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提取细菌DNA的实验方法
作者：德尔塔 日期：2022-03-30
一、提取细菌DNA方法的介绍 提取细菌DNA一般可选用革兰氏阴性细菌，例如：大肠杆菌，通常选取的细菌有三种选择。 二、提取细菌水煮模板法-主要用于PCR反应 （一）水煮模板法的实验步骤 1.在LB或脑心板上接种单个菌落，在37摄氏度下连续画一条线培养18-24小时。 2.将接种了1?2种蘑菇的苔藓放入150微升三蒸馏水中，搅拌均匀，然后在100摄氏度下煮沸10分钟。 3.以12000 rpm离心10分钟，取出上清液，并保存在-20°C下以备后用。 最简单的操作的试剂要求低。缺点是纯度不够高，可能包含RNA和蛋白质等杂质。但是PCR反应模板足以用于一般检测目的。 有人说，这种方法可用于制作用于扩增4kb以下片段的模板，而编辑者可通过这种模板PCR扩增3500bp片段。编者建议：用这种方法获得的模板存储时间短，强烈建议每月复制一次。 三、提取细菌DNA水煮模板法的实验试剂 序号 产品 CAS号 货号 备注 1 LB营养琼脂 PYJH50087 以上为水煮模板法提取细菌DNA实验所用试剂，请选用高品质的德尔塔生物的生化试剂。 四、提取细菌DNA，采用CTAB / NaCl法 （一）CTAB / NaCl法的实验步骤 1.在5ml LB中接种单个菌落，在30°C下培养过夜， 2.将1ml种子培养液加入100ml 2％LB中，并在37°C和220r / min下培养16小时； 3.以5000r / min的速度离心10分钟，并丢弃上清液。 4.加入10ml TE进行离心和洗涤后，用10ml TE溶解细菌，充分混合，然后在-20℃储存以备后用。 5.取3.5ml细菌悬浮液，并添加184μl10％SDS混合均匀，加37μl10mg/ ml蛋白酶K，混合均匀，在37℃孵育1小时 6.加入740μl5mol / L NaCl，然后加入512μlCTAB / NaCl，充分混合，并在65°C孵育10分钟。 7.加入等体积的氯仿/异戊醇，混合均匀，以10000r / min的速度离心5分钟，然后保存上清液。 8.在上清液中加入等体积的苯酚：氯仿：异戊醇（25：24：1），混合均匀，以10000r / min离心5分钟，然后保存上清液。 9.加入0.6倍的异丙醇，混合均匀
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制备琼脂糖凝胶的实验介绍
作者：德尔塔 日期：2022-03-30
一、制备琼脂糖凝胶的实验简介： ※ 制备琼脂糖凝胶所学的琼脂糖是由半乳糖及其衍生物组成的中性物质，不带电荷，琼脂胶是一种含有硫酸盐和羧基的强酸多糖，由于这些基团带电，因此可以在电场作用下产生强烈的电渗现象，加之硫酸根自由基可与某些蛋白它影响电泳速度和分离效果，因此，目前，琼脂糖通常用作板电泳的电泳载体，分离蛋白和同工酶。可以将琼脂糖电泳与免疫化学技术进行结合，发展成为了免疫电泳技术，该技术可以鉴别其他方法不能鉴别的复杂体系，琼脂糖凝胶电泳经常应用于分离和鉴定核酸，如： DNA鉴定，DNA限制性内切核酸核酸酶Atlas生产等，由于此方法易于操作，设备简单，样品量小且具有高分辨率，因此已成为一种基因工程研究中常用的实验方法之一。 二、制备琼脂糖凝胶所需材料及试剂： 琼脂糖、EDTA（PH8.0）；Tris-乙酸（TEA），Tris-硼酸（TBE）或者采用Tris-磷酸（TPE），TAE缓冲溶液液、溴酚蓝、Tris-EDTA缓冲溶液、蔗糖、溴化乙锭（EB）、甘油。 三、制备琼脂糖凝胶的实验步骤 1.核酸分子大小与琼脂糖浓度之间的关系 ①凝胶中DNA分子的大小，DNA片段的迁移距离（迁移率）与碱基对的对数成反比，因此将已知大小的标准物移动的距离与未知片段的距离进行比较。未知片段的大小可以测量。但是，当DNA分子的大小超过20kb时，很难用普通的琼脂糖凝胶分离它们，此时，电泳的迁移率不再取决于分子大小。因此，当通过琼脂糖凝胶电泳分离DNA时，分子大小不应超过该值。 ②琼脂糖浓度如下表所示，电泳时需要使用不同浓度的琼脂糖凝胶分离不同大小的DNA。 琼脂糖的浓度/％ 线状DNA的大小/kb 0.3 60－5 0.6 20－1 0.7 10－0.8 0.9 7－0.5 1.2 6－0.4 1.5 4－0.2 2.0 3－0.1 2.核酸构型与琼脂糖凝胶电泳分离之间的关系： 具有不同构型DNA移动的速度顺序依次为：共价闭合的环状DNA（cccDNA）>线性DNA
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对染色体G显带技术介绍
作者：德尔塔 日期：2022-03-30
一、染色体G显带技术简介： 染色体G显带技术中条带模式的形成主要是由于DNA，核酸结合蛋白和染料的相互作用，它主要指DNA的序列，染色体上螺旋形和折叠非组蛋白的分布存在区域差异，这些差异导致二硫键和硫氢键的分布不同，深色区域通过许多二硫键交联，因为它很容易与染料结合，浅色区域缺少二硫键和多硫氢键，难以与染料结合，呈现浅色。另外，由于DNA在染色体中的碱基分布不同，DNA的螺旋和折叠程度也不同，进而影响结合蛋白的分布和构型，与染料结合后，表明不同级别的子线，该方法是GTG方法（G波段，Trysin使用的Giemsa） 二、染色体G显带技术所需材料及试剂： Hank's溶液、ICN溶液、0.02％EDTA溶液、磷酸盐缓冲液、Giemsa储备溶液、胰酶溶液。 三、染色体G显带技术步骤 1.将准备好的染色体玻片在65°C的烤箱中烘烤2至3小时，然后放入37°C的培养箱中以备后用。 2.用生理盐水配制0.14％的磷酸蛋白酶溶液（70 毫克磷酸酶减少50 毫升生理盐水），并储存在-18°C下以备后用。使用时，取15 毫升母液和35 毫升 pH 6.7的磷酸盐缓冲液代替0.042％作为工作溶液。使用前预热至26°C。 3.将一块样品浸入胰酶溶液中15-25秒。 4.取出玻片，并用蒸馏水冲洗以除去胰酶溶液。 5. pH 6.7磷酸盐缓冲液稀释Giemsa储备溶液（1:10）作为染料溶液，并染色8分钟。 6.用蒸馏水洗涤染料溶液，干燥并在显微镜下分析。 四、染色体G显带实验的注意事项： 1.染色体标本的G条带需要大约3天的片龄，染色体长度适中（1号染色体长度约为10±2μm），分散性好，几乎没有重叠。如果漆膜寿命延长，则蛋白酶处理时间应适当延长。 2.应准备血浆酶工作溶液以供当前使用。通过增加被处理标本的数量，酶活性将降低，并且处理时间需要延长。 3.为了获得具有适当形态的染色体标本，秋水仙素的处理浓度应较低或处理时间应较短。 4.捆扎时，可以先将一块作为测试件，然后将测试件分开进行不同的酶解时间，以分解适当的酶解时间。 5.酶解时间与酶液温度和胰酶浓度成反
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操作乙醇沉淀DNA实验的方法
作者：德尔塔 日期：2022-03-30
一、乙醇沉淀DNA实验的简单介绍： 乙醇沉淀DNA可以任意比例的水互溶，实验使用的乙醇与核酸不会起任何化学反应，对DNA相对是很安全的，因此乙醇是非常理想的DNA沉淀剂。 二、乙醇沉淀DNA实验过程所需的材料及试剂： 1.5ml尖底连盖离心管、乙酸、乙酸钠、ddH2O、200ul黄吸头、1000ul蓝吸头 三、乙醇沉淀DNA实验操作流程 1.加入1/10体积的乙酸钠（3 mol / L，PH = 5.2）并在DNA溶液中充分混合，转化的终浓度为0.3 mol / L； 2.加入两倍于冰预冷却的乙醇，再次充分混合，然后在-20°C放置15-30分钟； 3.以12,000 g离心10分钟，小心除去上清液，并将所有替换物吸到管壁上； 4.加入70％的乙醇，体积为离心管的1/2，以12000g离心2分钟，小心地除去上清液，并将所有替换物吸到管壁上； 5.在室温下，将无盖的EP管插入实验台中，以蒸发残留液体至干； 6.添加适量的ddH2O以溶解DNA沉淀。 四、乙醇沉淀DNA实验所需试剂清单： 序列 产品名 货号 CAS号 备注 1 1000ul蓝吸头 FT-1000 2 200ul黄吸头 FT-200 3 1.5ml尖底连盖离心管 F-EP015 4 无水乙醇 JT26000 64-17-5 以上为乙醇沉淀DNA实验，实验请选用高质量试剂。
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酶切的实验原理及步骤
作者：德尔塔 日期：2022-03-30
一、酶切实验实验方法和原理 酶切技术是采用了粘性末端连接时必须对目的DNA分子以及载体分子进行酶切对应的粘末端进行连接。 二，酶切实验所需的材料和试剂： 琼脂糖，水平电泳仪，微波炉或电炉，电泳仪，台式高速离心机，恒温水浴，紫外线透射仪， 1.5×TBE缓冲溶液。 2. 6x电泳上样缓冲液：0.25％溴酚蓝，40％（w / v）蔗糖水溶液，在4°C下保存。 3. 溴化乙锭（EB溶液的母液）：配制EB溶液 10mg / ml，并将其存储在用铝箔或黑纸包裹的容器中。 三，酶切实验的操作步骤： 1. DNA消化反应 ①给ep管编号（**为0.5ml），用微量移液管加入1μgDNA和2μl相应的核酸内切酶反应10x缓冲液，再加蒸馏水使总体积为19μl。将溶液在管中混合后，加入1μl酶溶液。用手指轻拂管壁以混合溶液。您也可以用微量离心机摇动它以将溶液浓缩在试管底部。此步骤是整个实验成功或失败的关键。有必要防止不正确的添加和遗漏。使用扩展核酸内切酶时，应将离开冰箱的时间减至最少，以避免活性降低。 ②混合反应体系后，将eppendorf管放在适当的支架上（例如泡沫板上），并在37°C水浴中放置2-3小时以完成消化反应。 ③在每个试管中加入2μl0.1mol / L EDTA（pH8.0），充分混合以终止反应，并保存在冰箱中以备后用。 2. 制备DNA分子量标准：使用DNA长度为50kb的双链DNA分子，商业溶液的浓度为0.5mg / ml，并且酶促水解反应如上所述。获得了八个片段，分别具有23.1、9.4、6.6、4.4、2.3、2.0、0.56和0.12kb的长度。 EcoRI切割了1个DNA，得到6个片段，长度分别为21.2、7.4、5.8、5.6、4.9和2.5 kb。 3. 制备琼脂糖凝胶过程 ①取20ml 5×TBE缓冲溶液，加水至200ml，制备0.5×TBE缓冲溶液，备用。 ②胶液的制备：称取0.4g琼脂糖，放入200ml锥形瓶中，加50ml 0.5×TBE代替缓冲液，放入烤箱（或电炉）中加热至琼脂糖全部融化，取把它摇匀。这是0.8％的琼脂糖凝胶溶液。在加热过程中不时摇动，使附着在瓶壁上的琼脂糖颗粒进入溶液。加热时盖上密封膜以减少水的蒸发。
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梯度凝胶电泳实验实操
作者：德尔塔 日期：2022-03-30
一、梯度凝胶电泳简单介绍 梯度凝胶电泳也经常使用聚丙烯酰胺凝胶，但不是在单一浓度（孔径）的凝胶上进行，而是形成梯度后的凝胶。丙烯酰胺的浓度从凝胶的顶部到底部逐渐进行变化。例如，顶部凝胶浓度通常约为5％，底部凝胶浓度可以达到约25％。 二、梯度凝胶电泳的实验步骤 凝胶梯度通过梯度混合器可以形成。首先需要将高浓度的丙烯酰胺溶液添加到玻璃板上后，溶液的浓度会逐渐降低。因此，在凝胶顶部的孔径会较大，而在凝胶底部的孔径会相对较小。梯度凝胶电泳通常还需要添加SDS，并且存在浓缩凝胶。电泳的过程基本上是类似于SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳。 三、梯度凝胶电泳实验的优点： ①首先，梯度凝胶的分离范围比单浓度凝胶宽，并且可以同时分离分子量范围更大的蛋白质。单凝胶电泳无法分离分子量超过其分离范围，太大或太小的蛋白质。梯度凝胶的孔径范围大于单个凝胶的孔径范围。分子量较大的蛋白质可以在凝胶顶部的大孔部分中分离，而分子量较小的蛋白质可以在凝胶底部的小孔部分中分离，因此分子量越来越大。小蛋白质可以同时分离。例如，4％-30％的梯度凝胶可以分离分子量为50,000至2百万的蛋白质。 ②另一个优点是梯度凝胶可以区分分子量差异较小且不能在单一浓度的凝胶中分辨的蛋白质。在电泳过程中，蛋白质在梯度凝胶中迁移，并且其穿过的孔径越来越小，直到凝胶的孔径不可渗透为止，因此蛋白质在电泳过程中被浓缩并在凝胶中浓缩。一个非常狭窄的区域。分子量稍小的蛋白质可以向前迁移并集中在稍向前的区域。随着梯度凝胶的孔径逐渐变小，它将对蛋白质不可渗透的孔附近的蛋白质产生浓缩作用。因此，电泳后会形成一个非常狭窄的区域，可以分辨出分子量差异小的蛋白质。对于太稀的样品，可在电泳过程中将样品添加几次，不同大小的蛋白质分子最终将停留在其相应的凝胶孔中并被分离。 ③天然状态下的蛋白质分子量可以直接测定而无需解离成亚基。因此，该方法可以补充通过SDS-PAGE测量分子量的方法。梯度凝胶电泳
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测定过氧化氢酶(CAT)的活性
作者：德尔塔 日期：2022-03-30
一，过氧化氢酶(CAT)简单介绍 植物中的黄素氧化酶代谢产物通常含有H 2 O 2，例如光呼吸中的乙醇酸氧化酶和呼吸中的葡萄糖氧化酶。 H2O2的积累会导致破坏性氧化。过氧化氢酶（CAT）和过氧化物酶（POD）是去除H2 O2的重要保护酶。它们可以将H2 02分解为O2和H2 O，从而保护人体免受H2 O2的有害影响。其活性与抗逆性密切相关。 二，测定过氧化氢酶(CAT)实验原理 （CAT）催化以下反应： 2 H2 O2→2 H2 O + O22 H2 O2→2 H2 O + O2， 在该实验中，通过测量H2O2的还原来确定CAT的活性。 在H 2 O 2存在下，过氧化物酶可以氧化愈创木酚产生棕色的4-邻甲氧基苯酚。活性可以通过用分光光度计测量产物的含量来确定。 三，测定过氧化氢酶(CAT)实验结果计算 CAT和POD的酶活性以U / 毫克蛋白或U / 克 FW表示。 四，测定过氧化氢酶(CAT)的实验步骤 酶溶液的制备 1.称取0.25g的叶子，加入5倍于pH7.0的（M / V）PBS，并在冰浴中以15000r / min的速度研磨。 离心15分钟以取一部分上清液，并适当稀释以用于酶活性测定。 2. CAT活性的测定 在3毫升反应体系中，包括0.3％H2 02 1毫升，H2 0 1.95毫升，最后加入0.05毫升酶溶液 开始反应，并测量240 nm波长下POD的降低率。 POD每分钟降低0.01定义为1个活力单位。 3.POD活性的测定 在3毫升的反应系统中，加入1毫升的0.3％H 2 O 2，0.95毫升的.0.2％Guaiacol，1毫升的pH 7.0 PBS。最后，加入0.05毫升酶溶液以开始反应，并记录在470纳米处的POD增加速率。POD每分钟增加0.01定义为1个活力单位。 4.使用考马斯亮蓝G-250方法测定蛋白质含量。 五，测定过氧化氢酶(CAT)实验所需试剂 1.50毫摩尔/升 pH7.0磷酸盐缓冲液 2.0.3％H2 02：吸取0.5毫升 30％H2 02并向50毫升中添加pH 7.0磷酸盐缓冲液 3.0.2％愈创木酚：称取0.2克愈创木酚，并向100毫升中添加pH 7.0磷酸盐缓冲液 序号 名称 货号 CAS 备注 1 植物过氧化氢酶(CAT)溶液 HC0933 2 H
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学习Ficoll密度梯度离心法技能
作者：德尔塔 日期：2022-03-30
一、Ficoll密度梯度离心实验原理 Ficoll密度梯度离心实验中，常用来分离人外周血单个核细胞（PBMC）的分层液比重是 1.077±0.001 的聚蔗糖(Ficoll)-泛影葡胺(Urografin)(F／H)分层液。Ficoll是蔗糖的多聚体，呈中性，W水性高，平均分子量约为400,000，当密度为1.2g／ml仍未超出正常生理性渗透压,也不穿过生物膜。红细胞、粒细胞比重大，离心后沉于管底；淋巴细胞和单核细胞的比重相对小于或者等于分层液的比重，离心后漂浮在分层液的液面以上，也会有少量的细胞悬浮于分层液中。吸取分层液液面以上部分的细胞，就可从外周血中分离得到单个核细胞。 二、Ficoll密度梯度离心实验所需材料 比重为1.077±0.001的聚蔗糖-泛影葡胺(商品名为淋巴细胞分离液)。0.2％台酚兰染色液，Hank's液(无钙镁)、10％小牛血清RPMI1640、用生理盐水或等渗的PBS进行配制、短中管、毛细滴管、1毫升和10毫升刻度吸管。无菌干燥注射器针头。碘酒，75％酒精，无菌棉球，镊子，橡皮止血带。血球计数板、显微镜、水平式离心机。 三、Ficoll密度梯度离心实验的步骤 1.在短中管中加入适量淋巴细胞分离液。 2.取肝素抗凝静脉血与等量Hank's液或RPMI1640充分混匀，用滴管沿管壁缓慢叠加于分层液面上，注意保持清楚的界面。水平离心2000rpm×20分钟。 3.离心后管内分为三层，上层为血浆和Hank's液，下层主要为红细胞和粒细胞。中层为淋巴细胞分离液，在上、中层界面处，有以单个核细胞为主的白色云雾层狭窄带，该单个核细胞包括有：淋巴细胞和单核细胞。除此之外，还含有血小板。 4.用毛细血管插到云雾层，吸取单个核细胞。置入另一短中管中，加入５倍以上体积的Hank's液或RPMI1640，1500rpm×10分钟，洗涤细胞两次。 5. 末次离心后，弃上清，加入含有10％小牛血清的RPMI1640，重悬细胞。取一滴细胞悬液与一滴0.2％台盼兰染液混合，于血球计数板上，计数四个大方格内的细胞总数。 单个核细胞浓度(细胞数／1毫升细胞悬液)＝4个大方格内细胞总数/4×10４×2(稀释
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采用盐析法纯化抗体技术
作者：德尔塔 日期：2022-03-30
一、采用盐析法纯化抗体的实验原理 盐析法纯化抗体是基于在待纯化免疫血清中加入饱和硫酸铵溶液，由于抗体也是一种蛋白质，蛋白质在水溶液中的溶解度是由其本身携带的亲水基团数和电荷数决定的，当我们向抗血清中加入饱和硫酸铵溶液后，硫酸根离子和铵根离子与抗体竞争溶液中的水分子，而硫酸根离子和铵根离子比抗体分子具有更强的亲水性，因此抗体分子表面的水化膜被破坏，同时其暴露出来的带电基团被溶液中的盐离子所中和进而导致其溶解度大大降低，依据此原理从而将其从抗血清中分离。 二、盐析法纯化抗体实验所需材料 硫酸铵；抗血清；PBS缓冲液；离心管；离心机等。 三、采用盐析法纯化抗体的实验步骤 1.将5ml抗血清与0.01M PBS在离心管内等体积混合，向其中加入10ml饱和硫酸铵溶液，边滴加边摇匀，然后置于2到8摄氏度静置过夜。 2.将步骤1中的待分离物于离心机内离心，8000r/min离心15到20分钟，除上清。 3.将步骤2中离心后的沉淀用2ml 0.01M PBS 溶解，然后缓慢加入3ml 饱和硫酸铵溶液，边滴加边摇匀，然后置于2到8摄氏度静置2小时。 4.将步骤3中的待分离物于离心机内离心，8000r/min离心15到20分钟，除上清。 5.将步骤4中离心后的沉淀用1.65ml 0.01M PBS 溶解，然后缓慢加入3.35ml 饱和硫酸铵溶液，边滴加边摇匀，然后置于2到8摄氏度静置2小时。 6.将步骤5中的待分离物于离心机内离心，8000r/min离心15到20分钟，除上清。 7.将步骤6中离心后的沉淀用1ml 0.01M PBS 溶解, 转移到MD 14000透析袋内，用0.01 M PBS进行透析，透析4次以上，每次至少1小时以上。 四、盐析法纯化抗体实验所需的试剂清单 序号 产品名 货号 CAS 备注 1 PBS缓冲液 HC2031 2 硫酸铵 JT10921 7783-20-2 3 5ml圆底连盖离心管 （灭菌） F-EP050-H 以上为盐析法纯化抗体实验所需的试剂、缓冲液以及耗材产品。
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测量植物的呼吸速率(广口瓶法, 实验原理,实验仪器与试剂,实验步骤)
作者：德尔塔 日期：2022-03-30
一、测量植物的呼吸速率实验介绍 测量植物的呼吸速率实验中,呼吸速率是植物生命活动强弱的重要指标之一,常应用在植物生理研究及农业生产实践等领域。测呼吸速率的方法有很多种，但基本介于测定CO2的释放量以及O2的吸收量两大类方法之一。本文实验用罐子法测量植物的呼吸速率，并对植物在不同萌发阶段小麦种子以及幼芽的呼吸速率对比。 二、测量植物的呼吸速率实验原理 在密闭的容器中添加一定量的碱液（通常是Ba（OH）2），然后悬挂植物材料，然后植物材料释放的CO2可以被容器中的Ba（OH）2吸收，然后将剩余的用草酸滴定碱。根据空白样和样品消耗的草酸溶液之间的差异，可以计算出呼吸释放的二氧化碳量。响应如下： Ba（OH）2 + CO2→BaCO3↓+ H2OBa（OH）2 + CO2→BaCO3↓+ H2O Ba（OH）2（剩余）+ H2C2O4→BaC2O4↓+ 2H2O 三、测量植物的呼吸速率实验仪器与试剂 1、仪器：1套广口瓶计量呼吸器；电子天平；每个酸碱滴定管1个； 1套滴定管支架。 2、试剂：1/44 mol / L草酸溶液：精确称量2.8651g重结晶的H2C2O4·2H2O并将其溶解在蒸馏水中，稀释至1000ml，每毫升相当于1mgCO2。 0.05mol / L氢氧化钡溶液：溶于1000ml蒸馏水中的8.6g Ba（OH）2或15.78g Ba（OH）2·8H2O。如果有浑浊，请在溶液澄清后使用。 酚酞指示剂：称取1g酚酞并将其溶于100ml 95％乙醇中，然后将其存储在滴管瓶中。 序号 产品 货号 CAS号 备注 1 草酸 144-62-7 JT22272 2 氢氧化钡 17194-00-2 WSH40129 3 酚酞指示剂 77-09-8 HC0247 4 5%乙醇 64-17-5 JT26000 以上是实验可以采用的试剂，请采用高品质的德尔塔生物的生化试剂。 四、测量植物的呼吸速率实验步骤 （一）测量植物的呼吸频率 1.组装广口瓶的呼吸器 取一个500毫升的广口瓶，并添加一个三孔橡胶塞。将装有苏打石灰的干燥管插入一个孔中，以吸收空气中的二氧化碳，以
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沙门氏菌检测实验（实验介绍,材料和试剂,检验程序,操作步骤,细菌类型,实验结果）
作者：德尔塔 日期：2022-03-30
一、沙门氏菌测试介绍 沙门氏菌测试检测实验中沙门菌属是由符合肠杆菌科和沙门菌族进行定义的，是由能运动的细菌组成。该实验知识主要介绍了食品中沙门氏菌的检验方法，该检测方法同样适用于航空食品的检验。 二、沙门氏菌测试材料和试剂 1、移液器（1ml，10ml），恒温培养箱（36±1℃，42℃），冰箱，匀浆器，振荡器，培养皿，稀释瓶，天平，显微镜，接种棒等。 2、生化试剂和培养基 蛋白water水，缓冲蛋白胨水（BP），靛蓝基质试剂，尿素琼脂（pH 7.2），四硫酸钠纯净绿（TTB）富集液，氯化镁孔雀石绿富集液，三糖铁琼脂，亚硒酸胱氨酸（SC）富集液，亚硫酸铋琼脂（BS），糖发酵管，SS琼脂，氰化钾（KCN）培养基ONPG培养基，半固体琼脂，DHL琼脂，HE琼脂，WS琼脂，，氨基酸脱羧酶测试培养基，丙二酸钠钠，沙门氏菌因子血清：26种类型用于初步分型； 57种类型用于进一步键入； 163种类型用于详细键入。 序号 产品 CAS号 货号 备注 1 90*15mm培养皿 FM-90-X 2 蛋白胨 68308-36-1 SS6091 3 氯化镁孔雀绿肉汤（MM） PYJH50136 4 四硫磺酸盐煌绿增菌液（TTB肉汤） PYJH50538 5 亚硒酸盐胱氨酸（SC）增菌液 PYJH51513 6 亚硫酸铋琼脂（BS） PYJH50134 7 DHL琼脂/胆硫乳琼脂（DHL） PYJH50131 8 HE琼脂（HE） PYJH50137 9 WS琼脂 PYJH50145 10 SS琼脂 PYJH51791 11 三糖铁琼脂（TSI） PYJH50993 12 尿素琼脂（pH7.2） PYJH50627 13 氰化钾（KCN）培养基 151-50-8 HCC340707 14 氨基酸脱羧酶 15 ONPG培养基
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T7 DNA聚合酶测序技术（实验简介,实验步骤,注意事项,实验所需试剂）
作者：德尔塔 日期：2022-03-30
一、T7 DNA聚合酶测序技术实验简介： T7 DNA聚合酶测序实验中，T7 DNA聚合酶是第一批同时拥有两种活性的转移酶类，分别是5'→3'聚合酶活性与单链及双链3'→5'核酸外切酶活性，因此如果预先使用适当的方法处理T7 DNA聚合酶，则实验中的3'→5'核酸外切酶的活性也会随之大大降低，此时经处理后修饰完成的T7 DNA聚合酶也称为T7测序酶。通过使用T7测序酶获得的测序数据在每个碱基位置具有相对均匀的配对参与。因此，通过放射自显影获得的结果相对清晰并且易于辨别。 T7测序酶具有高聚合速度和高度连续性。因此，该酶在使用中不同于Klenow片段和逆转录酶。它几乎没有错误终止，整个反应可在短时间内完成，并且不需要其他反应（追赶步骤）。然而，对于具有紧密二级结构的区域，错误的终止反应将导致读取序列的困难。如果遇到这些情况，则应使用某些高温DNA聚合酶，例如Promega的测序级Taq DNA酶。利用高温DNA聚合酶独特的耐热性，测序反应可以在不利于二级结构形成的高温条件下进行。 二、T7 DNA聚合酶测序技术实验步骤 （一）模板准备 1. M13单链模板的制备： 转化为合适的大肠杆菌宿主菌株并接种在含有指示剂（例如X-gal / IPTG）的中上后，含有M13重组体的细胞将显示出无色的“噬菌斑”，实际上已被感染。细胞不会被溶解或杀死通过噬菌体。出现噬菌斑是因为被感染的细菌比周围未感染的细菌生长慢。从无色噬菌斑获得的感染细胞可通过培养测序反应所需的单链模板生产。 （1）将培养过夜的宿主细胞（例如NM522或JM101）用3ml TYP肉汁中1：100稀释。在37°C剧烈振荡1小时后，细胞进入早期对数期。此时，用滴管将含有重组M13（与琼脂）的合适噬菌斑转移到细胞中中。 （2）在37°C下剧烈振摇（300 rpm）孵育6小时。 （3）将细胞中转移到两个1.5ml 离心管中，并以12000g离心15分钟。将上清液转移到新的离心管中并离心15分钟。小心取出1-1.2ml上清液（注意不要触摸沉淀物），然后转移到新的离心管中。 （4）在上清液中加入0.25体积的3.75M
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植物病原物分离，培养与移植（,实验简介,实验步骤,注意事项,实验所需试剂）
作者：德尔塔 日期：2022-03-30
一、植物病原物的分离，培养与移植实验简介： 植物病原物的分离，培养与移植实验要求了解植物病原体菌，细菌，病毒和线虫的分离，培养并且接种的一般方法，并掌握其基本原理；了解植物传染病研究中常用的接种方法，比较不同接种方法在疾病发展过程和外部环境上的差异。 二、植物病原物的分离，培养与移植实验步骤 （一）病原菌的分离和培养 植物病原微生物分离和培养工作应在专门的无菌手术室或超净工作台中进行，但也可以在干净安静的室内进行。工作时在桌面上铺一块湿纱布，然后将所有工作用具放在湿纱布上。尽量少在室内四处走动，以减少空气流通，减少污染。所选的分离材料应尽可能新鲜，以减少腐生细菌混合的机会。从患病组织的边缘靠近健康组织可以减少污染。同时，这部分病原生物处于相对活跃的状态，生长迅速，易于成功分离。 植物病原菌的分离有组织分离法和稀释分离法两种，在病组织上产生大量孢子的病原菌以及病原细菌的分离都可用稀释分离法。 1组织分离方法请遵循以下步骤： （1）培养皿的准备：取一块无菌的培养皿，放在湿纱布上，在盖子上注明分离的日期，材料和分离者的名字。 （2）培养皿平板制备：用无菌操作法向培养皿中加入25％乳酸1－2滴（减少细菌污染），然后将熔化而冷至45℃左右的马铃薯琼胶中一管倒入培养皿中，轻轻摇动使成平面（分离细菌时则不能加乳酸）。 （3）切开小块患病组织（叶斑病）：取新鲜的病叶，选择典型的单个病斑，然后用剪刀或手术刀从病斑边缘切小块（每侧约3个） -5毫米长）。组织几个街区。 （4）表面消毒：将患病小块的组织浸入70％酒精中几秒钟后，按照无菌方法，将患病组织移入0.1％汞升的溶液中1-3分钟，然后将其置于无菌状态水连续冲洗三遍。您也可以使用漂白粉片（1-2片），研磨后添加10ml无菌水，并灭菌5-10分钟。用蘸有70％酒精的脱脂棉擦拭患处，水果，块茎和树枝等组织内部的病原菌，并用火焰将表面酒精燃烧掉，重复2-3次即可表面消毒。 （5）用无菌操作法将
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DNA的乙醇沉淀（DNA,实验简介,实验材料及试剂,实验步骤,实验所需试剂）
作者：德尔塔 日期：2022-03-30
一、DNA的乙醇沉淀实验简介： DNA的乙醇沉淀实验中乙醇可以消除核酸的水合层并暴露带负电的磷酸基团。Na可以将抗衡离子与这些带电基团结合，以减少沉淀形成部位多核苷酸链之间的排斥。当阳离子量足以中和暴露在磷酸残基的电荷时，形成乙醇沉淀。 二、DNA的乙醇沉淀实验所需材料及试剂： 冷100％乙醇（-20°C）、DNA样本、3M醋酸钠缓冲液、4°C微量离心机（在冷藏室中正常的微量离心机工作正常、乙酸钠缓冲液 三、DNA的乙醇沉淀实验步骤： 1.将DNA转移到一个容器中，使其占总体积的四分之一（例如：一个500 微升试管中的DNA溶液应不超过125 微升） 2.加入十分之一的乙酸钠缓冲液以平衡离子浓度 3.加入两倍体积预冷的无水乙醇；在-20°C的冰箱中放置一小时 4.在4°C微量离心机中以最高速度离心样品15分钟 5.用1 毫升微量移液器吸取上清液。重新离心，然后用200 微升移液器取出其余的 6.加入200 微升冷的70％乙醇；在4°C的离心机中离心5分钟 7.用200 微升移液器移出上清液。在37°C水浴中蒸发掉残留的乙醇 8.将沉淀转移到所需体积的水或TE缓冲液中。 四、DNA的乙醇沉淀实验所需试剂清单： 序列 产品名 货号 CAS 备注 1 10ul白吸头(灭菌) FT-10-H 2 200ul黄吸头 FT-200 3 1.5ml尖底连盖离心管 F-EP015 4 无水乙醇 JT26000 64-17-5 5 乙酸钠缓冲液 HC1966 6 醋酸钠缓冲液 HC1484 以上为DNA的乙醇沉淀实验，实验请选用高质量试剂。
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人类基因组DNA提取（实验简介,实验所需试剂,实验步骤,注意事项,实验所需试剂清单）
作者：德尔塔 日期：2022-03-30
一、人类基因组DNA提取实验简介： 人类基因组DNA提取实验中所用细胞裂解液裂解细胞膜，收集细胞核，添加SDS破坏核膜，使用蛋白酶K将核蛋白降解为小片段，然后从DNA上解离，通过苯酚-氯仿提取去除蛋白质，然后用无水乙醇，75。用％乙醇洗涤DNA沉淀物，真空干燥，并溶解在TE中以获得高分子量DNA。 二、人类基因组DNA提取实验所需试剂： 1.5ml Ep离心管,蛋白酶K溶液,NaAc,1000ul蓝吸头 三,人类基因组DNA提取实验步骤： 1.细胞分裂和RNase /蛋白酶K消化 ①将100微升抗凝全血放入1.5ml Ep离心管中，然后加入100微升裂解物和20微升RNaseA /蛋白酶K溶液，来回吸打混合，并在55°C孵育35min将离心管倒置来回几次直到溶液是水溶性的。 ②加入10微升的3M NaAc（pH 4.8），然后加入1250微升的结合缓冲液，充分摇匀以在12,000 rpm下离心30秒。 2. DNA与吸附柱结合 用移液管转移上清液，并将其加入离心吸附柱（设置收集管）中，静置1min以离心12,000 rpm30秒，然后将废液丢弃在收集管中。注意：待转移的上清液约为1300微升，而离心吸附柱的容量约为650微升，因此每次需要将650微升的上清液转移至离心吸附柱，进行离心处理，将废液丢弃在收集管中，然后重复实验操作步骤3。 3. DNA的纯化 ①在离心吸附柱（设置收集管）中加入600微升洗涤缓冲液（洗涤缓冲液），以离心12,000 rpm30秒。 ②重复步骤4一次，以离心12,000 rpm3分钟以完全除去洗涤缓冲液。 ③小心取出离心吸附柱，弃去收集管，将离心吸附柱放入干净的1.5ml Ep离心管中，向离心吸附柱添加50微升分离缓冲液（洗脱缓冲液）（代替缓冲液，必须添加在离心吸附柱的中央）静置1min,以离心12,000 rpm30秒。 ④取出装有提取的基因组DNA的Eppendorf离心管。 4. DNA的琼脂糖凝胶电泳 取8-10微升基因组DNA，加入2微升上样缓冲液，充分混合，将样品加入1％琼脂糖凝胶斑点中，然后进行电泳。 四,人类基因组DNA提取实验所需试剂清单： 序列 产品名 货号 CAS号 备注
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