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ELISA试剂盒测定中试剂的准备Z为关键,啦啦啦!

ELISA试剂盒测定中试剂的准备Z为关键,啦啦啦!

作者:德尔塔 日期:2022-04-06

在实验室,对试剂准备一般不太注意,通常的做法是,在实验时将试剂从冰箱中拿出来即用,而忽略了这种做法有可能影响后面温育时间不够的问题,ELISA试剂盒其直接的后果是对一些弱阳性标本的检测出现假阴性。因此在实验开始前,将试剂盒先从冰箱中拿出来,在室温下放置20分钟以上后,再进行测定,以使试剂盒在使用前与室温平衡。这样做的目的,主要是为了在后面的温育反应步骤中,能使反应微孔内的温度能较快地达到所要求的高度,以满足测定要求。其次,上海恒远生化试剂有限公司还指出以下几点: ELISA试剂盒的操作步骤 1、取出试剂盒,室温(20-25℃)放置30分钟。 2、分组:取出96孔板,根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数,把剩余的板条继续冷藏处理。分别设标准品组(6个浓度)、空白孔、待测样品组。 3、标准品的稀释:准备小试管6 只,依次编好号码,先在各小试管中加入标准品稀释液100ul,然后取原浓度标准品100ul加入一只已编好号的试管中,充分混匀;再在该试管中取100ul 加入第二支试管中,充分混匀;再在该试管中取100ul加入第三只试管中,充分混匀;再在该试管中取100ul 加入第四只试管中,充分混匀;再在该试管中取100ul加入第五只试管中,充分混匀;然后在该试管中取100ul,弃掉。第六只试管作为0 号标准品。 注:为减少实验误差,保证准确性,建议设置复孔。 4、加样:依照标准品的顺序分别加入50ul的标准品溶液于空白微孔中;空白对照孔加入50ul的蒸馏水;其余微孔中先加样品40ul然后再加生物素标记的抗体10ul。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。 5、温育:用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。 6、洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30 秒弃去,如此重复5 次,拍干。 7、加酶标溶液:标准品组、待测样本组各孔中加入50ul的酶标溶液(空白对照孔除外)。 8、温育:酶标板用封板纸密封后,放入湿盒内于37℃恒温孵育1小时。 9、洗板:用稀释

试剂盒的参考标准您知吗?且听上海晶抗为您分解

试剂盒的参考标准您知吗?且听上海晶抗为您分解

作者:德尔塔 日期:2022-04-06

我公司的技术专员表示出对ELISA试剂盒的参考标准熟知以下7项就够了: 一、标准曲线 1.定量方法:标准曲线至少由5个浓度组成,测定次数不少于5次,以确定工作浓度范围和IC50范围。 2.定性方法:工作浓度范围通过阴性、临界值浓度和阳性的样品测定来确定,每个浓度重复不少于5次,浓度与响应值之间应有一定的关系。 二、检测限和定量限 1.检测限:20份空白样品测定均值加3倍标准差。 2.定量限:应大于标准曲线中zui低浓度点。对于定量方法,应对该浓度样品至少测定6次进行验证,而不能通过外延法推断。 三、临界值(cut-off值)的确定 对于有zui高残留限量的药物,检测方法的临界值为20份添加MRL浓度的样品重复3次测定的均值减去1.64倍标准差,即95%置信限处。对于禁用药物,检测方法的临界值为定量限,该值应达到公认的指标。 四、精密度和准确度 对于有zui高残留限量的药物,添加浓度为MRL及MRL上下各一个浓度;对于禁用药物,添加浓度为定量限和2倍定量限,每个添加浓度至少测定5个平行样,并至少进行3批实验(不同检测日期,不同标准曲线,不同批次试剂盒)。 1.准确度:回收率范围大于40%或符合相应检测标准的要求。 2.精密度:以变异系数表示。   批内变异系数:每批平行样之间的变异系数小于或等于25%,对于禁用药物小于或等于30%.   批间变异系数:所有样品之间的变异系数值小于或等于30%,对于禁用药物小于或等于40%.   定性方法:阴性和阳性样品各测定不少于50份,确定假阳性率和假阴性率。 五、交叉反应 试剂盒与待检药物类似物、代谢物或共同存在的药物测定交叉反应率。 六、保存期 保存期通过保存条件的稳定性试验结果确定。 七、复核试验 1.定量方法:检测限、IC50以及至少两个添加浓度的准确度和精密度,并与理化方法(或与具代表性进口试剂盒)比较。 2.定性方法:检测限、假阳性率和假阴性率。

ELISA试剂盒实验记录的书写步骤

ELISA试剂盒实验记录的书写步骤

作者:德尔塔 日期:2022-04-06

ELISA试剂盒实验记录字迹整齐,选用标准的专业术语、计量单位及外文符号,英文缩写出现时须注明全称及中文释名,运用蓝色或黑色钢笔、碳素笔记载,不得运用铅笔或易褪色的笔(如油笔等)记载。试验原始记载须记载于正式试验记载本上,试验记载本应按页码装订,须有接连页码编号,不得缺页或挖补。每次试验须按年、月、日次序在试验记载本相关页码右上角或左上角记载试验日期和时刻,也可记载试验条件如天气、温度、湿度等。ELISA试剂盒试验记载本主页一般作为目录页,可在试验开端后连续填写,或在试验结束时统一填写。 试验记载本应作为宣布论文和试验室科技档案管理的*文件,研究生结业应在离校前将悉数试验记载和其他科研材料上缴试验室保管和存档,不得随意处置或丢掉。试验记载需修正时,选用划线方法去掉原书写内容,但须确保仍可辨认,然后在修正处签字,防止随意涂改或彻底涂黑,空白处可符号“废”字或 打叉。ELISA试剂盒试验记载中应照实记载实践所作的试验,试验成果、表格、图表和照片均应直接记载或订在试验记载本中,变成*记载。

今日讲述:ELISA试剂盒实验的操作要点

今日讲述:ELISA试剂盒实验的操作要点

作者:德尔塔 日期:2022-04-06

ELISA试剂盒应严格遵照规定操作,必能得出准确的结果。首先应选取的试剂,良好的仪器和正确的操作是保证ELISA检测结果准确可靠的必要条件。所以ELISA试剂盒的购买,试剂质量的保证以及实验前实验仪器的检察都是很重要的。一、标本的采集及保存    1、血清:全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000 x g离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。    2、血浆:可用EDTA或肝素作为抗凝剂,标本采集后30分钟内于2 - 8° C 1000 x g离心15分钟,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。    3、细胞培养物上清或其它生物标本:请1000 x g离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。    4、样本处理:血清或血浆标本推荐稀释10,000倍。    注:以上标本置4℃保存应小于1周,-20℃或-80℃均应密封保存,-20℃不应超过1个月,-80℃不应超过2个月;标本溶血会影响zui后检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测。    二、试剂的准备按试剂盒说明书的要求准备实验中需用的试剂. ELISA中用的蒸馏水或去离子水,包括用于洗涤的,应为新鲜的和高质量的.自配的缓冲液应用pH计测量较正.从冰箱中取出的试 验用试剂应待温度与室温平衡后使用.试剂盒中本次试验不需用的部分应及时放回冰箱保存。三、加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品zui终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。    四、温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。    五、洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。    六、显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.    七、测定:以空白空调零,450nm波长

上海恒远为您解答:胎牛血清需要灭活吗?

上海恒远为您解答:胎牛血清需要灭活吗?

作者:德尔塔 日期:2022-04-06

相信很多人都有一个疑问,那就是胎牛血清需不需要灭活处理。针对这个问题,上海恒远觉得有必要给大家讲解讲解!   一般的血清都不要去灭活处理,为什么呢?GIBCO公司在其血清说明书上解析道:经过正确处理的热灭活血清,对大多数的细胞而言是不需要的。经此处理过的血清对细胞的生长只有微小的促进,或完全没有任何作用,甚至通常因为高温处理影响了血清的质量,而造成细胞生长速率的降低。而经过热灭活的血清,沉淀物的形成会显著增多,这些沉淀物在倒置显微镜下观察,像是“小黑点”,常常会让研究者误以为是血清遭受污染,而把血清放在37℃环境中,又会使此沉淀物更增多,使研究者误认为是微生物的分裂扩增。除非是在做免疫学研究或培养干细胞、昆虫细胞和平滑肌细胞时,才推荐做热灭活。所以在不是做免疫学研究或培养干细胞、昆虫细胞和平滑肌细胞培养时,血清尽量不经热灭活。

关于血清不清澈有沉淀是不是有质量问题的问题

关于血清不清澈有沉淀是不是有质量问题的问题

作者:德尔塔 日期:2022-04-06

zui近有客户向我公司钱咨询一个问题,那就是购买的GIBCO胎牛血清不清澈,血清里面会有很多透明的絮状的东西,是不是血清存在质量问题?     如果您是从正规渠道购买的话,是没有问题的。进口胎牛血清或多或少总有点溶血,因为真正的胎牛血清凝血功能差,红细胞容易破裂,且采血后集中处理。而国产血清的采血点很分散,大多是由屠户采血后马上离心收集,所以很少会有溶血,表现出明亮的蜡黄色,当然,国产血清也很少有标准意义上的胎牛血清国产的血清呈现出蜡黄。总之,进口的血清,质量的呈现出谈黄、微红色,差点的呈现出橘红色或鲜红色。    至于沉淀问题,很多血清客户,会发现进口血清有沉淀,从而怀疑血清的质量问题,这是没有根据的。血清中的沉淀是由纤维蛋白的凝聚产生,对血清质量没有任何影响,沉淀的产生原因很多,和厂家的加工生产方式密切相关。国产的血清,大多来自北方,由于价格低廉,保存环境都不好,从采血、冷冻、运输到生产会经过多次冻融,每次冻融过程,就会析出部分纤维蛋白沉淀,这样,血清成品过滤后看起来反而更加的“干净”,很少有沉淀产生。进口的胎牛血清,过滤分装前很少会反复冻融,生产后的成品也是清澈的,但随着时间的推移,血清中的大量纤维蛋白会析出形成沉淀。当然,进口的新生牛血清,一般牛龄都在2周左右,血清中的各种蛋白含量明显偏高,生产后血清可能会浑浊,甚至有大量沉淀。当然,购买回来的血清都是冰冻状态,使用时需要融化,融化过程在温度较低的状态下慢慢进行,否则沉淀相对较多,虽然沉淀并不直接影响血清的质量,但对细胞的显微观察有一定的阻碍。

小鼠泛素蛋白(Ub)ELISA检测试剂盒目前厂家/报价

小鼠泛素蛋白(Ub)ELISA检测试剂盒目前厂家/报价

作者:德尔塔 日期:2022-04-06

小鼠泛素蛋白(Ub)ELISA检测试剂盒目前厂家/报价 参数规格: 产地:国产/进口 规格:48T/96T 保存:2-8℃ 检测原理:采用双抗体夹心ABC-ELISA法 产品特点:运用免疫学技术测定标本的方法,该方法灵敏度高、特异性强、高重复好! 实验方法:酶联免疫法/酶免法(ELISA)凡购买目录本公司ELISA检测试剂盒可提供代测服务。 样本类型:标本必须为液体,不含沉淀。包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清、组织匀浆等。每个标本量收集体积=50ul×检测种类。取材前可向销售人员索要人血清剥夺反应相关蛋白elisa试剂盒说明书。 人血清剥夺反应相关蛋白elisa试剂盒样本采集:收集标本前必须清楚要检测的成份是否足够稳定。对收集后当天进行检测的标本,储存在2-4℃备用;如有特殊原因需要周期收集标本,将标本及时分装后放在-20℃或-70℃条件下保存。避免反复冻融。标本2-8℃可保存48小时,-20℃可保存1个月。-70度可保存6个月。部分激素类标本需添加抑肽酶。 注意事项: 1.试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。 2.实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。 3.不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。 4.使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器。 5.使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。 6.洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。 7.底物A应挥发,避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用8.手接触,有毒。实验完成后应立即读取OD值。 9.加入试剂的顺序应一致,以保证所有反应板孔温育的时间一样。 10.按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。 小鼠泛素蛋白(Ub)ELISA检测试剂盒目前厂家/报价 “ELISA试剂盒"实验操作流程(具体请参照说明书): ① 加抗体包

粒细胞集落刺激因子的信息

粒细胞集落刺激因子的信息

作者:德尔塔 日期:2022-04-06

粒细胞集落刺激因子(G-CSF)是一种糖蛋白,含有174个氨基酸,分子量约为20000。       主要由内毒素、TNF-α和IFN-γ可活化单核细胞和巨噬细胞产生。G-CSF基因全长2.5kb,包括5个外显子和4个内含子,G-CSF有5个半胱氨酸,Cys 36与Cys42,Cys74与Cys64之间形成两对二硫键,Cys17为不配对半胱氨酸,二硫键对于维持G-CSF生物学功能是必须的因素。人和小鼠G-CSF在氨基酸水平上有73%同源性,并具有相互交叉的生物学活性。       G-CSF主要作用于中性粒细胞系(lineage)造血细胞的增殖、分化和活化。重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)作用于造血祖细胞,促进其增殖和分化,其重要作用是刺激粒、单核巨噬细胞成熟,促进成熟细胞向外周血释放,并能促进巨噬细胞及噬酸性细胞的多种功能。       G-CSF临床主要用于预防和**肿瘤放疗或化疗后引起的白细胞减少症、**骨髓造血机能障碍及骨髓增生异常综合征、预防白细胞减少可能潜在的感染并发症、以及使感染引起的中性粒细胞减少的恢复加快。

花生的食用知识

花生的食用知识

作者:德尔塔 日期:2022-04-06

《本草纲目》说:“花生悦脾和胃润肺化痰、滋养补气、清咽止痒。”对付霜降后高发的胃痛,有意识地选择一些暖胃食物,如花生、南瓜、红薯、胡萝卜、甘蓝等,便可以达到养胃暖胃的目的。   花生性味甘、平,可健脾和胃、润肺化痰、益气止血,用于脾虚消瘦、食少乏力、干咳少痰、产后乳汁不足等症。李教授介绍说,花生中的脂肪可使肝内胆固醇分解为胆汁酸,促进排泄,从而降低血中胆固醇含量,用以预防动脉粥样硬化。   花生中高含量的蛋白及氨基酸还可提高记忆力,延缓衰老。它所含的VE可延缓组织老化,并增强肝脏解毒功能。   花生具有止血和提升血小板的功能,且花生红衣的效果比花生米本身强50倍,所以吃花生连红衣一块吃。   因此,冬季进补吃什么?花生zui有益! 温馨提示:吃花生也有诸多禁忌。 1、因为花生脂肪和蛋白质含量非常高,那些体寒湿滞、脾虚便泄,以及有胃肠道疾病的人不宜食用,否则会加重腹泻。 2、对于有肝胆疾患的人来说,花生会加重肝脏负担。 3、皮肤油脂分泌旺盛、易长青春痘的人,也不宜过量进食花生。 4、由于花生有止血作用,能增进血凝,促进血栓形成,所以那些血黏度高或有血栓的人不宜食用。此外,我们日常食用花生米大多是油炸,这样非常容易引起上火,特别是那些肝火旺盛、内热上火的人食用,会火上浇油。如果实在想吃,也限于以水煮或炖的花生为宜,此时的花生具有不温不火、易于入口、容易消化等特点,也是*的养生食用方法。

BIM分享:关于酶联免疫试剂盒实验的操作流程描叙

BIM分享:关于酶联免疫试剂盒实验的操作流程描叙

作者:德尔塔 日期:2022-04-06

昨天上午我司吴在询盘的留言上看到有客户咨询关于实验正确步骤是怎样的?在经过一番交流后,我司吴特意整理出实验中的整个操作流程及注意事项与亲们分享: 一、前期准备工作:    实验前样本和试剂盒室温平行1小时,如果样本是冻存样本,应提前拿到2-8摄氏度进行解冻(不建议直接室温解冻)    准备好实验所需耗材,蒸馏水(去离子水)。                 二、操作流程描叙: 1,将要进行实验的版孔进行设定好,标准品5个点,每个点设定平行,需要用到10个孔,空白只需1个孔。剩下孔可以做为样本孔。 2,稀释标准,准备好5个EP管,然后在每个EP管中加入150微升标准稀释液,编上编码,分别为1,2,3,4,5,在1号管中加入150标准品,用枪头反复吹打10次左右(注意控制幅度不要过大容易产生气泡)如果有涡旋仪可以在涡旋仪上涡旋5秒左右,然后换枪头,在1号管中取150微升加入到2号管,后面过程一次类推。zui后稀释完,前面4个管中每管液体在150微升,5号管为300微升。浓度是从大到小。 3,标准、样本、空白加样:标准是每个浓度点2个孔(做平行),每孔加入50微升,加样过程中注意换枪头,样本孔中每孔加入50微升,加样过程中注意换枪头,空白孔加入50微升蒸馏水。特别要说明的是,标准加样和样本加样尽量控制在15分钟内加完,如果时间拖的太长,会导致前面孔先反应后面孔才开始反应,这样数值偏差过大。加完样后盖上封板膜,至37摄氏度孵育30分钟. 4,洗版,在孵育过程中可以将洗涤液配好,20ml30倍浓缩洗涤液用蒸馏水或者去离子水定容到600ml即可。每孔加入250-300微升的洗涤液(不要漫过版孔),(如果有震荡仪的话,可以讲板子放入震荡仪上5秒左右,然后静止三十秒,没有请忽略次过程)将板子在桌子上晃动5秒左右,然后静置30秒,甩干,拍板。说明:甩干过程尽量要快,1秒内就可以完成,不要慢慢倾斜倒掉液体,直接翻板甩掉液体即可。拍板过程需要在桌子上垫一层吸水纸或者滤纸,版孔朝下拍几下,拍干区别主要看吸水

饲养细胞在体外的细胞培养中操作步骤

饲养细胞在体外的细胞培养中操作步骤

作者:德尔塔 日期:2022-04-06

饲养细胞在体外的细胞培养中,单个的或数量很少的细胞不易生存与繁殖,必须加入其它活的细胞才能使其生长繁殖,加入的细胞称之为饲养细胞(Feeder cell)。在细胞融合和单克隆的选择过程中,就是在少量的或单个细胞的基础上使其生长繁殖成群体,因此在这一过程中必须使用饲养细胞。许多种类的动物细胞都可以做饲养细胞,如正常的脾细胞、胸腺细胞、腹腔渗出细胞等,常选用腹腔渗出细胞,其中主要是巨噬细胞和淋巴细胞。应用腹腔渗出细胞的好处是:一方面做饲养细胞,另一方面巨噬细胞可以吞噬死亡的细胞和细胞碎片,为融合细胞的生长造成良好的环境。腹腔细胞的来源可以是与骨髓瘤细胞同系鼠。也可以是其他种类的小鼠,如C57鼠,昆明小白鼠等。1.材料(1)小鼠(Balb/c或C57小白鼠)若干只。(2)11.6%蔗糖溶液(经10磅30min高压灭菌)。2.操作方法(1)拉颈处死小鼠。(2)70%酒精浸泡消毒10min。(3)用手术剪将小鼠腹部剪开一小口,剥开皮肤,露出腹腔。(4)用注射器将4ml 11.6%蔗糖溶液注入腹腔,用手指轻揉1min仍用该注射器回抽腹腔液体,加入离心管。(5)1 000r/min离心10min。(6)取上清,以HAT选择培养液将细胞制成悬液。台盼蓝染色计数活细胞,使每毫升含40万个活细胞。(7)以1ml吸管将细胞种入微量培养皿,每孔0.05ml,含2万个细胞,放入CO2培养箱培养,即可供细胞融合和克隆化之用。如果在融合后发现在培养孔中饲养细胞数量少,则可以在细胞换液时再加入一些。

枯草芽孢杆菌的菌体和芽胞的关系

枯草芽孢杆菌的菌体和芽胞的关系

作者:德尔塔 日期:2022-04-06

青海发光杆菌所谓的菌体指的是营养体,就是已经萌发出来的。形成的芽孢实际上是休眠体,芽孢的表面有一层厚厚的荚膜,它能耐高温、耐腐蚀、耐化学制剂的清洗。用消毒剂去杀芽孢要很长的时间才能杀死它,用消毒剂去杀病毒或者细菌相对来说更容易得些,而杀死产生芽孢的这种菌相对来说就难多了,要用更长的时间和较高的浓度。 那么到底休眠体的芽孢和营养体的芽孢杆菌有什么区别,他们之间的关系又是什么呢? 大家都知道西游记,西游记的*章*回,孙悟空是从一块石头里面蹦出来的,这块石头我们可以理解为这个芽孢杆菌形成的休眠体,就是芽孢。 换句话说休眠体的芽孢萌发成为营养体的活菌的时候,它更容易死亡掉。因为休眠体的芽孢(就是现在卖的芽孢粉剂)变成营养体后就是活的,青海发光杆菌活的就会受到环境因素的影响,以及其它所有的不利因素对它的的影响,比如讲缺乏营养、温度过高、温度过低和紫外线的侵袭,都可能造成不可逆的损伤,导致它的死亡。 乳酸片球菌    PediococcusacidilacticiLindner 肠膜明串珠菌    Leuconostoc mesenteroides 棒杆菌属    Corynebacterium sp. 嗜酸乳杆菌    Lactobacillus acidophilus 嗜酸乳杆菌    Lactobacillus acidophilus 枯草芽胞杆菌    Bacillus subtilis 谷氨酸棒状杆菌    Corynebacteriumglutamicum(Kinoshitaetal.)Abe .. 乙型溶血性链球菌    Streptococcus hemolytic-β 灰黄青霉    PenicilliumgrisofulvumDierckx 里氏木霉    Trichoderma reesei 枯草芽孢杆菌枯草亚种    Bacillussubtilissubsp.subtilis 大肠埃希氏菌    Escherichia coli 产气荚膜梭菌    Clostridium perfringens 单增李斯特氏菌    Listeria monocytogenes 副溶血弧菌    Vibrio parahaemolyticus 阪崎肠杆菌    Enterobacter sakazakii 福氏志贺氏菌    Shigella flexneri青海发光杆菌

为避免RF对ELISA测定的干扰通常可以采取哪些措施

为避免RF对ELISA测定的干扰通常可以采取哪些措施

作者:德尔塔 日期:2022-04-06

(1)抗原elisa试剂盒稀释标本:这在判断急性病原体感染的特异IgM抗体如抗HAVIgM,抗HBclgM, TORCH的IgM抗体检验等尤为有用。因为急性感染时,血循环中特异的IgM抗体滴度通常很高,而RF滴度通常相对要低得多。因此,在测定前对标本进行稀释,特异的IgM因高滴度存在仍可检出,而非特异的RF则会因为稀释变成非常低的滴度,从而对测定几乎不产生干扰。现在,有些特异IgM检测ELISA试剂盒不要求稀释标本,直接检测,这样虽然方便了实验室技术人员的操作,但容易出现假阳性结果,并且由于某些慢性感染,如HBV的感染,血循环中抗HBelgM可持续以一定的滴度存在,标本不做稀释即进行检测,即可出现阳性结果,从而失去抗HBclgM用于HBV急性感染的诊断价值。因此,在临床实验室,一定要使用要求对标本做1:1000稀释的试剂盒进行检验,从而保证相应检测项目结果的可靠性及临床应用价值。(2)改变酶标抗体:由于RF结合的是IgG的Fc片段,如果将待酶标的抗体的F,片段酶切夫除,仅留下具有特异结合功能的F(ab’)2部分标记酶,抗原elisa试剂盒则在测定中即可避免RF的干扰。(3)标本中RF用变性IgG预先封闭:将经热变性(63℃,10min)的动物如兔、羊等的IgG加入到标本稀释液中,或是将该变性IgG连接至一颗粒固相如聚苯乙烯微球或微孔,然后加入临床血清标本,反应后,再吸出标本进行检测。此外,在测定特异IgM时,也可使用抗人IgG去除临床标本中RF和IgG。(4)测定抗原时,可在标本中加入可使RF降解的还原剂:如2—巯基乙醇。2—巯基乙醇等还原剂可使抗体内的巯基裂解,因而可以去除RF的干扰,但只适用于抗原测定。(5)抗原elisa试剂盒包被或酶标二抗使用特异的鸡抗体IgY:RF不与鸡IgY反应,如果包被和酶标二抗均为鸡IgY抗体,则不受标本中RF的干扰。

微生物、类菌质体和病毒等抗原的纯化操作

微生物、类菌质体和病毒等抗原的纯化操作

作者:德尔塔 日期:2022-04-06

elisa酶联免疫试剂盒说明书首先应分离出纯化的株系或毒株,并对该株系或毒株进行生物化学、血清学、紫外吸收光谱、电镜观察等鉴定,然后将经过签定的纯化株系或毒株进行生物学繁殖,在适当时间再将所需株系和毒株提纯,得到大量材料,zui后再予以鉴定,并测定其浓度。elisa酶联免疫试剂盒说明书在此要特别注意以下几点:1.材料本身是否稳定,如果不太稳定就要寻找使它稳定的条件;2,材料是否容易从寄主中提纯,利率是否高,要尽量寻找利率高的提纯方法;3,材料本身免疫原性(即抗原性)是否强,经提纯所得材料免疫原性是否损失,要尽量寻找免疫原性强的材料作为抗原,而提纯的方法也以不损害材料的生物活性和抗原性为前提。elisa酶联免疫试剂盒说明书所以在进行微生物等抗原纯化的时候,必须熟悉材料的性质、了解材料的繁殖方法和掌握抗原的提纯方法,对工作环境所具备的提纯设备及其功能的要心中有数。总之,不能草率纯化微生物等抗原。

分析ATCC菌种质量的鉴定方法

分析ATCC菌种质量的鉴定方法

作者:德尔塔 日期:2022-04-06

其一.ATCC菌种瓶中出现被吞噬的斑块或直接发现有螨类活动,表明菌种已遭受螨类污染;凡菌种瓶中出现红、黄、黑、绿等各色杂菌孢子,瓶壁出现两种或两种以上明显不同菌丝构成的大大小小的分割区,瓶中散发出各种发臭等异味,都是遭受霉菌或细菌、酵母等杂菌污染的表现。均应予以淘汰,并及时进行妥善处置。其二.凡菌种表面出现过厚的、致密的坚韧的菌皮,菌柱发生萎缩、脱壁,菌丝出现自溶现象,菌种底部积存大量黄褐色液体,ATCC菌种表面及四周出现过多的原基或耳芽,都是菌种老化或某种生理状况欠佳的表现,不宜使用。其三.严格剔除上述两类不合格菌种后,余下菌种中,符合该种食用菌的基本特征,且菌柱吃料彻底,上下长透,生长均匀,富有弹性者,即是合格菌种。需要指出的是,上述二三级菌种的质量鉴定,是针对菌种生产环节本身的质量管理而言的。至于ATCC菌种的生产性能,即在高产方面的表现如何,不能仅靠上述鉴定结果作出判断,而必须靠出菇试验和栽培实践去检验和证实。