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RNA提取试剂盒(磁珠法)

发布时间:2023-02-01

产品简述:

货号 规格 数量 价格
Q-0084825 100mg
1
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Q-0084825 250mg
1
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Q-0084825 500mg
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Q-0084825 1g
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Q-0084825 5g
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魏经理销售经理

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业务范围:

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产品介绍

本试剂盒采用具有独特分离作用的磁珠和缓冲液系统,从样品中分离纯化高质量RNA,特殊包被的磁珠,在一定条件下对目的RNA具有很强的亲和力,而当条件改变时,磁珠释放吸附的RNA,能够达到快速分离纯化RNA的目的。整个过程不涉及有毒试剂,安全、便捷、提取的RNA纯度高。使用本试剂盒纯化的RNA在A260/A280的紫外吸收均在1.8~2.0之间,可以应用到各类下游分子生物学实验。适用范围

1、从植物组织、种子等提取基因组RNA;

2、从组织、血液、淋巴液、尿囊液、精液或各种核酸保存液中提取基因组RNA;

3、适用于核酸自动化提取平台。

注意事项

1、所有相关器皿耗材都应为RNase-free产品,操作过程中应带口罩、手套避免环境中RNA酶污染样品。

2、磁珠使用前一定要充分混匀。

3、结合液、洗脱液使用前请先分别加入55μL、12μL DEPC原液。

4、本试剂盒可分离纯化高质量基因组RNA,但仍有少许DNA掺杂,不影响一般实验。若下游实验对DNA非常敏感,可在洗脱后使用商业化DNaseI去除。

5、如果是干材料,适当延长裂解时间;种子用粉碎机打成粉末状使用,样品为种子时,裂解时间为20-25min。

6、如果同等取样量下欲得到纯度更高RNA 可以增加洗涤次数(洗涤次数**不要超过3 次),也可以适当延长裂解时间。

 

操作步骤

1、裂解

研钵液氮预冷,取适量样本加入过量液氮,迅速研磨成均匀的粉末,转移至1.5 mL EP 管中。然后加入600 μL RNA提取裂解液(65℃先行预热)、10 μL β-巯基乙醇(客户自备,在植物样品有褐化现象时添加,否则无需添加),吹打或点阵混合均匀。然后把EP 管置于恒温水箱中65℃温浴15~20min。

2.结合

将EP 管从温浴设备中取出,12000rpm 离心10min。取500 μL 上清,加入振荡混匀的磁珠30 μL、500 μL 结合液,颠倒混匀5min。将EP 管置于磁力架上进行磁分离,吸弃废液(吸净管盖及管底残液)。

3.洗涤

⑴ 加入1000 μL 75%乙醇-DEPC溶液(无水乙醇、超纯水,DEPC按照750:250:1混合),吸打或点振5~10 次,然后磁分离,注意吸净管盖及管底的残液;

⑵ 重复步骤⑴一次,室温下开盖干燥10~20min,注意防止污染。

4.洗脱

加入100 μL 洗脱液(使用前原装洗脱液请先加入12 μL DEPC原液),缓慢抽吸混匀,持续轻摇EP管15-20min。然后磁分离,小心吸取上清液至新的EP管中,进行下游实验。 

常见问题及参考意见

得率低

(1)样品没有研磨充分,请尽量将样品研磨充分;

(2)组织没有完全裂解完,裂解时间不够或没有离心直接进行下一步操作;

可适当延长裂解时间,最长不超过60min。样品裂解后,请一定要离心后再进行下一步操作;

(3)结合不充分; 结合过程中要使磁珠一直处于悬浮状态,并且充分颠倒混匀;

(4)取样量大于说明书给出量; 取样量请严格按照说明书操作。

条带弥散

(1)样品不新鲜或反复冻融多次:尽量用新鲜样品进行试验,如果样品需要保存,请分装保存样品,尽量避免反复冻融;

(2)研磨时间太长,造成核酸降解:请研磨尽量迅速,防止RNA 降解;

(3)环境温度太高:请将研钵置于液氮保存后再进行研磨,如果所提取材料基因组极易降解,可用液氮研磨;

(4)裂解时间太长:裂解时间不要超过40min;

(5)提取后模板RNA 放置时间太长:提取后请尽量及时进行电泳试验。长期请置于-20℃保存(尽量注意避免反复冻融)。

RNA液有颜色

(1)洗涤过程不充分:如果结合后磁珠呈团状、丝状或颗粒状,要增加点震力度及次数,充分吹打混匀。

(2)裂解不充分:将组织充分研磨、适当增加RNA提取裂解液用量,也可以延长裂解时间。

(3)样品用量大于说明书给出量而其他试剂用量没有相应调整:严格按照说明书操作,如果需要增大样本量,可以等比例增大RNA提取裂解液、β-巯基乙醇以及磁珠用量,其他试剂用量可不改变。

RNA样品不纯,干扰后续实验

(1)RNA液有乙醇残留:洗涤时,请注意吸净管盖及管底的残液。此外,磁珠应完全干燥,保证无乙醇残留。

(2)磁珠洗涤不充分:加入75% 乙醇时,请吸打或点振混匀。如有必要,可增加一次洗涤步骤。

(3)RNA液中吸入磁珠:如果不小心吸入磁珠,请将上清液返回原管,待磁珠完全吸附至管壁后重新吸取上清。或者将吸取的上清液10,000rpm离心2min,再取上清。

(4)RNA液中含有蛋白质等杂质:建议适当减少样品用量。

(5)RNA液中含有轻微盐离子等杂质,此为洗脱液正常现象,不影响下游实验。如有特殊需要,可使用等量的经高压灭菌的0.1%DEPC水作为洗脱液。为方便实验,可将获得的RNA液置于-80℃环境分装保存。

德尔塔
参数信息
外观状态: 固体或粉末
质量指标: 95%+
溶解条件: 有机溶剂/水
CAS号: N/A
分子量: N/A
储存条件: -20℃避光保存
储存时间: 1年
运输条件: 室温2周
生产厂家: 德尔塔(Delta)

【运输说明】:

极低温产品:极低温产品运输过程中加装干冰运输。

低温产品:低温产品运输过程中加装冰袋运输。

常温产品:常温产品运输过程中无需加冰或者特殊包装。

【温馨提示】:

德尔塔(Delta)供应的产品仅用于科研,不能用于人体治疗、药物开发、和其他商业用途,如有购买方或第三方采购我公司的产品用于治疗、药物开发或商业用途,购买方或第三方将承担所有法律责任,我公司也将追究其法律责任。以上产品均可定购。

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