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挑选发酵床菌种的方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
费氏弧菌发光杆菌发酵床菌种中的有益微生物是发酵床的核心所在，也是影响发酵床工作效率的重要因素。因此，如何挑选发酵床菌种是大多养殖户都会去思考的问题。为了保证发酵床功能的多样化，应选择多种菌类复合而成的发酵床菌种。发酵床是一个复杂的生态系统，并不是某一种菌就可以带动发酵床正常工作的。发酵床中温度、湿度、通气性甚至酸碱度都需要有不同的有益菌进行调节，发酵床如果不能对这些因素进行控制，会使有益菌因生长环境恶劣而大量死亡，造成死床现象。使整个发酵床报废，起不到任何作用，浪费了养殖户极大的时间与财力，造成严重损失。选择操作简单的发酵床菌种制作发酵床。一来可以避免繁琐的制作过程，节省时间，二来减少在制作过程中因操作失误造成的发酵床制作失败，降低出现损失的概率。注意有效活菌数，发酵床费氏弧菌发光杆菌菌种的好坏并不是依靠有益菌数量的多少进行判断，而是根据有效活菌数来决定。发酵床是通过有益菌的活动繁殖才能对养殖动物有所帮助，没有用的菌以及已经死亡的菌对发酵床没有任何帮助，很多不法商家就利用这一点，偷换概念，使制作出来的发酵床养殖效果很差。使用发酵床进行养殖的目的在于降低养殖成本，提高经济效益。所以在挑选发酵床菌种的时候也要注意使用这款发酵床菌种的成本。值得注意的是，这里所指的成本不光指发酵床菌种的价格，也要考虑使用这款菌种制作发酵床每平米的均价，发酵床菌种的有效活菌数，垫料成本、日常维护难易程度、对养殖动物的帮助，甚至失败的几率都需要考虑在内，通过多方面的考虑才可以选择出一款真正适合您的费氏弧菌发光杆菌菌种。
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实验时如何控制抗原elisa试剂盒的质量
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
抗原elisa试剂盒质量控制主要采用质控图来进行有效的监督。质控图是什么呢？质控图就是把某一检验的性能数据与计算出预期来进行比较的一个图纸。这种性能数据是在按规程正常进行时，按照时间顺序而抽选出来的，这样做的目的是为了能检测在检验过程中变异的原因在检验同一个样本达20次以上时，就会发现这组数据（测定结果的吸光值）分布在均值两侧，大部分都集中在均值附近。抗原elisa试剂盒如果以测定值为横坐标，以出现的频率为纵坐标作图，就可绘出一个呈钟形的曲线图。钟顶处为均值，其他值以均值为中心对称分布，这就是正态分布。正态曲线以下的面积称概率，常用样本的均数（X）和标准差（SD）来表示，其计算方法如下：均值、标准差和概率的关系如下：X±1SD，概率0.68X±2SD，概率0.95X±3SD，概率0.99。换言之，当抗原elisa试剂盒检测同一样本达一定次数后所得的一组数据，其中靠近均值（X）的±1SD范围内的数据，占该组数据的68%，在X±2SD范围内分布的数据占总体的95%，在X±3SD范围内分布的数据占总体的99%。抗原elisa试剂盒当我们要求检验结果在X±2SD范围内为合格时，将有95%的数据可能合格。准确度是指测定结果与真值（或靶值）接近的程度。准确度不能以数字表示，往往用不准确度来衡量。测定结果与靶值的偏离程度称为偏差，它表示该项检验的不准确度。我们会在实验室中选操作经验丰富的技术人员行专业的测定，在检测之前，我们都会将恒箱、加样器等认真校正、调校正、调试，使用新的加样吸头等，尽量在*、的条件下进行检测这样得出结果才准确。除质控血清外同时测定阴性对照品和阳性对照品。并作双份测定，得出2个吸光值（A值），求出X。连续作20次，求出20个X，即X1……X20。抗原elisa试剂盒从这20个数据中，求出OCV的X和SD。依靠记录往往是不容易发现的，但放在质控图上是可以明的看出失控。
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鸭源性核酸PCR-荧光探针试剂盒操作要点解析
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
鸭源性核酸PCR-荧光探针试剂盒操作步骤包括样本的采集和保存、试剂和样本的平衡、加样、温育、洗涤、显色、比色、结果判定和结果报告。环节众多，任一环节操作不当，皆可影响测定结果。因此，必须重视各环节操作，掌握控制要点，方能保证检测结果准确可靠。 1 样本的采集和保存 作为激素和**药物测定的样本应考虑采集时间及体位等因素影响,可的松和促甲状腺激素清晨会有一峰值出现；生长激素、促黄体激素、促卵泡激素均以阵发性方式排放；从卧位变为站位时，肾素活性将明显增高；药物浓度监测应根据药代动力学选择合适时间采集样本。 内源性干扰因素对检测结果的影响，如类风湿因子、补体、异嗜性抗体、自身抗体、鼠抗体诊疗所致抗鼠Ig抗体、溶菌酶等。可以通过稀释、加热、改变固相和酶标抗体、使用鸡抗体IgY以及理化方法去除干扰因子。 外源性干扰因素对检测结果的影响，溶血、脂血、细菌污染、血液标本收缩不充分、存贮过久、反复融冻等。 尽量使用玻璃试管抽血，慎用塑料试管盛血，因聚乙烯易吸附抗原和抗体，影响检测结果。 2日内测定血液样本，，置2℃—8℃冰箱保存；2日至7日内测定，置2℃—8℃冰箱保存；7日以上测定，置-20℃以下冰箱保存。 2 试剂和样本的平衡 试剂和样本在测定前应先放置室温（20℃—25℃）平衡20分钟以上，以保证后续操作步骤中抗原抗体足够反应温度。 3 加样本及试剂 鸭源性核酸PCR-荧光探针试剂盒应正确使用移液器和试剂滴瓶。移液器应定期校准和维护，加样本时，应加在微孔下1/3处，不可擦划底部、冲起泡、加到微孔上缘或溅出。滴加试剂（包括抗原、酶结合物及显色剂）时，应摇匀试剂，先弃去瓶口1—2滴，然后垂直、均匀加入微孔。 4 温育 温育是ELISA操作中的关键步骤。国产试剂通常采用37℃30分钟和37℃60分钟两种方式。为保证温度均一，抗原抗体反应充分，宜采用水浴方式加热。如用孵箱，可内置一方盘，底衬纱布，加入适量水，微孔板放入其中温育。 5 洗涤 ELISA为异相固态方式检
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细胞常见的转染方法分析
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
ATCC细胞常见的转染方法有：1. 磷酸钙法：该方法利用磷酸钙DNA 复合物吸附细胞膜被细胞内吞原理得到瞬时或稳定转染结果，操作简便但重复性差，不可用于原代细胞的转染。2. DEAE-右旋糖苷法：带正电的DEAE-右旋糖苷与核酸带负电的磷酸骨架相互作用形成的复合物被细胞内吞，可用于瞬时转染，方法相对简便、结果可重复但对细胞有一定的毒副作用。3. 电穿孔法：利用高脉冲电压破坏细胞膜电位，DNA通过膜上形成的小孔导入。稳定转染，瞬时转染均适用。适用性广但细胞致死率高，DNA 和细胞用量大， 需根据不同细胞类型优化电穿孔实验条件。4. 病毒介导法：通过侵染宿主ATCC细胞将外源基因整合到染色体中。适用于稳定转染，可用于难转染的细胞、原代细胞，体内细胞等。5. 阳离子脂质体法：带正电的脂质体与核酸带负电的磷酸基团形成复合物被细胞内吞从而形成稳定转染或瞬时性转。该方法适用性广，转染效率高，重复性好，但转染时需除血清。转染效果随细胞类型变化大。6. 显微注射法：用显微操作将DNA 直接注入靶细胞核，适用于稳定转染和瞬时转染，转染细胞数有限，多用于工程改造或转基因动物的胚胎细胞。除上述传统方法外，近年来上推出了一些阳离子聚合物基因转染技术，以其适用宿主范围广，操作简便对细胞毒性小，转染效率高受到研究者们的青睐。其中树枝状聚合物（Dendrimers）和聚乙烯亚胺（Polyethylenimine，PEI）的转染性能*，但树枝状聚合物的结构不易于进一步改性，且其合成工艺复杂。聚乙烯亚胺是一种具有较高的阳离子电荷密度的有机大分子，每相隔二个碳个原子，即每“第三个原子都是质子化的氨基氮原子，使得聚合物网络在任何pH 下都能充当有效的“质子海绵”(proton sponge)体。这种聚阳离子能将各种报告基因转入各种种属细胞，其效果好于脂质聚酰胺，经进一步的改性后，其转染性能好于树枝状聚合物，而且它的ATCC细胞毒性低。大量实验证明，PEI 是非常有希望的基因**载体。
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Avi标签抗体-推荐Abbkine品牌的Avi标签抗体
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
Avi-Tag标签蛋白是一个15 个氨基酸的短肽（GLNDIFEAQKIEWHE），具有一个单生物素化赖氨酸位点，与已知天然可生物素化序列完全不同，可以加在目标蛋白的N端和C端。融合表达后，可被生物素连接酶生物素化，为了纯化重组蛋白选用低亲和性的单体抗生物素蛋白或抗生物素蛋白衍生物，除了用于蛋白质分离纯化，还用于蛋白质相互作用研究。 Avi Tag标签系统具有以下几大优点: 1.无论在体外或者体内，几乎所有的蛋白都可以在一个独特的Avi Tag位点轻易且有效地被生物素化； 2.生物素化是通过酶和底物的反应来实现，反应条件相当温和而且标记的专一性极高； 3.生物素AviTag只有15个氨基酸，对蛋白空间结构的影响非常小。 如何选择合适的Avi标签抗体？ 我们在选择Avi标签抗体时，主要根据自己的需要，特别是实验应用上的需要。另外，一个抗体检测后的应用类型越多，在使用过程中的选择余地就越大；而小鼠源的单克隆抗体一般在特异性、稳定性以及效价都要优于多克隆抗体。 另外，抗体的效价也是考察该抗体性价比的重要方面，也即相当于实际应用时的稀释比率。一个效价高的100μl Avi抗体（假如其WB检测的稀释比率是1:5000，zui终使用液相当于500ml），要比效价低的1ml的Avi抗体（假如WB检测的稀释比率是 1:200，zui终使用液相当于200ml）性价比更高。 产品名称及描述 货号 产品说明 Anti-Avi-Tag Monoclonal Antibody（5G11） A02210 详情 为什么推荐Abbkine品牌的Avi标签抗体 （克隆号5G11）？ 目前市面上能提供的Avi标签抗体有国产分装或原产的，国产分装的Avi标签抗体在质量稳定性上有不足，并且经过分装以后，其效价也有损失。而原产于国内实验室的Avi标签抗体有些具有较好的检测活性，在批次之间的稳定性上较难控制，而国内仅有的少量原产抗体也是多克隆抗体。至于*供应Avi标签抗体的进口品牌并不多，就连Abcam、Thermo，Sigma等等几个品牌都不能够提供Avi标签抗体，而其它品牌在性价比上远逊于Abbkine产品。
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ELISA试剂盒技术人员的心得体会
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
ELISA试剂盒技术人员的心得体会：1）用固定的几把移液器，这样可以尽可能的较少误差！2）用任何试剂前都要把试剂混匀，这是因为蛋白是很容易沉淀的，这一点需要您特别注意。3）湿盒孵育前要先把湿盒放在37℃进行温度平衡，这样可以减少达到平衡的时间，也可以避免符合试验温度的孵育时间不够。4）等板底的水珠挥发以后再读数，要不会出现负值的。
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上海沪鼎为您解答：血清使用中一些常见的问题
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
血清，指血液凝固后，在血浆中除去纤维蛋白原分离出的淡黄色透明液体或指纤维蛋白原已被除去的血浆.血清也是细胞培养中zui重要的元素之一。因此，上海沪鼎特别整理了一些血清使用中常见的问题，供大家参考： 1. 血清使用时一定需要灭活么？ 答：实验显示，经过正确处理的热灭活血清对大多数的细胞而言是不需要的。经此处理过的血清对细胞的生长只有微小的促进，或完全没有任何作用，甚至因为高温处理影响了血清的质量，而造成细胞生长速率的降低。而经过热处理的血清，沉淀物的形成会显著的增多，这些沉淀物在倒置显微镜下观察，像是“小黑点"，常常会让研究者误以为是血清遭受污染，而把血清放在37℃环境中，又会使此沉淀物更增多，使研究者误认为是微生物的分裂扩增。若非必须，可以不需要做热处理这一步。不但节省时间，更确保血清的质量。 2. 保存血清的方法是什么? 答：我们建议血清应保存在-5℃至-2O℃。若存放于4℃时，请勿超过一个月。若一次无法用完一瓶，建议无菌分装血清至恰当的灭菌容器内，再放回冷冻。 3. 如何解冻血清才不会使产品质量受损? 答：将血清从冷冻箱取出后，先置于2～8℃冰箱使之融解，然后在室温下使之全融。但必须注意的是，融解过程中必须规则地摇晃均匀。 4. 血清解冻后发现有絮状沉淀物出现，该如何处理? 答：血清中沉淀物的出现有许多种原因，但zui普遍的原因是由于血清中脂蛋白的变性所造成，而血纤维蛋白(形成凝血的蛋白之一)在血清解冻后，也会存在于血清中，亦是造成沉淀物的原因之一。但这些絮状沉淀物，并不影响血清本身的质量。若欲去除这些絮状沉淀物，可以将血清分装至无菌离心管内，以400g稍微离心,上清液即可接着加入培养基内一起过滤。不使用过滤的方法去除这些絮状沉淀物，因为它可能会阻塞过滤膜。 5. 如何避免血清中沉淀物的产生? (1)解冻血清时，请按照所建议的逐步解冻法(-20℃至4℃至室温)，若血清解冻时改变的温度太大(如-20℃至37℃)，非常容易产生沉淀物。 (2)解冻血清时，
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知道了这些,下一个大神就是您!
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
一．实验原理 ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。在测定时，受检标本（测定其中的抗体或抗原）与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。 二．实验材料与试剂配制 1.仪器与材料：酶标仪（使用前预热30分钟），微量加液器、吸头、蒸馏水或去离子水，滤纸。 2. 洗液的配制：按1:30的比例配制洗液备用。 三．样品收集、处理及保存 1）.细胞培养上清： 适用于检测体外培养的细胞分泌性成份。用无菌管收集细胞上清液，以1000×g离心15分钟，收集上清。 2）细胞： 用PBS反复洗涤细胞3次，调整细胞浓度达到104-106/ml 左右，通过反复冻融，使细胞破坏并放出细胞内成份，或者细胞超声粉碎，离心取上清液检测。 3）血清： 在室温下，血液自然凝固，以1000×g离心15分钟，取上清待测。 4）血浆： 应根据标本的要求选择EDTA 或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合后静置10-20 分钟后，以1000×g离心15分钟，收集上清。 5）体液： 包括胸腹水、脑脊液，分泌物等。使用不含热原和内毒素的离心管收集，以1000×g离心15分钟，收集上清。 6.）组织标本： 切取组织标本，称取重量0.5mg，加入500ul 的PBS，用手工或匀浆器，或超声破碎仪将标本匀浆，以2000-3000 rmp离心20 分钟，收集上清进行检测。 样品中不能含有NaN3，因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。 7）保存： 如果样品不能立即检测，应将其分装，-70 ℃保存，避免反复冷冻。保存过程中如出现沉淀，应再次离心。血液标本尽可能的不要使用
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细胞培养样品采集和存储
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
细胞培养原理： 此法采用定量夹心酶联免疫技术。特异性抗体对于C7已经被预先涂到微孔板。标准和样品吸入井和任何C7目前的固定抗体的约束。生物素共轭的抗体特异于C7除去任何未结合的物质后，加入到孔中。抗生物素蛋白共轭的辣根过氧化物酶（HRP）的洗涤后，加入到孔中。经过洗涤，以除去任何未结合的抗生物素蛋白的酶试剂，底物溶液加入到孔中，显色成比例的量的初始步骤中的约束的C7。彩色显影被停止并测量的颜色的强度。 样品采集和存储： 血清：使用血清分离管（SST）和全血标本在室温下两小时或4℃过夜℃，然后离心15分钟，在1000×g下。删除上清即可检测，或分装和店内样品在-20°C或-80°C。但应避免反复冻融循环。 等离子：采集血浆中EDTA或肝素作为抗凝血剂。在2-8°C在30分钟内收集离心15分钟，1000×G。即可检测，或分装保存样本在-20°C或-80°C。但应避免反复冻融循环。 细胞培养500 ml 肾系膜细胞培养基 MCM-prf 500 ml 尿道上皮细胞培养基 UCM-prf 500 ml 前列腺上皮细胞培养基 PEpiCM-prf 500 ml 成骨细胞培养基 ObM-prf 500 ml 滑膜细胞培养基 SM-prf 500 ml 髓核细胞培养基 NPCM-prf 500 ml 肝细胞培养基 HM-prf 500 ml 星形细胞培养基 SteCM-prf 500 ml 心肌细胞培养基 CMM-prf 500 ml 角膜上皮细胞培养基 CEpiCM-prf 500 ml 滋养层细胞培养基 TM-prf 500 ml 前脂肪细胞培养基 PAM-prf 500 ml 前脂肪细胞分化培养基 PADM-prf 500 ml 卵巢上皮细胞培养基 OEpiCM-prf 500 ml 间充质干细胞培养基 MSCM-prf 500 ml 间充质干细胞培养基 MSCM-sf-prf 间充质干细胞培养基 MSCM-acf-prf 500 ml 间充质干细胞成骨细胞分化培养基 MODM-prf 500 ml 间充质干细胞脂肪细胞分化培养基 MADM-prf 500 ml 间充质干细胞软骨细胞分化培养基 MCDM-prf 500 ml 乳腺上皮细胞培养基 MEpiCM-prf 5 ml
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新型**难辨梭状芽孢杆菌感染的抗生素
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
目前，**领域至少有100种抗生素，但是绝大部分都属于几个大类，如:喹诺酮类有环丙沙星、左氧氟沙星和氧氟沙星等;磺胺类有复方新诺明和甲氧苄啶等;发生耳部感染的儿童可能经常使用的青霉素类抗生素有阿莫西林等。 但我们必须注意到这样的情况，如果医生同时开具多种抗生素，或者对不需要使用抗生素的疾病，如非感染类型的感冒患者开具抗生素，那么，幸存下来的细菌将会进化成耐药菌。这就是为什么医生经常更换抗生素，同时也是医疗界一直提倡限制过度处方抗生素的原因。 非达霉素（fidaxomicin、Dificid），是一只口服抗生素，用于**难辨梭状芽孢杆菌感染，这种感染能导致腹泻，并可能导致结肠炎和其他肠道疾病。 难辨梭状芽孢杆菌被发现存在于感染患者的粪便中，如果他人接触了细菌或被细菌感染的表面，然后再去触摸自己的嘴唇就会被感染。Dificid将主要在医院销售，因为医院里面这种细菌是zui常见的。这是近一个世纪以来，研发出的新型**难辨梭状芽孢杆菌感染的抗生素。
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苏醒：细胞复苏的方法及注意事项
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
细胞复苏即使细胞恢复生长的过程，是将冻存在液氮或者-70℃冰箱中的细胞解冻之后重新培养。当恢复到常温状态时，细胞的形态结构保持正常，生化反应即可恢复。 细胞复苏方法: ①将冷冻管从液氮中取出，迅速投入37℃水浴融化，细胞融化后要尽快(约1min)移出37℃水浴。37℃水浴时间延长会提高细胞死亡率，复苏过程中一般细胞死亡率在20%～25%之间。 ②迅速用酒精棉球擦拭冷冻管外部杀菌消毒，然后放置在冰浴上。 ③小心开启瓶盖，把细胞转入含有4mL培养基的培养瓶中，然后把培养瓶移至培养箱，26℃～28℃培养1h，让细胞贴壁。 ④细胞贴壁后，小心移弃培养基，主要是去掉DMSO(悬浮生长细胞要通过离心沉淀除去DMSO)、还有死细胞及其碎片，加5mL新鲜培养基，26℃～28℃培养。 ⑤细胞培养24h后，更换新鲜培养基，继续培养直到形成单层，便可以传代。 ⑥详细记录复苏细胞的名称、数量、复苏时间、存放部位等。 注意事项： 1、注意无菌操作。 2、应在1-2min内使冻存液完全融化。如果复温速度太慢，则会造成细胞损伤。另外，细胞复苏后的操作在4℃冰浴中进行，以减少冷冻保护剂对细胞的毒性。 3、细胞复苏过程中，升温的速率要大，把从液氮或-70℃水箱中取出的细胞在zui短的时间内放入水浴锅。 4、细胞放入水浴中注意用镊子夹住细胞冻存管并在水浴中不时晃动，使其受热均匀，并防止水浴时水进入细胞冻存管污染细胞。打开细胞冻存管之前要用酒精棉球将冻存管消毒并晾干。 5、液氮操作有一定的危险性，打开液氮罐取出细胞时，戴上防护眼睛。 6、如果冻存管密封不严，液氮可被吸入。由于解冻时冻存管中的气温急剧上升，将可能发生爆炸。复苏过程中应盖上恒温水浴锅的盖。 上海恒远为广大客户提供高质量的免疫学和生命科学相关产品。质量可靠，被全国各大院校科研机构认可并为Elisa试剂盒标准品对照品长期供应商。我们将以专业执着，精益求精的精神服务于广大科研用户。
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索莱宝抗体新发布（NFKB1 Antibody）
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
NFKB1 Antibody Rabbit Polyclonal| Catalog number: K002146P Applications:WB IHC IF IP| Species specificity:HumanWestern blot analysis of extracts of various cell lines, using NFKB1 antibody.Immunoprecipitation analysis of 150ug extracts of MCF-7 cells using 3ug NFKB1 antibody . Western blot was performed from the immunoprecipitate using NFKB1 antibody at a dilition of 1:500.Immunohistochemistry of paraffin-embedded human tonsil tissue using NFKB1 antibody at dilution of 1:100 (x40 lens).Immunohistochemistry of paraffin-embedded human gastric cancer tissue using NFKB1 antibody at dilution of 1:100 (x40 lens).
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elisa试剂盒白介素类实验时常出现的错误及对策
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
elisa试剂盒白介素类异常：白板结果描述：显色步骤结束后酶标板所有孔均无颜色。阳性对照不显色。原因分析：试剂已过有效期，或不同试剂盒组分混用，检查试剂的组分及批号，确认未过期以及所有组分均属对应的试剂盒。elisa试剂盒白介素类对策：不同试剂盒或不同批号的试剂不能混用。整板的黄板现象可能是由于错加其他试剂造成，如同时操作两对半试剂时，测HbsAb板用于测HBsAg等；实验前检查试剂的组分及批号，确认所有组分均属于对应的试剂盒。如盛标本的试管四周常有血痂，易脱落，应远离酶标板。elisa试剂盒超过有效期的产品可能会产生很弱的信号；试剂盒没有按规定进行留存，受高温影响；实验前检查试剂的组分及批号，确认试剂未过期。孵育温度应控制在 37-38℃，孵育时间严格按照说明书操作，保温期内不宜多开门，以免影响保温。花板，一般是由于临床标本的收集、处理和留存方法不当造成，放置时间（自 然放置 1~2h）及离心转（3000r/min）、离心时间（15min）应引起注意。试剂、样品用前未平衡至室温从低温冰箱中取出的试剂及样品应置室温平 衡，20分钟左右。错加、漏加试剂底物、显色剂 A或B 严格按说明书的步骤操作，加完试剂后可观察一下液面高度是否一致，以减少漏加现象。实验结束后，阴阳性对照正常，质控正常，但临床标本感觉显色较弱，待测 标本中可能不含强阳性标本，故结果可能是正常的，如有怀疑，可复检标本加入叠氮钠作为防腐剂，酶免实验中的标本禁用叠氮钠作为防腐剂，可选用 proclin、硫柳汞等其他防腐剂，阴阳性对照正常，但质控、参考品或个别弱阳性标本未能检出。 不同试剂盒或不同批号的试剂不能 混用酶标对吸头的污染以及对盛放显色剂容器的污染都易造成黄板现象；避免试剂组分间的交叉污染，确保吸头、容器的干净，显色剂在光照条件下放置过久，实验 前已变蓝，显色剂A、B未使用前避光留存，孵育温度过高或孵育时间过长；孵育温度应控制在 37-38℃，孵育时间严格按照说明书操作。标本在一周内
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噬菌体滴度测定的操作步骤
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
亮发光杆菌在宿主细胞过量的情况下，噬斑的数量随着噬菌体的增加呈线性增加。由于这个原因，在感染以前，要将噬菌体进行稀释，而不是将宿主细胞稀释。以低MOI(感染重复性)铺板，也可确保每一个噬斑仅包含一个DNA序列。 材料和试剂 1. 微波炉 2. LB/IPTG/Xgal培养板 3. lb培养基 4. 顶层琼脂糖凝胶 操作步骤 1. 在5~10ml LB培养基中接种单个ER2537克隆，振摇孵育直至对数生长中期(OD600~0.5) 2. 在细胞生长时，微波融化顶层琼脂糖凝胶，分装至无菌培养管内，每管3ml。维持在45℃备用。 3. 37℃预热LB/IPTG/Xgal培养板，备用。 4. 以LB培养基10倍比稀释噬菌体。 亮发光杆菌建议稀释范围：对扩增的噬菌体培养上清，108-1011;对未扩增的筛选洗脱液，101-104。每次稀释都换用新的加样枪头，使用气溶胶阻隔枪头以避免交叉污染。 5. 一旦ER2537培养物长至对数生长中期，分装至微量离心管中，每管200ml。 6. 将倍比稀释的噬菌体上清加入含细菌培养物的微量离心管中，一支微量离心管中仅加入一种稀释液10ml，快速涡旋，室温孵育1-5min。 7. 转移至含有45℃顶层琼脂糖凝胶的管中，快速涡旋混匀，立即倾倒至预热的LB/IPTG/Xgal平板上，轻缓摇动平板使顶层胶均匀分布。 8. 冷却平板5min，37℃倒置培养过夜。 9. 亮发光杆菌噬斑计数以噬斑数为100左右的平皿为准，噬斑数乘以稀释度即可获得每10ml噬菌体的滴度-噬斑形成单位(pfu)。
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羊源性成分核酸检测PCR-荧光探针试剂盒试剂配置
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
羊源性成分核酸检测PCR-荧光探针试剂盒解决该情况的办法是：ELISA试剂盒①用F（ab）2替代完整的IgG；②标本用联有热变性（63℃，10 min）IgG的固相吸附剂处理（将热变性IgG加入到标本稀释液中同样有效）；③检测抗原时，可以用等加入到标本稀释液中，使RF降解。（2）补体ELISA系统中固相一抗和标记二抗过程中，抗体分子发生变构，其FC段的补体C1q分子结合位点被暴露出来，使C1q 可以将二者连接起来，从而造成假阳性。解决的办法是：①用EDTA稀释标本；②用53℃，10 min或56℃，30 min加热血清使C1q灭活。（3）嗜异性抗体人类血清中含有能与啮齿类动物（如鼠等）Ig （s） 结合的天然嗜异性抗体，可将ELISA系统中一抗和二抗连接起来，也能造成假阳性。解决的办法是：可在标本稀释液中加入过量的动物Ig （s） ，但加入量不足或亚类不同时无效。（4）嗜靶抗原的自身抗体抗甲状腺球蛋白、抗胰岛素等嗜靶抗原的自身抗体，羊源性成分核酸检测PCR-荧光探针试剂盒有时能与靶抗原结合形成复合物，在ELISA方法中均可干扰抗原抗体测定结果。为避免以上情况出现，解决的办法是：测定前需用理化方法将其解离后再测定。（5）医源性诱导的抗鼠Ig （s） 抗体临床开展的用鼠源性CD3等单克隆抗体**，用放射性同位素标记鼠源性抗体的影像诊断及靶向**等新技术，均有可能使这些病人体内产生抗鼠抗体；另外，被鼠等啮齿类动物咬伤的病人体内也可以产生抗鼠Ig （s） 抗体。这些病人ELISA测定时均可产生假阳性。解决的办法是：测定抗原时，在标本中加入足量的正常鼠Ig （s） ，从而克服由于上述原因造成的假阳性。（6）交叉反应物质ELISA试剂盒类、类AFP样物质等，是与靶抗原有交叉反应的物质。在用多抗测定抗原时对测定结果影响不大，但在用单克隆抗体测定抗原时，如果交叉抗原决定簇正好是所用单克隆抗体相对应的靶决定簇时，也会出现假阳性结果。（7）标本中其它成分的影响 血清脂质过高、胆红素、血红蛋白及血液粘度过大等，羊源性成分核酸检测PCR-荧
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