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ELISA实验技巧：ELISA试剂盒酶标板在上面情况下失效？
作者：德尔塔 日期：2022-03-01
ELISA试剂盒的保质期一般都是在一年，如果保存得当的话，不会出现问题的。但不要反复冻融。当然如果是正常的DAS-ELISA检测试剂盒等，应该放在4℃左右冰箱保存。建议ELISA试剂盒解冻后一次用完。已开封或者使用后，剩余试剂仍需按照试剂瓶标签所示的温度保存，ELISA检测试剂盒开封后的酶标板要加干燥剂后密封保存于-20℃，避免潮湿。 但要注意的是，如果将ELISA试剂盒刚从冰箱里面拿出来就立即使用的话，可能会影响，其直接的后果是对一些弱阳性标本的检测出现假阴性。 建 议：先从冰箱中拿出来，在室温下放置20分钟以上后，再进行测定，以使试剂盒在ELISA检测试剂盒使用前与室温平衡。这样做的目的，主要是为了在后面的温育反应步骤中，能使反应微孔内的温度能较快地达到所要求的高度，以满足测定要求。 elisa的板子什么情况下会失效？ 1．通常商品化的酶标板要求密闭4℃保存，长时间暴露或未密闭保存，要么失效，要么结果为非可靠数据；如果是自己包的板，可能效期更短，保存条件要求更高，至于显色剂，正常条件下一天内不会失效的。 2．第三板是否完全按照前两板加所有试剂，如果缺失其中某一步骤，结果也会无色。
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ELISA试剂盒免费代测服务
作者：德尔塔 日期：2022-03-01
“德尔塔生物”始终以"提供**的质量给客户，为客户的利益服务"为理念。拓展顶尖的产品研发与经验丰富的技术团队，致力于创新产品的研发。目前，实验室占地约800平米，内设国际先进实验仪器设备，能够完成ELISA检测、PCR扩增、免疫学检测等各类生物学实验。德尔塔生物经过10年ELISA试剂盒技术的积累与沉淀，不断创新突破，努力将中国生命科学研究提升到全新的高度！ 服务承诺： 凡购买本公司目录任何一种酶联免疫检测试剂盒，您只需将需要检测的动物（Human, Rat, Mouse, Rabbit, Monkey, Pig……）种类和检测指标（白介素类、激素类）及标本数量（48T/96T）通知公司业务员即可。 样本要求： 在收集标本前都必须有一个完整的计划，必须清楚要检测的成份是否足够稳定。我们提倡新鲜标本尽早检测，对收集后当天就进行检测的标本，及时储存在4℃备用，如有特殊原因需要周期收集标本，请造模取材后，将标本及时分装后放在-20℃或-70℃条件下保存。因冰室与室温存在一定温差，蛋白极易降解，直接影响实验质量，所以避免反复冻融。代测放免标本的客户取材前须向我司销售人员索要说明书，具体操作注意事项请与我司技术人员沟通。 液体类标本：标本必须为液体，不含沉淀。包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清、组织匀浆等。 血 清： 室温血液自然凝固10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。收集上清。如有沉淀形成，应再次离心。 血 浆： 应根据试剂盒的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，加入10%（v/v）抗凝剂(0.1M柠檬酸钠或1%heparin 或2.0%EDTA.Na2)混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。如有沉淀形成，应再次离心。 尿液、胸腹水、脑脊液：用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。如有沉淀形成，应再次离心。 细胞培养上清： 检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/
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ELISA试剂盒组成与常见ELISA试剂盒分类
作者：德尔塔 日期：2022-03-01
ELISA快速检测技术越来越多的用于疾病诊断、食品安全检测中，那么ELISA试剂盒的主要组成成份是什么呢？根据ELISA试剂盒的应用范围，可将ELISA试剂盒分为拿几种呢？ ELISA试剂盒主要的组成成份如下： (1) 已包被抗原或抗体的固相载体(免疫吸附剂)； (2) C的抗原或抗体(结合物)； (3) 酶的底物； (4) 阴性对照品和阳性对照品(定性测定中)，参考标准品和控制血清(定量测定中)； (5) 结合物及标本的稀释液； (6) 洗涤液，在板式ELISA中，常用的稀释液为含0.05%吐温20磷酸缓冲盐水； (7) 酶反应终止液，常用的HRP反应终止液为硫酸，其浓度按加量及比色液的最终体积而异，在板式ELISA中一般采用2mol/L。 常见的ELISA试剂盒 一、食品安全检验ELISA试剂盒 是指食品中的激素、药物、霉菌毒素、过敏原残留、转基因产品的检测试剂盒，以及微生物、维生素等的检测产品。 包括植物病毒、细菌、真菌、植物激素和转基因作物的农业诊断试剂盒，以及动植物疾病诊断类如猪、牛、羊、马等家畜和禽类以及宠物类检测试剂盒。 二、原装ELISA试剂盒以及各类国产ELISA试剂盒 1、细胞因子检测试剂盒： 如白介素、选择素、集落刺激因子，肿瘤坏死因子，干扰素，转化生长因子，趋化因子，细胞因子受体，粘附分子，生长因子，凋亡因子等等 2、心肌梗塞检测ELISA试剂盒 如肌钙蛋白，肌红蛋白，C-反应蛋白等等 3、内分泌检测ELISA试剂盒 如甲状腺，胰腺，性激素，孕酮，睾酮，生长激素，生长抑素，内皮素，皮质醇，骨钙素，催乳素，促肾上腺皮质激素，促卵泡素，雌二醇，雌三醇，5-羟色胺，17-羟孕酮等等 4、肝纤维化检测ELISA试剂盒 如纤维连接蛋白，透明质酸，胶原，基质金属蛋白酶抑制因子，基质金属蛋白酶，层粘蛋白等等 5、自身免疫检测ELISA试剂盒 如甲状腺，盐水可提取核抗原抗体(ENA)，抗核抗体，DNA，抗心磷脂抗体，类风湿因子，循环免疫复合物，抗胰岛细胞抗
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ELISA实验方法：ELISA中必要的三个试剂
作者：德尔塔 日期：2022-03-01
在临床检验中一般采用商品试剂盒进行测定，ELISA中有三个必要的试剂：免疫吸附剂、结合物和酶的底物等。 完整的ELISA试剂盒包含以下各组分： (1) 已包被抗原或抗体的固相载体(免疫吸附剂); (2) 酶标记的抗原或抗体(结合物); (3) 酶的底物; (4) 阴性对照品和阳性对照品(定性测定中)，参考标准品和控制血清(定量测定中); (5) 酶联物(结合物)及标本的稀释液; (6) 洗涤液; (7) 酶反应终止液。 免疫吸附剂 已包被抗原或抗体的固相载体在低温(2~8℃)干燥的条件下一般可保存6个月以上。有些不完整的试盒，仅供应包被用抗原或抗体，检测人员需自行包被。以下简述固相载体和包被过程。 免疫吸附剂 固相载体 固相载体在ELISA测定过程中作为吸附剂和容器，不参与化学反应。可作ELISA中载体的材料很多，最常用的是聚苯乙烯。聚苯乙烯具有较强的吸附蛋白质的性能，抗体或蛋白质抗原吸附其上后仍保留原来的免疫学活性，加之它的价格低廉，所以被普遍采用。聚苯乙烯为塑料，可制成各种形式。 ELISA载体的形状主要有三种：微量滴定板、小珠和小试管。以微量滴定板最为常用，专用于EILSA的产品称为ELISA板，国际上标准的微量滴定板为8×12的96孔式。为便于作少量标本的检测，有制成8联孔条或12联孔条的，放入座架后，大小与标准ELISA板相同。ELISA板的特点是可以同时进行大量标本的检测，并可在特制的比色计上迅速读出结果。现在已有多种自动化仪器用于微量滴定板型的ELISA检测，包括加样、洗涤、保温、比色等步骤，对操作的标准化极为有利。聚苯乙烯经射线照射后，其吸附性能特别是对免疫球蛋白的吸附性能增加，应用于双抗体夹心法可使固相上抗体量增多，但用于间接法测抗体时空白值较大。 良好的ELISA板应该是吸附性能好，空白值低，孔底透明度高，各板之间、同一板各孔之间、同一板各孔之间性能相近。聚苯乙烯ELISA板由于原料的不同和制作工艺的差别，各种产品的质量差异很大，因此，每一批号的EL
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ELISA实验操作要点：固体样本处理方法
作者：德尔塔 日期：2022-03-01
固体样本处理方法： 固体样本处理原则：称取1g的固体样本，用9g的合适缓冲液溶解，分泌蛋白可以直接离心取上清检测，细胞内的蛋白，要先收集细胞，再用合适方法破碎，离心取上清测试。 1、组织标本： 2、切割标本后，称取1g组织，加入9g的pH7.2-7.4左右的PBS，用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分），仔细收集上清。分装一份待检测，其余冷冻备用，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。对于植物组织，不好匀浆的话，就用液氮研磨，将植物组织放在研钵中，加入适量液氮，充分研磨。 2、细胞内蛋白样本： 许多待测蛋白不是分泌蛋白，而是存在于细胞内的蛋白，这个时候，要先收集细胞，洗涤干净，再破碎细胞，离心取上清。 （1）培养的细胞 A、动物细胞：用PH7.2-7.4的PBS稀释细胞悬液，使细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融（如果反复冻融，破碎效果不好，就采用超声波破碎），以使细胞破坏并放出细胞内成份。2-8℃条件离心20分钟左右（2000-3000转/分），仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。 B、植物细胞：用PH7.2-7.4的PBS稀释细胞悬液，使细胞浓度达到100万/ml左右，置于冰盒上，用超声破碎仪，设置破碎2s，冷却30s的方式，充分破碎细胞，以使细胞破坏并放出细胞内成份。2-8℃条件离心20分钟左右（2000-3000转/分），仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。 （2）组织的细胞 切割标本后，称取1g组织，加入9g的pH7.2-7.4左右的PBS，用手工或匀浆器将标本匀浆充分。2-8℃条件离心20分钟左右（2000-3000转/分），去除上清，再用pH7.2-7.4左右的PBS小心洗涤沉淀的细胞三遍。再用上述的细胞破碎方法破碎细胞。 3、土壤：称取1g土壤，加入9g的pH7.2-7.4左右的PBS，用手工将标本充分混匀。2-8℃条件离心20分钟左右（2000-3000转/分），仔细收集上清。分装一份待检测，其余冷冻备用，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。如果是测分
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ELISA实验操作要点：降低ELISA背景的四点Tips
作者：德尔塔 日期：2022-03-01
在ELISA试剂盒操作中，我们都认为ELISA实验的原理似乎很简单，不外乎固定抗原，添加一抗、二抗和底物，间中夹杂着洗涤和封闭。然而，即使是平淡无奇的洗涤和封闭，如果做得不太好，也有可能毁了整个实验。在实验结束时，我们是否能获得有意义的信息，这在很大程度上取决于结果的信噪比。背景噪音会影响您对结果的判断。如何降低ELISA的背景，下面有一些tips。 一、洗涤很重要 洗涤步骤看似很无聊，其实很重要，因为如果未结合的材料(如非特异结合的抗体或检测试剂)残留在微孔板中，那么它会增加背景噪音。如有必要，可增加洗涤液中的盐浓度，这会阻止非特异结合反应。如果背景过高，而您怀疑洗涤不够时，可以尝试增加洗涤次数。 二、封闭更关键 封闭液的作用是让不相关的蛋白占据微孔板中潜在的结合位点。这就降低了可产生信号的抗体非特异结合的机会。您当然也希望抗体只与目的蛋白结合吧。如果您的背景过高，怀疑封闭不充分，那么您可以尝试使用更高浓度的封闭液，或适当延长封闭时间。 如果您一直被背景问题所困扰，那么也许您该花些时间来优化封闭液。这可能需要时间，但也是值得的。目前主要有两种类型的封闭液：蛋白和非离子型去污剂。您使用的类型须取决于多个因素，包括微孔板的表面试剂、吸附的抗原、您的抗体和检测试剂。好的封闭液应降低非特异性结合，但它不应当与抗原、抗体或检测试剂发生相互作用。 最常用的非离子型去污剂是Tween-20。这种封闭液便宜、稳定，在去除洗涤过程中的一些非特异结合上很有用。但它们只在存在时起作用，因为很容易被洗掉。因此所有洗涤液中也必须添加封闭液。请勿使用高浓度(正常浓度为0.01-0.1%)，它会降低特异结合，产生假阴性。另一个选择是使用蛋白和非离子型去污剂这两种封闭液，后者可协助洗涤过程中的封闭。 蛋白封闭液则有所不同，是永久的。它们与开放位点结合并封闭，同时稳定与微孔板结合的抗原分子。常用的蛋白封闭液包括牛血清
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ELISA实验技巧：酶标板分类与性能判断
作者：德尔塔 日期：2022-03-01
酶标板作为ELISA检测实验中的辅材，起着举足轻重的作用并直接影响最终实验结果，酶标板的好坏主要取决于其对蛋白吸附的灵敏度、板孔间蛋白吸附能力差异以及所采购酶标板批次间的差异。因此，选择一款蛋白吸附灵敏度高、对蛋白吸附能力孔间差异小、批次间差异小的酶标板产品，是实验者获得可靠、稳定实验结果的保障。 酶标板分类： 根据不同的分类标准，酶标板有着不同的分类。 一、根据孔数，可分为96孔、48孔等，由于酶标板主要是配合酶标仪用，目前市面上的酶标仪最多为96孔，因此酶标板最为常用的也是96孔。 二、根据其底部的不同，又分为平底的，U型底、V型底等。平底的折射率低，适于在酶标仪检测；U型底的酶标板折射率较高，方便加样、吸样、混匀等操作，可以不用放在酶标仪上，直接通过目测观察颜色变化情况，从而判定有无相应的免疫反应。V底的酶标板可以精确的吸取样品。 三、根据酶标板与蛋白和其它分子结合能力的不同，又分为高结合力、中结合力和氨基化等。 （1) 高结合力 此种酶标板，表面经处理后，其蛋白结合能力大大增强，可达300~400ng IgG/cm2，主要结合的蛋白分子量＞10kD。使用该类酶标板可提高敏感性，并可相对减少包被蛋白的浓度和用量，不足之处为较易产生非特异性反应。抗原或抗体包被后，以非离子去污剂无法有效地封闭未结合蛋白的部位，需使用蛋白作为封闭剂。 （2) 中结合力 此类酶标板经表面疏水键被动与蛋白结合，适合作为分子量＞20kD的大分子蛋白的固相载体，其蛋白结合能力为200~300ng IgG/cm2。由于该类酶标板所具有的仅与大分子结合的特性，适用于作为未纯化抗体或抗原的固相载体，可降低潜在的非特异性交叉反应。该类板可以惰性蛋白或非离子去污剂作为封闭液。 （3) 氨基化 这种酶标板经表面改性处理后拥有带正电荷的氨基，其疏水键由亲水键取代。该类酶标板适合作为小分子蛋白的固相载体。使用合适的缓冲液和pH值，其
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ELISA原理：酶联免疫吸附测定原理与应用方向
作者：德尔塔 日期：2022-03-01
酶联免疫吸附测定简介 酶联免疫吸附测定法(Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay），简称ELISA，是实验室最常用的检测方法。 酶是能够催化化学反应的特殊蛋白质，其催化效力超过目前所有人造催化剂。ELISA是将酶催化的放大作用与特异性抗原抗体反应结合起来的一种微量分析技术。酶标记抗原或抗体以后，既不影响抗原抗体反应的特异性，也不改变酶本身的活性。因此ELISA具有准确性高、检测时间短、价格低廉、判断结果有客观标准、结果便于记录和保存等优点，适合于大批标本的检测，广泛应用于食品安全检测、医疗检测以及免疫实验分析等领域。 酶联免疫吸附测定原理 ELISA必须遵守以下3个核心原理：1）抗原或抗体能吸附于固相载体表面，并保持其免疫学活性；2）抗原或抗体可通过共价键与酶连接形成酶结合物，而此种酶结合物仍能保持其免疫学和酶学活性；3）酶结合物与相应抗原或抗体结合后，可根据加入底物的颜色反应来判定是否有免疫反应的存在，而且颜色反应的深浅是与标本中相应抗原或抗体的量成正比例的，可根据已知浓度的抗原或抗体的颜色反应的深浅绘制标准曲线并依此计算出未知样品中抗体或抗原的浓度。在ELISA中酶起到很关键的作用，常用于ELISA法的酶有辣根过氧化物酶，碱性磷酸酯酶等，其中尤以辣根过氧化物酶为多。酶结合物是酶与抗体或抗原, 半抗原在交联剂作用下联结的产物,它不仅具有抗体抗原特异的免疫反应，还能催化酶促反应，显示出生物放大作用。 酶联免疫吸附测定应用方向 ELISA应用的范围很广，而且正在不断地扩大，原则上ELISA可用于检测一切抗原、抗体及半抗原，可以直接定量测定体液中的可溶性抗原。在实际应用方面可用于疾病的临床诊断、疾病监察、疾病普查、法医检查、兽医及农业上的植物病害的诊断检定等。因此，它和生物化学、免疫学、微生物学、药理学、流行病学及传染病学等方面密切相关。按照待测物性质的不同，ELISA反应可以分为抗原检测反应及抗体检测反应。 在医学领域上，能够进行检
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ELISA实验操作要点：酶联免疫吸附试验（ELISA）四大操作要点
作者：德尔塔 日期：2022-03-01
1 标本的采取和保存 可用作elisa测定的标本十分广泛，体液(如血清)、分泌物(唾液)和排泄物(如尿液、粪便)等均可作标本以测定其中某种抗体或抗原成份。有些标本可直接进行测定(如血清、尿液)，有些则需经预处理(如粪便和某些分泌物)。大部分ELISA检测均以血清为标本。血浆中除尚含有纤维蛋白原和抗凝剂外，其他成份均同等于血清。制备血浆标本需借助于抗凝剂，而血清标本只要待血清自然凝固、血块收缩后即可取得。除特殊情况外，在医学检验中均以血清作为检测标本。 在ELISA中血浆和血清可同等应用。血清标本可按常规方法采集，应注意避免溶血，红细胞溶解时会释放出具有过氧化物酶活性的物质，以HRP为标记的ELISA测定中，溶血标本可能会增加非特异性显色。 血清标本宜在新鲜时检测。如有细菌污染，菌体中可能含有内源性HRP，也会产生假阳性反应。如在冰箱中保存过久，其中的可发生聚合，在间接法ELISA中可使本底加深。一般说来，在5天内测定的血清标本可放置于4℃，超过一周测定的需低温冰存。冻结血清融解后，蛋白质局部浓缩，分布不均，应充分混匀宜轻缓，避免气泡，可上下颠倒混和，不要在混匀器上强烈振荡。混浊或有沉淀的血清标本应先离心或过滤，澄清后再检测。反复冻融会使抗体效价跌落，所以测抗体的血清标本如需保存作多次检测，宜少量分装冰存。保存血清自采集时就应注意无菌操作，也可加入适当防腐剂。 2 试剂的准备 按试剂盒说明书的要求准备实验中需用的试剂。ELISA中用的蒸馏水或去离子水，包括用于洗涤的，应为新鲜的和高质量的。自配的缓冲液应用pH计测量较正。从冰箱中取出的试验用试剂应待温度与室温平衡后使用。试剂盒中本次试验不需用的部分应及时放回冰箱保存。 3 加样 在ELISA中一般有3次加样步聚，即加标本，加酶结合物，加底物。加样时应将所加物加在LEISA板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可溅出，不可产生气泡。 加标本一般用微量加样器，按规定的量加入板孔中。每次加标本应更
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ELISA实验概念与原理：免疫酶测定法(ELISA)实验原理及类型
作者：德尔塔 日期：2022-03-01
ELISA实验原理及类型 将已知抗体或抗原结合在某种固相载体上，并保持其免疫活性。测定时将待检标本和酶标抗体或酶标抗原按不同步骤与固相载体表面吸附的抗体或抗原发生反应，用洗涤的方法分离抗原抗体复合物和游离物成分，然后加入底物显色，进行定性或定量测定。 ELISA可用于检测抗体，也可用于检测抗原。根据检测目的和操作步骤的不同，通常有三种类型的检测方法。 1．间接法 此法是检测抗体最常用的方法。将已知抗原吸附于固相载体上，加入待测血清(抗体)与之结合，洗涤后，加酶标抗体和底物进行测定。其原理见图一。 图一 ELISA间接法示意图 2．双抗体夹心法 此法常用于检测抗原。将已知抗体吸附于固相载体，加入待测标本(含相应抗原)与之结合，温育后洗涤，加入酶标抗体及底物溶液进行测定。见图二。 图二 双抗体夹心法检测抗原 3．竞争法 此法可用于抗原及半抗原的定量测定，也可用于测定抗体。以测定抗原为例，将特异性抗体吸附于固相载体上，加入待测抗原和一定量的已知酶标抗原，使二者竞争地与固相抗体结合，经过洗涤分离，最后结合于固相的酶标抗原与待测抗原含量呈负相关。见图三。 图三 竞争法测抗原示意图
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ELISA实验操作要点：样本的收集及保存操作不当会影响ELISA实验结果
作者：德尔塔 日期：2022-03-01
ELISA（酶联免疫试验）以其灵敏度较高、特异性好的特点已广泛用于科研实验及临床，越来越多科研单位选择用ELISA实验方法完成研究课题。优质的试剂、好的仪器和正确的操作是保证ELISA试剂盒检测结果准确可靠的必要条件，但样本的收集及保存操作不当也会影响ELISA实验结果。样本的收集跟保存听上去貌似很简单，但不乏有许多科研工作者因为样本的收集跟保存没做好而影响实验结果。 下面针对样本收集及保存德尔塔生物提几点建议： 1. 严重溶血，以HRP为标记的ELISA测定中，残留在孔内的血红蛋白具有过氧化物酶样活性，催化底物显色造成假阳性； 2. 混有红细胞的血清易沉淀或附着在聚乙烯孔内不易洗净；如有细菌污染，菌体中可能含有内源性HRP，也会产生假阳性反应： 3. 标本凝固不全，有时为了争取时间快速检测，常在血液还未开始凝固时即强行离心分离血清，使血清中仍残留部分纤维蛋白原，在ELISA测定过程中可以形成肉眼可见的纤维蛋白块，易造成假阳性结果； 4. 采血试管洗涤不彻底、反复使用易交叉污染：塑料试管能吸附抗原物质，样本久置在塑料管内会使样本内抗原含量下降造成假阴性。 血清标本宜在新鲜时检测，严重溶血标本禁用。一般说来，在5天内测定的血清标本可放置于4℃，标本在冰箱中保存时间过长导致血清IgG聚合，使间接法的试剂本底加深。超过一周测定的需－20℃保存。冻结血清融解后，蛋白质局部浓缩，分布不均，应充分混匀并避免产生气泡。混浊或有沉淀的血清标本应先离心或过滤，澄清后再检测。反复冻融会使抗体效价跌落，所以测抗体的血清标本如需保存作多次检测，宜少量分装冰存；使用一次性玻璃试管或真空管采血管；并使用非抗凝标本，肝素抗凝血浆会增加OD值，可能与高浓度肝素具有强大的负电荷能吸附酶标记物不易洗脱有关；EDTA、酶抑制剂（如NaN3）可抑制ELISA系统中辣根过氧化物酶活性；血液标本采集后必须使其充分凝固后再分离血清，或标本采集时用带分离胶的采血管或于采血管中加入适当
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ELISA实验操作要点：液体样本处理方法
作者：德尔塔 日期：2022-03-01
液体样本处理原则： 所有的液体样本，用无菌管收集，2-8℃条件离心20分钟左右（2000-3000转/分），如果以后碰到其他的液体样本，也按这个方法，纳入汇总表。 1、血 清：用无菌管收集，室温血液自然凝固10-20分钟，2-8℃条件离心20分钟左右（2000-3000转/分），仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。 2、血 浆：应根据标本的要求选择EDTA、肝素钠或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，2-8℃条件离心20分钟左右（2000-3000转/分），仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。 3、尿 液：用无菌管收集，2-8℃条件离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。 4、胸腹水：用无菌管收集，2-8℃条件离心20分钟左右（2000-3000转/分），仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。 5、脑脊液：用无菌管收集，2-8℃条件离心20分钟左右（2000-3000转/分），仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。 6、唾 液：用无菌管收集，2-8℃条件离心20分钟左右（2000-3000转/分），仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。 7、细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。2-8℃条件离心20分钟左右（2000-3000转/分），仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。 8、牛奶：用无菌管收集，2-8℃条件离心20分钟左右（2000-3000转/分），仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。 9、蜂蜜：用无菌管收集，2-8℃条件离心20分钟左右（2000-3000转/分），仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。 样本收集注意事项 1、不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。 2、标本采集后尽快进行实验，若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。 3、我们通用处理方法，无法涵盖各
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针对小分子物质的竞争法ELISA试剂盒的质量优势
作者：德尔塔 日期：2022-03-01
ELISA试剂盒在环境监测、食品安全、药物监测、激素监测等领域的应用，获得长足的发展，大量的竞争法ELISA试剂盒被开发，质量控制越来越严格，德尔塔生物经过10年ELISA试剂盒技术的积累与沉淀，不断创新突破，针对激素类的小分子物质，我们主要通过以下几个途径保证竞争法 竞争法ELISA试剂盒 一、精心筛选配对抗原抗体 抗体的性能直接决定了试剂盒的特异性，我们通过评价大量抗体，筛选最适合的抗体进行生产。 二、抗原的改造 竞争法抗原改造是提高试剂盒灵敏度的最直接方法，通过延长连接臂等方法，对抗原进行改造，再偶联辣根过氧化物酶（HRP）。 三、用二抗包被，充分暴露一抗位点 用二抗（羊抗兔或者羊抗鼠）包被，跟一抗的（兔抗或者鼠抗）Fc端结合，充分暴露一抗的Fab端，降低空间位阻，有利抗原抗体结合。 四、完善的产品配方 试剂盒中各种重要的缓冲液，如校准品稀释液、酶标稀释液等，都是经过负责的配伍与严谨的实验，保证试剂盒的稳定性和重复性。 五、可靠的制备工艺 整个产品制备工艺，充分考虑了质量影响因素。 竞争法ELISA试剂盒，做为一种较为复杂的方法设计，在操作过程中，也有许多因素影响实验结果，因此操作过程有疑问可以直接联系我们技术人员进行技术指导，或查询本网站的ELISA技术专题查找解决方案。数据处理方法也对结果有很大影响，如有疑问请与我们技术人员联系。
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ELISA实验操作要点：ELISA检测做好这7步，得出完美结果
作者：德尔塔 日期：2022-03-01
ELISA检测系统可谓是免疫学反应应用到科研生产中最为广泛最为灵敏的技术手段。可是在新老手操作过程中总是会出现或大或小的问题，比如说花板，假阳性，全显色，全部显色，显色比空白还低.....。德尔塔生物为您总结7步ELISA检测实验经验，做好这7步您就能得出完美的实验结果。 1、包被原的性质很重要，蛋白浓度，是否降解，这关系到你做出的抗体可不可以被其识别，所以保存抗原很重要，我做重组蛋白时，师兄都严格警告我一定要在冰浴下缓慢融化就是这个道理。还有有的包被原可能不是蛋白，对于生物素和脂类物质或小分子物质我们要事先对其改造再加以包被，方法简要的列出如下: ①亲和素生物素:先亲和素先包被载体，加入生物素化的DNA，这种包被方法均匀、牢固，已扩大应用于各种抗原物质的定量测定。 ②脂类物质:可将其在有机溶剂(例如乙醇)中溶解后加入ELISA板孔中，开盖置冰箱过夜或冷风吹干，待酒精挥发后，让脂质自然干固在固相表面。 ③小分子必须依靠和大的蛋白载体偶联后才能固定在固相载体上。 2、包被液的选择，一般选择ph9.6的碳酸盐缓冲液。但有时由于试验的需要，包被原的特殊性也可能采用中性的缓冲溶液来包。应注意以下原理：由于蛋白质与聚苯乙烯固相载体是通过物理吸附结合的，靠的是蛋白质分子结构上的疏水基团与固相载体表面的疏水基团间的作用，这种物理吸附是非特异性的，受蛋白质的分子量、等电点、浓度等的影响，大分子蛋白质较小分子蛋白质通常含有更多的疏水基团，故更易吸附到固相载体表面。具体的试验还要有坚固的理论外也要实践，看一下最终可不可以应用到自己试验当中去。常用的包被液除了刚才提到的pH9.6碳酸盐缓冲液，还有pH7.2的磷酸盐缓冲液和pH7-8的Tris-HCL缓冲液等等。 3、封闭：继包被之后用高浓度的无关蛋白质溶液再包被的过程。封闭就是让大量不相关的蛋白质充填这些空隙，从而排斥ELISA后的步骤中干扰物质的再吸附。常用封闭剂有：0.05%-0.5%的BSA;10%的小牛血清或1%明胶;脱脂
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elisa可以应用于哪些检测？Elisa试剂盒评价标准与曲线
作者：德尔塔 日期：2022-03-01
Elisa生物检测是一种敏感度高，同时特异性强，重复性好的实验检测方法，由于其试剂稳定、易保存，操作简便，结果判断较客观等因素，已广泛应用在免疫学检验的各领域中。 目前市面上的Elisa试剂盒检测原理主要有以下四种：直接法，间接法，夹心法，竞争法。 Elisa试剂盒评价标准： ① 准确性：标准品线性回归与预期浓度相关系数R值，应大于等于0.9900。 ② 灵敏度：反应试剂盒的最低检测浓度 ③ 特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。 ④ 重复性：板内、板间变异系数 ⑤ 回收率：判断实验的准确性和特异性 Elisa试剂盒的标准曲线： 标曲R值是几个9才合格？ 实验室应按检测标准（方法）的要求使用标准溶液或标准物质建立标准曲线。所用标准溶液或标准物质应覆盖被测样品的浓度范围。检测标准（方法）如无具体的要求，至少使用5个标样（除空白外）建立线性标准曲线，每个点重复测定1-3次，对于筛选方法，线性回归方程的相关系数不应低于0.98，对于确证方法，相关系数不应低于0.99。 其实，大于0.99是判断是否为线性相关的一个标准，实际应用中线性大于0.999才是比较理想的。线性在0.99到0.999之间的监测结果只用接近最高浓度一半（中间浓度）的位置才比较准确，如果线性大于0.999的话，在整个线性范围内都会有一个比较满意的结果。 如果检测的线性不好，可以减少标准的覆盖范围，将标准的浓度调整到待测样品浓度附近，这样结果也是非常准确的。例如，样品的浓度约20ppb,但在0~50ppb范围建立标准曲线，但线性非常不理想，这时可以将标准范围调整到15~25ppb之间，作五个标准。 可以检测检测各类食品，饲料，组织及生物液体中真菌毒素、抗生素、食品添加剂以及其他细菌蛋白的ELISA试剂盒： 1.抗生素类：氨苄青霉素，货号：E4350，样本：血清，尿液，牛奶，组织 检测食品中抗生素的残留 样本类型：组织、血清、牛奶、鸡蛋和其他生物样本 真菌毒素是真菌产生的低分子量次级代谢产物 2.真菌毒素：总黄曲霉毒素，货号：E4747，样
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