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ELISA试剂盒阳性判定值的计算方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-06
ELISA试剂盒阳性判定值按下式计算： 阳性判定值=NCX+0.05 标本A值＞阳性判定值的为阳性，小于阳性判定值的为阴性。应留神的是，式中0.05为该试剂盒的常数，只适宜于该特定条件下，ELISA试剂盒而不是对各种试剂均可通用。也有写作P/N的，这儿的P不代表阳性（positive），而是病（patient）的缩写，不应误解。为防止稠浊，更宜用S/N标明。在前期的间接法ELISA试剂盒中，有些作者定出S/N为阳性规范，现多为各种测定所沿用。实际上每一测定系统应该用实验求出各自的S/N的阈值。更应留神的是，N所代表的阴性对照是不含受检物质的人血清。有的试剂盒中所设阴性对照为不含蛋白质或蛋白质含量较底的缓冲液，致使反应后发作的本底或许较正常人血清的本底低得多。
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免疫组化的标准步骤
作者：德尔塔 日期：2022-04-06
免疫组化步骤（ABC法） 1。4%多聚甲醛常规灌注固定，取材并置20%蔗糖溶液（4℃）中过夜。蜡块制作。切片，贴片。0.01MKPBS清洗5min×3后； 2。加入配好的0.3%的过氧化氢甲醇溶液（甲醇80ml＋0.01MKPBS 100ml＋30%过氧化氢）30min，以消除内源性过氧化物酶的影响，0.01MPBS清洗5min×3； 3。加入配好的0.3% Triton X100（30% Triton X100＋0.01MKPBS 100ml）30min，以增加细胞的通透性，0.01MKPBS清洗5min×3； 4。加入用血清稀释液（牛血清白蛋白1.00g＋0.01MPBS 100ml＋叠氮纳0.08g）稀释的一抗，4℃存放24-48h；吸去抗体，0.01MKPBS洗5min×3； 5。加入0.01MKPBS稀释的的二抗，室温孵育2h。0.01MKPBS洗5min×3； 6。加入ABC复合物之类的抗体，室温孵育2h，0.01MKPBS洗5min×3；蒸馏水迅速冲三次； 7。加入显色液，进行免疫组织化学显色，时间一般不超过30min，可不时在显微镜下进行观察，待细胞着色而背底颜色较淡时马上吸去显色液，用蒸馏水迅速冲三次后加入0.01MKPBS终止反应； 8。梯度酒精脱水之后，封片，拍照。 免疫组化SP法步骤： SP(streptavidin-perosidase)法,即链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结法. 按标记物质的种类，如荧光染料、放射性同位素、酶(主要有辣根过氧化物酶和碱性磷酸酶)、铁蛋白、胶体金等，可分为免疫荧光法、放射免疫法、酶标法和免疫金银法等。按染色步骤可分为直接法(又称一步法)和间接法(二步、三步或多步法)；按结合方式可分为抗原—抗体结合，如过氧化物酶-抗过氧化物酶（PAP）法和亲和连接，如卵白素-生物素-过氧化物酶复合物（ABC）法、链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结（SP）法等，其中SP法是zui常使用的方法。 一般的sp法步骤啊,具体如下： 1.烤片，68℃，20分钟, 2. 常规二甲苯脱蜡，梯度酒精脱水；二甲苯I 20min --二甲苯II 20 min--100%酒精I 10min --100%II 10min --95% 5min-- 80% 5min-- 70% 5min 3.阻断 灭活内源性过氧化物酶：3%H2O2 37℃孵育10mi
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上海研域科研师分享试剂自配方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-06
上海研域ELISA试剂盒科研师将试剂排序: A 按反应所需pH 1）pH＜5放在前。如DBI、TBI、ALB 2）pH≈7。如ALT、AST、HBDH、BUN、CK-MB、CK、Cho、TG、HDL、Glu、UA 3）pH＞8。如：γ-GT、ALP、LDH、Ca、GSP、Cr、TP B 按试剂所含成分 1）缓冲液成分。如磷酸盐缓冲液，Tris缓冲液 2）辅酶种类。如NADH、NADPH C 按检测反应的性质 1）终点法，速率法，免疫比浊法 2）双缩脲法测TP放于末位，利用双缩脲试剂去蛋白去污的作用 3）苦味酸试剂污染较重，且不易清除，尽量往后面放 上海研域ELISA试剂盒科研师自配材料与方法: 1）检测标本 2）检测试剂 3）检测仪器 4）检测方法 研域（上海）化学试剂有限公司总部设在上海，公司专业经营生命科学领域的研究试剂、实验室消耗品等，我们致力于向国内外生命科学研究人员提供*的ELISA试剂盒和技术服务。
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Rock-2 ELISA检测试剂盒检测范围
作者：德尔塔 日期：2022-04-06
Rock-2 ELISA检测试剂盒检测范围 Rock-2 ELISA检测试剂盒检测范围 Rock-2 ELISA检测试剂盒检测范围 检测种属：人 l 本试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织匀浆及相关液体样本中人Rho关联含卷曲螺旋蛋白激酶2（Rock-2）的含量。 l 有效期：6个月 l 保存条件：2-8℃ 实验原理 试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被人Rho关联含卷曲螺旋蛋白激酶2（Rock-2）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的人Rho关联含卷曲螺旋蛋白激酶2（Rock-2）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。 样本处理及要求 1. 血清：将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过一夜，然后1000×g离心20 分钟，取上清即可，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。 2. 血浆：用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本，并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃ 1000×g离心15分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。 3. 组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。zui后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。 4. 细胞培养物上清或其它生物标本：请1000×g离心20分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。 注：标本溶血会影响zui后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。 需要而未
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elisa试剂盒白介素类生产注意事项
作者：德尔塔 日期：2022-04-06
elisa试剂盒白介素类为了规范试剂盒生产，保证试剂盒质量，现将试剂盒制作过程中的一些注意事项及成品 的检测情况进行列举，希望严格按照执行。 一、原材料检测 1.LB 固体培养基和液体培养基要进行定期的检测抽查， 时间间隔为 2 个月。在分装之前，首先要了解 LB 固体和液体培养基的物理性质差异，做到能肉眼区分。 2.果胶酶在每一批使用之前，都必须要经过检测，之后才能进行分装 3.在每次试剂更换厂家之后均要进行检测 二、elisa试剂盒生产注意事项及相关检测 编号 产品名称 模拟 ABO 血型鉴定试剂盒 极速PCR 试剂盒 注意事项 特色elisa试剂盒 检测 1.避免试剂配制过程的交叉污染 2.所 有试剂一种一种分装，分装完毕贴完标 签之后再分另一种 每一批次都必须做预 实验进行检测 1.所用分装用离心管均用进口无菌的 2.分装前，需要对吸头进行灭菌3.在超 净工作台内进行分装 elisa试剂盒白介素类每一批次都要进行预实验检测 人性别鉴定试剂盒琼脂糖凝胶电泳试剂盒（DNA Marker）LB 固体培养基试剂 盒 HT006 LB 液体培养基试剂盒HT007 蛋白胨固体培养基试剂盒HT008 质粒DNA 提取试剂 盒 1.所以分装用离心管均用进口无菌的 2.分装前， 需要对吸头进行灭菌 3.在超 净工作台内进行分装严格按照操作手册进行操作即可 每一批次都要进行预实验检测 新配制的TAE 及新一 批次的 DNA Marker 需要进行检测 分装前确定分装材料无误 分装前确定分装材料无误分装前确定分装材料无误 一个月抽检一次 提取模板时顺便进严格按照操作手册配制即可 浙版试剂盒 行检测， 之后冰箱保 存 果酒及果醋的制作elisa试剂盒 分装前确定分装材料无误 腐乳的制作试剂盒琼脂块制作试剂盒 （模拟探究细胞表面 积与细胞体积的关 系） 植物的组织培养试剂盒PCR 试剂盒 分装前确定分装材料无误分装前确定分装材料无误琼脂更换厂家要进行检测 严格按照操作手册配制即可 1. 分装前需确定NAA、6-BA 没有出现 沉淀 每一批次都必须做预实验进行检测 1.所用分装用
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分析食用菌菌种鉴定方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-06
一、青海发光杆菌外观直接观察鉴定外观菌种，菌丝浓白、粗壮、富有弹性，则生命力强；如果菌种菌丝萎缩，干燥无色泽，或菌丝体自溶产生了多量红褐色液体，则生活力已变弱，不宜再用；木块菌种如仍保持硬实，则属于生活力强的菌种，如若木块变得软化松散，则已老化，不宜使用。二、培养观察鉴定对于分离、选育和引进的菌种，通过培养，观察菌丝体对干、湿度和温度等方面的适应特性。如将菌丝体置于偏干、偏湿和干湿相宜的条件下培养，若菌丝在前两种条件下能良好生长，而在干湿相宜的条件下生长*，则说明是好菌种。三、液体培养鉴定配制2％糖水溶液，经常规灭菌消毒，挑取黄豆粒大的菌块，放入100毫升上述溶液中，置于25—28℃温度下培养3—7天后，若液面出现气泡，产生“油皮”，发生浑浊现象，青海发光杆菌说明菌种本身有杂菌；如果苗块下沉，或迟迟才长出很薄的菌丝层，则说明菌种生活力弱；如若液面四周的菌丝生长快，且浓白呈棉絮状，则表明菌种生命力强。四、锯木屑瓶栽鉴定和周期产量鉴定瓶栽鉴定的做法与培育栽培的方法相似，把锯木屑培养料装得松一些，适当加大湿度，把需要鉴定的菌种接种于培养基中，做好记录，在26℃恒温下培养15天。然后使温度降至15—20℃，并给予较好的散射光条件，再培育半个月左右，在瓶壁和料面上就会出现子实体原基和少量子实体。若未发现杂菌和异常现象，再把菌种接在木段上，做周期产量鉴定。如果子实体生长旺盛，高产，青海发光杆菌具备优良品种特性，并且没有杂菌混生，说明菌种可靠，可以保存并投入大面积生产。
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微生物菌种的选择方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-06
1、微生物菌种选择动物消化道微生物具有多样性和特异性，不同动物种类对菌种的要求不同，同一菌株用于不同动物，产生的效果差异也较大。使用时一定要掌握菌种的特性和功效，选择不当起不到应有效果，反而会破坏原有菌群，甚至引发疾病2、微生物菌种应用时间微生物制剂应用要从子畜开始使用，以保证有益菌优先定植。因为制剂进入体内后要有一段时间进行微生物菌群调整才能定植下来。一般认为，乳酸菌类在各种动物的各阶段添加均较好，芽孢杆菌类在生长期添加较好，在幼龄期可以添加;曲霉菌类在幼龄期，水产动物全期不必添加;酵母菌类在生长期不必添加;在水产动物养殖中，以改善水质为目的时，可将微生物制剂或光合细菌直接洒于水中。3、微生物菌种添加方式一般粉状饲料添加微生物制剂效果较好，颗粒饲料和膨化饲料在加工过程中的高温可造成10%~30%的芽孢杆菌，90%以上的肠球菌以及99%以上的酵母失活，而乳酸杆菌几乎全部被杀灭。因此，在颗粒饲料中要使用耐热，耐挤压的芽孢杆菌制剂。乳酸菌不耐高温，应采用冻干后包被或采用喷雾干燥的方式制成的乳酸菌制剂。使用时采用饮水方式，以利于乳酸菌优先粘附于肠壁。4、微生物菌种剂量与浓度微生物制剂中必须含有相当数量的活菌才能达到效果。当进入动物肠道食糜中外源菌数大于1000万个每克时，都会对肠道内原有菌群产生较大的影响。因此，微生物制剂在产品中活菌数含量为10亿~20亿每克时效果*。我国正式批准生产的微生物制剂中规定每克芽孢杆菌含量要多于5亿个。以酵母菌产品为例，目前市场上销售的产品活菌数从每克几亿到200亿不等，在选择是要认真鉴别。5、微生物菌种抗生素的影响细菌类的微生物制剂对抗生素敏感，不宜与抗生素同时使用，使用微生物制剂的前后二天应停止使用抗生素。先用抗菌药物清理肠道，为益生菌的定植和繁殖扫除障碍，然后再饲喂微生物制剂，可提高使用效果。酵母菌类属于真核生物，生物学活性与细菌完全不同，对抗生素、磺胺类药物和一些抗菌剂有天然
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分析抗原elisa试剂盒实验异常原因
作者：德尔塔 日期：2022-04-06
在使用抗原elisa试剂盒做实验的时候，有些细节若是做不好会出现实验异常，或者效果不佳，那么是什么原因造成的呢？ ●白板异常：显色步骤结束后，酶标板所有孔均无颜色。阳性对照不显色。 这可能是因为： 1. 试剂已过效期，或不同试剂盒组分混用（解决方式：检查试剂的组分及批号，确认未过期以及所有组分均属对应的试剂盒。不同试剂盒或不同批号的试剂不能混用）。 2. 错加、漏加试剂底物、显色剂 A或B（解决方式：严格按说明书的步骤操作，加完试剂后可观察一下液面高度是否一致，以减少漏加现象）。 3. 洗板及加样过程中，酶标受污染失活失去催化显色剂显色的能力（解决方式：确认盛酶标的容器不含酶抑制剂如叠氮钠等，确认配制洗液的容器已洗干净）。 4. 终止液误作洗涤液稀释或当底物缓冲液配制（解决方式：每次配制时都应看清标签标明物质）。 5. 蒸馏水有问题（解决方式：确认配制洗液的纯化水达到要求且未污染，与好蒸馏水比较）。 ●显色弱、灵敏度低：实验结束后，包括阳性对照、质控在内的所有板孔颜色均较淡。 这可能是因为：试剂盒超过期， 超过有效期的产品可能会产生很弱的信号；试剂盒没有按规定进行保存，受高温影响（实验前检查试剂的组分及批号，确认试剂未过期。不要将试剂盒长时间置于常温下，按使用规定储藏）。 1. 试剂、样品用前未平衡至室温。如何解决？从低温冰箱中取出的试剂及样品应置室温平衡 20分钟左右。 2. 加入试剂的体积和时间有误，移液器计量不准，吸嘴内水分太多或不清洁。如何解决？确定所使用的试剂体积正确，加入时间适当。 校正移液器，移液器与吸嘴配合要紧密吻合。移液不宜太快，排放应完全。 3. 洗板及加样过程中，酶标受污染失活而失去催化显色剂显色的能力。如何解决？确认盛酶标的容器不含酶抑制剂如叠氮钠等，确认配制洗液的容器已洗干净，确认配制洗液的纯化水达到要求且未受污染。 4. 孵育时间及孵育温度未达到要求 ，反应板放入培养箱时注意温度并及时调整。如何解
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牛流行性腹泻病毒PCR-荧光探针试剂盒溢值现象分析
作者：德尔塔 日期：2022-04-06
牛流行性腹泻病毒PCR-荧光探针试剂盒实验步骤繁琐，操作者们所犯的问题也各有不同。为什么ELISA标准品会出现“溢值”的现象呢？① 样品/标准品不正确稀释。② 孵育时间/温度不正确。③ 在孵育时为盖上酶联板覆盖物：在孵育时需盖上酶联板覆盖物，以防止液体蒸发或孵育期间的污染。每个试剂盒内均有足够数量的酶联板覆盖物。④ 检测波长不正确：要保证分光光度剂的检测波长是正确的。⑤ TMB底物的显色时间过长：请监控显色时间。牛流行性腹泻病毒PCR-荧光探针试剂盒说明书中所示的显色时间可能因为温度和其它检测条件的不同而稍有变化。⑥ 样品不适合此检测：在说明书中会列出每种产品的适用标本范围，超出范围的标本可能不适于此试剂盒或者检测条件需要摸索。⑦ 样品/标准品污染：样品或标准品的污染可能会导致检测结果“溢值”。⑧ 偶合试剂不正确稀释：要严格按照说明书来稀释偶合试剂，浓度过高会造成OD的“溢值”HRP偶合试剂的不正确稀释⑨ 所用稀释液不对：只能使用相应试剂盒内的稀释液稀释样品和标准品。找到问题原因后，解决问题就容易的多了。各位广大科研者们也是一样，在检测的时候一定要认真仔细，并严格按照要求来操作。实验前，对牛流行性腹泻病毒PCR-荧光探针试剂盒说明书仔细的阅读。
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elisa试剂盒前期准备工作和操作流程
作者：德尔塔 日期：2022-04-06
进口elisa酶联免疫试剂盒前期准备工作： 实验前样本和试剂盒室温平行1小时，如果样本是冻存样本，应提前拿到2-8摄氏度进行解冻（不建议直接室温解冻） 准备好实验所需耗材，蒸馏水（去离子水）。 进口elisa酶联免疫试剂盒操作流程： 1，将要进行实验的版孔进行设定好，标准品5个点，每个点设定平行，需要用到10个孔，空白只需1个孔。剩下孔可以做为样本孔 2，稀释标准，准备好5个EP管，然后在每个EP管中加入150微升标准稀释液，编上编码，分别为1，2，3，4,5，在1号管中加入150标准品，用枪头反复吹打10次左右（注意控制幅度不要过大容易产生气泡）如果有涡旋仪可以在涡旋仪上涡旋5秒左右，然后换枪头，在1号管中取150微升加入到2号管，后面过程一次类推。zui后稀释完，前面4个管中每管液体在150微升，5号管为300微升。浓度是从大到小。 3，标准、样本、空白加样：标准是每个浓度点2个孔（做平行），每孔加入50微升，加样过程中注意换枪头，样本孔中每孔加入50微升，加样过程中注意换枪头，空白孔加入50微升蒸馏水。特别要说明的是，标准加样和样本加样尽量控制在15分钟内加完，如果时间拖的太长，会导致前面孔先反应后面孔才开始反应，这样数值偏差过大。加完样后盖上封板膜，至37摄氏度孵育30分钟. 4，洗版，在孵育过程中可以将洗涤液配好，20ml30倍浓缩洗涤液用蒸馏水或者去离子水定容到600ml即可。每孔加入250-300微升的洗涤液（不要漫过版孔），（如果有震荡仪的话，可以讲板子放入震荡仪上5秒左右，然后静止三十秒，没有请忽略次过程）将板子在桌子上晃动5秒左右，然后静置30秒，甩干，拍板。说明：甩干过程尽量要快，1秒内就可以完成，不要慢慢倾斜倒掉液体，直接翻板甩掉液体即可。拍板过程需要在桌子上垫一层吸水纸或者滤纸，版孔朝下拍几下，拍干区别主要看吸水纸和滤纸上没有明显的水渍为完成。 5，每孔加入50微升的酶标试剂，此处在空白孔中不需要加（空白孔为空），孵育30分钟。 6，洗版同步骤4 7，显色，先
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选择微生物菌种的方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-06
1、微生物菌种选择动物消化道微生物具有多样性和特异性，不同动物种类对菌种的要求不同，同一菌株用于不同动物，产生的效果差异也较大。使用时一定要掌握菌种的特性和功效，选择不当起不到应有效果，反而会破坏原有菌群，甚至引发疾病2、微生物菌种应用时间微生物制剂应用要从子畜开始使用，以保证有益菌优先定植。因为制剂进入体内后要有一段时间进行微生物菌群调整才能定植下来。一般认为，乳酸菌类在各种动物的各阶段添加均较好，芽孢杆菌类在生长期添加较好，在幼龄期可以添加;曲霉菌类在幼龄期，水产动物全期不必添加;酵母菌类在生长期不必添加;在水产动物养殖中，以改善水质为目的时，可将微生物制剂或光合细菌直接洒于水中。3、微生物菌种添加方式一般粉状饲料添加微生物制剂效果较好，颗粒饲料和膨化饲料在加工过程中的高温可造成10%~30%的芽孢杆菌，90%以上的肠球菌以及99%以上的酵母失活，而乳酸杆菌几乎全部被杀灭。因此，在颗粒饲料中要使用耐热，耐挤压的芽孢杆菌制剂。乳酸菌不耐高温，应采用冻干后包被或采用喷雾干燥的方式制成的乳酸菌制剂。使用时采用饮水方式，以利于乳酸菌优先粘附于肠壁。4、微生物菌种剂量与浓度微生物制剂中必须含有相当数量的活菌才能达到效果。当进入动物肠道食糜中外源菌数大于1000万个每克时，都会对肠道内原有菌群产生较大的影响。因此，微生物制剂在产品中活菌数含量为10亿~20亿每克时效果*。我国正式批准生产的微生物制剂中规定每克芽孢杆菌含量要多于5亿个。以酵母菌产品为例，目前市场上销售的产品活菌数从每克几亿到200亿不等，在选择是要认真鉴别。5、微生物菌种抗生素的影响细菌类的微生物制剂对抗生素敏感，不宜与抗生素同时使用，使用微生物制剂的前后二天应停止使用抗生素。先用抗菌药物清理肠道，为益生菌的定植和繁殖扫除障碍，然后再饲喂微生物制剂，可提高使用效果。酵母菌类属于真核生物，生物学活性与细菌完全不同，对抗生素、磺胺类药物和一些抗菌剂有天然
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外周血淋巴细胞染色体标本制备与分析
作者：德尔塔 日期：2022-04-06
1. 转化细胞采血及接种培养 1.1 在酒精灯火焰上，用灭菌注射器（一次性注射器）抽取肝素0.2ml，使肝素湿润至管壁。 1.2 常规消毒后，采集外周静脉血5ml，转动注射器使血液与肝素混匀。 1.3 在超净工作台中，预先将RPMI 1640液体培养基（5ml，含植物血凝素60mg/ml、10%小牛血清）加入消毒好的小培养瓶中，再滴加25滴全血（6号针头），水平摇动混匀。 1.4 置37℃恒温培养箱中培养72小时。培养过程中每天水平摇动培养物1～2次，使血液均匀悬浮，再继续培养。 1.5 终止培养前2～4小时，加入秋水仙素，使终浓度达到0.2μg/ml。轻轻摇动培养瓶，使秋水仙素混匀。继续培养至72小时。 2．制片 2.1 收集转化细胞时，去掉瓶塞，用乳头吸管吸取培养液，充分混匀培养物，再将全部培养物吸入刻度离心管中。 2.2 1000 rpm离心8分钟（注意先配平）。 2.3 弃上清液，加入37℃预温的 0.075 mol/L KCl溶液8 ml，用吸管轻轻吹打细胞团混匀后，置37℃恒温水浴箱低渗处理25分钟。 2.4 加入 1ml新配制的固定剂（甲醇：冰乙酸=3：1），用吸管小心吹打、混匀，1000rpm离心8分钟。 2.5 弃上清液，加入8ml固定剂，吹打细胞团制成细胞悬液后，室温下固定20分钟。 2.6 1000 rpm离心 8分钟。 2.7 弃上清液，重复固定一次。 2.8 弃上清液，根据细胞数量的多少适当加入数滴新配制的固定剂，吹打细胞制成悬液。 2.9 吸取少量细胞悬液，滴2～3滴于冰水浸泡过的载玻片上，吹散，气干。 2.10 将标本置Giemsa染液中，染色8分钟，水洗去浮色，气干。 2.11 转化细胞显微镜下观察染色体标本分裂相的多少及分散情况。
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神经细胞分散培养
作者：德尔塔 日期：2022-04-06
（一） 细胞系选材 常用胚胎动物或新生鼠神经组织。鸡胚常用胚龄6-8d，新生鼠或胎鼠（12-14d）或人胚胎。不过也有认为与组织相关。如大白鼠胚胎以19d为宜，小鼠以18d为宜，大鼠纹状体以10d为宜；若纹状体与黑质联合培养的大鼠胚，则黑质以13d，纹状体18-21d为宜；小脑以20-21d小鼠胚胎，所获蒲氏细胞成活率高，颗粒细胞正在分化；脊髓与DRG联合培养，常用4-7d鸡胚或12-14d小鼠胚胎，取材易，神经成活率高。（二） 取材。脑则取出相应组织，在解剖液中先剪碎，以使胰酶消化。脊髓则固定于琼脂板上，用小刀将其要成背腹两侧，分别培养。（三） 细胞分离与接种。神经组织用0.125-0.25%胰蛋白酶在37℃孵育30min，移入接种液，停止消化，并洗去胰蛋白酶液，用细口吸管吹打细胞悬液，使其充分分散，如此多次，待沉淀后吸出上层细胞悬液，计数，预置细胞密度，接种于培养皿（1×106），做电生理应为5×105或更低。（四） 抑制胶质细胞生长。培养3-5d后，也有人认为培养7d后，用阿糖胞苷，或5-FU抑制神经胶质细胞的生长。（五） 观察。接种6-12h，开始贴壁，并有集合现象，细胞生长突起明显，5-7d胶质细胞增生明显，7-10d胶质细胞成片于神经细胞系下面，形成地毯，2周时神经细胞生长zui丰满，四周晕光明显，一个月后，有些神经细胞开始退化，变形，甚至出现空泡，一般培养2-4周zui宜。但神经细胞只能增大，而不能增殖，只能原代，不能传代，不会有细胞周期，而且随培养时间的延长，细胞数量在下降，但胶质细胞可以，神经胶质细胞也可以。在培养过程中，早期9-12d时，有较多的神经细胞死亡，这是*次死亡阶段，应注意保持条件的恒定。在此之后存活下去的细胞一般突起长而多，且相互形成突触。（六） 常用培养细胞实验有：FCM的蛋白总量分析；膜片钳与离子通道的分析；免疫组化分析；但免疫组化分析应注意，由于抗体直接作用于活细胞，不易穿透活细胞，故对核内抗原定位时，首先考虑膜对抗体的通透性问题。常用化学试剂以增加其通透性或
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结晶紫检测法检测细胞生长
作者：德尔塔 日期：2022-04-06
1．肿瘤细胞在96孔细胞培养板各孔中加0.1ml含5×104～10×4 WEHI-164细胞的培养液（含10％小牛血清的RPMI-1640培养液），37℃ 5％ CO2的二氧化碳培养箱中培养2～3小时，让细胞帖壁。2．用RPMI-1640培养液10倍递次稀释TNF标准品，根据需要3～5倍递次稀释待检样品，每孔加0.1ml稀释的标准品或待检样品，每个稀释度3个重复孔。对照孔6个，3个阳性对照孔各加0.1ml含4μg TNF的RPMI-1640培养液，3个阴性对照孔各加100μl RPMI-1640培养液。继续培养18～24小时。3．甩去培养液，用PBS小心洗涤一次，每孔加0.1ml 10％甲醇溶液固定肿瘤细胞30秒钟。4．吸去甲醇溶液，每孔加0.1ml结晶紫染液，室温中放置20分钟。5．轻轻甩去染色液，用蒸馏水洗涤各孔，将培养板倒置于吸水纸上吸干水分。自然干燥或37℃烘干。此板可以在室温中长期保存。6．测定前，每孔加0.1ml 33％醋酸脱色，充分振荡后在570nm处测定光吸收度。用光吸收度（OD）值对样品稀释度作图，比较标准品曲线和待检样品曲线即可得到待测样品中的肿瘤细胞因子活性。
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调节血管生长的开关miRNA-132
作者：德尔塔 日期：2022-04-06
科研人员发现了一种可调节血管生长的“开关”——微型核糖核酸分子miR－132，并且找到了控制该“开关”的方法。这一研究成果有望对癌症和心脑血管疾病的**产生积极影响。这项研究由美国加州大学圣迭戈分校医学院和密歇根大学癌症中心的研究人员共同完成。研究小组在英国《自然·医学》杂志网络版上报告说，他们发现在正常血管形成或再生期间，形成血管内壁的内皮细胞会暴露在一种具有“开关”功效的物质环境中，导致血管开始扩张、生长。通过分析，研究人员确定这个“开关”就是微型核糖核酸分子miR－132。 负责此项研究的病理学家说，血管与这个“开关”的关系好比是汽车与油门、刹车片之间的关系。在肿瘤的血管里，miR－132分子非常丰富，它具有保障血管广泛生长的能力，结果造成病变部位的血管像油门轰响、刹车失灵的汽车一样在人体组织内闯荡。 但他们认为，对于心脑血管疾病患者和因其他疾病血管受损者来说，miR－132分子补充物可能有助于调节其血管生长，缓解病情。 根据这一原理，科研人员制作出了遏制miR－132分子的物质和miR－132分子补充物。在对患有癌症和视网膜疾病的老鼠进行实验时，研究者发现，遏制miR－132分子的物质能使老鼠病变部位的血管生长受到抑制，阻止病情进一步发展。对于miR－132分子补充物的效果，研究者暂时没有提供详细资料。 目前，正在设计一种纳米粒，以期将遏制miR－132分子的物质和miR－132分子补充物准确输送到老鼠的病变部位，并且降低这两种物质的毒副作用。
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