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使用血清的注意事项

使用血清的注意事项

作者:德尔塔 日期:2022-04-02

1、存放血清的方法? 建议血清应保存在-20℃以下。然而,若存放于4℃时,请勿超过半个月。若您一次无法用完一瓶,建议您无菌分装血清至恰当的灭菌容器内,再放回冷冻。 2、如何解冻血清才不会使产品质量受损? 建议您将血清从冷冻箱取出后,先置于2~8℃冰箱使之融解,然后在室温下使之全融。但必须注意的是,溶解过程中必须规则地摇晃均匀。 3、血清解冻后发现有絮状沉淀物出现,该如何处理? 血清中沉淀物的出现有许多种原因,但zui普遍地原因是由于血清中脂蛋白的变性所造成,而血纤素蛋白(形成凝血地蛋白之一)在血清解冻后,也会存在于血清中,亦是造成沉淀物的主要原因之一。但这些絮状沉淀物,并不影响血清本身的质量。若您欲去除这些絮状沉淀物,可以将血清分装至无菌离心管内,稍微离心,上清液即可接着加入培养基内一起过滤。我们不建议你以过滤的方法去除这些絮状沉淀物,因为它可能会阻塞您的过滤膜。 4、如何避免沉淀物的生产? 我们建议您在使用血清的时候,注意下列的操作: ⑴ 解冻血清时,请按照所建议的逐步解冻法(-20℃至4℃至室温),若血清解冻时改变的温度太大(如-20℃至37℃),实验显示非常容易产生沉淀物。 ⑵ 解冻血清时,请随时将之摇晃均匀,使温度及成分均一,减少沉淀的发生。 ⑶ 请勿将血清置于37℃太久。若在37℃放置太久,血清会变得混浊,同时血清中许多较不稳定的成分也会因此受到损害,而影响血清的质量。 ⑷ 血清的热灭活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以无须做此步骤。 ⑸ 若必须做血清的热灭活,请遵守56℃,30分钟的原则,并且随时摇晃均匀。温度过高、时间过久或摇晃不均匀,都会造成沉淀物的增多。 5、为什么要热灭活血清? 加热可以灭活补体系统。激活的补体参与溶解细胞事件,刺激平滑肌收缩,细胞和血小板释放组胺,激活淋巴细胞和巨噬细胞。在免疫学研究,培养ES细胞,昆虫细胞和平滑肌细胞时,推荐使用热灭活血清。 6、有必要做热灭活吗? 实验显示,经

使用血清的几点建议

使用血清的几点建议

作者:德尔塔 日期:2022-04-02

1、血清必须贮存-20℃,如存放于4℃,请勿超过两周,对于某些单位一次无法用完一瓶,可在无菌条件下将其40-45ml分装于无菌50ml离心管中,由于血清解冻时体积会增加10%,必须预留此膨胀体积的空间,否则易发生污染或容器冻裂的情形。 2、一般公司所提供的血清一般为200ml和500ml装量,因此建议在使用中宜采取逐步解冻的方法解冻血清:-20℃→4℃冰箱或冷库溶解24小时→室温下全溶后再分装,一般以50 ml无菌离心管中分装40-45ml。使用过程中要特别注意,必须规则地将血清摇晃均匀,小心勿造成气泡,使温度与成分均一,减少沉淀的发生。勿直接由-20℃放置至37℃环境下解冻,因为温度改变太大,容易造成蛋白质凝结而产生沉淀。 3、血清的灭活一般是指56℃,30分钟水浴加热已完全解冻的血清,加热过程中必须规则地摇晃均匀。此处理的目的是使血清中的补体成分去活化。但是,经过灭活处理的血清会因而造成沉淀的显著增多,且会影响血清的品质。所以,有的公司所生的细胞培养用牛血清不做灭活处理,由客户自行选择。而诊断试剂用血清在除菌过滤前进行过灭活处理。 4、在使用血清的时候,勿将血清留置于37℃太久,血清会变得混浊,同时血清中许多较不稳定的成分会因而受到破坏,影响血清的品质。 5、一般我们在使用过程中是先过滤培养基,再加血清,勿直接过滤血清。 6、血清的沉淀物: (1)凝絮物:其产生的原因有多种,但普遍的原因是血清中的脂蛋白变形及解冻后血清中存在的纤维蛋白造成,这些凝絮沉淀物不会影响血清本身的品质。除非必须,如果您想减少这些沉淀物,建议可用离心3000rpm,5min去除,或离心后取上清液加入培养基中一起除菌过滤。 (2)显微镜下观察“小黑点”,通常经过热处理的血清,沉淀物的形成会显著增多。有些沉淀物在显微镜下观察像是“小黑点”,常会误认为是血清遭受污染,而将血清放置在37℃中欲培养此“微生物”,但37℃环境下,又会使此沉淀物增多,更会误认为微生物的增殖,但以培养细菌的培养基检测,又没有污

血清的质量如何鉴定

血清的质量如何鉴定

作者:德尔塔 日期:2022-04-02

血清是我公司主营产品之一,质量保证,价格优惠。血清质量高低取决于两方面因素:一是取材对象,二是取材过程。用于取材的动物应健康无病并且在的出生天数之内,取材过程应严格按照操作规程执行,制备出的血清要经过严格的质量鉴定。 1、 如何储存和解冻血清才不会使产品质量受损?     将血清从冷冻箱取出后,先置于2~8℃冰箱使之融解,然后在室温下使之全融。但必须注意的是,融解过程中必须规则地摇晃均匀。     长时间储存在2-8℃时,血清中的各种蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纤维蛋白原、玻粘连蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可见的混浊。因此,推荐在-20℃以下储存血清,并避免反复冻融。     我们建议血清应保存在-2O℃。若存放于4℃时,请勿超过一个月。若一次无法用完一瓶,建议无菌分装血清至恰当的灭菌容器内,再放回冷冻。 2、血清中包含絮状沉淀,它们是什么,怎么处理?     沉淀包含纤维蛋白和脂蛋白。这是正常特性,不会影响产品性质。要除去沉淀,离心血清(400g,1-2分钟)或者简单的让其沉淀在瓶子底部,将血清小心的转移到另一个无菌瓶里(一般不建议采用过滤的方法除去沉淀,因为沉淀会堵塞滤膜而无法过滤)。大多情况轻轻摇动沉淀并加热至37℃就会再溶解。所以,使用产品时要摇动并加热血清至37℃,沉淀会自然消失。 3、 如何避免血清中产生沉淀? 按如下操作可避免沉淀的产生: (1)解冻血清时,请随时将之摇晃均匀,使温度及成分均一,减少沉淀的发生。 (2) 血清分装冻存时,须规则摇晃均匀(小心勿造成气泡),使温度与成分均一。 (3) 勿直接由-20℃直接至37℃解冻,因温度改变太大,容易造成蛋白质凝结而发生沉淀。 (4) 勿将血清置于37℃太久,否则血清会变得浑浊,同时血清中许多较不稳定的成份也会因此受到破坏,从而影响血清的品质。 (5) 血清的热灭活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以无须做此步骤。 (6) 若必须做血清的热灭活,请遵守56℃,30分钟的原则,并且随时摇晃均匀。温度过高

血清细胞含量的影响

血清细胞含量的影响

作者:德尔塔 日期:2022-04-02

研究龙寿丹对急性脑梗塞(ACI)患者血清肿瘤坏死因子(TNF)及循环内皮细胞(CEC)含量的影响,进一步探讨龙寿丹**脑梗塞有效的作用机制,为龙寿丹**脑梗塞的临床应用提供理论依据。方法:采用放射免疫分析法检测40例ACI患者服用龙寿丹前后血清TNF-α和CEC的含量,并与20例未服用龙寿丹的ACI患者及20名健康人作对照。结果:(1)ACI患者血清TNF-α和CEC含量明显高于健康组,且增高的程度与梗塞灶大小密切相关,梗塞灶越大,其含量越高。(2)ACI患者血清TNF-α与CEC呈正相关(r=0.68,P<0.01)。(3)4周后两组ACI患者血清TNF-α及CEC含量均降低,但**组降低更明显,与对照组比较具有显著性差异(P<0.01)。    结论:龙寿丹降低了ACI患者血清中增高的TNF-α及CEC,减轻了脑血管内皮细胞的损害,对脑血管内皮细胞及缺血神经元具有保护作用。

上海恒远教您如何分离血液中的白细胞!

上海恒远教您如何分离血液中的白细胞!

作者:德尔塔 日期:2022-04-02

人体中含有大量的细胞组织,其中白细胞的检测有我们息息相关,那么白细胞怎么分离呢,上海恒远特地为大家编辑整理了白细胞怎么分离的相关知识,不知道大家感不感兴趣呢?    血液中红细胞与白细胞比例约600~1000:1,两者的比重不同其沉降速度亦异。本法是利用血细胞自然沉降率的分离法,采集血液后应及时抗凝,通常选用肝素抗凝法。肝素能阻止凝血酶原转化为凝血酶,从而抑制纤维蛋白原形成纤维蛋白而防止血液凝固。    操作原则是将含抗凝血的试管直立静置室温30~60min后,血液分成明显三层,上层为淡黄色血浆,底层为红细胞,紧贴红细胞层上面的灰白层为白细胞,轻轻吸取即得富含白细胞的细胞群,离心洗涤后加入少量蒸馏水或含氯化铵的Gey溶液,经短时间的低渗处理,使红细胞裂解,经过反复洗涤可得纯度较高的白细胞悬液。    上海恒远为广大客户提供高质量的免疫学和生命科学相关产品。专业的酶免专家,提供免费代测,数据分析,技术服务。产品远销全国各地。多年以来我们以极其苛刻的要求控制产品的质量,坚持生物科学研究与世界同步的理念。因此也得到了全国各大医院院校、*医院、研究所,科研机构等单位的一致认可,并发表了多篇文献。咨询订购!

微生物菌种药物新突破

微生物菌种药物新突破

作者:德尔塔 日期:2022-04-02

微生物菌种发现了*种抗生素青霉素以来,科学家们已经发现了100多种抗生素,但自1987年起就没有新抗生素问世,缺乏新药和过度用药使细菌的耐药性与日俱增。2014年,世界卫生组织宣布,后抗生素时代(人们可能死于普通感染和小伤)可能于本世纪开始。2015年,美国西北大学在缅因州的土壤内发现了这种名为Teixobactin的抗生素,通过小鼠实验证明,Teixobactin对致命的MRSA细菌等具有非常强的对抗作用,而且可以**肺结核、败血病等多种常见的感染。更重要的是,与其他主要攻击细菌蛋白质的多数抗生素不同,它主要通过破坏细菌的细胞壁来消灭细菌,病原体很难对其发展出抗药性。因此Teixobactin被称为“游戏规则颠覆者”新型抗生素,同期被发现的有潜力的抗生素还有25种,不过Teixobactin的功效zui强。一直以来,李学臣研究组一直致力研发新型抗生素。2013年,他们利用化学方法全合成了达托霉素,并以此为基础,开展了新一代达托霉素类抗菌药物的研发工作。zui近,李学臣团队再次用化学合成的方法,成功合成了热门抗菌化合物Teixobactin。由于Teixobactin不会诱发细菌耐药性的产生。微生物菌种化学合成是*可以通过简单的原料灵活修饰化学结构并得到大量teixobactin衍生物的方法。因此,Teixobactin的化学合成引起了世界各地多个研究团队的密切关注和激烈竞争。产品名称:    Anti-CD45RO    规格:    0.1ml    CD45RO抗体 产品名称:    Anti-CD46/MCP/membrane cofactor protein    规格:    0.1ml    膜辅蛋白/内源性辅助因子活性蛋白抗体产品名称:    Anti-CD46/MCP/membrane cofactor protein     规格:    0.1ml    膜辅蛋白/内源性辅助因子活性蛋白抗体(人)产品名称:    Anti-CD49/VLA    规格:    0.1ml    CD49(非常晚期抗原)抗体产品名称:    Anti-CD49/VLA      规格:     0.1ml    CD49抗体产品名称:    Anti-CD5      规格:     0.1ml    CD5抗体产品名称:    Anti-CD50/ICAM-3    规格:    0.1ml    细胞间粘

实验秘籍:如何制备颗粒性抗原?

实验秘籍:如何制备颗粒性抗原?

作者:德尔塔 日期:2022-04-02

颗粒性抗原主要是指细胞抗原或细菌抗原。今天上海沪鼎对这两种抗原的制备方法进行了整理,下面分享给大家!绵羊红细胞的制备        zui常用的细胞抗原为制备溶血素用的绵羊红细胞。这种抗原制备比较简单,采集新鲜绵羊红细胞,以无菌盐水洗涤3次(每次离心2000r/min10min),zui后配成106/ml浓度的细胞悬液,即可应用。细菌抗原多用液体或固体培养物经集菌后处理。H抗原用有动力的菌株,菌液用0.3%~0.5%甲醛处理,而O抗原则需要100℃加温2~2.5h后应用。Vi抗原则应在杀菌后再加0.5%~1%氯化钙溶液。有时虫卵也可做成抗原,如日本血吸虫卵抗原可制成悬液供免疫用。有些细胞膜成分,如组织细胞膜、血细胞膜经打碎后亦可制成颗粒抗原。颗粒抗原悬液呈乳浊状,多采用静脉内免疫法,较少使用佐剂作皮内注射。菌体抗原的制备        O菌液的制备:选用经鉴定合格抗原性完整的标准菌株,接种于琼脂斜面培养基,置温箱37℃培养24h增菌;用适量生理盐水洗刮下菌苔,移入含有无菌玻璃珠的三角瓶中,充分摇动混匀菌体;100℃水浴2~2.5h杀菌并破坏H抗原。将处理过的菌液检测有无活菌存在,合格后用生理盐水稀释成每毫升8亿~10亿菌,加入石炭酸至终浓度为5%,即为O(菌体)抗原。        H菌液的制备:将合格的伤寒杆菌H菌株接种于普通琼脂的克氏瓶或大试管内37℃孵育18—24h。肉眼观察有无杂菌生长,必要时作镜检。用无菌甲醛生理盐水洗下菌苔,将洗下液体装入无菌试管内,置37℃恒温箱18—24h以杀菌。得到原液。用作无菌试验即将菌液接种于肉汤及琼脂培养基培养4天,无活菌生长者才可使用。      上海沪鼎经过数年的努力,已迅速成为集科研和生产为一体的专业化生物企业,产品国内大部分地区,拥有雄厚的实力、合理的价格和优良的服务,能够及时解决和满足客户的各方面的需求。公司国庆中秋双节活动正在进行中,需要选购试剂的朋友们咨询哦!

上海圻明祝贺北京博奥森被评为纳税信用等级3连A企业

上海圻明祝贺北京博奥森被评为纳税信用等级3连A企业

作者:德尔塔 日期:2022-04-02

上海圻明祝贺北京博奥森被评为纳税信用等级3连A企业。德尔塔生物与博奥森携手奋进、合作共赢。我司代理销售博奥森全线抗体产品,价格美丽,保证。 2017年7月24日13:30,北京石景山区*、*、*在石景山万商花园酒店7层多功能厅,举办石景山区纳税信用评价3连A企业颁证仪式暨税银企金融服务平台政策辅导支持会。会议表彰了2014至2016年度纳税信用等级评价中获得3连A的北京博奥森生物技术有限公司等30多家企业。               北京博奥森生物技术有限公司总邬江表示:北京博奥森生物技术有限公司将会一如既往的继续坚持守法经营、依法纳税,坚持做抗体供应商,创民族品牌化,为生命保驾护航!

只需五步,选出您实验合适的ELISA试剂盒!

只需五步,选出您实验合适的ELISA试剂盒!

作者:德尔塔 日期:2022-04-02

ELISA试剂盒在实验室已经相当普及,绝大多数ELISA试剂盒都是用于检测未知样本中抗原的浓度。用ELISA试剂盒当然比自己慢慢摸条件快得多,ELISA试剂盒不仅可以让实验更便利,往往还更加。现在市面上的ELISA试剂盒既有国产也有进口,数量繁多令人目不暇接,怎样才能选出zui适用的产品呢?这个首先得根据我们所要检测的分子进行考虑啊。选ELISA试剂盒只需五步:   *步、明确检测何种蛋白。   第二步、明确编码该蛋白的基因与其它哪些物种同源性。   第三步、寻找检测这些物种蛋白的试剂盒。   第四步、咨询商家ELISA是试剂盒使用的抗体类型:多抗还是单抗? 单抗是针对什么抗原决定簇的。   第五步、做出自己的判断该买哪个试剂盒。    如果您于我公司(上海恒远)购买Elisa试剂盒产品后有任何疑问,都可以打给我公司业务员,我们会为您安排解决。如果您对我们的ELISA试剂盒感兴趣的话,您可通过在线咨询、咨询、留言、的方式与我们取得,我们将竭诚为您服务,祝您工作愉快!

无血清培养基

无血清培养基

作者:德尔塔 日期:2022-04-02

1979年神经细胞培养出现了一个重要进展,用化学添加剂即可维持神经细胞存活与生长而不需要在培养基中添加血清。其工作基础是用合适的激素、营养物和促贴壁的物质的组合置换培养基中的成分,zui后找到了适合大多数细胞培养的试剂配方,该配方称为N2,专门用于神经细胞培养,zui早是用在B104大鼠神经母细胞瘤细胞系的培养。它的基础培养基是1:1的DMEM与H12的混合液,添加了胰岛素、转铁蛋白、黄ti酮、腐胺和硒。胰岛素和胰岛素样生长因子对于大多数类型细胞的存活和生长有重要作用,硒是谷胱甘肽产生的合作因子,可能有助于过氧化物和超氧化物的水解,有报道说还能防止细胞的光照损伤。随后的其他配方如N1N3则含有较低浓度的转铁蛋白。    血清中含有的组分,例如血清蛋白,可作为代谢毒物清除剂使用并能聚集于培养基中。当缺乏这些成分时,如神经元在无血清培养基中生长时,特别容易为过氧化物及自由基伤害,这已被许多研究者注意到了。过氧化物酶以及超氧化物歧化酶可阻止培养基中过氧化物和超氧化物的累积,有报道讲可以促进低密度培养细胞的存活。有学者发现细胞存活可为氧分压的下降而促进。因而,无血清培养基的配方常含有抗氧化剂的试剂。例如,维生素E和丙酮酸,可作为过氧化物清除剂使用。上述这些影响在高密度培养时变小,特别是神经元与胶质共培养时,它们可以吸收和代谢神经元毒性物质如谷氨酸。    应该注意,尽管无血清培养基是有化学限定性的,但在培养过程中它仍有变动,培养起始时可能有些物质缺乏,而后细胞的产物可能积累,从而使培养基的成分改变。这其实是有另一方面的好处,即条件培养基(已培养过细胞的培养基)的形成,条件培养基常常用来增加神经元和胶质细胞的发育。

elisa试剂盒样本处理的具体方法

elisa试剂盒样本处理的具体方法

作者:德尔塔 日期:2022-04-02

elisa试剂盒样本处理的具体方法1. 血清:室温血液自然凝固10-20分钟,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。2. 血浆:应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。3. 尿液:用无菌管收集,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。4. 细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。5. 组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。6. 标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融.7. 不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

有哪些常见的血清问题

有哪些常见的血清问题

作者:德尔塔 日期:2022-04-02

血清在运输和保存的过程中,会出现很多问题,面对这些常见问题,今天我们为您分享解决方法: 1、血清的成份可能有几百种之多,目前对其准确的成份、含量及其作用机制仍不清楚,尤其是对其中一些多肽类生长因子、激素和脂类等尚未充分认识,这给研究工作带来许多困难。    2、血清都是批量生产,各批量之间差异很大,而且血清保存期至多一年,因此,要保证每批血清的相似性极为困难,从而使实验的标准化和连续性受到限制。    3、对大多数细胞,在体内状态,血清不是它们接触的生理学液体,只是在损伤愈合以及血液凝固过程中才接触血清,因此使用血清有可能改变某种细胞在体内的正常状态,血清可能促进某些细胞的生长(成纤维细胞)同时抑制另一类细胞生长(表皮细胞)。    4、血清含一些对细胞产生毒性的物质,如多胺氧化酶,能与来自高度繁殖细胞的多胺反应(如精胺、亚精胺)形成有细胞毒性作用的聚精胺。补体、抗体、细菌毒素等都会影响细胞生长,甚至造成细胞死亡。    5、动物个体不同,血清产地、批号不同,每批质量差异甚大,其成分不能保持一致。  6、取材中可能带入支原体、病毒,对细胞产生潜在影响,可能导致实验失败或实验结果不可靠性。    7、大规模生产中,血清来源越来越困难,价格昂贵,是构成动物细胞培养对生产成本的主要部分之一。

德尔塔生物教您elisa试剂盒代测样本抗凝管选择

德尔塔生物教您elisa试剂盒代测样本抗凝管选择

作者:德尔塔 日期:2022-04-02

德尔塔生物教您elisa试剂盒代测样本抗凝管选择1.枸橼酸钠凝血试验管:浅蓝色头盖,枸橼酸钠主要通过与血液标本中Ca2+螯合而起抗凝作用。适用于凝血试验,国家临床实验室标准化委员会(national committee for clinical laboratory standards,NCCLS)推荐的抗凝剂浓度是3.2%或3.8%(相当于0.109mol/L或0.129mol/L),抗凝剂:血液=1:9。(普通血清管)-红色头盖,采血管中不含添加剂,用于常规血清生化,血库和血清学相关检验。2.枸橼酸钠血沉试验管:黑色头盖,血沉试验要求的枸橼酸钠浓度是3.2%(相当于0.109mol/L),抗凝剂:血液=1:4。(快速血清管)-橘红色头盖,采血管内有促凝剂,可激活纤维蛋白酶,使可溶性纤维蛋白变为不可溶的纤维蛋白多聚体,进而形成稳定的纤维蛋白凝块。快速血清管可在5min内使采集的血液凝固,适用于急诊血清系列化试验。3.EDTA抗凝管:紫色头盖,乙二胺四乙酸(EDTA,Mr:292)及其盐是一种氨基多羧基酸,可以有效地螯合血液中的Ca2+,螯合钙或将钙反应位点移去将阻滞和终止内源性或外源性凝血过程,从而防止血液标本凝固。适用于一般血液学检验,不适用于凝血试验、血小板功能检查、Ca2+、K+、Na+、Fe3+、碱性磷酸酶、肌酸激酶、亮氨酸氨基肽酶的测定及PCR试验。(惰性分离胶促凝管)-金黄头盖,采血管内添加有惰性分离胶和促凝剂。标本离心后,惰性分离胶能够将血液中的液体成分(血清或血浆)和固体成分(红细胞,白细胞,血小板,纤维蛋白等)彻底分开并完全积聚在试管*而形成屏障,标本在48小时内保持稳定。促凝剂可快速激活凝血机制,加速凝血过程,适用于急诊血清生化试验。4.(肝素抗凝管)-绿色头盖,采血管内添加有肝素。肝素直接具有抗凝血酶的作用,可延长标本凝血时间。适用于红细胞脆性试验,血气分析,红细胞压积试验,血沉及普能生化测定,不适于做血凝试验。过量的肝素会引起白细胞的聚集,不能用于白细胞计数。因其可使血片染色后背景呈淡蓝色,故也不适于白细胞分类。5.(血浆分离管)-

制成免疫荧光容易出现的问题和注意事项

制成免疫荧光容易出现的问题和注意事项

作者:德尔塔 日期:2022-04-02

在制作原代细胞免疫荧光时,容易出现一些问题,造成荧光鉴定失败,将抗原或抗体标记上荧光素,制成荧光抗体检测组织或细胞内的相应抗原(或抗体)时,一定要注意抗体的比例高低和浓度。 制作免疫荧光常用的方法有: 方法一:直接法 步骤:将荧光标记的特异性抗体(抗原)直接加在抗原(抗体)上,经一定的温度和时间染色,水洗—干燥—封片—镜检 优点:操作简便、特异性高、非特异性染色少 缺点:敏感性低 方法二:间接法 步骤:先用已知未标记的特异性抗体(一抗)与抗原反应,再用标记的抗体(二抗)与其反应,形成抗原—抗体—抗体复合物,水洗—干燥—封片—镜检 优点:敏感性强,目前多采用间接法 缺点:操作复杂 实验过程中常见的问题: 1,整个细胞片都出现荧光高点 原因有二:一是二抗浓度过高,适当降低二抗浓度即可。二是二抗发生沉淀,可以使用过滤或者离心荧光标记二抗 2,信号弱或无信号,染色细胞过少 目标蛋白在细胞中没有表达,需要制备细胞裂解液,用Western   Blotting验证目标蛋白在细胞中是否表达。 表达目标蛋白的细胞过少,标本中使用更多的细胞,试用其他瞬时转染方法,或者使用稳定转染细胞系。 细胞通透性差,需要增加通透剂作用的时间或者浓度,或改用其它的通透剂 染色前的固定步骤破坏了抗原表位,改用其他固定方法。 通透使抗原丢失,可以减少通透剂作用的时间或强度。 抗体不识别,需要换用其他抗体 一抗稀释度过大,使用同一样品按*的二抗用量作一抗稀释曲线,以确定*的一抗稀释比例。 二抗选择错误,要使用正确的二抗 3,镜下观察只有DAPI的蓝光,目的荧光几乎没有或者很弱 出现这种现象很有可能是抗体比例太低,需提高抗体浓度,可配合提高二抗浓度;共聚焦的激发荧光强度不够大;二抗孵育时是否是对应的种属,比如本来需要山羊抗鼠结果加为山羊抗兔。 4,细胞核周围总是存在有一些蓝色的小点点 这种情况一般是支原体污染所致,建议用杀支原体药2周后再检测,或者通

养细胞需要注意的细节

养细胞需要注意的细节

作者:德尔塔 日期:2022-04-02

养细胞可谓是个精细活,从事养细胞的人都知道养细胞的时候一旦不注意,就很容易造成细胞污染,所以想要养好细胞除了小心谨慎以外,还要提前做好准备: 细胞培养前的准备 1)在带上手套开始细胞培养之前,先检查一下移液管和瓶子的数量是否充足,以免在开始实验后再次出入操作台,这样可以降低细胞污染的风险。 2)细胞培养基也应先预热,选择只预热部分培养基而非整瓶加热,不但可以节约实验时间,而且可以避免因反复加热培养基而造成的蛋白质降解。 3)结束操作后,别忘了培养基对光敏感,应尽可能避光保存。 细胞培养的定期检查 1)定期检查培养细胞的形态,即形状和外观,对于细胞培养实验取得成功至关重要。 2)除确认细胞的健康状态外,每次操作细胞时通过肉眼和显微镜检查细胞还可早期发现污染征象,避免污染扩散至实验室其他细胞。        细胞变质的征象 1)细胞变质的征象包括核周出现颗粒、细胞与基质解离以及细胞质空泡形成。        2)这些变质征象可能为多种原因所致,例如:培养物污染、细胞系衰老或培养基中存在毒性物质,或者这些征象仅表明培养物需要更换培养基。        3)变质严重时将会成为不可逆的变化。        细胞培养通风橱的消毒及布局        1)保持细胞培养通风橱内的整洁有序,将所有物品置于直视范围内。        2)向放入通风橱内的所有物品喷洒70%乙醇,擦拭清洁进行消毒。        3)在通风橱中部开阔处放置细胞培养容器;移液器置于右前方易于取用;试剂和培养基置于右后方便于吸取;试管架置于中后部;小型容器置于左后部用于盛放废液。        培养瓶/皿等物品的无菌操作        1)无菌培养瓶、试剂瓶、培养皿等物品使用时方可揭开盖子,不得将其开放暴露于环境中,操作完成后尽快盖上盖子,取下盖子时应将盖子开口朝下放在工作台面上。        2)进行无菌操作时不要说话、唱歌或吹口哨。尽快完成实验,以尽量避免污染。        细胞培养中可能的污染物        1)细胞培养污染物