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红细胞裂解液配制注意事项
作者：德尔塔 日期：2022-02-18
裂解液：ACK裂解液作用更柔和些 注意事项： （1） 裂解液如果放在冰箱里，一定要预热，37度即可。裂解期间试管也可水浴，但如果是夏天室温比较高则不必； （2） 裂解5min后立刻离心（从所有管都混匀后计时间）； （3） PBS离心洗涤2次； （4） 裂解液pH值很重要，**一次不要配多，时间长效果不好，一次配100mL， 避光保存。 2.离心速度：800-1000rpm，5min 3.研磨轻柔很重要 4.培养淋巴细胞的最佳培养液是RPMI 1640，因为是原代细胞，要用10%胎牛血清。还有非常重要的一点，要想让细胞增殖得好，必须加二巯基乙醇（beta-2ME） 5.细胞密度1－2X10^6/mL
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动物组织提取基因组DNA常见问题
作者：德尔塔 日期：2022-02-18
1.选择的实验材料要新鲜，处理时间不易过长。 2.在加入细胞裂解缓冲液前，细胞必须均匀分散，以减少DNA团块形成。 3. 提取的DNA不易溶解，不纯，含杂质较多；加溶解液太少使浓度过大。沉淀物太干燥，也将使溶解变得很困难。 4. 电泳检测时DNA成涂布状，操作不慎；污染核酸酶等。 5.分光光度分析DNA的A280/A260小于1.8；不纯，含有蛋白质等杂质。在这种情况下，应加入SDS至终浓度为0.5%，并重复操作步骤2～8。 6.酚/氯仿/异戊醇抽提后，其上清液太黏不易吸取：含高浓度的DNA，可加大抽提前缓冲液的量或减少所取组织的量。
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动物组织提取基因组DNA的步骤
作者：德尔塔 日期：2022-02-18
1. 取新鲜或冰冻动物组织块0.1g（0.5cm3），尽量剪碎。置于玻璃匀浆器中，加入1ml的细胞裂解缓冲液匀浆至不见组织块，转入1.5ml 离心管中，加入蛋白酶K （500ug/ml）20μl，混匀。在65℃恒温水浴锅中水浴30min，也可转入37℃水浴12～24h，间歇振荡离心管数次。于台式离心机以12000 rpm离心5min，取上清液入另一离心管中。 2.加2倍体积异丙醇，倒转混匀后，可以看见丝状物，用100ul 吸头挑出，凉干，用200ul TE 重新溶解。（可进行PCR反应等，需要进一步纯化的按下列步骤进行） 3.加等量的酚：氯仿：异戊醇振荡混匀，离心12000 rpm，5min。 4.取上层溶液至另一管，加入等体积的氯仿?异戊醇，振荡混匀，离心12000 rpm，5min。 5. 取上层溶液至另一管，加入1/2体积的7.5mol/L乙酸氨加入2倍体积的无水乙醇，混匀后室温沉淀2min ，离心12000 rpm ,10min。 6.小心倒掉上清液，将离心管倒置于吸水纸上，将附于管壁的残余液滴除掉。 7.用1ml 70%乙醇洗涤沉淀物1次，离心12000 rpm ， 5min。 8.小心倒掉上清液，将离心管倒置于吸水纸上，将附于管壁的残余液滴除掉，室温干燥。 9.加200ul TE重新溶解沉淀物，然后置于4℃或?C20℃保存备用。 10.吸取适量样品于GeneQuant上检测浓度和纯度。
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培养基常用的灭菌方法
作者：德尔塔 日期：2022-02-18
高压蒸汽灭菌： 高压蒸汽灭菌适合于耐高温培养基、接种器械和蒸馏水的灭菌。培养基在爱制备过程中混入各种杂菌，分装后应立即灭菌，至少应在24h内完成灭菌工作。灭菌时一般是在0.105MPa压力下，温度121℃时，灭菌15~30min即可。消毒时间不宜过长，也不能超过规定的压力范围，否则有机物质特别是维生素类物质就会在高温下分解，失去营养作用，也会使培养基变质、变色，甚至难以凝固。 可将蒸馏水或自来水装在三角瓶中，装水量一般不超过瓶的2/3，用牛皮纸或硫酸纸包扎封口，然后放入高压锅中灭菌后即为无菌水。 灭菌后的培养基可放到培养室中预培养3d，若无污染现象，则证明灭菌是彻底的，可以使用。暂时不用的培养基**置于10℃下保存。含IAA或GA3的培养基应在1周内用完，其他培养基最多也不要超过1个月。 过滤灭菌： 一些植物生长调节剂及有机物，如IAA、GA3、ZT、CM等，遇热容易分解，不能与培养基一起进行高温灭菌，而要使用细菌过滤器滤去其中的杂菌。细菌过滤器与滤膜（孔径0.45微米）使用之前要先进行高压灭菌。过滤后的溶液要立即加入培养基中，若为液体培养基，可在培养基冷却至30℃时加入；若为固体培养基，必须在培养基凝固之前（50-60℃）加入，振荡使溶液与其他成分混合均匀。
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抗体孵育时间过长或温度较高如何解决
作者：德尔塔 日期：2022-02-18
抗体孵育时间过长或温度较高：解决办法是，严格执行操作规程，**随身佩带报时表或报时钟，及时提醒，避免因遗忘而造成时间延长。现在流行的二步法（Polymer）敏感性很高，要求一抗孵育的时间不是传统的1小时，而是30分钟，因此，要根据染色结果进行调整。 DAB变质和显色时间太长：DAB**现用现配，如有沉渣应进行过滤后再用。配制好的DAB不应存放时间太长，因为在没有酶的情况下，过氧化氢也会游离出氧原子与DAB产生反应而降低DAB的效力，未用完的DAB存放在冰箱里几天后再用这种似乎节约的办法是不可取的。DAB的显色**在显微镜下监控，达到理想的染色程度时立即终止反应。不过当染色片太多时或用染色机时，这样做似乎不现实，但至少应对一些新的或少用的抗体显色时进行监控，避免显色时间过长。
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胡萝卜素与叶黄素优缺点介绍
作者：德尔塔 日期：2022-02-18
叶黄素具有独特的保健功能和良好的着色性能，可在食品行业广泛应用，在焙烤食品、饮料、冷冻食品、果冻及果酱类食品中着色，色彩鲜艳且持久。 摄入足够量的叶黄素能保护视黄斑，有效地预防视力下降。叶黄素作为抗氧化剂，能清除自由基和游离基，限制由于新陈代谢和关心所致的组织损伤，提高肌体的免疫力，预防衰老。 叶黄素作为着色剂根据不同产品建议添加量为(叶黄素晶体)。叶黄素与β-胡萝卜素的性能对比： 1. 两者都为胡萝卜素类物质，呈色都为金黄色，即色调一致； 2. β-胡萝卜素在油质产品里只能少量溶解，在100℃的植物油里只能溶解0.25%，大部分为分散性悬浮状态；叶黄素在油质产品里的溶解度比β-胡萝卜素大8倍，在100℃的植物油里能溶解2%，溶解性更好； 3. 在水分散性产品方面两者的呈色也基本一致，为乳黄到金黄色，β-胡萝卜素目前只有乳浊性水分散产品，叶黄素在浓度不要求很高的情况下可以有透明澄清产品； 4. 两者作为营养强化剂，β-胡萝卜素只是作为维生素A源，在体内转化为维生素A被人体吸收，叶黄素除作为营养强化剂外，还有保健作用，其保护视网膜、清除自由基和游离基的作用更被人们关注。 5. 稳定性方面，两者耐热性均很好，在不同PH下呈色均稳定，在抗光性方面，β-胡萝卜素就不如叶黄素，叶黄素具有更好的光稳定性。 6. 价格方面，由于β-胡萝卜素自然资源含量低，生产工艺复杂，生产成本较高；叶黄素由于自然资源丰富，含量高，生产工艺相对较简单，生产成本也就较低，故，叶黄素相对于β-胡萝卜素，存在价格优势，用叶黄素作为着色剂可适当降低生产成本，提高产品在市场的竞争力。
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卡波姆934、940、941区别
作者：德尔塔 日期：2022-02-18
卡波姆不懂型号主要是粘稠度的不同，卡波姆其商品名为卡波普（carbopol)，按粘度分为934、940、941等。 1、Carbopol940：短流变性、高粘度、高清澈度，低耐离子性及耐剪切性，适用于凝胶及膏霜中。 2、Carbopol941：长流变性、低粘度、高清澈度，中等耐离子性及耐剪切，适用于凝胶及乳液。 3、Carbopol934：交联聚丙烯酸树脂，局部给药系统，在高粘度时稳定，用于浓凝胶剂、乳剂、混悬剂。 卡波姆是以季戊四醇等与丙烯酸交联得到的丙烯酸交联树脂，是一类非常重要的流变调节剂，中和后的卡波是优秀的凝胶基质，有增稠、悬浮等重要用途，工艺简单，稳定性好，广泛应用于乳液、膏霜、凝胶中。
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常用检测器有哪几种
作者：德尔塔 日期：2022-02-18
检测器的作用是将柱流出物中样品组成和含量的变化转化为可供检测的信号，常用检测器有紫外吸收、荧光、示差折光、化学发光等。 PDA检测器：即紫外检测器，点时间可检测单一点处吸收值。 DAD检测器：二极管阵列检测器，可理解为无数个PDA检测器串联。即点时间可检测某一波段吸收值，比PDA检测器定性能力强大。 荧光检测器：对某些吸收紫外光后可发射荧光的物质进行检测，灵敏度较高。 蒸发光散射检测器：可以检测没有紫外吸收的有机物质（不可用于梯度洗脱） 示差折光检测器：根据折射率的变化对样品浓度检测（不可用于梯度洗脱），万能检测器，但是定性能力和PDA一样差。
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紫外可见吸收检测器的介绍
作者：德尔塔 日期：2022-02-18
紫外可见吸收检测器(UVD)是HPLC中应用最广泛的检测器之一，几乎所有的液相色谱仪都配有这种检测器。其特点是灵敏度较高，线性范围宽，噪声低，适用于梯度洗脱，对强吸收物质检测限可达1ng，检测后不破坏样品，可用于制备，并能与任何检测器串联使用。紫外可见检测器的工作原理与结构同一般分光光度计相似，实际上就是装有流动地的紫外可见光度计。 紫外吸收检测器 紫外吸收检测器常用氘灯作光源，氘灯则发射出紫外-可见区范围的连续波长，并安装一个光栅型单色器，其波长选择范围宽(190nm～800nm)。它有两个流通池，一个作参比，一个作测量用，光源发出的紫外光照射到流通池上，若两流通池都通过纯的均匀溶剂，则它们在紫外波长下几乎无吸收，光电管上接受到的辐射强度相等，无信号输出。当组分进入测量池时，吸收一定的紫外光，使两光电管接受到的辐射强度不等，这时有信号输出，输出信号大小与组分浓度有关。 局限：流动相的选择受到一定限制，即具有一定紫外吸收的溶剂不能做流动相，每种溶剂都有截止波长，当小于该截止波长的紫外光通过溶剂时，溶剂的透光率降至10%以下，因此，紫外吸收检测器的工作波长不能小于溶剂的截止波长。
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乙二胺四乙酸二钠盐的合成方法
作者：德尔塔 日期：2022-02-18
按一定的配比将氰化钠与甲醛的混合物缓缓加入乙二胺水溶液中，在85℃、减压下通入空气以除去氨气。反应完毕后，用浓硫酸调Ph值至4. 5，再经脱色、过滤、浓缩、结晶分离、干燥得成品。 氯乙酸法：先将100kg氯乙酸、100kg冰和135kg 30%的NaOH溶液混合，在搅拌下加入18kg 83%～84%的乙二胺，在15℃下保温1h。分批缓慢加入30%的NaOH溶液至反应物显碱性为止，并在室温下保持12h。加热至90℃，加活性炭脱色。滤液用盐酸调Ph值到4.5，并在90℃下浓缩、过滤；滤液冷却后结晶、分离、洗涤，在70℃下干燥得成品。 用乙二胺四乙酸与氢氧化钠溶液作用制得：在装有搅拌器的2L反应烧瓶中，加入292g乙二胺四乙酸，1.2L水。在搅拌下加入200mL 30%氢氧化钠溶液，加热至全部反应完。加20%的盐酸中和至pH=4.5，加热至90℃浓缩，过滤。滤液冷却后析出结晶。抽滤分出，用蒸馏水洗涤，在70℃烘干，得产品二水乙二胺四乙酸二钠盐。 在搪瓷反应罐中加入乙二胺四乙酸、水，在搅拌下加入氢氧化钠溶液，加热至全部反应，加盐酸至PH为4.5，加热至90℃浓缩，过滤，滤液冷却，滤出结晶，水洗，70℃烘干，得乙二胺四乙酸二钠。 将氯乙酸钠与乙二胺缩合，经酸化得乙二胺四乙酸，再用氢氧化钠中和即得。把所得粗品溶于10倍水中，加入等体积乙醇以析出二钠盐，然后过滤，洗涤。
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DNA提取的几种方法介绍
作者：德尔塔 日期：2022-02-18
浓盐法： 利用RNP和DNP在电解溶液中溶解度不同,将二者分离,常用的方法是用1M 氯 纳提取化钠抽提,得到的DNP粘液与含有少量辛醇的 氯仿一起摇荡,使乳化,再离心除去蛋白质,此时蛋白质凝胶停留在水相及氯仿相中间,而DNA位于上层水相中,用2倍体积95%乙醇可将DNA 钠盐沉淀出来。 也可用0.15 MNaCL液反复洗涤细胞破碎液除去RNP,再以1MNaCL提取脱氧核糖蛋白,再按氯仿---异醇法除去蛋白。 两种方法比较,后种方法使核酸降解可能少一些。 以稀盐酸溶液提取DNA 时,加入适量去污剂,如SDS可有助于蛋白质与DNA 的分离.在提取过程中为抑制组织中的DNase对DNA 的降解作用,在氯化钠溶液中加入柠檬酸钠作为金属离子的烙合剂.通常用.15MNaCL,0.015M柠檬钠,并称SSC溶液,提取DNA。 阴离子去污剂法: 用SDS或二甲苯酸钠等去污剂使蛋白质变性,可以直接从生物材料中提取DNA .由于细胞中DNA与蛋白质之间常借静电引力或配位键结合,因为阴离子去污剂能够破坏这种价键,所以常用阴离子去污剂提取DNA。 苯酚抽提法: 苯酚作为蛋白变性剂,同时抑制了DNase的降解作用.用苯酚处理匀浆液时,由于蛋白与DNA 联结键已断,蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶.蛋白分子溶于酚相,而DNA溶于水相.离心分层后取出水层,多次重复操作,再合并含DNA 的水相,利用核酸不溶于醇的性质,用乙醇沉淀DNA .此时DNA是十分粘稠的物质,可用玻璃漫漫绕成一团,取出.此法的特点是使提取的DNA保持天然状态 . 水抽提法: 利用核酸溶解于水的性质,将组织细胞破碎后,用低盐溶液除去,然后将沉淀溶于水中,使充分溶解于水中,离心后收集上清液.在上清中加入固体氯化钠调节至2.6m.加入2倍体积95%乙醇,立即用搅拌法搅出.然后分别用66%、80%和95%乙醇以及丙铜洗涤,最后在空气中干燥,既得样品.此法提取的中蛋白质含量较高。
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高碘酸的性质介绍
作者：德尔塔 日期：2022-02-18
正高碘酸脱水得到偏高碘酸HIO4，进一步脱水则生成七氧化二碘专(无色粘稠液体)，七氧化二碘分属解得到五氧化二碘（I2O5）和氧气。 纯净的偏高碘酸不存在。偏高碘酸水溶液的最高浓度为86%，具有很强的酸性和氧化性。偏高碘酸是无机酸中氧化性最强的之一，能将金属锰氧化为七氧化二锰或高锰酸，将硫酸盐氧化为过二硫酸盐，将二价铁氧化为高铁酸盐。并且酸性只比高氯酸和高溴酸极不稳定的氢砹酸弱，比硫酸、盐酸、硝酸等还强。 86%偏高碘酸如果和有机物接触，先会使其脱水碳化，之后甚至会着起火来。偏高碘酸为难挥发性酸。如皮肤上沾到偏高碘酸，应先用清水冲洗，再有硼酸二氢钠溶液中和。必要时需到医院就医。 正高碘酸和偏高碘酸可分别生成盐类，称为“正高碘酸盐”及“偏高碘酸盐”。偏高碘酸盐的溶解度和化学性质与同族卤素的高氯酸盐类似，但阴离子半径更大，氧化性较弱，不过酸性条件下氧化性极强，和偏高碘酸类似。 有机化学中，高碘酸可氧化邻二醇并使碳-碳键断裂，生成两个羰基化合物，用于确定糖类的结构。
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利福平和利福霉素有什么区别
作者：德尔塔 日期：2022-02-18
利福霉素是从地中海链霉菌产生的利福霉素b经转化而得的一种半合成利福霉素类抗生素。 药理及应用： 对金黄色葡萄球菌（包括耐青霉素和耐新青霉素株）,结核杆菌有较强的抗菌作用。对常见革兰阴性菌的作用弱，口服吸收差.注射后体内分布以肝脏和胆汁内为最高,在肾,肺,心,脾中也可达**浓度.与他类抗生素或抗结核药之间未发现交叉耐药性.用于不能口服用药的结核患者和耐药金葡菌引起的胆道,呼吸道,泌尿道等部位感染。 利福平俗称:甲哌利福霉素,甲哌力复霉素 药理和应用:本品为力复霉素sv的半合成类似物,对结核杆菌高度敏感,在宿主细胞内外对结核杆菌和其它分枝杆菌（包括麻风杆菌等）均有明显的杀菌作用.对脑膜炎球菌,流感,嗜血杆菌,金葡菌,表皮链球菌,肺炎军团菌等也有一定抗菌作用,对大型病毒,衣原体有抑制作用.结核杆菌对本品易产生耐药性,故常与其它抗结核药,如异烟肼,乙胺丁醇等合用,以加强作用并延迟耐药菌株的产生.本品是通过抑制细菌rna聚合酶阻碍mrna合成.达到杀菌作用.与其它抗结核药之间无交叉耐药性,故对其它抗结核药已耐药的变异菌株同样有效,临床主要用于各型结核病.
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用TRIzol LS提取禽流感病毒方法
作者：德尔塔 日期：2022-02-18
1.在1.5ml的管中加入病毒原液500ul，再加入TRIzol LS 500ul，充分混匀，室温放置10min。 2.加入200ul的氯仿，盖紧离心管盖，用力震荡离心管（溶液充分乳化，成乳白状，无分相现象），室温放置10min （由于氯仿沸点低、易挥发，振荡时离心管可能爆开，小心）。 3.离心 4℃、13000r/min、15min，取上层液相移入另一管（切忌吸动白色中间相）。 4.加入等体积异丙醇，轻轻颠倒离心管充分混匀液体，室温放置10min。 5.离心 4℃、13000r/min、15min，（这时乍一看会发现管子里好像没有东西，再仔细看看，会发现靠近管底的壁上有一星点的白色沉淀物，就是它了）用枪小心吸去所有上清。 6.1ml75%乙醇洗一遍，离心 4℃、8000r/min、10min，（这时又会发现管子没东西了，不要担心，有的，但是因为量太少看不见罢了）用枪小心吸去所有上清，在超净台中干燥5min。 7.加入适量DEPC处理水。（如果材料来源丰富的话，加入的水量为下一步RT的total减去其他试剂的量；若要省着点用，则自己看着办了，尽量不要加太多的水）。 8.建议立即做RT。若要保存，可在上一步加入乙醇后冻存于－70℃，可保存一年；若加入DEPC水后则只能在－20℃保存1个月左右。
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