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原代细胞核基质的制备
作者：德尔塔 日期：2022-05-04
原代细胞核基质的制备 试剂和器材： 1. 硫酸铵（含10mmol/L Tris-HCl，（pH7.4）及0.2mmol/L MgCl2的1mol/L与0.2mol/L硫酸铵溶液）； 2. 氯化镁（1mol/L储存液）； 3. 苯甲基磺酰氟（PMSF）（无水乙醇配制的1mol/L储存液）； 4. 纯化的细胞核保存于含0.25mol/L蔗糖、10mmol/L Tris-HCl，（pH7.4）、5mmol/L MgCl2的溶液中； 5. DNA酶Ⅰ； 6. Tris-HCl（1mol/L储存液，pH7.4）； 7. 悬浮缓冲液（SB）：5mmol/L MgCl2、10mmol/L Tris-HCl，pH7.4（含0.1mmol/L苯甲基磺酰氟）； 8. Triton X-100； 9. 低速离心机，配有固定角转子和离心管； 实验方法： 所有的试剂置于0—4℃，并且所有操作均在0—4℃完成。 1. 向核悬液中加入Triton X-100使其浓度达到1%（体积分数），孵育30min同时用移液器小心混匀，以免产生气泡； 2. 1000g离心10min，弃去上清。用悬浮缓冲液小体积重悬提取的核沉淀（如5ml）； 3. 用DNA酶Ⅰ（30U/mg DNA）消化细胞核30min； 4. 通过缓慢添加1mol/L硫酸铵溶液来增加盐浓度，使其最终离子强度达到0.6（0.2mol/L 硫酸铵），加入0.2mol/L硫酸铵使体积达到40ml，然后孵育30min； 5. 1000g离心15min沉淀核基质，弃去上清； 6. 用悬浮缓冲液重悬沉淀，用相差显微镜或薄片电镜检测获得的产物；
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原代细胞核仁的制备
作者：德尔塔 日期：2022-05-04
原代细胞核仁的制备 试剂和器材： 1. 悬浮缓冲液：0.34mol/L蔗糖、0.05mmol/L MgCl2、10mmol/L Tris-HCl，pH7.5； 2. 密度阻滞溶液：0.88mol/L蔗糖、0.05mmol/L MgCl2、10mmol/L Tris-HCl，pH7.5； 3. 按要求向溶液中加入蛋白酶抑制剂； 4. 吊桶式低温低速或高速离心机； 5. 超声发生器； 6. 光学显微镜（相差或普通光学显微镜）； 实验方法： 所有操作须在0—4℃完成。 1. 将纯化的原代细胞细胞核溶于悬浮缓冲液中； 2. 超声处理悬液10—15s，中间间隔30—40s； 3. 用1g/L美蓝染色，通过相差或普通光学显微镜监测核的破裂。通常原代细胞细胞核完全破裂需要40—60s的超声处理； 4. 在离心管中，将超声处理物加入到一半体积的密度阻滞溶液上，2000g离心20min并收集核仁沉淀；
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用差速离心法从大鼠肝脏中分离原代细胞重线粒体组分
作者：德尔塔 日期：2022-05-04
用差速离心法从大鼠肝脏中分离原代细胞重线粒体组分 试剂和器材 1. 甘露醇缓冲液：0.2mol/L甘露醇、50mmol/L蔗糖溶液、10mmol/L KCl、1mmol/L乙二胺四乙酸、10mmol/L Hepes-NaOH，pH7.4； 2. 玻璃棒； 3. Dounce匀浆器（20—30ml宽松配制，Wheaton B型）； 4. 高转矩桥式电动机（半导体开关控制）； 5. 高速离心机，配有可容纳40—50ml离心管的固定角转子低速冷冻离心机； 6. Potter-Elvehjem匀浆器，20—40ml间隙为0.07mm； 7. 注射器（内径约0.8mm），带金属套管针； 实验方法： 所给体积适用于约10g的肝脏。第6步以后所有操作须在0—4℃下进行。 1. 对一雄性大鼠过夜禁食，使其糖原耗尽； 2. 颈椎脱臼法处死大鼠，迅速切除肝脏并称重； 3. 将肝脏转移到置于冰上的烧杯中，用剪刀小心地剪碎（肝脏碎片的大小不得超过3mm3），然后用甘露醇缓冲液混悬（每克肝脏使用约4ml缓冲液）； 4. 将一半的液体和组织碎片倒入Potter-Elvehjem匀浆器，用研杵上下研磨5—6次（旋转速度约为700r/min），另一半的样品也重复该操作； 5. 将匀浆液平分到2个离心管中，并于1000g离心10min； 6. 倾倒上清后，放置在冰上。取30ml缓冲液重悬沉淀，用Potter-Elvehjem匀浆器的研杵研磨2—3次进行匀浆，并重复步骤5操作； 7. 倾倒后合并上清，再于1000g离心10min； 8. 用连在20ml注射器的金属套管针去除上清； 9. 4000g离心上清15min； 10. 用金属套管针和注射器去除4000g离心所得上清。为尽可能除去上清，针头尽量靠近凹液面； 11. 同样将致密的棕色沉淀上堆积的疏松粉红色物质小心地吸出，用纸片擦拭管内壁以去除附着液体； 12. 每管加入10ml缓冲液，用玻璃棒搅拌自然状态下重悬沉淀； 13. 在Dounce匀浆器中用研杵轻轻地研磨3次以完成重悬； 14. 用缓冲液补偿到原体积，再倾倒至新管中； 15. 重复步骤9—14 3次； 16. 最后，将纯化了的重线粒体重悬于合适的介质中（与后序分析相一致）；
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用Nycodenz○R不连续梯度溶液纯化酵母线粒体
作者：德尔塔 日期：2022-05-04
用Nycodenz○R不连续梯度溶液纯化酵母线粒体 试剂和器材： 1. 酵母原生质体制备于山梨醇缓冲液中； 2. NycoprepTM Universal（600g/L Nycodenz）； 3. Nycodenz○R工作溶液：500g/L Nycodenz； 4. 山梨醇缓冲液：0.6mol/L山梨醇、20mmol/L Mes-KOH，pH6.0； 5. 山梨醇缓冲液（2×）：1.2mol/L山梨醇、40mmol/L Mes-KOH，pH6.0； 6. 悬浮缓冲液：0.6mol/L山梨醇、20mmol/L Mes-KOH，pH7.4； 7. 按要求向溶液加入蛋白酶抑制剂； 8. 高速离心机，配有8×50ml规格固定角转子； 9. 超速离心机，配有可容纳12—13ml管吊桶式转子； 10. Dounce匀浆器（约40ml紧密配制，Wheaton A型）； 11. Dounce匀浆器（约40ml宽松配制，Wheaton B型）； 实验方法： 所有操作须在0—4℃下进行。 1. 使用紧致配制Dounce匀浆器用研杵研磨15次来匀浆原生质体； 2. 用等体积的山梨醇缓冲液稀释，并用固定角转子在1500g转速下离心5min； 3. 轻轻倒出上清液，并保留沉淀； 4. 用山梨醇缓冲液将沉淀重悬到原体积，再重复第1、2步操作； 5. 合并所有上清液，在12000g转速下离心10min； 6. 将粗制的线粒体沉淀在约40ml的山梨醇缓冲液中重悬，用宽松配制的Dounce匀浆器轻轻地研磨几次； 7. 1500g下离心5min，以去除剩余的核和碎屑； 8. 用带金属套管针的注射器将上清去除，当心不要搅到疏松堆积的沉淀； 9. 12000g将上清离心10min，在约4ml的山梨醇缓冲液中重悬沉淀（使用宽松配制的Dounce匀浆器）； 10. 从25ml山梨醇缓冲液（2×）和18ml（和14.5ml）500g/L Nycodenz工作溶液来制备两种180g/L和145g/L的Nycodenz溶液；用水将每种溶液配制到50ml； 11. 在适用于吊桶式转子的管中装入这些Nycodenz溶液各5ml以及约2ml的粗制线粒体混悬液（若有必要，用山梨醇缓冲液注满）； 12. 在约200000g下离心30min。纯化的线粒体在两种Nycodenz溶液界面上呈带； 13. 用带金属套管针的注射器收集区带；用4倍体积的悬浮缓冲液来稀释；12000g离心15min，在悬浮缓冲液中重悬
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从组织和培养细胞中制备轻线粒体组分
作者：德尔塔 日期：2022-05-04
从组织和培养细胞中制备轻线粒体组分 试剂和器材： 1. 匀浆介质：0.25mol/L蔗糖溶液、1mmol/L乙二胺四乙酸、10mmol/L Hepes-NaOH，pH7.4； 2. 按要求向溶液加入蛋白酶抑制剂； 3. 磷酸盐缓冲液； 4. 低速冷冻离心机，配有30—40ml离心管的吊桶式离心转子； 5. 高速离心机，配有30—40ml离心管的固定角转子； 6. 用于肝脏：Potter-Elvehjem（聚四氟乙烯树脂和玻璃）匀浆器（30—40ml），连接高转矩桥式电动机（半导体开关控制）； 7. 用于细胞：滚珠轴承匀浆器或带23号或25号针头的注射器； 8. Dounce匀浆器（宽松配制，Wheaton B型）； 9. 20ml规格注射器（内径约0.8mm），带金属套管针； 实验方法： 所有操作须在0—4℃下进行。 1. 对肝脏：用剪刀非常细微地剪碎组织（或使用组织切碎机），用匀浆介质转移到Potter-Elvehjem匀浆器中（每2.5g组织使用10ml介质）。研杵研磨6次左右进行匀浆（500—700r/min）； 2. 对细胞：在5ml磷酸盐缓冲液中洗涤（1—3）×108个细胞，再换用匀浆介质进行洗涤。在3ml匀浆介质中混悬细胞，在滚珠轴承匀浆器中来回5次匀浆； 3. 800g下离心10min，沉淀核、细胞碎屑和未破碎细胞； 4. 倾倒或吸取（使用针管和注射器）上清，置于冰上； 5. 在宽松配制Dounce匀浆器中研杵研磨2—3次进行匀浆，使用10ml匀浆介质重悬沉淀（细胞则使用5ml）； 6. 重复离心，合并上清； 7. 将合并的上清在3000g下离心10min； 8. 将第7步得到的上清在15000g下离心10min； 9. 用10ml（细胞对应5ml）匀浆介质重悬轻线粒体沉淀，在宽松配制Dounce匀浆器中用研杵轻轻地研磨2—3次； 10. 15000g下离心10min； 11. 在适当的介质中重悬沉淀用于分析或进一步处理；
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机器视觉LED光源性能优势及类别
作者：德尔塔 日期：2022-05-04
机器视觉具有三大技术优势：采像技术，处理技术及运动控制技术。视觉光源的选择是为了将被测物体与背景尽量明显分别，获得高品质、高对比度的图像。而且视觉光源的正确选择，直接影响系统的成败，处理精度和速度。 机器视觉光源的种类 理想的光源应该是明亮，均匀，稳定的，视觉系统使用的光源主要有三种，高频荧光灯、光纤卤素灯、LED（发光二极管）照明。 1、高频荧光灯：使用寿命约1500－3000小时。优点：扩散性好、适合大面积均匀照射；缺点：响应速度慢，亮度较暗； 2、光纤卤素灯：使用寿命约1000小时。优点：亮度高，缺点：响应速度慢，几乎没有光亮度和色温的变化； 3、LED灯：使用寿命约10000－30000小时，可以使用多个LED达到高亮度，同时可组合不同的形状，响应速度快，波长可以根据用途选择。 LED光源的性能优势 1、可制成各种形状、尺寸及各种照射角度； 2、可根据需要制成各种颜色，并可以随时调节亮度； 3、通过散热装置，散热效果更好，光亮度更稳定； 4、使用寿命长（约3万小时，间断使用寿命更长）； 5、反应快捷，可在10微秒或更短的时间内达到最大亮度； 6、电源带有外触发，可以通过计算机控制，起动速度快，可以用作频闪灯； 7、运行成本低、寿命长的LED，会在综合成本和性能方面体现出更大的优势； 8、可根据客户的需要，进行特殊设计。 LED光源的颜色 1、主要颜色：红色、蓝色、绿色、白色 2、其他颜色：橙色、红外、紫外 维视图像LED视觉光源，具有亮度可调、低温、均衡、无闪烁、无阴影，亮度、色温一致，使用寿命长等优点。公司致力于不断开发新的产品和完善其功能，提供多种机器视觉产品，免费提供测试，并协助提供整体解决方案它已广泛应用于各个行业。用户可以根据使用环境及使用范围的不同，选择合适的光源种类、颜色以及照明方式，使得检测系统达到最佳的性能，获得最优的检测结果。
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工业相机的种类及CCD、CMOS相机简介
作者：德尔塔 日期：2022-05-04
工业相机（亦称作“机器视觉相机”）由两大基本部件组成：图像感光芯片和数字化的数据接口。 图像感光芯片由数十万至数百万个像素组成。像素把光线的强度转换为电压输出。 这些像素的电压被以灰度值的形式输出，所有像素放在一起就形成了图像，发送给计算机。数据接口主要有USB 2.0、1394和千兆以太网三种。 相比于传统的民用相机（摄像机）而言，它具有高的图像稳定性、高传输能力和高抗干扰能力等，“工业相机”一词或许不是很准确，因为这些相机还同时被应用在医疗、科研和安保等领域。 工业相机的分类 任何东西分类一定有它自己的分类标准，工业相机也不例外，按照芯片类型可以分为CCD相机、CMOS相机；按照传感器的结构特性可以分为线阵相机、面阵相机；按照扫描方式可以分为隔行扫描相机、逐行扫描相机；按照分辨率大小可以分为普通分辨率相机、高分辨率相机；按照输出信号方式可以分为模拟相机、数字相机；按照输出色彩可以分为单色（黑白）相机、彩色相机；按照输出信号速度可以分为普通速度相机、高速相机；按照响应频率范围可以分为可见光（普通）相机、红外相机、紫外相机等。 CCD相机和CMOS相机 目前市面上工业相机大多是基于CCD（Charge Coupled Device）或CMOS（Complementary Metal Oxide Semiconductor）芯片的相机。 CCD是目前机器视觉最为常用的图像传感器。它集光电转换及电荷存贮、电荷转移、信号读取于一体，是典型的固体成像器件。CCD的突出特点是以电荷作为信号，而不同于其它器件是以电流或者电压为信号。这类成像器件通过光电转换形成电荷包，而后在驱动脉冲的作用下转移、放大输出图像信号。 典型的CCD相机由光学镜头、时序及同步信号发生器、垂直驱动器、模拟/数字信号处理电路组成。CCD作为一种功能器件，与真空管相比，具有无灼伤、无滞后、低电压工作、低功耗等优点。以维视数字图像技术有限公司生产研发的MV-VS-L系列1394接口一体化工业CCD相机为例，
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碘克沙醇梯度提取哺乳动物原代细胞过氧化物酶体
作者：德尔塔 日期：2022-05-04
碘克沙醇梯度提取哺乳动物原代细胞过氧化物酶体 试剂和器材： 1. OptiPrepTM（600g/L的碘克沙醇）； 2. 匀浆介质：0.25mmol/L蔗糖溶液、1mmol/L乙二胺四乙酸、1g/L乙醇、5mmol/L 3-吗啉基丙磺酸（MOPS），pH7.2； 3. 稀释剂：6mmol/L乙二胺四乙酸、6g/L乙醇、30mmol/L MOPS，pH7.2； 4. 1mol/L 蔗糖溶液； 5. 按要求向匀浆介质和稀释剂中加入蛋白酶抑制剂； 6. 使用匀浆介质制备好的线粒体组分； 7. Dounce匀浆器（10ml宽松配制，Wheaton B型）； 8. 两室梯度制备仪或Gradient MasterTM； 9. 5ml注射器（内径大约为0.8mm），带金属套管针； 10. 超速离心机，配有容纳30—40ml体积的固定角离心转子，最大转速大约为100000g，另带大约30ml容量的厚壁管； 11. 梯度收集器； 实验方法： 哺乳动物原代细胞培养。 原代细胞收集后，所有操作均在0—4℃进行。 1. 使用碘克沙醇、稀释剂、1mol/L蔗糖溶液和水分别根据不同的体积比配制一下梯度溶液：500g/L碘克沙醇（5+0.6+0.4+0.0）、400g/L碘克沙醇（4+0.6+0.7+0.7）和200g/L碘克沙醇（2+0.6+1.1+2.3）； 2. 使用宽松配制的Dounce匀浆器在匀浆介质中对线粒体沉淀进行重悬（研杵研磨2—3次），相应地调整使得每克组织对应0.5ml体积； 3. 使用两室梯度制备仪或者Gradient MasterTM来制备线性梯度，使用注射器和金属套管针从200g/L和400g/L的碘克沙醇溶液中各取9ml，制备梯度溶液并置于适用于固定角离心转子的聚碳酸酯管中，每个梯度最底层均为2ml的500g/L碘克沙醇； 4. 在每个梯度溶液上层加入3ml混悬液，然后在105000g下离心1h； 5. 让转子从1000r/min开始持续减速，将梯度溶液收集于1ml中，密度越大的可越先得到收集。或者也可以用注射器和金属套管针来收集沿梯度溶液往下2/3距离上形成带的过氧化物酶体；
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哺乳动物原代细胞培养的β-半乳糖苷酶（荧光测定）
作者：德尔塔 日期：2022-05-04
哺乳动物原代细胞培养的β-半乳糖苷酶（荧光测定） β半乳糖苷酶：β半乳糖苷酶由大肠杆菌lacZ基因编码，可催化半乳糖苷水解。 最大优势是易于用免疫组织化学法观测其原位表达，是最常用的监测转染率的报道基因之一。 以邻—硝基苯—β—D—半乳吡喃糖苷(ONPG)为底物可用标准的比色法检测酶活性，其检测动力学范围为6个数量级。氯酚红—β—D—半乳吡喃糖苷(CPRG)是另一个可用比色法检测酶活性的底物，其灵敏度比ONPG高近10倍。以MUG和荧光素二半乳糖苷(FDG)为底物则可用荧光法检测其活性。 此法可检测单个细胞的酶活性，并可用于流式细胞学(FACS)分析。如以二氧杂环丁烷为底物，可用化学发光法检测酶活性，其检测动力学范围最大，灵敏度最高，与用生物发光法检测荧光素酶活性的灵敏度相似。 试剂和器材： 1. 反应缓冲液：100mmol/L醋酸钠，100mmol/L KCl、2%（体积分数）Triton X-100、5mmol/L 二硫苏糖醇（DTT），pH4.3； 2. 底物：1.7mmol/L4-甲基-伞形酮-β-D-半乳糖苷（4-MUG）或邻—硝基苯—β—D—半乳吡喃糖苷(ONPG)，溶于反应缓冲液中； 3. 微量离心机； 4. 荧光计：透射光波长355nm，激发光波长460nm，比色皿可容纳200μl样品； 5. 流式细胞学(FACS)分析 6. 37℃水浴锅； 实验方法： 哺乳动物原代细胞培养。 原代细胞收集后。 1. 用两倍体积的缓冲液进行稀释，然后于0—4℃下在微量离心机中离心10min以获得具有梯度的沉淀物； 2. 在0.25ml的反应缓冲液中重悬沉淀； 3. 与等体积的底物进行混匀，37℃孵育1h。使用0.25ml的反应缓冲液代替底物来作为样品空白； 4. 再配有一份底物空白； 5. 1h后测定荧光； 6. 流式细胞学(FACS)分析
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叶绿素荧光参数及定义
作者：德尔塔 日期：2022-05-04
叶绿素荧光参数及定义 叶绿素荧光参数是一组用于描述植物光合作用机理和光合生理状况的变量或常数值，反映了植物“内在性 ”的特点 ， 被视为是研究植物光合作用与环境关系的内在探针 。 为了统一叶绿素荧光参数名称， 在1990年召开的国际荧光研讨会上对上述的大部分参数给出了标准术语( standard nomenclature)。 现常用于分析叶绿素荧光参数的技术称叶绿素荧光动力学技术，其在测定叶片光合作用过程中光系统对光能的吸收、传递、耗散、分配等方面具有独特的作用，该技术被称为研究植物光合功能的快速、无损伤探针，已逐渐在环境胁迫对植物光合作用影响研究方面得到应用。叶绿素荧光技术通常有调制和非调制两种。调制叶绿素荧光测定技术，是利用具有一定的调制频率和强度的光源诱导，通过饱和脉冲分析方法，使叶绿素荧光发射快速地处于某些特定状态，以进行相应荧光检测的技术。即其激发荧光的测量光具有一定的调制（开/关）频率，检测器只记录与测量光同频的荧光，因此调制荧光仪允许测量所有生理状态下的荧光；打开一个持续时间很短（一般小于1 s）的强光关闭所有的电子门（光合作用被暂时抑制），从而使叶绿素荧光达到最大。该技术方便野外观测之用。 部分叶绿素荧光动力学参数的定义： F0：固定荧光，初始荧光(minimalfluorescence)。也称基础荧光，0水平荧光，是光系统Ⅱ(PSⅡ)反应 中心处于完全开放时的荧光产量，它与叶片叶绿素浓度有关。 Fm：最大荧光产量(maximalfluorescence)，是PSⅡ反应中心处于完全关闭时的荧光产量。可反映经 过PSⅡ的电子传递情况。通常叶片经暗适应20 min后测得。 F：任意时间实际荧光产量(actualfluorescence intensity at any time)。 Fa：稳态荧光产量(fluorescence instable state)。 Fm/F0：反映经过PSⅡ的电子传递情况。 Fv=Fm-F0：为可变荧光(variablefluorescence)，反映了QA的还原情况。 Fv/Fm：是PSⅡ最大光化学
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工业相机的主要性能特点
作者：德尔塔 日期：2022-05-04
图像感光芯片：以前工业相机都使用CCD芯片。 这使得相机具有高灵敏度和低图像噪声。 此外，CCD工业相机还具有以下三个主要特征：1、全局快门；2、黑白与彩色两种型号；3、长期都有库存。 与此同时，越来越多的CMOS感光芯片也被用于工业相机领域。 由于它们成本较低，可以有效降低机器视觉应用的整体造价。 但大多数CMOS相机的卷帘式快门限制了其应用领域。专业研发生产CCD和CMOS两种芯片的相机，以及相关产品。 没有图象处理：数字感光芯片还将一些物理及化学方面的属性（如温度、酸度等）转换为数字信号。 感光芯片不对这些属性进行任何分析处理，它们只是尽可能准确的将其转换为数字信号。 本质上是将光子信号转换为数字信号的设备， 而这里所谓的数字信号就是图像。 这些图像不一定非得看起来如何美轮美奂， 在工业机器视觉领域，只需要相机尽可能精确的将光信号转换为电信号。 所以，工业相机不会美化它拍摄的画面， 同理，机器视觉领域也应尽量避免压缩图像。 镜头：机器视觉技术的应用领域非常广泛。 因此，大部分工业相机在发售时都不带镜头，但带有镜头基座。 镜头接口有两种型号：C和CS。 维视图像生产的工业相机支持这两种接口。 此外，市场上还有显微镜、望远镜、内窥镜等其它基于这些装配接口标准的镜头。 数字 I/O接口：机器视觉的定义不仅仅是捕捉到图像，还包括与机器的交互。为此，工业相机提供了数字I/O接口。其中用的最多的就是外触发输出。 在外触发模式下，相机根据外界事件触发快门，捕捉图像。 典型的应用就是传送带上安装光栅，然后将工业相机放置在旁边。 当有目标物体经过光栅时，触发脉冲信号，进而让相机曝光。 编程界面：工业相机是数字化的图像感应设备。 其信号即图像最终还是要由计算机进行分析。 在进行图像分析前，首先需要设置相机参数和捕捉图像。 通常，机器视觉需要相机控制、图象采集和图象分析这三部分整合为一个程序。 工业相机的生产商一般也都会提供编程接口，用于相机控
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实验室离心机的结构和性能
作者：德尔塔 日期：2022-05-04
离心机是利用离心力对混合液（含有固形物）进行分离和沉淀的一种专用仪器。实验室常用电动低速离心机有低速、高速离心机和低速、高速冷冻离心机，以及超速分析、制备两用冷冻离心机等多种型号。其中以低速（包括大容量）离心机和高速冷冻离心机应用最为广泛，是生化实验室用来分离制备生物大分子必不可少的重要工具。在实验过程中，欲使沉淀与母液分开，常使用过滤和离心两种方法。 这类低速离心机结构较简单，可分小型台式和落地式两类，配有驱动电机、调速器、定时器等装置，操作方便。低速离心机其转速一般不超过4000rpm，台式高速离心机最大转速可达18000rpm。 平稳、缓慢地转动调速手柄（约需1~2分钟）至所需转速，待转速稳定后再开始计时。 离心完毕，将手柄慢慢地调回零位。 低速冷冻离心机 转速一般不超过4000rpm，最大容量为2—4L，是实验室最常用于大量初级分离提取生物大分子、沉淀物等。 速冷冻离心机这类离心机多用于收集微生物、细胞碎片、细胞、大的细胞器、硫酸沉淀物以及免疫沉淀物等。 转速可达20000rpm以上，除具有低速冷冻离心机性能和结构外，高速离心机所用角式转头均用钛合金和铝合金制成。离心管为具盖聚乙烯硬塑料制品。 此外，超速离心机还装配有抽真空系统。 超速低速离心机 转速可达50000rpm以上，能使亚细胞器分级分离，并用于蛋白质、核酸分子量的测定等。其转头为高强度钛合金制成，可根据需要更换不同容量和不同型号的转速转头。超速离心机驱动电机有两种，一种为调频电机直接升速，另一种为通过变速齿轮箱升速。为了防止驱动电机在高速运转中产热，装有冷却驱动电机系统（风冷、水冷），限速器、记时器、转速记录器等关闭开关。切断电源。 使用方法检查低速离心机调速旋钮是否处在零位，外套管是否完整无损和垫有橡皮垫。 其转头多用铝合金制的甩平式和角式两种，离心管有硬质玻璃、聚乙烯硬塑料和不锈钢管多种型号。离心
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使用离心机提取植物基因组DNA
作者：德尔塔 日期：2022-05-04
植物基因组DNA提取使用什么样的离心机做?具体步骤怎么样？植物组织提取基因组DNA 一、材料 幼嫩叶子。 二、设备 移液器，冷冻高速离心机，台式高速离心机，水浴锅，陶瓷研钵，50ml离心管（有盖）及5ml和1.5ml离心管，弯成钩状的小玻棒。（这时选择设备的时候注意选择那种通用性强的，可以一机配多种转子的离心机，可以大大的降低设备采购成本，比如说我厂生产的TG16台式高速离心机，就有16种转子可供选择，有6*50ml（角转子），16*5ml(角转子），12*1.5/2ml角转子，一款机型都可以配全，省事省钱，方便使用，带冷冻的话选择TGL16台式高速冷冻离心机或者TGL20台式高速冷冻离心机即可，也是可配16款转子的详情参看：三、试剂 1、提取缓冲液Ⅰ：100mmol/L Tris·Cl, pH8.0, 20mmol/L EDTA, 500mmol/L NaCl, 1.5% SDS。 2、提取缓冲液Ⅱ：18.6g葡萄糖，6.9g二乙基二硫代碳酸钠，6.0gPVP，240ul巯基乙醇，加水至300ml。 3、80:4:16/氯仿:戊醇:乙醇 4、 RnaseA母液 5、其它试剂：液氮、异丙醇、TE缓冲液，无水乙醇、70%乙醇、3mol/L NaAc。 四、操作步骤： 1. 在50ml离心管中加入20ml提取缓冲液Ⅰ, 60℃水浴预热。 2. 幼苗或叶子5-10g, 剪碎, 在研钵中加液氮磨成粉状后立即倒入预热的离心管中, 剧烈摇动混匀, 60℃水浴保温30-60分钟(时间长,DNA产量高), 不时摇动。 3. 加入20ml氯仿/戊醇/乙醇溶液, 颠倒混匀(需带手套, 防止损伤皮肤)，室温下静置5-10分钟, 使水相和有机相分层(必要时可重新混匀)。 4. 室温下5000rpm离心5分钟。 5. 仔细移取上清液至另一50ml离心管,加入1倍体积异丙醇,混匀,室温放置片刻即出现絮状DNA沉淀。 6. 在1.5ml eppendorf中加入1ml TE。用钩状玻璃棒捞出DNA絮团,在干净吸水纸上吸干,转入含TE的离心管中,DNA很快溶解于TE。 7. 如DNA不形成絮状沉淀,则可用5000rpm离心5分钟, 再将沉淀移入TE管中。这样收集的沉淀,往往难溶解于TE,可在60℃水浴放置15分钟以上，以帮助溶解。 8. 将DNA溶液3000rpm离心5分钟, 上清液
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不连续Nycodenz梯度溶液中原代细胞溶酶体的分离
作者：德尔塔 日期：2022-05-04
不连续Nycodenz梯度溶液中原代细胞溶酶体的分离 试剂和器材： 1.匀浆介质：0.25mol/L蔗糖溶液、1mmol/L乙二胺四乙酸、10mmol/L Hepes-NaOH，pH7.4； 2.NycoprepTM Universal； 3.磷酸缓冲液pH7.4（50mmol/L） 4.NycoprepTM Universal稀释剂：6mmol/L乙二胺四乙酸、60mmol/L Hepes-NaOH，pH7.4； 5.Nycodenz工作溶液（500g/L）：将5体积NycoprepTM Universal和1体积NycoprepTM Universal稀释剂混合； 6.按要求向溶液中加入蛋白酶抑制剂； 7.线粒体组分； 8.超速离心机，带有配置约38ml容量离心管的吊桶式转子（也可用较小的17ml或13ml离心管）； 9.10ml规格注射器（内径大约0.8mm），带金属套管针； 实验方法： 所有操作在0—4℃下进行。 1.用匀浆介质对Nycodenz工作溶液进行稀释来产生Nycodenz浓度分别为300g/L、260g/L、240g/L和190g/L的梯度溶液，将这些溶液保持在0—4℃； 2.在匀浆介质（4—10ml）中重悬冲洗过的线粒体沉淀，再与2倍体积Nycodenz工作溶液混合； 3.对于36—38ml的小管，在每个小管中用带金属套管针的注射器加8ml 190g/L Nycodenz于底层，从240g/L、260g/L和300g/L的Nycodenz各取7ml，再加入8—9ml线粒体沉淀混悬液； 4.在95000g下离心2h，然后从190g/L与240g/L Nycodenz界面上收集溶酶体或者在进行标记分析之前，分级收集全部梯度组分；
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哺乳动物原代细胞培养的β-半乳糖苷酶（分光光度测定）
作者：德尔塔 日期：2022-05-04
哺乳动物原代细胞培养的β-半乳糖苷酶（分光光度测定） 试剂和器材： 1.反应缓冲液：5g/L聚乙二醇辛基苯基醚（Triton X-100）、0.05mol/L柠檬酸钠-磷酸盐缓冲液，pH4.3； 2.终止液：0.25%甘氨酸-NaOH，pH10； 3.底物：6mmol/L对硝基苯基-β-半乳呋喃糖苷溶于缓冲溶液中； 4.微量离心机，带1.5—2.0ml小管； 5.分光光度计（可见波长）带1ml比色皿； 紫外-可见分光光度法测定酶活 酶活测定：以ONPG为底物测定β-半乳糖苷酶活力。 酶活定义：以ONPG为底物，37℃保温酶解，每分钟释放lμmol／L邻硝基酚的酶量，定义为1个酶活力单位。 实验方法： 1.每次检测，将0.5ml底物与沉淀于微量离心小管中的膜组分或50μl膜的混悬液混合； 2.如第1步设置空杯样，立即加入终止（缓冲液）1ml； 3.37℃孵育检测液30min； 4.加入1ml的终止（缓冲液）到检测液中； 5.在微量离心机中离心1—2min，去除任何沉淀物质； 6.读出在410nm波长下检测液相对于空白样的吸光值；
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