义，细胞死亡可分为凋亡和坏死不同的两种类型。细胞凋亡在生活过程中无处不在，在生物个体和生存中起着非常重要的作用。它是在某些生理条件下顺序发生的一系列事件的组合。它是一种自主控制，细胞可以根据某些法律程序终止其生命。细胞凋亡具有可识别的形态和生化特征。 从形态上可以看出，凋亡细胞与周围细胞脱离，然后变成圆形，细胞膜向内收缩，细胞质浓缩，内质网扩张，细胞核收缩破裂，分布是块状或新月形。网状细胞和细胞膜的进一步融合将细胞分为许多完全包裹的凋亡小体，最终被吞噬细胞吞噬并消化。在细胞凋亡过程中，细胞内容物不会在细胞外释放，不会影响其他细胞，因此不会引起炎症反应。 在生物化学中，在大多数细胞凋亡过程中，内源性核酸内切酶被激活，其活性增加。核DNA在核小体的连接处被酶随机切割，并降解为180-200bp的多个片段或其倍数。如果对核DNA进行琼脂糖电泳，则可以显示出以180-200bp为碱基的DNA阶梯的特征。 相反，坏死是当细胞受到严重损害时发生的细胞死亡。在坏死的早期，细胞失去质膜的完整性，各种细胞器肿胀，质膜塌陷释放出内含物，引起炎症反应。尽管在坏死过程中核DNA也被降解，但是由于存在各种长度的DNA，碎片无法形成梯形条纹，而是分散的。 一些轻度的损伤刺激和一些抗肿瘤药物可以诱导细胞凋亡。通常，这些因素还可以在诱导细胞凋亡的同时诱导细胞坏死
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细胞凋亡检测（DNA ladder法检测）实验
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
一、细胞凋亡检测实验方法原理 当发生细胞凋亡时，内源核酸酶被激活，并在核小体之间切割染色体DNA链以形成180至200个碱基或其倍数的DNA片段，并提取这些DNA片段进行电泳，DNA阶梯带（DNA阶梯）可以获得。 二、细胞凋亡检测实验所学的材料 凋亡细胞 蛋白酶K、乙酸钾、白细胞裂解液、Tris-HCl、NaCl、 EDTA 、SDS、乙醇、琼脂糖、仪器，耗材、离心管离心机水浴电泳仪电泳槽 序列 产品名 货号 备注 1 蛋白酶K SS2244-25mg 2 乙酸钾 JT0883-500g 3 白细胞裂解液 4 Tris-HCl（无菌） HC2100-500ml 5 NaCl JT0001-500g 6 EDTA二钠 SS0008-100g 7 SDS HC1238 8 乙醇 JT26000-500ml 9 琼脂糖 SF0012-50g 10 10ul滤芯吸头 FT-10X-H 11 1.5ml离心管 F-EP015 三、细胞凋亡检测实验的流程 1.材料和试剂的制备 1.物质：凋亡细胞。 2.蛋白酶K（500μg/ ml），乙酸钾氯仿（8 mol / L），无水乙醇，70％乙醇，2％琼脂糖凝胶。 3.白细胞裂解液：pH 8.0、10 mmol / L Tris-HCl，10 mmol / L NaCl，10 mmol / L EDTA，1％SDS。 四、细胞凋亡检测实验操作步骤 1.收集凋亡细胞：取1?2×106细胞，离心后，用70％酒精（-20℃）固定2 h。 2.洗涤：取出用酒精固定的细胞，以1000 r / min离心5分钟，去除上清液，然后用PBS洗涤两次。 3.裂解细胞：加入400μl细胞裂解液，充分混合并加入100μl蛋白酶K，并在65°C水浴中消化2小时或过夜。 4.蛋白质处理：加入75μl8 mol / L乙酸钾，在4°C下放置15分钟，然后加入750μl氯仿，充分混合，以10000 r / min离心10分钟，然后将上清液转移至一支新的Eppendorf管。 5.沉淀DNA：添加750μl无水乙醇，轻轻颠倒混合，然后可以看到乳白色
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什么是抑制剂（酶抑制剂,化学抑制剂）
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
酶抑制剂： 酶抑制剂，也就是我们生物医疗领域，通常所说的抑制剂，是潜在的药物有效成分。 酶抑制剂是与酶结合并降低其活性的分子。抑制剂通过与酶的活性位点结合，抑制剂可降低底物与酶的相容性，从而抑制了酶-底物复合物的形成，阻止了反应的催化作用，并减少了反应产生的产物数量。 可以说，随着酶抑制剂的浓度增加，酶活性的速率降低，因此，产物的产生量与抑制剂分子的浓度成反比。 由于阻断酶的活性可以杀死病原体或纠正代谢失衡，因此许多药物都是酶抑制剂。 此类抑制剂也经常应用在杀虫剂中使用，当然并非所有与酶结合的分子都是抑制剂。 酶激活剂与酶结合并增加其酶促活性，而酶底物在酶的正常催化循环中结合并转化为产物。 抗感染类抑制剂；程序性死亡-1抑制剂 化学领域抑制剂： 化学领域抑制剂也称为慢白聚合剂，是阻止或者降低化学反应速率的化学物质，抑制剂的作用于负催化剂具有相反的作用。化学抑制剂不能停止聚合反应，但会减慢聚合反应的速度；抑制或减轻化学反应的物质。化学抑制剂有很多类型。 例如：催化反应的负催化剂，高分子化合物的阻聚剂，塑料，橡胶，油脂等的抗氧化剂，泡沫抑制剂，汽油的抗震剂，防腐缓冲液等。 化学抑制剂的案例：抗氧化剂是食品，橡胶和其他有机物质中的氧化反应；在食品中添加水杨酸可抑制腐烂；向某些聚合物中添加紫外线抑制剂（例如水杨酸甲酯等）可防止由于吸收紫外线而导致的劣化；有机磷酸酯是体内胆碱酯酶的抑制剂，在某些聚合物单体的储存和运输过程中，需要使用抑制剂来防止其自聚合。
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噬菌体的检测与效价测定
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
一、噬菌体的检测与效价测定实验简单介绍： 1. 了解噬菌体效价的含义及其测定原理。 2. 学会检查噬菌体的方法。 3. 掌握用双层琼脂平板法测定噬菌体效价的操作技能。 二、实验目的 目的：探讨该方法的临床效果了解噬菌体效价的含义及其测定原理。 2、学习如何检查噬菌体。 3、掌握双琼脂平板法测定噬菌体效价的操作技巧。 三、实验原则： 噬菌体是一种特别寄生于细菌和放线菌上的病毒。它的个体形状很小，用常规的微生物计数法无法测定其数量。当强毒噬菌体感染细菌时，会使敏感菌迅速裂解并释放大量的子代噬菌体，进而扩散感染周围细胞。最后，含有敏感菌的悬浮液会逐渐变得清澈，或者在含有敏感菌的平板上出现肉眼可见的菌斑。了解噬菌体的特性，快速检测、分离和测定噬菌体效价具有重要意义。 样品可以是发酵液、空气、污水、土壤等（对于不能取样但需要检验的对象，可以用用无菌水浸泡过的棉花表面作为检验样品）。为了便于分离，可通过增殖培养提高样品中噬菌体的数量。 用生物检测法检测噬菌体需要12小时左右，无法及时判断是否存在噬菌体污染。噬菌体污染可以通过快速检测大致确定，以便采取必要的预防措施。正常发酵（培养）液离心后沉淀，上清液蛋白质含量很小，加热后仍清晰可见；而离心后感染噬菌体的发酵（培养）液上清液中含有从热解菌中逸出的活性蛋白，但加热后蛋白质变性，有丁达尔效应，光照下不明显。该方法简便、快速、准确，可用于鉴定发酵液污染的噬菌体。但是，它不适用于致溶性细菌和嗜热噬菌体的诊断，也不适用于噬菌体感染较少的原代种子培养基。 噬菌体效价为1ml样品中感染性噬菌体粒子数。用双琼脂平板法测定效价。由于一个噬菌体通常在含有特定宿主菌的琼脂平板上产生一个噬菌体斑，因此噬菌体的效价可以根据一定体积的噬菌体培养基中的菌斑数量来计算。该方法形成的斑块形态大小一致，清晰度高，计数更准确，应用广泛。 四、实验所需材料： 序号 产品 CAS
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免疫荧光（Immunofluorescence, IF）(实验方法,简介,实验步骤,实验所需试剂)
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
免疫荧光（Immunofluorescence, IF）实验方法 一．免疫荧光实验简单介绍 免疫荧光技术正在免疫学,生物化学与显微镜以技术为基础的技术。它基于抗原抗体反应的原理是先用荧光团标记已知的抗原或抗体，然后使用该荧光抗体（或抗原）作为探针检查细胞或组织内的相应抗原（或抗体）。利用荧光显微镜可以看见荧光所在的细胞或组织，从而确定抗原或抗体的性质与定位，以及利用定量技术（比如流式细胞仪）含量测定。 免疫荧光实验的主要步骤包括细胞片制备,固定及通透（或称为透化）,封闭,抗体孵育及荧光检测等。细胞片制备（通俗的说法是细胞爬片）是免疫荧光实验的第一步，细胞片的质量对实验的成败至关重要，原因很简单，如果发生细胞掉片，一切都无从谈起。这一步关键的是玻片（Slides or Coverslips）的处理以及细胞的活力，有人根据成功经验总结出许多有益的细节或小窍门，非常值得借鉴。固定与通透步骤最重要的是根据所研究抗原的性质选择适当的固定方法，合适的固定剂与固定程序对于获得好的实验结果是非常重要的。免疫荧光中的封闭与抗体孵育与其它方法（如ELISA或Western Blot）中的相同步骤是类似的，最重要的区别在于免疫荧光实验中要用到荧光抗体，因此必须谨记避光操作，此外抗体浓度的选择可能更加关键。最后需要注意的是，标记好荧光的细胞片应尽早观察，或者用封片剂封片后在4℃或-20℃避光保存，以免因标记蛋白解离或荧光减弱而影响实验结果。 由于操作步骤比较多，同时在分析结果时无法像WB那样可以根据分子量的大小区分非特异性识别，所以要得到一个完美的免疫荧光实验结果，除了需要高质量的抗体，以及对实验条件进行反复优化外，还必须设立严谨的实验对照。总之，免疫荧光实验从细胞样品处理,固定,封闭,抗体孵育到最后的封片及观察拍照，每步都非常关键，需要严格控制实验流程中每个步骤的质量，才能最终达到你的实验目的。 二.免疫荧光实验步骤： （1）细胞制备。对于单层生长细胞，在传代中培养事先将
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消化道平滑肌的生理特性及其影响因素实验
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
消化道平滑肌的生理特性及其影响因素实验 一．基本介绍：消化道平滑肌的生理特性及其影响因素 二．实验目的 1.观察生理特征，例如收缩力，自动节律和消化道平滑肌的可拉伸性。 2.了解胃肠道推进运动的实验方法，并观察药物对其的影响。 3.了解离体消化道平滑肌的实验方法，观察理化因素和药物对离体消化道平滑肌特征的影响，并分析其作用机理。 三．实验原理 胃肠道平滑肌具有肌肉的一般特征，例如兴奋性和收缩性，以及其自身的特殊性。它具有自动律动和伸展功能，可以产生推进动作。它可以改变化学物质，温度和拉伸。刺激的影响更为敏感，并且还受到神经和液体因素的调节。副交感神经末梢释放的神经递质乙酰胆碱和抗胆碱能酶新斯的明等可增强肠胃蠕动，而M受体阻滞剂阿托品抑制肠胃蠕动。肾上腺素和交感神经末梢释放神经递质去甲肾上腺素可抑制胃肠蠕动。去甲肾上腺素从内脏神经的大多数神经末梢释放，通过减慢胃肠道基本电节律的频率和传播速度，可以减慢胃肠运动并减缓胃肠平滑肌的收缩。在动物实验中，木炭被用作标记物，以测量木炭在胃肠道中每单位时间的距离，这可以反映出胃肠道前进的能力和速度。 小肠分离后，将其置于模拟人体内部环境的液体环境中，以使营养液的离子成分，渗透压，pH，温度，氧分压和营养成分类似于内部环境，可以在一段时间内维持肠道。平滑肌的正常活动和功能。药物可以通过与肠平滑肌上的受体相互作用来影响离体的肠平滑肌。 四．实验试剂及设备 序号 产品 cas号 货号 备注 1 乙酰胆碱 66-23-9 SC0410 2 新斯的明 114-80-7 JQ2762 3 阿托品 51-55-8 FF0438 4 肾上腺素 51-43-4 YZM003350 5 酚妥拉明 73-05-2 LSH58052 6 普萘洛尔 14556-46-8 DBK501834 7 台氏液
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细胞计数实验
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
细胞计数实验 一．实验目的 1.把握细胞计数方法。 2.了解区分细胞存活状态方法。 二．实验用品 0.4％台盼蓝溶液，无水乙醇或95％乙醇溶液，脱脂棉 普通显微镜,试管,稻草,毛细稻草,细胞计数板,绸布。 序号 产品名 货号 CAS 备注 1 0.4％台盼蓝溶液 SX0153 72-57-1 2 乙醇 JT26000 64-17-5 三．实验原理 在细胞内培养在工作中，通常有必要了解细胞的生命状态并确定细胞死亡，确定细胞接种的浓度和数量，并了解细胞活力和增殖，例如通过酶消化鉴定细胞悬液中的细胞活力，恢复后冷冻的细胞进行活力测试等。制备细胞悬液后，通常用生命染料台盼蓝将细胞染色，然后进行细胞计数。锥虫蓝无法穿透活细胞的正常细胞膜，因此活细胞不会被染色。死亡细胞的细胞膜通透性增加，使染料进入细胞并使细胞着色（蓝色）。对于细胞计数，通常根据白细胞计数方法使用血细胞计数板进行计数，这便于确定细胞的生存条件。 四．实验内容与方法 （一）动物细胞悬液的制备 将动物细胞用生物盐水准备适当浓度的细胞悬液，以备将来使用。 （二）细胞计数 1.柜台板加工 用无水乙醇或用95％乙醇溶液擦拭计数板然后，用丝布擦拭盖玻片一件，盖上计数板上的盖板。 2.染色 用滴管画0.4％台盼蓝染料溶液，以1：1的比例添加到细胞悬液中。从计数板的边缘缓慢滴落以填充计数板和盖板之间的间隙。注意不要让液体流入相邻的凹槽或携带气泡，否则会重做。片刻后，将计数板放在低倍镜下（10×10倍）以观察计数。 3.计数方法 根据该图，计算计数板的四个大正方形（每个大正方形分为16个小正方形）中的像元数。计数时，仅对完整的细胞进行计数，如果将细胞聚集在一起，则将对一个细胞进行计数。在大正方形中，如果行上有单元，通常将较低的行单元不计为较高的行单元，将左侧的行单元不计为右的行单元。第二次重复计数的误差不应超过±5％（图7-1）。在显微镜下观察到，折射力强
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PCR-SSP分析实验
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
PCR-SSP分析实验 一、实验简介 PCR序列特异性引物（SSP）分析方法是通过使用可以特异性鉴定特定等位基因的引物通过PCR扩增来检测序列多态性的方法，也称为等位基因特异性引物PCR方法。本实验采用PCR-SSP法检测MN的基因型。 二、实验方法原理 根据确定的某个等位基因的性质，设计其3'端第一个碱基与每个等位基因的特定碱基匹配的序列特异性引物。在PCR反应期间，只有引物3'末端。只有当第一个碱基与确定特定等位基因的碱基互补时，DNA片段才能完全复制，并且根据PCR产物的存在或不存在对等位基因进行分型。 三、实验材料 PCR扩增仪， 电泳仪， 电泳槽， 引物1：5'-GCATCAAGTACCACTGGT-3'； 引物2：5'-GCATTAAGTACCACTGAG-3'； 通用引物：5'-GAGAAGTTGAGAAAGGGGT-3'。 模板DNA， Taq聚合酶， 丙烯酰胺， 电极缓冲液， 加载缓冲液等 序列 产品名 货号 CAC 备注 1 丙烯酰胺 LSH54449 2 IEF电极缓冲液 HC1773 四、实验程序 1.PCR扩增PCR反应系统为20μl（2个系统，分别为引物1和引物2），包含模板2μl（约50ng），引物1.5μl，dNTP1.6μl（0.4mM），10×缓冲液2μl， Taq酶1.0 U，加双蒸水至20.0μl; PCR反应条件为94℃4min，94℃1.5min / 52℃2.0min / 72℃2.0min，30个循环。 2.PCR扩增产物的检测取2μlPCR扩增产物，进行6％聚丙烯酰胺凝胶电泳（T = 6％，C = 3.3％，凝胶规格为82mm×64mm×0.75mm）。电极缓冲液为1×TBE。将添加有1/5体积上样缓冲液的消化产物在220 v电压下电泳2至3小时。银染显色。 五、结果判断 根据电泳条带的等位基因类型的确定，只有一个系统将该条带检测为对应的特定引物的对应类型（M或N），并且两个系统都将该条带检测为MN类型。 六、实验讨论 1.注意事项①如果引物结合序列存在碱基变异，则可能没有扩增产物，导致类型判断错误； ②只有根据对照样品的准确分类，才能判断结果。 2.方法评估该方法操作简便，并且需要较
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平板细胞克隆形成试验
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
一、平板细胞克隆形成实验简介： 细胞克隆形成率即细胞接种存活率，表示接种细胞后贴壁的细胞成活并形成克隆的数量。贴壁后的细胞不一定每个都能增殖和形成克隆，而形成克隆的细胞必为贴壁和有增殖活力的细胞。克隆形成率反映细胞群体依赖性和增殖能力两个重要性状。 二、平板细胞克隆形成实验基本步骤： 1、取对数生长期的各组细胞，分别用0.25%胰蛋白酶消化并吹打成单个细胞，并把细胞悬浮在10%胎牛血清的DMEM培养液中备用。 2、将细胞悬液作梯度倍数稀释，每组细胞分别以每皿50、100、200个细胞的梯度密度分别接种含10mL 37℃预温培养液的皿中，并轻轻转动，使细胞分散均匀。置37℃ 5% CO2及饱和湿度的细胞培养箱中培养2～3周。 3、经常观察，当培养皿中出现肉眼可见的克隆时，终止培养。弃去上清液，用PBS小心浸洗2次。加4%多聚甲醛固定细胞5mL固定15分钟。然后去固定液，加适量GIMSA应用染色液染10～30分钟，然后用流水缓慢洗去染色液，空气干燥。 4、将平皿倒置并叠加一张带网格的透明胶片，用肉眼直接计数克隆，或在显微镜（低倍镜）计数大于10个细胞的克隆数。最后计算克隆形成率。 克隆形成率 =（克隆数/接种细胞数）×100% 平板克隆形成试验方法简单，适用于贴壁生长的细胞。适宜底物为玻璃的、塑料瓶皿。试验成功的关键是细胞悬液的制备和接种密度。细胞一定要分散得好，不能有细胞团，接种密度不能过大。 三、平板细胞克隆形成实验所需材料 序号 产品名 货号 CAS 备注 1 胰蛋白酶 SS2236 9002-07-7 2 PBS HC2031 3 多聚甲醛 JT12020 30525-89-4
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ELISA实验(简介,概念,原理,操作步骤)
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
ELISA实验 一、ELISA实验简介 ELISA是酶联接免疫吸附剂测定( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的简称。它是继免疫荧光和放射免疫技术之后发展起来的一种免疫酶技术。此项技术自70年代初问世以来，发展十分迅速，目前已被广泛用于生物学和医学科学的许多领域。 二、ELISA实验原理 ELISA是以免疫学反应为基础，将抗原、牽9体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种敏感性很高的试验技术。 由于抗原、抗体的反应在一种固相载体──聚苯乙烯微量滴定板的孔中进行，每加入一种试剂孵育后，可通过洗涤除去多余的游离反应物，从而保证试验结果的特异性与稳定性。在实际应用中，通过不同的设计，具体的方法步骤可有多种。即:用于检测抗体的间接法、用于检测抗原的双抗体夹心法以及用于检测小分子抗原或半抗原的抗原竞争法等等。比较常用的是ELISA双抗体夹心法及ELISA间接法。 三、ELISA实验操作步骤 方法一 用于检测未知抗原的双抗体夹心法: 1. 包被：用0.05M PH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1～10μg/ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml，4℃过夜。次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次，每次3分钟。(简称洗涤，下同)。 2. 加样：加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中，置37℃孵育1小时。然后洗涤。(同时做空白孔，阴性对照孔及阳性对照孔)。 3. 加酶标抗体：于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.1ml。37℃孵育0.5～1小时，洗涤。 4. 加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分钟。 5. 终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。 6. 结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅，以“+”、“-”号表示。也可测O·D值：在ELISA检测仪上，于450nm(若以ABTS显色，则410nm)处，以空白对照孔调零后测各孔O·D值，若大于规定的阴性对照OD值
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噬菌体滴度的测定实验（实验介绍;所需试剂;实验步骤）
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
一、噬菌体滴度测定实验介绍 噬菌体滴度测定实验中在宿主细胞过多的情况下，噬菌斑的数目随着噬菌体的增加而线性增加。因此，在感染前，应稀释噬菌体，而不是宿主细胞。低MOI（感染重复性）的平板还可确保每个噬菌斑仅包含一个DNA序列。 二、噬菌体滴度测定实验所需试剂 序号 产品 cas号 货号 备注 1 LB培养基 HC1007 2 顶部琼脂糖凝胶 HC1421 1、微波炉 2. LB / IPTG / Xgal培养板 3. LB培养基 4.顶部琼脂糖凝胶 三、噬菌体滴度测定实验步骤 1.在5~10ml LB培养基中接种一个ER2537克隆，并摇动孵育直至对数中期（OD600~0.5）。 2.随着细胞的生长，将顶部琼脂糖凝胶微波加热并分配到无菌培养管中，每管3ml。保持在45℃下使用。 3.将LB / IPTG / Xgal培养板在37°C下预热并放在一旁。 4.在LB培养基中将噬菌体稀释10倍。 推荐稀释范围：108-1011，用于扩增噬菌体的培养上清液； 101-104用于未放大筛选的洗脱液。每次稀释均使用新的吸头。**使用气溶胶屏障来避免交叉污染。 5.一旦ER2537培养物生长到对数生长期的中期，将其等分到微量离心管中，每管200ml。 6.将稀释的噬菌体上清液添加到装有细菌培养物的微量离心管中。仅将10 ml的一种稀释剂添加到微量离心管中，迅速涡旋，并在室温下孵育1-5分钟。 7.转移到装有45℃顶层琼脂糖凝胶的试管中，涡旋并快速混合，立即倒入预热的LB / IPTG / Xgal板上，然后轻轻摇动该板以均匀分布顶层凝胶。 8.将板冷却5分钟，然后在37°C下孵育过夜。 9.噬菌斑计数是基于噬菌斑计数约为100的培养皿。将噬菌斑计数乘以稀释液得到的滴度为每10毫升噬菌体噬菌斑形成单位（pfu）
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小鼠骨髓细胞微核试验（介绍,原理,步骤,结论）
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
一、小鼠骨髓细胞微核实验介绍 小鼠骨髓细胞微核实验中的微核是指存在于细胞主核之外的粒子，其大小相当于细胞直径的1/20至1/5。微核试验是一种快速检测化学毒物的方法，化学毒物会破坏染色体并干扰细胞的有丝分裂。它被认为是圆形或杏仁形，其染色与细胞核一致，并且在相间细胞中可以出现一种或多种。通常认为微核是细胞中的染色体断裂或纺锤体丝撞击，并在有丝分裂晚期停留在核外。因此，微核试验可以检测两种遗传学：由化学毒物或物理因素引起的染色体突变变化和染色体分离变化。结束。 微核可以出现在多种细胞中，但是在有核细胞中，将它们与正常细胞核的裂片和核突起区分开来更加困难。由于红细胞可以在成熟前最后一次分离后数小时排出主核，并且仍保留PCE细胞中的微核，因此通常要对PCE细胞中的微核进行计数。 二、小鼠骨髓细胞微核实验器械与试剂 序号 产品 cas号 货号 备注 1 甲醇 67-56-1 JT25999 2 甘油 56-81-5 JT26018 3 牛血清白蛋白96% 9048-46-8 SS2163 4 生理盐水 7732-18-5 5 吉姆萨染料 51811-82-6 SX0115 6 pH 6.8磷酸盐缓冲液 HC1980 7 磷酸二氢钾 7778-77-0 SS1343 8 磷酸氢二钠 7558-79-4 SS1345 1.设备手术刀，手术剪刀，无牙钳，弯曲小止血钳，干净的纱布，带橡胶头的移液器，台式离心机，离心分离管，胶片架，吹风机，玻璃蜡笔，玻璃染色筒，2ml注射器和针头，滑片和幻灯片，固定时钟，带油镜的显微镜，细胞计数器。 2.试剂甲醇（分析纯），甘油（分析纯），小牛血清，生理盐水和Giemsa储备溶液（取1g Giemsa染料，66ml和60ml甲醇。）先将染料放入研钵中，加少量将适量的甘油混合并研磨，然后将剩余的甘油分批浇注以继续研磨，然后将其转移到烧杯中，
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琼脂糖凝胶电泳常见问题与解决办法
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
一、琼脂糖凝胶电泳简单介绍： 琼脂糖凝胶是以琼脂糖为支持介质制备的凝胶。琼脂糖分为一般琼脂糖和经化学修饰后熔点降低的低熔点琼脂 糖，琼脂糖的熔点在62?65°C之间，融化后在37°C下可维持液态数小时，30°C时凝固成胶。多用于对染色体DNA在凝胶内进行原位酶切及DNA片段回收。琼脂糖凝胶 由于孔径大常用于大分子蛋白质、DNA的分离。 二、琼脂糖凝胶电泳凝胶制备 序列 产品名称 货号 CAS 备注 1 琼脂糖 SF0012 9012-36-6 1.当微波炉溶解琼脂糖时，胶水会在三角锥烧瓶上沸腾。微波炉加热时，胶水可能会剧烈沸腾。 （1）总液体体积不得超过三角烧瓶体积的50％。 （2）将2％或更多的胶水溶液设置为中火。 （3）当胶液剧烈沸腾时，停止加热，取下三角瓶，请戴上耐热手套，小心摇动三角瓶，然后再次加热，胶会沸腾直至胶变透明，确保琼脂糖完全溶解了 2.琼脂糖电泳图像的背景模糊：如果琼脂糖没有完全溶解，则电泳图像的背景将模糊。完全溶解的琼脂糖凝胶是透明的，并且锥形瓶的内壁上不应有琼脂糖颗粒粘附。 3.加热后，水蒸发。如有必要，应添加热蒸馏水以弥补原始重量并摇匀。 三、琼脂糖凝胶电泳 1. DNA条带模糊且拖尾。 （1）DNA降解。避免核酸酶污染。 （2）DNA负载过多。减少凝胶中DNA的负载量。 （3）过时的电泳缓冲液：多次使用电泳缓冲液后，离子强度降低，pH值升高，缓冲容量降低，影响电泳效果。建议经常更改运行缓冲区。 （4）电泳条件不合适。电泳时的电压不应超过20 V / cm，温度应低于30℃，巨大的DNA链应低于15℃。检查所使用的电泳缓冲液是否具有足够的缓冲能力。 （5）类DNA盐太高。游泳前，先用乙醇沉淀除去多余的盐。 （6）存在蛋白质污染。电泳前先提取蛋白质。 （7）DNA变性。电泳前无需加热，请用20 mM NaCl缓冲液稀释DNA。 2. DNA条带较弱或无DNA条带。 （1）DNA负载量不足：增加DNA负载量。 （2）DNA降解：避免DNA核酸酶污染。 （3）DNA脱离凝
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测定植物中的可溶性糖含量（蒽酮法）
作者：德尔塔 日期：2022-03-30
一、测定植物中的可溶性糖含量目的： 糖是植物的重要成分之一，也是代谢的主要原料和存储物质。不同的负载条件和不同的成熟度会影响水果和蔬菜中的糖含量。因此，测定水果和蔬菜中的可溶性糖可以了解和鉴定水果和蔬菜的质量。 二、测定植物中的可溶性糖含量原理 当糖用浓硫酸脱水以形成醛或其衍生物时，反应如下： 糠醛或羟甲基糠醛进一步与蒽酮试剂缩合生成蓝绿色物质，该蓝绿色物质在可见光区域中在620 nm波长处具有最大吸收，并且其光吸收值与糖含量在一定范围内成正比。 该方法可用于单糖，寡糖和多糖的测定，具有灵敏度高，简便，快速的优点，适用于痕量样品的测定。 三、测定植物中的可溶性糖含量实验材料，仪器和试剂 序号 产品 CAS号 货号 备注 1 葡萄糖 50-99-7 SC0001 2 蒽酮 90-44-8 JT25818 3 乙酸乙酯 141-78-6 JT11988 1.材料：大白菜叶，柑橘 2.仪器：分光光度计恒温水箱20ml刻度试管（3个）漏斗100ml容量瓶刻度试管试管架剪刀砂浆 3.试剂： （1）200μg/ ml标准葡萄糖：AR级葡萄糖100mg，溶于蒸馏水，定容至500ml。 （2）蒽酮试剂：将蒽酮1g溶于乙酸乙酯中，稀释至50ml，避光保存。 （3）浓硫酸。
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噬菌体培养方法(液体培养法,双层琼脂培养方法,琼脂表面培养方法)
作者：德尔塔 日期：2022-03-30
一、噬菌体培养菌液体培养法 1.在适当的温度下，通常在16至24小时内，以液体培养方法培养指定的宿主细菌。 2.将100μl噬菌体原液与300μl宿主细菌悬浮液混合，并使其感染15分钟。 3.将混合溶液连接到装有10 ml新鲜液体培养基的试管中，并在适当的温度下摇动并培养约8至24小时。培养时间取决于噬菌体。 4.将培养基转移到离心管中，并以10,000 rpm（5,000 g）离心10分钟以沉淀宿主细菌。 5.将上清液转移至新试管中，并用孔径为0.22μm的过滤器除去残留细菌，以获得不含宿主细菌的噬菌体原液。但是，由于噬菌体原液是透明的，因此不能用肉眼直接判断其增殖效果，因此应测定其效价以确认增殖培养的有效性。 序号 产品 CAS号 货号 备注 1 琼脂培养基 PYJH51095 2 90*15mm培养皿 FM-90-X 3 10ml离心管 F-EP100 二、噬菌体培养双层琼脂培养方法 1.在适当的温度下，通常在16至24小时内，以液体培养方法培养指定的宿主细菌。 2.将100μl噬菌体原液与300μl宿主细菌悬浮液混合，并使其感染15分钟。 3.将混合物加入5 ml冷却至45°C的0.7％琼脂培养基中，均匀混合，然后立即将其放在倒入的1.8％琼脂培养基板上。 4.板固化后，将其移至合适温度的培养箱中。培养时间通常为8至24小时。培养时间取决于噬菌体。 5.遵循与上述相同的步骤，制作另一个没有噬菌体的对照组。 6.将培养板的清晰度与对照组进行比较。通常，含有噬菌体的板是透明的，而仅含有宿主细菌的对照组是浑浊的。 7.将含有噬菌体的板在-20°C下放置4?5小时后，将其取出并在室温下融化。 8.将解冻的液体转移到离心管中，并以10,000 rpm（5,000 g）离心10分钟，以沉淀宿主细菌。 9.将上清液转移到新试管中，并用孔径为0.22μm的滤器除去残留细菌，以获得不含宿主细菌的噬菌体原液。 三、噬菌体培养琼脂表面培养方法 1.在适当的温度下，通常在16至24小时内，以液体培养
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