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最轻松的糖肽鉴定——PLGS、BiopharmaLynx糖肽分析简介
作者：德尔塔 日期：2022-05-02
最轻松的糖肽鉴定——PLGS、BiopharmaLynx糖肽分析简介 贾伟 沃特世科技（上海）有限公司实验中心 糖基化蛋白质参与了几乎所有重要的生命过程，糖链的组成和结构对糖基化蛋白质的构象、功能以及与其它分子的相互作用都具有巨大的影响。许多蛋白类药物都是糖基化蛋白质，如免疫球蛋白IgG等。蛋白糖基化一级结构的研究内容包括：糖链的糖型结构、糖基化修饰的氨基酸位点、以及两者间的对应关系。这些信息都集中于糖肽结构中。沃特世的PLGS与BiopharmaLynxTM软件具有独特的糖肽鉴定功能，其主要分析流程如下。 1、建立Y1离子理论数据库：蛋白糖基化主要有N-与O-糖基化。N-糖基化是糖链与天冬氨酸(N)连接，O-糖基化是糖链与丝氨酸(S)或苏氨酸(T) 连接。在质谱的CID碎裂中，糖苷键较肽键更容易断裂。而在N-、O-糖基化中，第一个与氨基酸连接的都是N-乙酰氨基葡萄糖(GlcNAc)。因此在糖肽的碎片中，peptide-GlcNAc的离子信号稳定存在（及Y1离子）。PLGS与BiopharmaLynx进行糖肽搜索的第一步就是建立理论Y1离子数据库。 2、发现候选Y1离子信号：在数据库建立之后，根据质量准确度，对Y1离子质谱数据库进行搜索，从而发现候选Y1离子信号。 3、在候选Y1离子的相关碎片信息中，查找糖诊断离子。如果找到至少2个糖诊断离子，则确定其为糖肽，进而进行下一步处理。糖诊断离子来源于糖链中最常见的糖残基型的碎片，这里主要考虑7种糖诊断离子：204.0817、186.0817、168.0817、274.0187、292.0817、366.1012、657.1111。 4、搜索其它候选糖型信息及多肽序列鉴定。在Y1离子的质量检索匹配的基础上，搜索可能的糖单位差值数据，以发现Y1离子的各种糖型结构。之后再根据肽段的b、y离子碎片等信息进行肽段序列鉴定，以及糖基化位点确定。PLGS、BiopharmaLynx对糖肽的鉴定功能，为分析蛋白类药物复杂的糖型结构提供了非常简便的方式，已经成为糖蛋白药物分析中不可或缺的有力工具。 图1. 糖肽鉴定流程图。 图2. IgG糖肽EEQYNS
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Isolation of human primary gastric mucosa epithelial cells
作者：德尔塔 日期：2022-05-02
Isolation of human primary gastric mucosa epithelial cells 1. A piece of gastric mucosa (∼3 cm2) was obtained from the normal appearing mucosa of the stomach at surgery. 2. The patients were proven to be no H. pylori-negative by a combination of serology, histology and culture. 3. The patients gave informed consent, and the Human Research Committee approved the study. 4. The surface mucosal layer was removed with a razor blade, immediately minced, and then incubated in Ham's F-12 culture medium containing collagenase type I (0.2 mg/ml; Invitrogen) for 10 min. 5. Cells from the final incubation were washed and cultured in Ham's F-12 medium supplemented with 10% FBS and streptomycin (300 μg/ml) at 37°C in a humidified 5% CO2 atmosphere. 6. Epithelial cells were cultured in a 24-well collagen-coated dish at a final concentration of 106 cells/ml for 24 h before use. 7. Cultured cells formed subconfluent monolayers within 24 h of the inoculation. 8. The cultured cells in the monolayers had periodic acid-Schiff-positive material in the cytoplasm, confirming that the population consisted of mucus producing epithelial cells with at most a minimal contamination by other cells. 9. Each experiment used gastric cells from a different patient with individual experiments being performed by using gastric cells from a single patient. 10. The results were pooled from three different experiments. Reference 1. Tanahashi, T., Kita, M., Kodama, T., Yamaoka, Y., Sawai, N., Ohno, T., Mitsufuji, S., Wei, Y. P., Kashima, K., and Imanishi, J. (2000). Cytokine expression and production b
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关于超声波清洗器的一些小知识
作者：德尔塔 日期：2022-05-02
超声波清洗器选择清洗液时，应思考以下三个要素： 1、清洗效率：选择最有用的清洗溶剂时，必然要做实行。如在现有的清洗工艺中引入超声，所运用的溶剂通俗不必变卦； 2、超声波清洗器操作简略：所运用的液体应安全无毒、操作简略且运用寿命长； 3、成本：最低价的清洗溶剂的运用成本并纷歧定最低。运用中必需思考到溶剂的清洗效率、安全性、必然量的溶剂可清洗几工件使用率最高级要素。当然所选择的超声波清洗器清洗溶剂必需抵达清洗结果，并应与所清洗的工件材料相容。水为最通俗的清洗液，故运用水基溶液的系统操作烦琐、运用成本低、使用遍及。然而对某些材料以及污垢等并不合用于水性溶液，那么还有很多溶剂可供选用。 分歧的清洗液，要区分的清洗系统 水性系统：凡间由敞口槽构成，工件浸没个中。而复杂的系统 由多个槽构成，并配备轮回过滤系统、冲淋槽、单调槽以及其它附件。 溶剂系统：多为超声波汽相除油脂超声波清洗器，常配备废液延续收受接管装置。超声波汽相肃清油脂进程是由溶剂蒸发槽和超声浸洗槽成的集成式多槽系统完成的。在热的溶剂蒸汽和超声激荡一起用下，油脂、蜡以及其他溶于溶剂的污垢就被除去。经由一列清洗工序后下料的工件发烧、洁净单调。 超声波清洗器的清洗件措置 超声清洗的另一个思考要素是清洗件的上、下料或许说是放置清洗件的工装的设计。清洗件在超声波清洗器清洗槽内时，无论清洗件照样清洗件篮都不得触及槽底。清洗件总的横截面积不该逾越超声槽横截面积的70%。橡胶以及非刚化塑料会接收超声波能量。绝缘的清洗件也应惹起特殊留心。工装篮设计欠妥，或所盛工件太重，纵使**的超声波清洗器的效率也会被大大降低。钩子架子以及烧杯都可用来支撑清洗件。 清洗工夫：3-10分钟，**采用准时方法清洗。 关于超声波清洗器您还可以了解其它栏目内容，更仔细内容请致电给先欧超声发卖或许工程技能人员，先欧超声波清洗器有从业数十年的工程技能人员，能给您很好的处置清洗
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PCR实验室的设计
作者：德尔塔 日期：2022-05-02
1 PCR实验室平面布局 PCR扩增检验实验室原则上分为四个单独的工作区域：试剂贮存和准备区、标本制备区、扩增反应混合物配制和扩增区、扩增产物分析区。为避免交叉污染，进入各个工作区域必须严格遵循单一方向进行，即只能从试剂贮存和准备区→标本制备区→扩增反应混合物配制和扩增区→扩增产物分析区。 各实验区之间的试剂及样品传递应通过传递窗进行。PCR实验室平面布置示意图如下图所示。 2实验室空调通风系统设计及压力控制 PCR实验室并没有严格的净化要求，但是为避免各个实验区域间交叉污染的可能性，宜采用全送全排的气流组织形式。同时，要严格控制送、排风的比例以保证各实验区的压力要求。 2.1PCR试剂贮存和准备区 该实验区主要进行的操作为贮存试剂的制备、试剂的分装和主反应混合液的制备。试剂和用于样品制作的材料应直接运送至该区，不得经过其他区域。试剂原材料必须贮存在本区内，并在本区内制备成所需的贮存试剂。 对与气流压力的控制，本区并没有严格的要求。 2.2PCR标本制备区 该区域主要进行的操作为样本的保存、核酸(RNA、DNA)提取、贮存及其加入至扩增反应管和测定DNA的合成。 本区的压力梯度要求为：相对于邻近区域为正压，以避免从邻近区进入本区的气溶胶污染。另外，由于在加样操作中可能会发生气溶胶所致的污染，所以应避免在本区内不必要的走动。 2.3扩增反应混合物配制和扩增区 该区域主要进行的操作为DNA扩增。此外，已制备的DNA模板 (来自样本制备区)的加入和主反应混合液(来自试剂贮存和制备区)制备成反应混合液等也可在本区内进行。 本区的压力梯度要求为：相对于邻近区域为负压，以避免气溶胶从本区漏出。为避免气溶胶所致的污染，应尽量减少在本区内的不必要的走动。个别操作如加样等应在超净台内进行。 2.4扩增产物分析区 该区域主要进行的操作为扩增片段的测定。 本区是最主要的扩增产物污染来源，因此对本区的压力梯度的要求为：相对于邻近区域为负压，以避免扩增产物
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PCR实验室建设的基本设备与要求
作者：德尔塔 日期：2022-05-02
临床基因扩增检验实验室管理暂行办法 第一章 总 则 第一条 为规范临床基因扩增检验实验室管理，保证临床基因扩增检验质量，使临床诊断和**更为科学、合理，特制定本办法。 第二条 临床基因扩增检验技术指以临床诊断**为目的，以扩增检测DNA或RNA为方法的检测技术，如聚合酶链反应（PCR）、连接酶链反应（LCR）、转录依赖的放大系统（TAS）自主序列复制系统（3SR）和链替代扩增（SDA）等。 第三条 本办法适用于开展临床基因扩增检验的实验室。临床基因扩增检验实验室设立在二级以上医院。 第四条 临床基因扩增检验实验室必须使用经国家药品监督管理局批准的临床检验试剂开展临床基因扩增检验项目。 第五条 卫生部临床检验中心（以下简称卫生部临检中心）和省、自治区、直辖市临床检验中心（以下简称省临检中心）负责对所辖行政区域内临床基因扩增检验实验室的质量监督管理工作。 第二章 实验室设置和验收 第六条 拟设置临床基因扩增检验实验室的医疗机构按照《临床基因扩增检验实验室基本设置标准》（见附件）筹建实验室；筹建完成后，由法定代表人向卫生部临检中心提出技术验收申请。申请时需提交以下材料： （一）《医疗机构执业许可证》复印件； （二）可行性研究报告； 1、 拟设临床基因扩增检验实验室机构的所在地医疗卫生资源状况、本机构的基本情况、对临床基因扩增检验的需求以及临床基因扩增实验室运行的预测分析； 2、 拟设临床基因扩增检验实验室的设置平面图； 3、 拟设临床基因扩增检验实验室将开展的检验项目、实验设备条件和有关技术人员资料 第七条 卫生部临检中心和省临检中心共同组织相关专业的专家组（以下简称专家组），按照《临床基因扩增检验实验室基本设置标准》对提出申请的临床基因扩增检验实验室进行技术验收。验收完成后，在20日内将验收报告寄送至申请机构。 第八条 经专家组技术验收合格的医疗机构将本办法第六条规定的材料及专家组验收报告送至省级行政部备案。在将符合规定
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实验鼠不能取代人体胚胎干细胞研究
作者：德尔塔 日期：2022-05-02
导读：美国耶鲁大学科学家5日宣布，他们新完成的研究详细地揭示了人体胚胎干细胞中的3种基因是如何控制人体发育的，该成果有望帮助人们深入了解如何培育这些细胞用于疾病**。 研究人员在新出版的《细胞·干细胞》杂志上发表文章称，人体胚胎干细胞对人体的作用不同于实验鼠胚胎干细胞对鼠体的作用，这凸显了利用人体胚胎干细胞开展研究工作的重要性。文章资深作者、耶鲁大学干细胞中心遗传学助理教授娜塔莉亚·伊万诺娃说，从实验鼠的情况难以推断出胚胎干细胞在人体中的作用，人类的身体以不同的方式组织自己。 胚胎干细胞在受精后不久便形成，由于每个干细胞能转变成身体中的任何种类的细胞，因此它们十分独特。随着人体发育，细胞开始定性发展，失去了变成其他细胞类型的能力，当然，某些新干细胞的再生除外。科学家希望能够了解干细胞自我再生和分化的过程，以便**那些与细胞受损相关的疾病，如帕金森病、脊椎受伤、心脏病和阿尔茨海默症。 科学家通过研究确认的3种控制胚胎早期发育的基因分别是Nanog、Oct 4和Sox 2，它们是维持干细胞自我再生和防止其过早分化成非正常细胞的关键。由于目前使用人体胚胎干细胞受到政府规定的限制，因而许多有关胚胎干细胞如何工作的研究只能在实验鼠身上进行。 新的研究显示，从根本上讲，人类胚胎干细胞在人体中作用不同于实验鼠干细胞在鼠体上的作用。例如，在人体内，Nanog基因与Oct 4基因成对后控制名为外胚层神经细胞的分化，该细胞世系（lineage）能导致神经元和其他中枢神经系统细胞的产生。与之相反，Sox 2细胞与其他基因合作，在外胚层、中胚层和内胚层所有早期细胞世系的控制和新干细胞的产生中发挥着至关重要的作用。干细胞自我再生涉及多个类型的癌症。 伊万诺娃强调，许多其他的基因一定参与了人体早期发育变化的控制，她的实验室正在试图寻求该问题的答案。 Distinct Lineage Specification Roles for NANOG, OCT4, and SOX2 in Human Embryonic Stem Cells Zhen
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“新四大碱基”的确定，对于生物学研究者的几点启示
作者：德尔塔 日期：2022-05-02
21世纪最有生命力的行业之一，不得不说有生物行业。生物行业的发展速度已经超过了以往任何的时代，而且越来越加深入的研究着生命这个永恒不变的主题。目前随着对于表观遗传学的研究逐步深入，越来越多新的发现被生物界人士所震掠。其中新“四大碱基”的发现，对于生物行业的研究者来说，是又惊又喜。惊的是我们对于生命的认识，还有很长的路要走；喜的是我们对于生命的认识又向前迈进了一大步。相信表观遗传学研究的更加深入会给生物科学的发展，注入更多的活力；坚信越来越多的研究人员，会关注并研究这一课题。 下面我司经过整理相关的文献，简要介绍“新四大碱基”： 新四大碱基是什么? 几十年来，科学家们一直认为DNA中只包含有4种碱基：腺嘌呤(A)、鸟嘌呤(G)、胸腺嘧啶(T)和胞嘧啶(T)，这4种碱基已成为我们对基因代码如何形成生命的认识的基础。此处对于“新四大碱基”的说法主要是针对传统研究的四种碱基而言的。具体如下： 第5种碱基：5-甲基胞嘧啶 (5-methylcytosine) 第6种碱基：5-羟甲基胞嘧啶 (5-hydroxymethylcytosine) 第7种碱基：5-甲酰基胞嘧啶 (5-formylcytosine) 第8种碱基：5-羧基胞嘧啶 (5-carboxlcytosine) 对于研究者的几点启示： 第8种碱基的意义： 中科院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所徐国良研究组近日在《科学》杂志发表论文，初步阐明了DNA去甲基化的机制与过程，宣告人类发现了这个生命编码过程中的“新单词”。这意味着人类对自身受精卵变为胚胎细胞的内在机制有了更深理解。 甲基化是核酸的一种重要修饰，调节基因的表达和关闭，与动植物生长发育、疾病发生发展有密切关系。以往研究已知，DNA四大碱基还有两种修饰形式，即第5种碱基5mC、第6种碱基5hmC，它们均包含甲基（m）这个“词缀”，是甲基化的碱基。DNA甲基化会关闭某些基因的活性；而反之，DNA去甲基化则会诱导基因的重新活化
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Isolation of human prostatic smooth muscle cells
作者：德尔塔 日期：2022-05-02
Isolation of human prostatic smooth muscle cells Human prostate tissues 1.Human hyperplastic prostates were obtained during surgery from four men through transurethral resection of the prostate. 2.All these patients had histories of prostatism and were diagnosed as having benign prostatic hyperplasia on the basis of the combination of rectal digital examinations, transrectal sonography of the prostate, and urodynamic studies (including uroflowmetry, urethral pressure profile, and cystometry). Tissue explants and subcultures 1.Tissue specimens were immediately placed into a sterile Petri dish and minced into small pieces of ~2 × 2 × 2 mm under a laminar flow hood. 2.The minced tissue pieces then were transferred into a 15-ml polypropylene centrifuge tube containing 3 ml of 0.1% collagenase type 1 in HBSS, pH 7.4, and bubbled with a mixture of 5% CO2/95% O2 at 37° for 40 min. 3.The tube was subjected to a rotator at a speed of 300 rpm for 3 min. After a brief settlement, the supernatant fraction was discarded, and the tube was filled with 3 ml of 0.1% trypsin in PBS in the above condition for 10 min. 4.The tissue pieces were centrifuged at a speed of 1000 rpm for 3 min, and then the pieces were washed twice with HBSS and transferred to sterile flasks, which were precoated with 10 μg/ml collagen type 1, containing RPMI-1640 medium supplemented with 10% FCS (v/v), penicillin (100 units/ml)/streptomycin (100 μg/ml), amphotericin B (2.5 mg/ml), and testosterone (10 nM). 5.Cultures were maintained in a humidified incubator at 37° in 5% CO2/air. 6.Usually with 5–7 days, succe
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乳化机的转速问题分析
作者：德尔塔 日期：2022-05-02
乳化机在工业设备搅拌系统中据有主要的效果，特殊是在固液夹杂、液液夹杂、油水乳化、涣散均质、剪切研磨方面有着极端主要的使用。之所以称其为乳化机是应为可以完成乳化的效果。油水两相介 质的彻底夹杂后构成乳液，分为油包水或水包油两种系统，要完成乳化，有至少两方面的要求：一是激烈的机械切割涣散效果，将水相与油相的流体介质还切割打散 为小颗粒，然后再汇拢兼并时就有相互浸透掺混，构成乳液。二是适宜的乳化剂，在油水分子间充任序言桥梁的效果，经过其电荷及分子间力的效果，使油水夹杂乳 液可以依照我们所需望的工夫不变寄存。 目前乳化机的使用不单单局限于"乳化"，因为其共同的剪切效果，对粉粒体在液体中的破碎摧毁撞击最终细化到幻想的粒径，然后使固体质充沛掺混到液体中并构成相对不变的悬浮液。 当然与乳化剂一样，添加了涣散剂后，悬浮液的不变性就能获得加强。当某种固体物质经过必然工夫与液体的接触可以被液体彻底消融，那么经剪切撞击而构成的小颗料将更快地被液体所消融，由于其比外表积增大了很多倍了。当人们习气了经过高压均质机来获得微细颗粒后，细化就与均质划上了等号，因此乳化机对物料的细化及充沛掺混的效果也就是均质的进程了。所以我们也可以把乳化机称为均质机，为便于区分，普通可冠于高速或许高剪切均质机，以致于对乳化机有良多种叫法：真空均质机、高剪切均质机、高剪切均质机、高剪切均质机、无菌均质机、高剪切均质机、真空均质机、管线式均质机等。 乳化机的剪切效果的强弱直接影响到最终细度，经由剖析，首要与刀刃尖利水平，硬度，转定子间隙，切割的两刀口的相对活动速度及答应经过的粒径等有关，凡间状况下，刀刃尖利水平、硬度、转定子间隙及答应经过的粒径根本已定型或不想改动了，那么乳化机刀口的相对活动速度就是最有影响的要素，显示为转子的圆周线速度，该线速度高，则对径向活动的流体的切割或撞击的密度就高，因此乳化机的细化效果就强，反之亦然。 但
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气相色谱仪气路故障与排除
作者：德尔塔 日期：2022-05-02
气相色谱仪气路故障与排除 （1）流量调节故障； （2）气路泄漏故障； （3）气路堵塞与污染故障。 在气相色谱仪出现的各种故障中，有相当大的一部分都与气路有关，因此，了解和熟悉气路故障是十分必要的。 一、 流量的调节 1、流量调不上去 （1） 直观检查：首先检查仪器系统是否有明显的漏气声。在仪器系统气路有较大的泄漏发生时，很可能导致流量调不上去。如果听不到漏气声则转入（3）进行。 （2）查漏：听到有漏气声之后，可依照声音发出的方向而逐步定位。此时可利用皂液的涂抹进一步确定漏气的发生处。找到原因后及时堵漏。 （3）柱前压观察：观察柱前压指示表的数值大小，可迅速判断是气源引起的故障，还是仪器内部气路堵塞及损伤造成的。如果是柱前压太低（精确地说是比正常流量操作时的预定压力值低），则说明气源需要检查；如果柱前压正常则需要检查仪器的内部气路。 （4）钢瓶高压检查：打开钢瓶阀后，观察高压表指示，压力应在1~15MPa之间。如果压力在1MPa以下，停用该钢瓶，换气；如压力值在合适的范围内，说明钢瓶压力正常。 （5）减压阀上低压输出检查：调节减压阀看钢瓶上低压表指示能否调到0.25~0.6MPa之间。如果正常，可怀疑气路过滤接头有堵塞或者是仪器上的稳定阀有问题，此时应按照（6）来进行；如低压值不正常，则说明减压阀有问题，需进行（7）的修理。 （6）过滤器堵塞及稳压阀检查：将过滤器出口到仪器气源入口处的接头缓缓旋开，观察是否有较强的气流从接头处跑出。如有，则说明过滤器不堵塞，稳压阀可能有问题。在确定稳压阀不出气后，可进行阀拆卸与清洗，这可能是稳压阀内阀针与阀座间堵塞所致。如清洗后阀仍不能正常工作，**换一个新阀；在上面试验中若无较强气流从旋开的接头中流出，需要检查过滤器入口前后可能堵塞之处；当然中间管线的堵塞也是可能的，但发生率甚小。 （7）减压阀修理：在明了减压阀的结构之后，可拆卸修理减压阀。由于该减压阀入口一侧有高压，
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Isolation and Culture of human vascular smooth muscle cells
作者：德尔塔 日期：2022-05-02
Isolation and Culture of human vascular smooth muscle cells 1. Human vascular smooth muscle cells (SMCs) were isolated from human saphenous vein. 2. Small moistened pieces of tissue (6 mm2) were placed intima side down in a tissue-culture flask and left to adhere for 2 hours, and then the base of the flask was carefully flooded with culture medium consisting of Dulbecco's modified Eagle's medium containing 15% HI-FBS, penicillin (10 U/mL), streptomycin (10 µg/mL), and fungizone (0.5 µg/mL) and left undisturbed for 2 to 3 weeks. 3. Primary isolates were grown to confluence in culture medium and passaged using trypsin/EDTA. 4. Cells were fixed for 10 minutes in ice-cold methanol and immunocytochemical analysis showed them to be positive for the smooth muscle cell–specific marker α-actin. 5. Cells were used from five different patients between passages 2 and 9. 6. To render cells quiescent, FBS was removed from the culture medium for 24 hours before all experiments. Measurement of Cell Growth 1. Cell Outgrowth From Explants To avoid individual variations, outgrowth of cells from explants was analyzed in IMAs and SVs from the same patients (n=5; four men and one woman; age, 61±8 years), and the explant culture was performed as described above. At 20 days after culture, total explants and explants with cell outgrowth were counted. Cell outgrowth rate was calculated as follows: Cell Outgrowth Rate=N(+)/N(t)x100%, where N(+) is the number of explants with cell outgrowth (regardless of cell number) and N(t) is the total number of explants seeded. 2. DNA Synthesis and Cell Divis
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Culture of human venous smooth muscle cells
作者：德尔塔 日期：2022-05-02
Culture of human venous smooth muscle cells 1. Explants of the 2 groups of skins (control subjects and patients with varicose veins) were prepared according to the method described for smooth muscle cells by carefully putting the epidermis at the top. 2. Cells were grown into collagen-precoated Petri dishes in Dulbecco’s modified Eagle medium supplemented with 10% fetal calf serum, 10% horse serum, 2 mmol/L L-glutamine, 105 U/L penicillin, and 100 μg/mL streptomycin at 37°C in a 95% air, 5% CO2 atmosphere. 3. Cell growth began within 3 to 5 days, and cells reached confluence after 2 weeks. 4. Cells were then trypsinized, seeded at a density of 10 000 cells/cm2 (first passage), and subcultured to be used at passage 3 or 4 after 8 to 10 population doublings in the same culture medium described above without horse serum. 5. For determination of cell proliferation, both cell types were subcultured at passage 3 at a density of 8000 cells/cm2 and counted at different times with an automatic cell counter. Reference 1. Sansilvestri-Morel P, Nonotte I, Fournet-Bourguignon MP, et al. Abnormal deposition of extracellular matrix proteins by cultured smooth muscle cells from human varicose veins. J Vasc Res. 1998; 35: 115–123. 2. Sansilvestri-Morel P, Rupin A, Kern P, et al. Imbalance in the synthesis of collagen type I and collagen type III in smooth muscle cells derived from human varicose veins. J Vasc Res. 2001; 38: 560–568.
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气相色谱仪的基本构造
作者：德尔塔 日期：2022-05-02
气相色谱仪的基本构造 气相色谱仪的基本构造有两部分，即分析单元和显示单元。前者主要包括气源及控制计量装置﹑进样装置﹑恒温器和色谱柱。后者主要包括检定器和自动记录仪。色谱柱（包括固定相）和检定器是气相色谱仪的核心部件。 （1）载气系统 气相色谱仪中的气路是一个载气连续运行的密闭管路系统。整个载气系统要求载气纯净、密闭性好、流速稳定及流速测量准确。 （2）进样系统 进样就是把气体或液体样品速而定量地加到色谱柱上端。 （3）分离系统分离系统的核心是色谱柱，它的作用是将多组分样品分离为单个组分。色谱柱分为填充柱和毛细管柱两类。 （4）检测系统检测器的作用是把被色谱柱分离的样品组分根据其特性和含量转化成电信号，经放大后，由记录仪记录成色谱图。 （5）信号记录或微机数据处理系统 近年来气相色谱仪主要采用色 谱数据处理机。色谱数据处理机可打印记录色谱图，并能在同一张记录纸上打印出处理后的结果，如保留时间、被测组分质量分数等。 （6）温度控制系统 用于控制和测量色谱柱、检测器、气化室温度，是气相色谱仪的重要组成部分。 气相色谱仪分为两类：一类是气固色谱仪，另一类是气液分配色谱仪。这两类色谱仪所分离的固定相不同，但仪器的结构是通用的。
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各种常见缓冲液的配制方法(在线计算)
作者：德尔塔 日期：2022-05-02
磷酸盐缓冲液，Tris缓冲液和柠檬酸缓冲液等是生物学实验中常用的缓冲液，也是PeproTech重组细胞因子和蛋白溶解所需的常用缓冲液。然而，这些缓冲液的配制比较麻烦，尤其当要获得特定pH值的缓冲液时，调节pH值是费力、费时的事情。对于Tris等缓冲液等，pH计是无法准确测量其pH值的。 那么，有没有简便的方法来配制特定浓度和pH值的上述缓冲液呢？ 美国PeproTech公司为此精心设计开发出一个网上实用工具--。只要将你所需配置的浓度，pH值，以及配制的体积在网站上相应的位置输入或选定，即可计算出配制该溶液所需各组分的重量或体积，然后称取相应重量或体积的组分即可配制出您所需的缓冲液。 该网上工具包括以下内容： 1) 配制磷酸盐缓冲液 由一定量的Na2HPO4和NaH2PO4混合而得。 2) 配制柠檬酸(盐)缓冲液 由Citric Acid(柠檬酸)和Trisodium Citrate(柠檬酸钠)混合而得。 3) 配制醋酸溶液 在水中加入一定体积的醋酸而得。 4) 配制Tris缓冲液 由一定量的Tris HCl(Tris酸)和Tris Base(Tris碱)混合而得。 5) 重量与摩尔数转换工具 已知一蛋白的分子量(kDa)，可由重量推算出摩尔数和分子数，以及在一定体积内摩尔浓度。相反，也可由一个蛋白的摩尔数推算出重量和分子数，以及由摩尔浓度推算出所含的蛋白质量。 附：这些缓冲液在溶解PeproTech公司重组细胞因子和蛋白中的应用举例 1) 磷酸盐缓冲液 1 x PBS用于溶解100-19 Human KGF 和100-52 Human FGF-23等。 2) 柠檬酸(盐)缓冲液 5mM柠檬酸钠(pH 8.0)用于溶解100-17A Human FGF-acidic, 10mM柠檬酸(pH 3.0)用于溶解100-21 Human TGF-b1等。 3) 醋酸溶液 10mM醋酸用于溶解120-10 Human Noggin和120-20 Human WISP-3等。 4) Tris缓冲液 5mM Tris(
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切向流超滤（TFF）的原理、特点及其应用
作者：德尔塔 日期：2022-05-02
颇尔公司提供业界领先的切向流过滤(TFF)技术，以满足日益增加的生物技术和生物工艺过程中的多样性需求并应对各种挑战。这些产品的设计目的是在保证过滤效果一致以及获得最高过滤量的前提下，简化处理过程并使处理过程呈流水线化。 切向流超滤（TFF）能快捷、高效地进行生物分子的分离与纯化处理；可用于低至10毫升、高达数千升样品溶液的浓缩和脱盐处理；也可以用于不同大小生物分子的分离、细胞悬液收集、以及发酵液和细胞裂解液的澄清。 为什么要使用切向流超滤 ● 易于装配，操作简单-用管路和少许管路配件，简单地连接切向流超滤装置、泵以及压力表，向储槽中加入样品，即可开始工作。 ● 快捷高效-对比透析，装配更轻松，处理速度快；对比离心浓缩装置或搅拌式超滤装置，可在更短的时间内获得更高浓度。 ● 仅需在同一系统中执行两步操作-在同一系统中完成样品的浓缩和渗滤处理，节约时间并避免损失产物。 ● 工艺和缩放-由于结构材料与平板式超滤器流体通路，实验室规模下的条件可以应用于生产规模的应用中。处理低至10mL、或高达千升体积的样品，均可提供对应的切向流超滤装置。成本低廉-切向流超滤装置与平板式超滤器经清洗后可再次使用，也可在单次应用后废弃。可执行简单的完整性测试，检验滤膜和密封的完整性。 切向流超滤的原理？如何分离生物分子 切向流（也称为“错流”）超滤中，泵推动流体通过滤膜表面，冲刷去除其上截留的分子，从而使滤膜表面的积垢程度降至最低。在渗余物流体中产生紧靠滤膜的压力，使溶质和小分子通过滤膜。如此方能完成过滤。利用细分筛网分离沙子与鹅卵石的模拟实验，有助于理解切向流超滤的机理：筛网眼象征滤膜上的孔隙，而沙子与鹅卵石象征待分离的分子，在直流过滤中，沙子-鹅卵石混合物被迫向着筛网眼方向移动，随着一些较小的砂粒通过筛网眼落下，在筛网表面形成以个鹅卵石层，阻碍顶部砂粒向筛网方向移动并通过筛网眼（图1），在直流过滤中，增加压力，仅能对混合物施加压
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