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TAE与TBE有何区别，怎么选择？
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
相关原理： 缓冲液在电泳过程中的一个作用是维持合适的pH。电泳时正极与负极都会发生电解反应，正极发生的是氧化反应（4OH--4e->2H2O+O2)，负极发生的是还原反应（4H++4e->2H2)，长时间的电泳将使正极变酸，负极变碱。一个好的缓冲系统应有较强的缓冲能力，是溶液两极的pH保持基本不变。 电泳缓冲液的另一个作用是使溶液具有一定的导电性，以利于DNA分子的迁移，例如，一般电泳缓冲液中应含有0.01-0.04mol/L的Na+离子，Na+离子的浓度太低时电泳速度变慢；太高时就会造成过大的电流使胶发热甚至熔化。 电泳缓冲液还有一个组分是EDTA，加入浓度为1-2mmol/L，目的是螯合Mg2+ 等离子，防止电泳时激活 DNA酶，此外还可防止Mg2+离子与核酸生成沉淀。 TAE&TBE TAE是使用广泛的缓冲系统。其特点是超螺旋在其中电泳时更符合实际相对分子质量（TBE中电泳时测出的相对分子质量会大于实际分子质量），且双链线状DNA在其中的迁移率较其他两种缓冲液快约10%，电泳大于13kb的片段时用TAE缓冲液将取得更好的分离效果，此外，回收核酸片段时也易用TAE缓冲系统进行电泳。TAE的缺点是缓冲容量小，长时间电泳（如过夜）不可选用，除非有循环装置使两极的缓冲液得到交换。 TBE的特点是缓冲能力强，长时间电泳时可选用TBE，并且当用于电泳小于1kb的片段时分离效果更好。TBE用于琼脂糖凝胶时易造成高电渗作用，并且因与琼脂糖相互作用生成非共价结合的四羟基硼酸盐复合物而使核酸片段的回收率降低，所以不宜在回收电泳中使用。 怎么选择： 对于分辨率要求不高时，使用TAE和TBE均可；对于分辨率要求比较高时，较低浓度的胶有利于提高大分子量核酸的分辨率，此时宜使用TAE；而较高浓度的胶有利于提高小分子量核酸的分辨率，此时宜使用TBE。
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沙丁胺醇检测卡检测原理及使用步骤
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
沙丁胺醇检测卡用于快速检测猪尿、组织样(畜禽肉)、饲料中的沙丁胺醇残留，灵敏度为5μg/kg，沙丁胺醇快速检测卡检测过程只需要5分钟，适用于各类企业及检测机构。 检测原理: 沙丁胺醇检测卡应用竞争抑制免疫层析的原理，样本中的沙丁胺醇在侧向移动的过程中与胶体金标记的特异性单克隆抗体结合，抑制了抗体和NC膜检测线上沙丁胺醇-BSA偶联物的结合。如果样本中沙丁胺醇含量大于5μg/kg，检测线不显颜色，结果为阳性；反之，检测线显红色，结果为阴性。 沙丁胺醇检测卡使用步骤: (1)测试前请完整阅读使用说明书，并将未开封的检测卡和待检样本溶液回复至常温； (2)从包装袋中取出检测卡后请尽快使用； (3)将检测卡平放，用滴管吸取待检样品溶液，滴加3滴(约75µL)于加样孔中，加样后开始计时； (4)结果应在5-8分钟读取，其他时间判读无效； (5)读取结果时，检测卡水平置于观察者正面，如右图所示。
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基因甲基化的相关说明
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
DNA甲基化是指甲基供体（S-腺苷甲硫氨酸，SAM）在DNA甲基转移酶（DNMT）的作用下，将甲基添加到DNA分子的碱基上，以胞嘧啶-鸟嘌呤二核苷酸（CpG）中的胞嘧啶5位碳原子和甲基间的共价结合尤为常见，CpG中胞嘧啶由此被修饰为5甲基胞嘧啶（5mC）。DNA甲基化修饰后在离体状态表现出更强的惰性，如亚硫酸氢钠可使非甲基化的胞嘧啶转变为尿嘧啶，而不能改变甲基化的CpG中的胞嘧啶；在活体状态表现为基因表达活性的降低。因此，高甲基化状态意味着基因表达的失活/抑制/沉默，而低甲基化状态意味着基因表达的激活/活化。肿瘤细胞的DNA甲基化状态在全基因组水平上呈现广泛的低甲基化特征，导致原癌基因的活化，基因组不稳定性增加；但在抑癌基因、修复基因等启动子区的甲基化状态是升高的，即高甲基化，从而导致了相应抑癌基因等的表达受到抑制。且发现肿瘤细胞的高甲基化基因多发生于启动子区的CpG岛，而正常细胞启动子区的CpG岛多处于非甲基化状态。 在包括肺癌在内的绝大多数肿瘤以及诸如阿尔兹海默病、心衰等非肿瘤性疾病的患者的基因组水平均发现了DNA甲基化的异常。由于人类基因组包含近四万个基因，大量研究发现许多疾病均可能存在特异性的甲基化谱，甚至在疾病的不同阶段甲基化谱也不尽相同；此外，据研究肿瘤细胞发生CpG岛高甲基化的频率远高于基因突变。因此，通过对患者样本进行特定一组基因或全基因组的甲基化水平检测，理论上可以诊断疾病、辅助进行分级分期的判断甚至筛选敏感化疗药物。 基因甲基化异常是肿瘤发生尤为常见的表观遗传变化之一，肿瘤的发生表现为基因组整体甲基化水平降低（癌基因）和CpG岛局部甲基化水平的异常升高（抑癌基因）。 人SHOX2、RASSF1A基因甲基化检测试剂盒可以检测人SHOX2基因和RASSF1A基因甲基化，辅助临床肺癌的早期诊断，提高肺癌患者生存率。
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收到细胞后如何操作？
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
1.首先，观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象。若有，请及时与Procell技术支持联系。2.用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分贴壁细胞会有少量从瓶壁脱落，将细胞置于细胞培养箱内静置培养，隔天再取出进行观察。3.仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等。4.可将培养瓶内多余的培养基转移至50ml无菌离心管中，备用；细胞传代时，可以将该培养基按照一定比例和客户自备的培养基混合使用，让细胞逐渐适应培养条件。5.确认细胞状态良好后，应及时将细胞冻存，再进行后续的实验，避免后期实验失误可能发生细胞污染或死亡而导致的细胞丢失。6.建议客户收到细胞后前3天，100X、200X、400X各拍3-5张细胞照片，记录细胞状态，便于和Procell技术支持沟通交流。
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热门CTLA4&PD1/L1双靶点抗体活性检测细胞模型
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
T细胞在癌症、感染和自身免疫性疾病相关的不同类型的免疫反应中都发挥着至关重要的作用。T细胞与抗原呈递细胞的特异性相互作用往往决定了T细胞的命运并调节其抗肿瘤反应。基础及临床研究发现了许多调节T细胞功能的免疫调节分子，其中，表达在T细胞上的免疫检查点分子通过激活信号（共刺激分子）或抑制信号（共抑制分子）调节T细胞功能，在免疫系统中起着核心作用。目前，靶向T细胞功能的免疫检查点抗体疗法已经获得了激动人心的疗效，取得了很大的成功，其中包括针对程序性细胞死亡蛋白1（PD-1）及其配体PD-L1的Pembrolizumab， Durvalumab以及抗细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4（CTLA–4）的Ipilimumab等单抗药物已广泛运用于黑色素瘤、转移性尿路上皮癌、膀胱癌，肺癌等各种肿瘤患者。 靶点简介 在迄今发现的免疫检查点分子中，CTLA-4抑制T细胞的作用机制是为人们最深入了解的机制之一。CTLA-4，又称CD152，是一种跨膜糖蛋白，可与CD28竞争性地结合抗原呈递细胞上的CD80（B7-1）和CD86（B7-2）蛋白，当与配体结合时，可作为T细胞激活的“关闭”开关，针对CTLA4的单抗Ipilimumab是一个被成功用于黑色素瘤患者的免疫检查点药物。 PD-1（也称为CD279），是一种T细胞表面受体，通过与配体其PD-L1和PD-L2的相互作用对抑制T细胞活性起着重要作用。与CTLA-4信号类似，PD-1结合其配体抑制T细胞增殖，细胞因子如干扰素-γ（IFN-γ）、肿瘤坏死因子和白细胞介素2（IL-2）的产生，并减少T细胞的存活，但与CTLA-4不同的是，它主要调节组织和肿瘤内的效应T细胞活性，而不影响淋巴器官中的T细胞活化。 药物研发现状 尽管通过抗体药物对免疫检查点信号阻断在癌症**中取得了显著的成功，但目前，大多数患者仍不能从单一靶点的阻断中获益。例如，虽然临床上针对PD-1和CTLA-4通路的抗体药物，已被用于多种癌症适应症，但大多数患者单一使用PD-1或CTLA-4阻断剂并无效果。因此，针对一种以上的免疫检查点抗原的抗体组合疗法被认为是一种
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如何摆脱qpcr苦恼，得到更好的结果
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
什么是荧光定量PCR？ 指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个 PCR进程，使每一个循环变得“可见”，最后通过Ct值和标准曲线对样品中的DNA(or cDNA)的起始浓度进行定量的方法。 定量PCR原理？ 与传统PCR一样,反应在温度模块里循环进行；理论上每经过一个循环目的基因的数量都会增加一倍；每个循环结束后,定量PCR仪器通过不同的滤光片记录荧光信号；在扩增过程中,荧光信号随着PCR产物的增加而增强。 定量PCR体系？ 普通的PCR体系；模板,引物,dNTPs，buffer，Taq酶；加入各种类型的荧光染料。 在做Real time PCR时，对于SYBR Green I染料法和Taqman探针法都可以，但是二者有区别。SYBR Green I染料法是利用SYBR Green I结合双链DNA来检测PCR产物，可用于监测任意双链DNA序列的扩增，但是必须考虑非特异性扩增。因成本相对低，是目前较常用的)。但是由于SYBRGreen I可以与所有的双链DNA结合，包括非特异性的双链DNA序列，因此可能会产生假阳性信号。 图1：SYBR染料法原理图 Taqman探针法使用荧光探针检测PCR扩增过程中产生的特异PCR产物：特异性荧光信号的产生，需要探针与目标序列进行特异性的杂交；探针可以标记不同的报告基团，因此可以在一个反应管中进行二条序列扩增完整的探针。5′端荧光基团吸收能量后将能量转移给临近的3′端荧光淬灭基团(发生荧光共振能量转移)；退火，探针与模板结合，引物在聚合酶作用下进行延伸反应，遇到探针时发挥3′-5′外切酶活性将探针切碎到反应体系中；报告基团与淬灭基团距离变大，在激发光的作用下发荧光。实验结果重复性好，价格高。 图2：TaqMan探针法原理图 说了这么多，不知道小伙伴们对qPCR的理解是不是清晰多了呢?qPCR作为一种简单便捷的定量技术，应该是小伙伴们常用的技术了。虽然听起来简单但做起来却没有想象的那么简单，事实上，实验室做一个样本检测QPCR需要1~2个小时，这个时候不仅试剂盒重要，检测能力也很重要，希望这篇文章能
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为什么你的细胞生长缓慢？
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
细胞生长缓慢的常见原因: (1)培养基可能缺乏细胞生长所需的某种因子。 通常情况下，当小伙伴购买细胞，并没有按照ATCC或国内细胞库推荐的方法制备培养基，使用实验室兄弟姐妹使用的培养基来培养细胞。解决方法一般是按照推荐的方法制备培养基，或直接购买培养细胞的培养基。(B)细菌、支原体、真菌等污染:虽然培养基中通常添加双抗体(青霉素和链霉素)，但如果无菌操作观念不强，仍有可能造成污染。处理方法:如果有冷冻细胞，可以丢弃污染细胞。当然，丢弃并不是随意的，扔进垃圾桶。应按照实验室生物安全规定进行。然后复苏培养物，建议培养箱完全消毒。 如果不冷冻，而且这种细胞非常珍贵，常用的**方法是药物**:细菌污染加5-10倍的抗生素;真菌污染加抗真菌药物;支原体污染再加上抗支原体药物，具体药物可以咨询技术支持，他们会更加专业。 (C)许多细胞的生长依赖于密度。如果传代后细胞密度过小，也会影响细胞生长。这段时间没有什么特别好的，就是更换液体。如果细胞培养瓶为T75，则可以消化、离心、复苏，然后接种到T25瓶中。 (4)冷冻细胞中添加DMSO(二甲基亚砜)的量不正确，没有逐渐梯度冷却。下一次恢复后的细胞总是坏的。处理方法:按推荐的冷冻保存方法制备冷冻液。部分细胞适合10% DMSO，部分细胞适合5% DMSO;严格遵循渐变冷却的原则，细胞恢复后迅速解冻。 (5)换液间隔时间太长。一些小伙伴真的把细胞“佛”系生长。当他们想到它的时候，才会换下液体，相信一个句子。“你已经是一个成熟的细胞了。你应该学会养活自己，成长”。在这种情况下，细胞培养瓶中积累了大量的细胞代谢废物，影响细胞活性。推荐:勤奋点 (6)细胞的“消化”时间不宜过长，减少对细胞的损伤;此外，EDTA一般添加到胰腺酶中，螯合钙离子，影响细胞粘附。**方法:控制细胞“消化”时间，尽量去除干净的胰蛋白酶和EDTA。 PH值:细胞需要在一定的PH值下生长，这个小朋友知道。但是很多时候PH值是我们忽略的东西，这也
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大孔树脂与凝胶型树脂的区别介绍
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
大孔树脂介绍： 大孔树脂是一类有大孔结构的高分子吸附树脂，具有良好的大孔网状结构和较大的比表面积，是20世纪60年代发展起来的新型有机高聚物吸附剂，目前已在环保、食品、医药等领域得到了广泛应用。 凝胶型树脂介绍： 由纯单体混合物经缩合或聚合而成的，外观呈透明状的均相凝胶结构的离子交换树脂统称为凝胶型树脂。该类树脂一般采用悬浮共缩聚或共聚合工艺合成球状基体，再经化学反应活化处理，导入离子交换基团而制成。 大孔树脂与凝胶型树脂的区别： 大孔树脂骨架部分的性质与凝胶树脂基本相同，但大孔树脂具有长久且孔径较大的物理孔结构。这一特性使大孔树脂在耐污染、机械强度、抗氧化性等使用性能方面比凝胶树脂更具优势，但大孔树脂的交换容量一般会相对较低，且制造成本相对较高。 主要区别为孔隙度不同 1、凝胶型树脂的孔隙度很小，一般都在3nm以下。严格来讲，这些孔隙并不是真正的孔，而是交联与水合多聚物凝胶结构之间的距离，它随运行条件的变化而改变，在干燥状态下的凝胶型树脂中，这种“孔”实际上是不存在的； 2、大孔型树脂则不同，它的“孔”大于原子距离，而且不是凝胶结构的一部分，可称得上是真正的孔，其大小及形状不受环境条件影响而改变，因而在水溶液中不显示溶胀。
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血清的这些常识你知道吗？
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
牛血清是细胞培养中用量大的天然培养基，含有丰富的细胞生长必须的营养成份，常用于动物细胞的体外培养，具有极为重要的功能。 一、血清的成分 血清是由血浆去除纤维蛋白而形成的一种很复杂的混合物，其组成成份虽大部分已知，但还有一部分尚不清楚，且血清组成及含量常随供血动物的性别、年龄、生理条件和营养条件不同而异。血清中含有各种血浆蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生长因子、激素、无机物等，这些物质对促进细胞生长或抑制生长活性是达到生理平衡的。 二、血清的功能 1.提供对维持细胞指数生长的激素，基础培养基中没有或量很少的营养物，以及主要的低分子营养物。 2. 提供结合蛋白，能识别维生素、脂类、金属和其他激素等，能结合或调变它们所结合的物质活力。 3.有些情况下结合蛋白质能与有毒金属和热原质结合，起到解毒作用。 4.是细胞贴壁、铺展在塑料培养基质上所需因子来源。 5.起酸碱度缓冲液作用。 6.提供蛋白酶抑制剂，使在细胞传代时使剩余胰蛋白酶失活，保护细胞不受伤害。 三、不同血清之间的差异 市场上各种血清产品角龙混珠，一不小心,你可能就使用了品质不好的血清。血清按照采血时间可分为胎牛血清，新生牛血清和小牛血清，三者的优劣顺序为:胎牛,血清>新生牛血清>小牛血清。 一般细胞建议使用胎牛血清培养，部分细胞可使用新生牛血清培养，小牛血清则不建议用于细胞培养。 四、血清选购的注意事项 1.产品关键指标 (1)低内毒素 内毒素是所有细胞培养的大敌,对细胞培养的影响性早在将近三十年前就被广泛讨论和重视.。内毒素会改变细胞外形，影响下游生物途径反应，抑制酵素活性等，低内毒素对细胞培养作用重大。 (2)血红蛋白 根据血红蛋白含量的不同表现出黄色、淡黄色、橘红色、微红色等。细胞培养用血清的标准是血红蛋白含量不高于20mgldL，颜色越红，数值越高;反之，数值越低。品质好的一般呈琥珀色，偏红一般生产工艺较差 (3)微生物指标 包括细菌、霉菌、支原体、噬
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细胞培养中黑点的问题~~
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
24、培养中常出现一些黑点，是污染吗? 首先肉眼观察培养液是否变浑浊，如果变浑浊，基本可以确定是污染;如果肉眼观察培养液没有变浑浊：在显微镜下观察黑点大小和形状是否规则，是否运动，是做布朗运动还是呈直线型快速移动。如果黑点大小不规则，做布朗运动，黑点可能是细胞碎片(可能是细胞状态不佳或者消化过度引起的)，也可能是血清反复冻融产生的蛋白沉淀引起的，也可能是细胞的代谢产物。如果黑点大小一致，快速移动，很可能是细菌污染。 25、如何预防细胞培养中黑点的产生? 掌握细胞传代的最佳时机，不要细胞长老了再传代;掌握好消化时间，防止消化过度产生细胞碎片;减少血清等试剂的冻融次数;将培养液的PH调到最佳;严格控制水质和器皿的清洁。 26、黑点已经产生了，如何进行处理? 如果判定黑点是污染，请及时将细胞处理后丢弃。其他情况，可参照以下进行： 如果是悬浮细胞：收集细胞上清慢速离心(500-600 rpm/min，5-6 min)并更换新的培养瓶;如果是贴壁细胞：将细胞用PBS洗2-3遍，洗的时候，轻轻拍打培养瓶，让贴壁不牢的碎片和颗粒脱落，再弃去PBS，消化时先加低浓度的胰酶如0.05%胰酶消化1 min左右，让细胞间隙中的颗粒和碎片脱落下来，去掉低浓度胰酶，然后正常消化细胞，将收集的细胞悬液慢速离心(500-600 rpm/min，5-6 min)并更换新的培养瓶，并可以尝试适当增加血清浓度进行培养。 27、培养用dish,flask是否相同？ 不同厂牌的dish或flask，其所coating的polymer不同，制造程序亦不同，虽对大部分细胞没有太大之影响，惟少数细胞则可能因使用厂牌不同之dish或flask而有显著之生长差异。
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培养基应该如何配置？
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
1、选择适宜的营养物质 总体而言，所有微生物生长繁殖均需要培养基含有碳源、氮源、无机盐、生长因子、水及能源，但由于微生物营养类型复杂，不同微生物对营养物质的需求是不一样的，因此首先要根据不同微生物的营养需求配制针对性强的培养基。自养型微生物能从简单的元机物合成自身需要的糖类、脂类、蛋白质、核酸、维生素等复杂的有机物，因此培养自养型微生物的培养基完全可以(或应该)由简单的无机物组成。例如，培养化能自养型的氧化硫硫杆菌(Thiobacillus thiooxdans)的培养基组成见表3.9。在该培养基配制过程中并末专门加入其他碳源物质，而是依靠空气中和溶于水中的CO2为氧化硫硫杆菌提供碳源。 就微生物主要类型而言，有细菌、放线菌、酵母菌、霉菌、原生动物、藻类及病毒之分，培养它们所需的培养基各不相同。在实验室中常用牛肉膏蛋白胨培养基(或简称普通肉汤培养基)培养细菌，用高氏I号合成培养基培养放线菌，培养酵母菌一般用麦芽汁培养基，培养霉菌则一般用查氏合成培养基。 2、营养物质浓度及配比合适 培养基中营养物质浓度合适时微生物才能生长良好，营养物质浓度过低时不能满足微生物正常生长所需，浓度过高时则可能对微生物生长起抑制作用，例如高浓度糖类物质、无机盐、重金属离子等不仅不能维持和促进微生物的生长，反而起到抑菌或杀菌作用。另外，培养基中各营养物质之间的浓度配比也直接影响微生物的生长繁殖和(或)代谢产物的形成和积累，其中碳氮比(C/N)的影响较大。严格地讲，碳氮比指培养基中碳元素与氮元素的物质的量比值，有时也指培养基中还原糖与粗蛋白之比。例如，在利用微生物发酵生产谷氨酸的过程中，培养基碳氮比为4/l时，菌体大量繁殖，谷氨酸积累少；当培养基碳氮比为3/l时，菌体繁殖受到抑制，谷氨酸产量则大量增加。再如，在抗 生素发酵生产过程中，可以通过控制培养基中速效氮(或碳)源与迟效氮(或碳)源之间的比例来控制菌体生长与抗生素的合成协调。 3、控制pH条件 培养基
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Real-time PCR实验攻略（基本方法二）
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
材料与仪器 一、关于Trizol Reagent需要的试剂 1. Chloroform：氯仿 (分析纯) 2. Isoproplyl alcohol：异丙醇(分析纯) 3. 75% Ethanol（in DEPC-treated water）:75%乙醇。要求用分析纯无水乙醇并用0.01%的DEPC处理过的无Rnase的水稀释。 4. RNase-free water：无Rnase的水。方法是：将DEPC按0.01%（V/V）加在dH2O中500 ml（50 ul），在37 ℃过夜，并高压灭菌即得（150 ℃ 3小时） 5. 一次性塑料手套 6. 注意：DEPC有致癌之嫌 7. 抽提出的细胞总RNA干燥后加水50 ul，取10 ul加无Rnase水990 ul，稀释100倍成1 ml。于0.5 cm厚的石英比色杯中，以无Rnase水为对照，在721型紫外分光光度计下检测，结果应为：A260/280 ratio
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组织样本中的甘油含量如何检测更精确
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
组织样本中的甘油含量如何检测更精确 上海德尔塔生物供应组织样本甘油检测试剂盒，下面我们来看看如何测定组织样本，才能更加精确！ 首先我们来看一下：样本应该如何处理？ 组织细胞裂解 细胞(包括分化的脂肪细胞)裂解： 消化、离心收集细胞。或直接在培养皿内裂解。通常6孔板单孔约2x106个细胞，75cm2瓶约1x107细胞。按比例每 1~2 x 106细胞加 0.1ml 裂解液，混匀，静置 10 分钟。 动物组织裂解： 切记要预先将新鲜组织剪切称重后再进行保存。组织冻存后再进行解冻、剪切、称重可能会产生严重的测量误差。离心管精确称重，加入组织块后再称重，二者相减(即减量称重法)计算组织量(约 100mg)。强烈建议按比例每 1mg 组织加10µl裂解液以减少样品间蛋白和脂质含量变异而产生的误差。（注意；裂解液用量在 1ml 或更多可保证有效的裂解与脂质提取）。用电动高速匀浆器或手动玻璃匀浆器破碎组织。（不推荐超声方法，因其不能完全和均匀破碎。应根据预实验调整初始的组织细胞加入量），而后，静置 10 分钟。 二. 裂解液处理： 1. 取适量上清液转移到 1.5ml 离心管中，进行步骤 2 的操作。余下的裂解液可用 BCA 法蛋白定量试剂盒进行蛋白定量或－20ºC 储存。 2. 70ºC 加热 10 分钟灭活脂肪酶，可能出现絮状沉淀。 3. 室温 5000rpm 离心 5 分钟，上层清液即可用于酶学测定。 注意：当甘油浓度较低时，可将待测样品与工作溶液按照100µl:100µl体积混合，然后再进行测定，但是如果样品体积超过100µl时将会稀释工作液中酶的浓度，使反应灵敏度下降。如果待测样品浓度超过线性范围，可进行适当稀释，然后根据稀释倍数来计算样品中甘油浓度。） 组织样本中的甘油含量如何检测更精确
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收到大鼠骨髓间充质干细胞后如何操作？
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
大鼠骨髓间充质干细胞（BMSC）分离自骨髓；骨髓是机体的造血组织，位于身体的许多骨骼内。成年动物的骨髓分两种：红骨髓和黄骨髓。红骨髓能制造红细胞、血小板和各种白细胞。血小板有止血作用，白细胞能杀灭与抑制各种病原体，包括细菌、病毒等；某些淋巴细胞能制造抗体。因此，骨髓不但是造血器官，它还是重要的免疫器官。骨髓是存在于长骨（如肱骨、股骨）的骨髓腔和扁平骨（如髂骨）的稀松骨质间的网眼中，是一种海绵状的组织，能产生血细胞的骨髓略呈红色，称为红骨髓。出生时，红骨髓充满全身骨髓腔，随着年龄增大，脂肪细胞增多，相当部分红骨髓被黄骨髓取代，最后几乎只有扁平骨骨髓腔中有红骨髓。骨髓基质系统内存在的骨髓间充质干细胞是一种除造血干细胞以外的、具有高度自我更新能力和多向分化潜能的干细胞，可以向骨、软骨、肌组织、皮肤、脂肪、神经等多种组织分化，因此可以作为组织工程中的种子细胞。在骨髓中，BMSC占骨髓有核细胞总数的0.001%-0.1%，含量极低。骨髓间充质干细胞的体外培养条件要求较高，在培养过程中，受贴壁时间、种植密度、血清含量、培养温度和培养基pH值等条件的影响。1.首先，观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象。若有，请及时与Procell技术支持联系。2.用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分贴壁细胞会有少量从瓶壁脱落，将细胞置于细胞培养箱内静置培养，隔天再取出进行观察。3.仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等。4.可将培养瓶内多余的培养基转移至50ml无菌离心管中，备用；细胞传代时，可以将该培养基按照一定比例和客户自备的培养基混合使用，让细胞逐渐适应培养条件。5.确认细胞状态良好后，应及时将细胞冻存，再进行后续的实验，避免后期实验失误可能发生细胞污染或死亡而导致的细胞丢失。6.建议客户收到细胞后前3天，100X、200X、400X各拍3-5张细胞照片，记录细胞状态，
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细胞系的建立过程
作者：德尔塔 日期：2022-03-31
细胞建系的一般程序包括原代培养、第一次传代、常规传代、冻存与复苏等过程。所涉及的原代培养、第一次传代、常规传代、冻存与复苏等过程的具体方法与常规的原代培养等技术一样。①取材：材料主要来源于外科手术或活检瘤组织，取材时避免用坏死组织，要挑选瘤细胞集中和活力较好的部位，瘤性转移淋巴结或胸腹水是较好的培养材料。取材后尽快培养，因故不能立即培养者，可冻存。其培养方法及冻存方法同正常组织。②细胞的纯化：在肿瘤组织中常混杂有一些成纤维细胞，培养时能与瘤细胞同时生长，并常压过癌细胞，导致细胞生长受阻甚至消失，应仔细排除。排除方法常有：机械刮除法、反复贴壁法、消化排除法、胶原酶消化法等。③提高细胞培养存活率和生长率：根据实验经验，细胞在体外不易培养，建立能传代的细胞系更为困难。一般当组织或细胞被原代培养后，要经过对新环境的适应才能生长，因此不能局限于一般培养法，须采用一些特殊措施。如：用适宜底物，鼠尾胶原底层及饲细胞底层等。用细胞生长因子，根据细胞种类不同选用不同的促细胞生长因子，如胰岛素、氢化可的松，雌激素等。也可以考虑动物媒介培养。
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