-
免疫组化抗体选择要点及流式抗体选购常识
作者：德尔塔 日期：2022-04-20
一抗的选择要点 1. 选择单克隆还是多克隆抗体？由一种B细胞产生的单一特异性抗体叫做单克隆抗体，单克隆抗体能目标明确地与单一特异抗原决定簇结合，就像导弹精确地命中目标一样。另一方面，即使是同一个抗原决定簇，在机体内也可以由好几种B细胞产生抗体，形成抗体混杂物，称为多克隆抗体。在抗原抗体反应中，一般单克隆抗体特异性强，但亲和力相对小、检测抗原灵敏度相对较低；而多克隆抗体特异性稍弱、抗体的亲和力强、灵敏度高，但易出现非特异性染色（实验时可以通过封闭等尽量避免非特异性染色）。 2. 抗体的种属来源。一般兔来源的抗体多是多克隆；而小鼠来源的抗体多是单克隆，但也有例外。抗体的来源这点非常重要，后面检测时带标记的二抗必须与一抗来源相匹配。 3. 实验目的是检测什么种属的抗原，即Species Reactivity。这一点很重要，一般说明书上都有注明，如小鼠Mouse、大鼠Rat、人Human等等，选购时尽量选择说明书上已经标注反应性的抗体。 4. 能否做免疫组化？一般一抗说明书都会注明是否能做WB、IHC、ICC、IF等，建议**选择注明的抗体，因为一般都是经过实验验证的。 5. 检测标本类型。用户是检测石蜡切片还是冰冻切片，一般能做石蜡切片的抗体，都可以用来检测冰冻切片；但能做冰冻切片的抗体，不一定能检测石蜡切片中的抗原。 6. 价格与质量。进口抗体时间长，且价格高，很多都是国内厂家OEM的，科研型的抗体属于浓缩型抗体，需要多摸索几次实验条件，建立合适的实验条件后再进行大批量的实验，并且实验操作者的熟练程度、对实验的把控等对实验结果影响也很大，实验细节一定要把控好。另外，抗体切记避免反复冻融。 二抗的选择 1. 种属来源。主要根据一抗种属来源来决定购买二抗来源，如一抗是小鼠来源，那二抗就买抗小鼠的即可（二抗来源goat or Rabbit均可）；如一抗是兔来源，那二抗就买抗兔的即可。 2. 标记物的选择。常见的标记物有HRP、Biotin、荧光素等。免疫组化现阶段多用二步
-
实验室离心机使用注意事项和事故原因分析
作者：德尔塔 日期：2022-04-20
离心机是生物学实验中经常使用到的一种仪器,它借助转轴高速旋转产生离心力,使不同密度的物质分开。能达到初步分离纯化的目的,是实验室必不可少的仪器。离心机在高速运转过程中会产生气溶胶（图1）,气溶胶中含有病原微生物,对环境、人体的呼吸系统、消化系统、神经系统等损害均很大。实验室中因为离心机的操作使用不当造成的实验室事故也时有发生,所以如何正确使用离心机是非常重要的。 1发生事故的主要原因 ①离心机配平时,由于天平长期使用而又未能校对,对称放置的离心管不平衡超过了0.1～1g。样品的称量误差、离心过程中样品液的外溢和转子腐蚀等是造成转子不平衡的主要因素。 ②离心管在装样时,因离心管帽没有拧紧,在离心过程中离心腔内的高真空状态造成离心管破裂和样品液外溢,如此造成转子不平衡而发生轴弯曲或断轴事故。 ③使用水平转子时,吊篮与水平转子型号不匹配,影响转子的动平衡。 ④离心管帽内橡胶密封环和转子盖橡胶密封环使用不当和消毒不当,如因高温消毒(使用干燥箱烘烤)或长期使用造成内部断裂而老化龟裂、失去密封作用等,使样品在高速运转时外溢,从而使转子在不平衡状态下运行。 ⑤对于各种材料的离心管,使用前没能很好地了解厂家要求的离心管使用范围和消毒方法,采用化学溶剂和不适当的消毒液处理,造成离心管在运行中溶胀、破裂而发生事故。 ⑥离心管老化或将高速离心机离心管用在超速离心机上,使离心管在运行时破裂,样品液外溢造成失衡,离心轴造成损坏。 使用离心机时必须注意以下操作 ①离心机的安装：根据离心机的性能选择合适的地点放置,对一般小型高速台式离心机和低速离心机可放在稳定的工作台上,正面水平放置。离心机四周至少留有30厘米的空间。 ②在使用前,应检查离心机的各项指标是否处于正常状态，如内部零部件，控制面板显示，电源等。 ③使用时,放置离心物品要对称等质量放置,如要进行不等质量配平,要用离心管装等质量的水进行找平。离心管的表面尽量无液体和粉末等异物,以
-
lncRNA促进胃癌进展的新机制研究思路分析
作者：德尔塔 日期：2022-04-20
Nature子刊|联合南京医科大发表重要研究成果：揭示lncRNA促进胃癌进展的新机制 近日，南京医科大学第一附属医院的束永前团队将最新的研究成果，以题为“Upregulation of the long noncoding RNA FOXD2-AS1 promotes carcinogenesis by epigenetically silencing EphB3 through EZH2 and LSD1, and predicts poor prognosis in gastric cancer”发表于著名学术期刊《Oncogene》（影响因子：6.854）。该研究发现了促进胃癌进展的重要lncRNA FOXD2-AS1，并且揭示FOXD2-AS1通过EZH2和LSD1与目标基因结合而诱导转录沉默的新机制。FOXD-AS1通过EZH2和LSD1介导EphB3下调促进胃癌发生。这些结果表明在胃癌发生过程中FOXD2-AS1可以通过与EZH2和LSD1发生直接相互作用抑制EphB3发挥肿瘤诱导因子的作用，因此该分子或可成为检测癌症发生的新标志物。 研究背景： Long noncoding RNAs (lncRNAs)是一组无蛋白编码潜能，大小超过200个核苷酸的非编码RNA。许多研究表明，lncRNA在不同的分子通路中发挥关键的调节作用，特异性的lncRNA与肿瘤的发生有关，例如FENDRR、TINCR和GAPLINC，并且在胃癌细胞中lncRNA异常富集。数据显示，多种肿瘤相关的lncRNA通过与甲基转移酶EZH2和去甲基化酶LSD1相互作用调节癌症进展。 胃癌（GC）是世界上排名第四的恶性肿瘤，在东亚地区发病率较高，大多数病例由于早期无特定的症状而被诊断为晚期。此外，由于对胃癌发生的分子和遗传机制知之甚少，**方案也很有限。认识到遗传和表观遗传失调与肿瘤发生有关，识别新的诊断和预后生物标志物，对预测胃癌的发生具有很好的应用前景。 研究思路： 此次云序生物和南京医科大的研究团队对FOXD2-AS1在胃癌进展中发挥的功能以及调控的相关生物学机制进行了深入研究，其思路和方法值得我们借鉴。本研究中，首先比较了GEO数据库中GC和正常胃组织的lncRNA表达谱，发现了一种新的lncRNA FOXD2-AS1在GC中显著过表达。深入分析发现FOXD2-AS1在GC中的上调与肿瘤大小、癌
-
如何提取情绪中的线索进行科学研究？
作者：德尔塔 日期：2022-04-20
情绪是人类活动反馈中的一个重要指标，也是许多研究领域中不可避免的重要话题之一，如情绪的验证，心理学、刑侦、谎言的研究、商业领域中对食物饮品的客观反馈、市场调研、可用性评价、教育、游戏、人机交互等各方面都有着广泛的研究，那什么是情绪及现如今学者们是如何进行面部表情分析的呢？ 什么是情绪？ 情绪是一种混合的心理现象。它是由独特的主观体验、外部表现和生理唤醒三种成分组成（Izard,1977）。 I.主观体验（subjective experience）是个体基于不同客观刺激对不同情绪的自我感受，对同一客观刺激存在个体差异。 II.情绪的外部表现，通常称之为表情（emotional expression）。它是情绪状态发生时身体各部分的动作量化形式，包括面部表情、姿态表情和语态表情。 面部表情是所有面部肌肉变化的动作量化形式，它能精细的表达不同性质的情绪，因此是鉴别情绪的主要标志，说到表情不得不提的是美国心理学家Paul Ekman，他主要研究脸部表情识别、情绪与人际欺骗，并提出不同文化的面部表情都有共通性，他根据人脸解剖学特征，将其划分为若干个既相互独立又相互联系的动作单元（Action Unit），并分析了这些运动单元的运动特征及其所控制的主要区域以及与之相关的表情，且给出大量的照片说明，许多人脸动画都是基于面部动作编码系统（Facial Action Coding System），也就是我们所说的微表情。 在他四十多年的研究生涯中，他曾研究新几内亚部落民族、精分病人、间谍、连环杀人犯、职业杀手等面容。FBI、CIA等常请他做表情顾问。姿态表情是指面部以外的身体其他部分的表情动作，包括手势、身体姿势等。语调也是表达情绪的一种重要形式，语调的抑扬顿挫也和情绪息息相关。在Ekman《Telling Lies》一书中详细的介绍到当人们情绪发生变化时表情、言辞、声音、身体行为等之间的关系，如果有学者对情绪有较深研究者不妨参考。 III.生理唤醒（physical arousal）是指情绪的生理反应。它涉及广泛的神经结构
-
脐静脉内皮细胞传代培养方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-20
Sciencell公司的人脐静脉内皮细胞（货号#8000、HUVEC）是科研实验中常用到的内皮细胞，当人脐静脉内皮细胞达到80-90%融合时，需要对人脐静脉内皮细胞进行传代培养。 传代培养方法： 1.准备培养瓶：用纤维粘连蛋白（货号#8248、BPF）以2ug/cm2包被培养瓶，包被时间为37度一小时或4度过夜。将培养基（货号#1001、ECM）、胰酶中和液（货号#0113、TNS）、胰酶/EDTA消化液（货号#0103、T/S）和无钙镁离子的磷酸盐缓冲液（货号#0303、DPBS），温度恢复至室温，我们不推荐用37°C水浴加热试剂和培养基。 2.胰酶消化：弃去原培养瓶中培养基，用10mlDPBS冲洗人脐静脉内皮细胞，然后加入2ml胰酶消化液。轻轻摇晃培养瓶以至胰酶消化液覆盖所有人脐静脉内皮细胞。如果使用ScienCell实验室的胰酶/EDTA消化液，会把胰酶消化对脐静脉内皮细胞的损害减少到最低。 3.终止消化：将培养瓶放入37度培养箱中1-2分钟，在孵化后期，轻轻拍打培养瓶以使脐静脉内皮细胞脱离瓶壁。显微镜下观察脐静脉内皮细胞形态变化，直至80%脐静脉内皮细胞变圆。然后立即加入10ml胰酶中和液并轻轻摇动培养瓶。 4.细胞收集：收集人脐静脉内皮细胞并将其转入50ml离心管中。再加入10ml培养基冲洗培养瓶以确保收集所有的残余脐静脉内皮细胞。在显微镜下观察培养瓶中剩余脐静脉内皮细胞的数量以确定是否将脐静脉内皮细胞大部分收集，剩余脐静脉内皮细胞数应小于5%。 5.离心重悬：以1000转/分（1000rpm)离心收取的脐静脉内皮细胞5分钟，弃去上清，在新加的培养基中重悬脐静脉内皮细胞。 6.铺板培养：对脐静脉内皮细胞计数，然后将它们接种到新的纤维粘连蛋白包被过的培养瓶中，37度培养即可。电话13683626447
-
控制微环境氧含量是研究干细胞的一个重要基础
作者：德尔塔 日期：2022-04-20
2017年12月巴黎七大的Adrien Moya 博士在Stem Cell上发表文章研究人源骨髓间充质干细胞的糖代谢研究，来分析在组织工程中应用MSCs从体外移植入人体内的存活率极低的情况。 文章中指出，人骨髓间充质干细胞（MSCs）是组织工程中很理想的选择。然而，因为它的存活率很低，限制了在**上的效果。研究者发现，hMSCs在体内真实环境更接近于缺氧（0.1%O2）而不是体外的低氧环境（1%-5% O2）。在这种缺氧的环境下，hMSCs无法适应在没有外源葡萄糖存在的情况下，只能控制很有限的内部葡萄糖储备和基本为零的ATP储量。在这种外源葡萄糖水平极低的情况下，因为缺乏下调能量翻转的机制导致hMSCs能量储量的快速耗尽，直接导致其极低的存活率。 低于0.1%的氧气条件呈现了体内移植后的环境 哺乳组织行使功能的氧气浓度是2%-10%左右。比如在骨髓中MSC（间充质干细胞）微环境（niche）中的氧气浓度是2%-8%。氧气含量在提供人骨髓间充质干细胞（hMSCs）稳态的能量需求，存活以及移植之后最终行驶功能的过程中，扮演着极其重要的角色。但是， hMSCs在组织工程中的应用，特别是移植后早期在体内的氧气浓度需求还不清楚。 本研究中，首次将hMSCs种在组织工程的载体上面，并保持氧气含量在0.13%±0.06% 长达24h。该氧气浓度比小鼠在体的软组织局部缺血的浓度更低，人类肿瘤的微环境的氧气浓度是0.3%至4.2%。对于这种极低浓度的耗氧量的解释，是在移植后早期阶段，hMSCs微环境基本没有血液供给氧气。 想精确地研究细胞在活体内的氧气浓度，是非常具有挑战性的。本文作者尝试通过建立一种缺氧生物标记的表达，研究氧气浓度在21%至0.1%的范围内，hMSCs的生长情况。发现0.1%的氧气含量最能反映hMSCs在活体内的真实状态。在这种条件下，移植之后的细胞，显现出线粒体活性的高度抑制。在体外实验中，0.1%的氧气浓度是唯一可以诱导缺氧标记物表达，并显著下调线粒体活性。研究结果表明，0.1%的氧气含量**地反应出hMSCs在活体状态下在组织工程构建
-
ThermoInspector红外热成像监测方案
作者：德尔塔 日期：2022-04-20
1 方案简介 ThermoInspector是用于热监控、分析和评估的自动化检测系统。可用于材料（如塑料、金属等）、生物、化学过程等及相应制造业等领域的工控、安防、质量控制监测和过程监测控制，如焊接、加热、冷却、锻接、生物发酵等，可实时测量，记录和评估热信息，并与现有的机器控制系统和PLC配合使用。 ThermoInspector系统包含一个中央处理单元，同时可支持多达4台热像仪。所有热像仪均采用高灵敏度（优于0.03℃）红外热传感器，温度测量范围可达﹢2000℃。正由于这些非凡的特性，它可以连续测量和评估被测产品表面的热场，无论是塑料、金属还是生物材料。因此，本系统可以检查热特性，例如热梯度，最高或最低温度，以及评估温度沿热断面的分散情况，检查所选区域中温度上升的速度。 每个ThermoInspector系统均支持多相机热辐射测量、相机控制、调色板设置、温度范围设置，和定义其他更多功能。用户可选择不同分辨率相机：640×512、336×256、160×128，也可选择不同焦距镜头。 2 主要技术特点 n 全套完整红外热成像视觉方案 n LWIR640px、336px、160px分辨率可选 n 即插即用式安装和简易设置 n 强大的全屏可视化操作 n 图形、表格、统计数据、OK/NOK指示灯 n 8x数字输入输出接口，4x以太网端口 n 通过以太网线和24V直流电供电 n IP65防护等级和触摸屏保护 n 温度范围-25°C～150°C, -40°C °C～550°C，最高可选2000°C 3 两种强大的中央处理单元 3.1 触摸屏中央控制单元 n 工业化一体机解决方案 n 前面板IP65防护等级 n 快速简易安装 n VESA接口 n 全HD触摸屏显 n 4路PoE以太网端口 n 报警数字输出 n 独立输入触发器 n 24V DC输入电源 n 为PLC额外提供2路以太网口 n 串行通信 3.2 无源中央控制器 ThermoInspector中央控制器使用无源控制器版本节省尺寸和成本，并采用与触摸屏类型相同的性能和接口。用户可以使用带键盘的全高清液晶显示器进行系统配置集成。尺寸仅有26×22×8
-
FAO通路通过抑制失巢凋亡促进结肠直肠癌细胞远端转移
作者：德尔塔 日期：2022-04-20
中山大学附属肿瘤医院肿瘤研究所徐瑞华教授长期从事消化道肿瘤个体化**及抗癌药物研究。该课题组利用NuRNA™ Human Central Metabolism PCR Array研究发现在非贴壁的结直肠癌细胞中，脂肪酸氧化（FAO）通路被激活。而在转移的肿瘤中，CPT1A表达上调，由CPT1A介导的FAO通路激活，通过调控氧化还原稳态抑制其失巢凋亡，促进非粘附的CRC细胞增殖存活。该研究成果发表在学术期刊Oncogene（IF:6.854）。 研究背景 结直肠癌（CRC）是最常见的肠胃肿瘤，由于其容易发生远端转移，使之成为肿瘤相关死亡的主要原因。远端转移是一个复杂的过程，具有侵袭性的癌细胞从原发肿瘤中脱离，进入血液和淋巴管，只有其中一些细胞可以从血管渗出，并定居在新的器官，形成远端转移。转移过程中大部分细胞，由于脱离原发灶，失去与胞外基质的粘附，导致细胞失巢凋亡。 FAO也称为β-氧化，是脂肪酸分解产生乙酰辅酶A的过程，同时生成ATP，NADPH，MADH和FADH2。肉毒碱棕榈酰转移酶1A（CPT1A）定位在线粒体膜上，是FAO中最主要的限速酶。已有文章报道，CPT1A与多种肿瘤进程相关。考虑到FAO参与了非粘附肿瘤细胞的代谢过程，作者猜测CPT1A在肿瘤细胞能量代谢调节和转移抑制中会是好的靶标。 研究思路： 该研究着重于CPT1A介导的FAO通路激活，通过维持氧化还原稳态，保护结直肠癌细胞免受失巢凋亡的影响。作者运用NuRNA™ Human Central Metabolism PCR Array分析了超低粘附生长的及正常贴壁生长的HCT15和HCT116两种细胞中代谢相关基因的表达。基因富集分析结果显示，两种细胞中FAO通路被明显激活。由于CPT1A是FAO通路的关键基因，作者因此集中于研究CPT1A在CRC转移中的作用。qRT-PCR结果显示，在悬浮的CRC细胞中，FAO通路中的关键基因明显上调。其后作者分析了临床病人中原位肿瘤和转移灶的样本，发现CPT1A在转移灶中表达上调。 为了进一步研究CPT1A在非粘附CRC细胞中的功能，作者建立了CPT1A敲低的稳定株，发现在细胞非粘附生长
-
老药新用研发思路与高内涵成像应用于中药筛选
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
老药新用或将迎来传统中药的春天 中药在我国的应用已有两千多年的历史，在人们防病治病过程中发挥了非常重要的作用。几千年来传统中药主要是直接用原药材或饮片配成复方，由病人自己制备汤剂服用，且此法目前仍在广泛应用。这种传统用药方法的缺点是显而易见的，如服用不方便、疗效不稳定、质量无法控制等。 随着提取技术的发展，出现了一系列的方法可以将中药组份提取出来，检测其功效，并进行纯化，用于治病机理的研究。最成功的例子就是青蒿素，这个被全世界关注的中药提取物，也因此，又一次将中国传统中药推向了世界的舞台，也为药物研究人员另辟蹊径，找到了一条新的药物研发思路⸺老药新用：针对已有中药的药效，研究其组份对**其他疾病的疗效。 灵芝可调节免疫系统，是肿APPLICATION NOTE瘤靶向佐剂；黄芪可**创伤、糖尿病、慢性疲劳；麦冬可滋阴养肺，**呼吸系统疾病。而研究表明从黄芪、灵芝、麦冬等中提取的多糖可诱导巨噬细胞像树突细胞分化，从而达到增强免疫力的功效。巨噬细胞是先天免疫系统中抗原呈递细胞的主要类型之一。作为一种特殊的噬菌细胞，它通过吞噬、抗原提呈、细胞因子分离、激活T、B细胞的适应性免疫应答发挥着重要的宿主防御作用。能够增强免疫力的中药植物有很多，但他们的治病机理却不完全相同，甚至有些有着其他功能，如降糖、降脂等，该如何从大量的天然药物提取物中得到有效成分，并探明机理呢？ 传统的药物研发方法由于速度慢、成本高，很难满足现代药物研究的需要，因此，药物研发的策略变为了对药物库进行全面、系统筛选的研究方式。当然，有一部分原因也是因为技术的进步让大规模的药物筛查成为了可能。这其中就包括能够分辨出各种疾病之间是否存在相似分子作用机制的大数据分析技术，能够据此预测出候选药物分子的计算机模型，以及能够利用各种细胞系进行大规模、高通量药物筛选的新型药筛系统，如高内涵成像分析系统。 图1 利用高内涵成像系统的活细胞追踪功
-
原代细胞传代培养
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
细胞培养过程中，传代是非常重要的环节，若操作不当会给细胞带来不可逆转的伤害，原代细胞因其培养难度高且传代次数有限，细胞消化的步骤需要格外细心与谨慎。美国ScienCell公司根据其丰富的原代细胞培养经验，总结出一套细胞消化的方法，有效降低了消化步骤对细胞的操作。现分享给大家： 1. 当细胞达到80-90%融合时需要传代培养。 2. 提前准备好多聚赖氨酸（PLL，货号0403）或纤维粘连蛋白（BPF，货号8248）包被好的培养瓶。 3. 将完全培养基，胰酶/EDTA消化液（T/E，货号0103），胰胰中和液（TNS，货号0113）和不含钙镁离子的DPBS（货号0303）加热至室温。我们不推荐用37度水浴加热试剂和培养基。 4. 用DPBS冲洗细胞。 5. 以T-75培养瓶为例，向培养瓶中加入8mlDPBS，然后加入2ml胰酶/EDTA消化液。轻轻摇动培养瓶保证细胞被胰酶/EDTA消化液完全覆盖。将培养瓶置于37度培养箱1-2分钟直到细胞变圆。在显微镜下观察细胞形态变化。 6. 在消化期间，准备一支50ml离心管加入5ml胎牛血清（FBS，货号0500）。 7. 将胰酶/EDTA消化液从培养瓶中吸出至50ml离心管中（一小部分细胞已消化下来），将培养瓶继续置于37度培养箱中1-2分钟（此时培养瓶中没有液体）。 8. 在孵化结束时，轻轻拍打培养瓶侧面使细胞脱离表面。在显微镜下检查以确保所有细胞已脱离。 9. 向培养瓶中加入5ml胰酶中和液，将消化后的细胞转移至50ml离心管中。再加入5ml胰酶中和液冲洗培养瓶，以保证所有细胞被收集。 10. 在显微镜下观察剩余细胞数量以确定是否收集成功，细胞数量应小于5%。 11. 以1000转/分离心收取的细胞悬液5分钟，然后在培养基中重悬细胞。 12. 细胞计数，然后将细胞以推荐的细胞密度接种在包被好的培养瓶中。 电话+微信13683626447
-
小白必看！RNA甲基化整体水平鉴定的方法汇总
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
RNA甲基化（RNA methylation）是一类表观遗传修饰，在已经发现的超过100种不同的RNA化学修饰中，主要有6-甲基腺嘌呤（N6-methyladenosine, m6A）、5-甲基胞嘧啶（C5-methylcytidine, m5C）和1-甲基腺嘌呤（N1-methyladenosine, m1A）。RNA甲基化在调控基因表达、编辑、稳定性及降解等方面扮演重要角色。早在20世纪70年代，人们已经在真核生物的mRNA和lncRNA中发现了m6A修饰。但受制于技术的局限性，无法开展m6A检测尤其是m6A定量分析，甚至是单碱基水平m6A的鉴定。随着高通量测序技术（NGS）的发展以及液相色谱灵敏度的提高，RNA甲基化整体水平的鉴定方法得到了长足的发展。 目前RNA甲基化整体水平的鉴定所用的技术手段包括液相色谱联用（LC-MS）、比色法以及Dot blotting等。下面就分别来介绍目前较为流行的RNA甲基化整体水平的鉴定方法。 图1. RNA甲基化的主要类型 1. LC-MS/MS LC-MS/MS在液相质谱的基础上采用串联质谱，能够获得分子离子峰和碎片离子峰，可对碱基同时进行定性和定量分析。第一步使用TRIzol提取完Total RNA后，对mRNA进行富集并去除rRNA。第二步是在37℃条件下，将200-300 ng mRNA用含有25 mM NaCl和2.5 mM ZnCl2缓冲液的核酸酶P1（2 U）消化2 h，然后加入NH4HCO3（1 M，3 μl）和碱性磷酸酶（0.5 U），37℃再孵育2 h后，将RNA从单链消化成单个碱基。第三步将样品稀释至50 μl并过滤，并将5 μl溶液注入LC-MS/MS中，根据出峰的保留时间面积计算各个碱基的含量。第四步进入质谱串联分析，单个核糖核苷酸会被离子化，同时被打断成五碳糖和嘧啶或嘌呤，在C18柱上通过反相超高效液相色谱分离核苷，使用Agilent 6410 QQQ三重四极杆LC质谱仪以正电喷雾电离模式进行质谱检测，根据出峰的保留时间计算m6A的面积。最后根据m6A和总A的比例就能算出m6A在mRNA上整体的甲基化程度。 图2. LC-MS/MS检测RNA甲基化水平示意图 2.比色法 比色法RNA甲基化整体水平鉴定也是我们云序生物的一款产品。相对于LC-MS/MS较
-
沃特世：隐藏在天然草本减肥药里的“非天然威胁”
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
前言： “天然草本”一直是减肥保健食品或膳食补充剂（诸如减肥茶、减肥咖啡）常用的推广亮点，然而随着国家对于保健品产品安全的监管愈发严格，我们时而能看到新闻报道中某某保健品被查出违法添加合成药物的报道。这些案件中，西布曲明是经常出现的违规添加药物。 西布曲明是一种用于肥胖症**的药物，主要是通过降低食欲、诱导发热从而增加能量消耗来实现肥胖症的**。但其副作用较大，可能诱发心脏病，需要专业医生医嘱和指导才能使用。因此，违规将这种药物添加到保健食品中，不仅是一种商业欺诈行为，更会给消费者带来巨大的风险。无论是美国FDA还是中国食药监局，都将西布曲明添加列为天然减肥保健品的重点监测项目。 由于市场上减肥产品品种多、数量大，由此带来的巨大实验室检测量需要一种比传统质谱方法更简便易用的方法来应对。接下来，将介绍一种基于Waters ACQUITY QDa质谱检测器的解决方案。相较于传统仅适用UV检测，该检测器对复杂样品的选择性更高，并且可提高分析的可信度，尤其适合分析无紫外吸收能力或紫外吸收较弱的化合物，省去衍生化处理，直接进行测定。同时，相较于传统质谱系统，QDa检测器使用简便，易于操作，能满足大批量的检测需求。 解决方案： 薄层色谱(TLC)是一种分析级分离技术，其样品分离过程发生在位于载体(如玻璃或塑料)上的开放式固定相上。高性能TLC (HPTLC)是一种定量分析技术，能够以半自动或全自动方式进行点样、板展开和分析。我们将TLC板直接连接到质谱检测器离子源入口，以使用ACQUITY QDa对TLC分离的化合物进行确认。称取200 mg“生源坊”减肥产品(天然草本产品)的胶囊内容物并溶解于10 mL甲醇中。涡旋混合30 s使样品均质化，然后在室温下置于超声水浴中提取10 min。在25 °C下以2750 RCF离心10 min，收集上清液用作检测溶液。 用甲醇将购自Fluorochem(英国德比郡)的西布曲明参比物质配制成0.785 mg/mL 的溶液。利用TLC自动进样器4将5 µL样品和2 µL标准品点样到HPTLC Si 60
-
离心机及其转子的种类，你了解多少
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
离心机是生物学实验中必不可少的仪器，看似通用的仪器，却是有许多学问的，实验操作中我们需要了解离心机知识，能够合理利用它而更稳定地为我们的实验服务。 离心机作为一种实验室通用仪器，几乎每个实验室都会配置一到两台甚至数台。大家对其并不陌生，我们整理了一些关于离心机及其转子种类的资料分享给大家。 一、离心技术的基本原理 1、离心力（force, F） F = m * a = m * ω2r2 a：粒子旋转的加速度 m：粒子的有效质量，g为单位 ω：粒子旋转的角速度，弧度/s为单位 r：粒子的旋转半径，cm为单位 2、相对离心力（relative centrifuge force, RCF） 通常离心力常用地球引力（g）的倍数来表示，因而称为相对离心力（RCF）。常用数字×g来表示，例如13000g表示相对离心力为13000。相对离心力指在离心场中，作用与颗粒的离心力相当于地球重力的倍数，单位是重力加速度g（980cm/s2）。 RCF = ma/mg = mω2r2/mg = ω2r2/g ∵ω = 2π× （rpm）/60 ∴RCF = 1.119 × 10-5 × （rpm）2r rpm：revolutions per minute为每分钟转数 由上式可知，只要给出旋转半径r，则RCF和rpm之间可以相互换算。 由于转头的形状及结构的差异，每台离心机的离心管从管口至管底的各点与旋转轴之间的距离是不一样的，所以在计算时规定旋转半径均用平均半径rav代替，即最大半径rmax和最小半径rmin的平均值。 一般，低速离心时常以转速rpm来表示，高速离心时则以g表示。报告离心条件时使用RCF比rpm要科学，因为它可以真实地反映颗粒在离心管内不同位置的离心力及其动态变化。 WIGGENS离心机均有RPM和RCF双显示功能，操作者可以一目了然的看到转速和离心力。 二、离心机的种类 离心机按用途分为工业用离心机和实验用离心机。后者根据功能又分为制备性离心机和分析性离心机。制备性离心机一般用来分离各种生物材料，分离的样品量比较大，也是大多数科研实验室配备的离心机种类。分析性离心机常用来研究纯的生物大分子和颗粒的理化性质，一般有光学
-
DNA图谱中的峰信号，究竟受到哪些因素的影响？
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
谈论混合DNA图谱分型技术 DNA图谱中的峰信号，究竟受到哪些因素的影响？ 1. PCR扩增效率（Amplification efficiency）； 2. 模板量(Template)； 3. 降解系数(Degradation)； 4. 扩增子的分子量(molecular weight)； 5. 等位基因类型（Heterozygote or Homozygote）； 6. 位点特异性（Locus）； 假设有如下图谱，贡献者为2，实际分型如下表 如果不考虑其他因素，分型的图谱应该如下： 1. 模板量：contributor 1>contributor 2 2. 降解因素：contributor 1> contributor 2 3. 扩增效率：Locus2 > Locus 1 4. Stutter 5. 模拟结果 STRmix生物模型考虑到了所有相关因素： 如何将生物模型应用在图谱的拆分中？ MCMC（马尔科夫链-蒙特卡罗算法）产生于19世纪50年代早期，是在贝叶斯理论框架下，通过计算机进行模拟的蒙特卡洛方法。 蒙特卡洛方法的实质是通过大量随机试验，利用概率论解决问题的一种数值方法。马尔科夫链是指生成随机数列的一种方法。 MCMC是一种简单有效的计算方法，在很多领域到广泛的应用，如统计生物学、贝叶斯(Bayes)问题、计算机问题等。 MCMC通过将随机生成的数值与之前的数值进行比较，通过检测是否与正确值更接近，来判断下一步是接受还是重新生成一个随机值，循环往复，最终找到最接近正确值的区域。云算GPM系统将这个过程分为两个部分，pre-burn in 和post-burn in 分别计算10万次和5万次，最终找到正确的解释。 MCMC结合系统的生物模型，具体的工作方式如下： 目前云算GPM DNA混合图谱分析系统的客户数量已经近100个，主要分布在北美、欧洲，成为目前最受欢迎的混合图谱分析系统之一。
-
脐静脉内皮细胞相关实验应注意哪些事项
作者：德尔塔 日期：2022-04-19
脐静脉内皮细胞作为科研工作者很多相关实验要用到的产品在近年来受到了市场的热烈追捧。而进行相关实验的前期准备和对脐静脉内皮细胞产品的选择及处理都是尤为重要的，这需要消费者在各个方面都要做到谨慎而严密。下面小编就为各位介绍一下脐静脉内皮细胞相关实验应注意哪些事项。 一、注意做好实验前准备 科研工作者在做脐静脉内皮细胞相关实验的时候应该做好充分的实验前准备，这要求实验者拥有专业的实验室和合格的实验环境以及专业的实验设备，这些条件的满足是保证消费者的相关实验得到**结果的前提条件。 二、选择质量过硬的脐静脉内皮细胞 众所周知脐静脉内皮细胞是一种需要专业培育和严格技术把关的实验性产品，品质好纯度越高的脐静脉内皮细胞在进行实验的时候能够获得越好的试验效果和反馈。所以消费者们在进行相关实验的时候应该选择专业的脐静脉内皮细胞公司所培育的产品，其品质更可靠稳定。 三、注意脐静脉内皮细胞的保存 同时脐静脉内皮细胞作为专业的实验产物在运输和保存方面也要做到周全严密，一般情况下脐静脉内皮细胞都是通过干冰保存运输到消费者的手中的，消费者要注意在收到产品之后应该将脐静脉内皮细胞放入质量较好的液氮中保存，避免环境其他物质对其产生破坏而影响实验效果。 可见人们在进行专业而受欢迎的脐静脉内皮细胞相关实验的时候，首先应该针对脐静脉内皮细胞做好充分而专业的实验前准备，同时选择质量过硬的脐静脉内皮细胞并注意按照专业要求对其进行液氮保存，这样才能从实验体和实验流程上都充分保障最终的实验效果。电话13683626447
咨询热线
18133906270
德尔塔官方微信