唾液基因组DNA提取试剂盒（磁珠法）

【注意事项】

1、 磁珠使用前一定要充分混匀。

2、如果同等取样量下欲得到更多DNA 可以增加洗脱次数（洗脱次数**不要超过3 次），也可以适当延长裂解时间。

3、结合液异丙醇客户自备。

【操作步骤】

1、裂解

取200μl样本至1.5mlEP管中，加入600μl裂解液S1-2、40μl裂解液S2，研磨均匀，然后转移至1.5ml EP管中，吹打或点阵混合均匀。然后把EP 管置于恒温水箱中65℃温育15～20min。待冷却到室温，加入400ul氯仿，剧烈震荡15s，静置3min，12000rpm离心10min。

2. 结合

尽量取净上清于新的1.5 mL EP管中，加入等体积的异丙醇以及振荡混匀的50 μL磁珠，颠倒混匀3 min，静置   1 min。将EP管置于磁铁上进行磁分离，吸弃废液（吸净管盖及管底残液）。

3. 洗涤

加入600 μL 70%乙醇溶液（用户自行配置），轻柔混匀1-2 min，然后磁分离，吸净管盖及管底的残液；重复本步骤一次。

4. 洗脱

室温晾干5～10 min至乙醇挥发完全，加入50～100 μL洗脱液，缓慢抽吸混匀，56℃温浴10 min。每隔2～3 min轻摇EP管几下混匀。然后磁分离，小心吸取上清液至新的EP管中，进行下步实验。（判断磁珠晾干的标准：侧面观察磁珠无反光，正面观察磁珠边缘龟裂）

【常见问题及参考意见】

得率低

（1）样本没有完全裂解完，裂解时间不够或没有离心直接进行下一步操作；

可适当延长裂解时间，最长不超过60min。样品裂解后，请一定要离心后再进行下一步操作；

（2）结合不充分；

结合过程中要使磁珠一直处于悬浮状态，并且充分颠倒混匀；

（3）取样量大于说明书给出量；

取样量请严格按照说明书操作。

条带弥散

（1）样品不新鲜：尽量用新鲜样品进行试验，如果样品需要保存，可根据试验，分装保存样品，尽量避免反复冻融；

（2）裂解时间太长：裂解时间不要超过60min；

（3）提取后模板DNA 放置时间太长：提取后如有需要，请尽量及时进行凝胶电泳试验。短期内可置于4℃保存，长期请置于-20℃保存（尽量注意避免反复冻融）。

DNA液有颜色

（1）洗涤过程不充分：如果结合后磁珠呈团状、丝状或颗粒状，要增加点震力度及次数，充分吹打混匀。

（2）裂解不充分：将组织充分研磨、适当增加裂解液S1-2和S2用量，也可以延长裂解时间。

（3）样品用量大于说明书给出量而其他试剂用量没有相应调整：严格按照说明书操作，如果需要增大样本量，可以等比例增大裂解液S1-2、S2以及磁珠用量，其他试剂用量可不改变。

DNA样品不纯，干扰后续实验

（1）DNA液有乙醇残留：洗涤时，请注意吸净管盖及管底的残液。此外，磁珠应完全干燥，保证无乙醇残留。

（2）磁珠洗涤不充分：加入70% 乙醇时，请吸打或点振混匀。如有必要，可增加一次洗涤步骤。

（3）DNA液中吸入磁珠：如果不小心吸入磁珠，请将上清液返回原管，待磁珠完全吸附至管壁后重新吸取上清。或者将吸取的上清液10000rpm离心2min，再取上清。

（4）DNA液中含有蛋白质等杂质：建议适当减少样品用量。

（5）DNA液中含有轻微盐离子等杂质，此为洗脱液（含有抑制核酸降解的成分）正常现象，不影响下游实验。如有特殊需要，可使用等量的经高压灭菌的去离子水作为洗脱液。为方便实验，可将获得的DNA置于-20℃环境分装保存。