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心得体会:组织样本的western blot,这十点需要注意
作者:德尔塔 日期:2022-03-31
利用组织样本来进行Western blot,这是许多实验室常常开展的工作。不过,若是想获得重复可靠的印迹结果,也绝非易事。在此,Bio-Rad的专家贡献了一些经验,可以帮助您获得清晰的图像和可靠的数据。 1. 快速处理组织 使用干净的工具来收集和处理组织样本。为了去除可能影响蛋白稳定性的污染物,用预冷的中性缓冲液简单洗涤。洗涤后,在液氮中快速冷冻组织,以便保留蛋白的结构和特征,比如翻译后修饰(PTM)。组织样本可保存在冰上,立即匀浆处理。若保存在 –20°C,蛋白仍然有可能降解,因此组织样本要放在–80°C长期保存。 2. 精心挑选裂解液 在选择jia的裂解缓冲液时,应考虑pH值、离子强度、去污剂和变性剂类型等因素。放射免疫沉淀分析缓冲液(RIPA)是广泛使用的裂解液。同时,在选择过程中也要考虑目标蛋白的定位,例如,细胞质蛋白建议选用Tris-HCl裂解液,而核蛋白则首xuan RIPA。在富集各个组分的低丰度蛋白时,可能需要对组织组分进行预先分离。裂解液的用量取决于组织的大小/重量;缓冲液与组织的比例对确保有效裂解很关键。 3. 选择破碎方法 与细胞相比,组织需要更剧烈的破碎方法,如匀浆技术。为了进一步解离组织并剪切细胞DNA,可能需要对样本进行超声处理。这一步要避免起泡,因为它会降低回收率。同时,脂质会影响western blot的质量,要尽量去除。从植物组织中提取蛋白也颇具挑战性,因为它们富含蛋白酶,还含有大量可能干扰蛋白提取的代谢物。您必须针对特定的植物组织来优化提取过程。 4. 抑制蛋白降解 细胞膜的破坏会释放出可降解蛋白质的酶。为了限制蛋白酶的活性,可以向缓冲液中加入尿素等强变性剂,不过这些条件可能会影响某些蛋白质的完整性,因此,裂解液中通常含有蛋白酶抑制剂混合物。常用的蛋白酶抑制剂包括PMSF、抑肽酶、亮抑酶肽和胃蛋白酶抑制剂。 SUMO化蛋白的鉴定可能特别有难度,因为去除SUMO的异肽酶存在,并且通常只有一小部分蛋白被SUMO化。为了保留SUMO化,建议在裂解液中加入异肽
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鱼精蛋白的纯化介绍
作者:德尔塔 日期:2022-03-31
鱼精蛋白的提取:成熟精巢组织-均浆-硫酸酸解-NACL溶液提取-四层纱布过滤-加乙醇沉淀杂蛋白-离心-上清液-加TCA溶液沉淀-离心-鱼精蛋白硫酸盐。鱼精蛋白的纯化:分离提取后的鱼精蛋白必须纯化。利用鱼精蛋白的电荷和分子大小,分别采用聚丙烯酰胺等电聚焦和凝胶过滤层析手段对提取的鱼精蛋白粗提物进行纯化。在聚丙烯酰胺等电聚焦过程中,因鱼精蛋白是带正电荷的碱性蛋白质,所以聚集于碱性端,而处在中、酸性区域的蛋白质条带则为杂蛋白。聚丙烯酰胺等电聚焦完毕后,取胶板的碱性端,经扩散洗脱、透析除盐,然后进行凝胶过滤层析。当鱼精蛋白粗提物通过凝胶过滤柱时,溶液中的物质就按照不同分子量筛分开来,鱼精蛋白分子小,能够进入凝胶孔内,所以最后被洗脱出来。
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抗体和重组蛋白的使用及保存方法,有哪些?
作者:德尔塔 日期:2022-03-31
无论是保存还是运输,请避免反复冻融。反复冻融,冰晶会破坏抗体和重组蛋白的空间结构,导致蛋白变性形成多聚体和重组蛋白构象改变,从而降低抗体的结合能力,也加快了抗体球蛋白和重组蛋白的降解速度。抗体和重组蛋白保存得当与否,直接决定了抗体和重组蛋白的活性使用效果,如果保存得当,抗体和重组蛋白活性大部分都可以维持数年。 1. 收到抗体和重组蛋白后的操作 收到抗体和重组蛋白后(大部分抗体和重组蛋白是溶液态),请务必在 4℃,12000rpm,离心 3 分钟,再打开管盖进行分装、溶解和保存(如果抗体和重组蛋白体积小于 50?l,请延长离心时间至 5 分钟,以保证全部抗体和重组蛋白均离心下来,干粉状态的同样适用)。抗体和重组蛋白使用特制的储存管,只有在 12000rpm 离心 3 分钟,才能将附着在管壁或盖内的抗体和重组蛋白全部离心下来(即使是在 10000rpm 离心也会离心不完全,导致出现抗体和重组蛋白的量不足的现象)。请详细阅读说明书,并按照推荐的保存条件正确保存和使用抗体和重组蛋白。 2. 抗体和重组蛋白的长期保存 对于 大部分抗体和重组蛋白,比较合适的保存方式是:抗体分装后保存在 -20℃,重组蛋白分装后保存在 -80℃。 (1)分装可以降低反复冻融对抗体和重组蛋白活性的损害,同时也降低了由于多次从同一管中吸取抗体和重组蛋白造成的污染可能性。 (2)分装的量以一次实验用完为好,最少不能少于 10 ?l 每份。因为分装体积越小,抗体和重组蛋白的浓度越可能会受到蒸发以及管壁吸附的影响。 (3)复融后的分装抗体和重组蛋白如果一次用不完,将剩余母液保存在 4℃,避免再冻起来。 (4)抗体和重组蛋白工作液应该当天配制当天用完,4℃ 保存尽量不要超过 1 天。 (5)绝-对避免将抗体和重组蛋白保存在自动除霜冰箱中,将抗体和重组蛋白保存在冰箱里层,避免温度变化造成反复冻融。 3. 抗体和重组蛋白的短期保存 大部分 的抗体和重组蛋白收到后 4℃ 短暂保存 1~2 周,对抗体和重组蛋白活性没有影响。
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ICOS和IL-10协同作用以促进宿主-微生物群落的共生
作者:德尔塔 日期:2022-03-31
全基因组关联研究(GWAS)结果显示:ICOSLG(编码可诱导的共刺激配体ICOSL)是炎症性肠病的易感基因。 ICOSL与树突状细胞中模式识别受体信号的增强,CD4 T细胞诱导IL-10的产生以及针对特定抗原的高亲和力抗体的产生有关,所有这些都可能解释其参与胃肠道炎症的机制。 自美国阿拉巴马大学伯明翰分校的Craig L. Maynard团队发现:小鼠ICOSL缺乏会导致IL-10的大量产生以及CD4 T细胞的大量富集,在大肠近端区域尤为明显。成年小鼠ICOSL缺陷导致IL-10的分泌不足,诱导了严重的结肠炎症,而该症状可以通过甲硝唑**得以缓解。 ICOSL缺陷小鼠结肠粘液中IgA和IgG抗体水平下降,并且其对微生物抗原(包括来源于鞭毛藻科粘液相关细菌的鞭毛蛋白)的识别能力也有所下降。ICOSL缺乏加以及CD4特异性的Il10基因缺失进一步导致幼年小鼠自发性出现结肠炎。进一步,作者发现在这种情况下,母体获得的抗体和宿主衍生的抗体都有助于生命早期的抗体库的形成,这些库在早期则介导了肠炎的保护作用。 (图1,IL-10暂时性缺失加剧ICOSL小鼠的肠炎表型) 在这项研究中,作者首先比较了ICOSL缺陷型小鼠在IL-10短暂性缺失的情况下肠炎的发生与发展。通过抗Thy1.1抗体介导IL-10分泌细胞的清除,作者发现小鼠肠道中CD4效应细胞的水平明显上升,同时伴随着肠道炎症的严重性的增加。 (图2,肠道受影响抗体主要识别共生菌抗原) 进一步,作者发现ICOSL的缺失会导致分泌IL-10细胞的水平自然升高,然而肠道中识别共生菌的抗体水平则明显降低,该趋势在肠道近端更为明显。通过对抗体组成进行分析,作者发现这些受到影响的抗体分子主要负责识别肠道共生菌来源的抗原靶标。 在此基础上,作者给小鼠提供了抗体以及IL-10双重**。结果显示,两者结合使用能够大幅附近小鼠生命早期的肠道稳态。而上述抗体在自然状态下既来源于母体,同时也来源于宿主自身。 总的来说,上述发现揭示了ICOSL依赖的抗共生菌抗体和IL-10在大肠微生物群的适应性免疫调节中的伙伴关系。此
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IL36靶点药物细胞筛选模型药
作者:德尔塔 日期:2022-03-31
背景 IL-36和IL36R通路在人体的炎症反应中扮演着非常重要的角色,是炎症性疾病的重要因素,属于IL-1家族成员。IL-36亚家族由3种相似的激动性配体IL-36α、IL-36β、IL-36γ和IL-36拮抗性配体(IL-36 receptor antagonist, IL-36Ra)组成。IL-36通过IL-36受体(IL-36 receptor, IL-36R)和IL-1受体辅助蛋白(IL-1RAcP)介导细胞内信号转导。研究表明,编码IL-36Ra的基因突变失活会导致IL-36R信号失调,主要表现为弥漫型脓疱银屑病,表明IL-36在银屑病的皮肤炎症中有重要作用。进一步研究表明IL-36在其他器官的炎症性疾病中也有重要作用,IL-36和IL36R药物的开发成为炎症性疾病**重要方向。 IL-36α、IL-36β、IL-36γ在体内通过与 IL-36R结合,激活MAPK/NF-kB通路发挥促炎症作用,参与树突状细胞与T细胞的激活、成熟、极化、抗原提呈和刺激促炎因子产生等功能。而IL-36Ra是IL-36R受体拮抗剂,也可与IL-36R结合,可抑制和调节IL-36R活性。 在体内如IL-36RA发生突变而失活,导致IL-36信号无法被抑制,IL36R持续异常激活,诱导趋化因子和细胞因子的表达,会促进各种炎症细胞如巨噬细胞、嗜中性粒细胞以及Th17细胞的浸润和活化,以及IL-17、TNF和IL22的等细胞因子的释放,能进一步的上调皮肤细胞和树突状细胞表达IL36,进一步的放大炎症反应。最终皮肤表面招募大量中性粒细胞以及其他免疫细胞,形成成片的脓疱,导致脓疱型银屑病(General pustular psoriasis, GPP)。 IL-36靶点药物研发现状 针对IL36靶点的药物既可以通过结合IL-36R受体发挥作用,也可以通过结合IL-36α、IL-36β、IL-36γ起作用。目前已处于临床阶段的药物,主要通过靶向其受体IL-36R发挥作用,主要包括imsidolimab和Spesolimab等抗体药物。现有临床进展数据分析显示,IL-36R抗体对脓疱型银屑病GPP的**效果和安全性都比较理想,而对掌跖型银屑病的疗效一般。对于IL36靶点药物对其他炎症性疾病如溃疡性结肠炎、克劳恩病、特应性皮炎,鱼鳞病、化脓性
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转录因子调控原钙粘蛋白三维基因组机制研究取得重要进展
作者:德尔塔 日期:2022-03-31
在大脑发育过程中,人类860亿个神经元必须通过数万亿突触进行连接,形成复杂的神经网络,来完成准确的信号传递和感觉运动、认知信息的有效处理。大脑神经网络建立的失败或异常会导致神经发育和神经精神障碍。为了形成合适的突触连接,神经元进化出了自我回避机制来区分各自的独特性,以最大限度地形成功能性突触连接。脊椎动物和无脊椎动物的神经自我回避都需要细胞表面识别分子的独特组合表达来产生单个细胞表面的分子识别代码。在哺乳动物中,原钙粘蛋白家族的约60个基因的随机选择性表达产生的分子多样性,就为大脑中单个神经元提供了自我回避所需的细胞特异性。原钙粘蛋白是如何选择性地抑制部分成员而让其他成员表达的分子机制尚未被完全阐明。神经元特性的有序获得及维持需要下调转录抑制因子来解除神经特异性基因的抑制状态。抑制元件的沉默转录因子REST或者叫神经元限制性沉默因子,就是一个重要的神经基因的抑制因子,它能抑制神经前体细胞和非神经细胞中大量神经特异性基因的表达。REST是一个含有串联排列锌指结构域的锌指蛋白,通过串联排列的锌指结构域与人类基因组中成千上万的位点结合后,抑制相应基因的表达,REST是怎样识别人类基因组中成千上万的位点这一核心问题一直没有得到解决。吴强团队致力于原钙粘蛋白三维基因组表达调控的分子机制研究。在此研究中,该团队鉴定出原钙粘蛋白超级增强子和可变外显子中的REST结合位点的图谱。该研究通过一系列实验发现REST通过其串联排列锌指结构域,以碱基特异性反向平行的方式识别人类基因组中成千上万的位点,这种方向性的结合对于REST调控神经系统基因表达至关重要,进一步研究发现REST通过构象转换的方式来识别人类基因组中不同类型的结合位点,解开了人类基因组为什么具有不同类型的REST位点这个长久的未解之谜。人类基因组中有800多种转录锌指蛋白的基因,本研究的发现对于阐明锌指结构转录因子识别和构建人类基因组的机制具有重要意义。最后,该团队通过自
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细胞培养指南——技术和方案
作者:德尔塔 日期:2022-03-31
细胞培养指南——技术和方案 哺乳动物细胞组织培养技术指南。涵盖大量关于哺乳动物细胞系的维持、分裂和细胞保存的信息。请注意,所有细胞培养必须使用无菌技术在层流罩中进行。 1.引言 细胞培养是细胞和分子生物学中使用的关键工具,可以对细胞的生理学和生物化学进行建模。此外,细胞培养使研究人员能够确定药物和有毒化合物对细胞反应的影响。由于使用一批克隆细胞可获得一致和可重复的结果,细胞培养仍然是当今研究中使用最广泛的技术之一。 来自动物或植物的细胞在有利环境中的生长被称为细胞培养。不同的细胞有不同的培养要求,为了达到最佳的生长效果,可以通过培养基的选择和补充剂来满足。所用介质的作用是提供必需的营养物质(氨基酸、碳水化合物、维生素、矿物质)、生长因子、激素、气体(O2、 CO2),并调节物理化学环境(pH值、渗透压、温度)。 1.2 原代培养vs细胞系 原代培养是指在组织分离后直接进行培养的细胞。一旦这些细胞汇合,即会占据烧瓶中所有可用空间,此时就需要将它们转移到一个新的生长容器中进行传代或分割,这将为细胞提供更多的继续生长和扩展的空间。第一次传代后,原代培养现在成为所谓的细胞系。源自原代培养的细胞系寿命有限,这意味着它们在衰老之前只能分裂有限的次数。 由于细胞被传代,生长能力最强的细胞占优势,导致群体的基因型和表型一致。永生细胞系广泛用于细胞和分子生物学,以绕过衰老等问题。细胞可以通过多种不同方式转化并永生。自发地、化学地或病毒地。一旦转化,这些细胞就获得了无限分裂的能力,成为一个连续的细胞系。 1.3 贴壁细胞和悬浮细胞 细胞系可以是: 1.贴壁(贴壁依赖性)——贴壁细胞必须在附着于固体或半固体底物上时进行培养,通常需要胰蛋白酶法进行亚培养(更多信息请参见2.6)。 2.悬浮(与锚固无关)——悬浮细胞不需要固体生长底物,可以悬浮在培养基中生长。 2. 细胞培养指南 以下是细胞系培养的通用指南。所有细胞培养必须在微生物安
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夏季注意真菌感染
作者:德尔塔 日期:2022-03-31
盛夏已经过去,但是天气依旧潮湿、闷热,这样的气候环境助长了细菌、病毒特别是真菌的繁殖,是真菌感染的高发期。在夏季以及初秋,我们应该从哪些方面注意真菌感染呢? 1.皮肤真菌感染 潮湿、闷热的环境容易引发各种皮肤病,尤其是真菌感染导致的皮肤癣菌病。一般表现为水疱、瘙痒、脱屑等,并且有一定的传染性。如果不加注意可能加重病情,引起其他感染病。 2.食管真菌感染 食管也是会有可能被真菌感染即霉菌性食管炎,通常表现为吞咽困难和吞咽痛,后期病情加重可能会发生穿孔,导致吞咽痛加重且可出现上消化道出血。部分患者可能产生皮肤过敏、消化道过敏、呼吸道过敏等并发症状。发现类似情况应该尽快进行真菌检查。 3.肺部真菌感染 肺部真菌感染分为外源性和内源性,是由机体免疫力下降或直接吸入真菌孢子致病,临床无特异性表现。一旦确诊,应该对症**,同时保持所处环境干燥,注意通风,同时也要提高自身免疫力。 4.肠道真菌感染 肠道真菌感染主要是因为误食霉变的食物所致,夏季闷热,谷物易发霉,食用后很容易导致真菌感染性腹泻。常见的致病真菌有白色念珠菌和毛霉菌,多发于儿童。这就需要家长要多注意孩子的饮食,防止“病从口入”,也应该及时的检查和**。 5.手足真菌感染 手足癣也在夏季多发,且具传染性,临床分为角化过度型、浸渍糜烂型和水疱型三种,都是真菌感染引起的。一旦发现要及时用药**。在日常也要注意卫生,袜子勤换洗,并单独洗涤;保持皮肤干燥;尽量不去人多赤足的公共场所,防止再次感染。 夏季真菌感染高发期应该格外注意,如果感觉身体不适,应及时检查,真菌确诊可进行真菌镜检,使用三凯医学科技有限公司生产的真菌荧光染色液,可以将真菌染色,观察清楚,方便临床快速、准确的进行诊断。
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移液器通用带滤芯吸头品类规格知多少
作者:德尔塔 日期:2022-03-31
今日给大家带来 移液器通用带滤芯吸头的相关产品信息,帮助大家更好的认识到它的作用,以便更好地操作使用。 一、什么是移液器吸头,带滤芯吸头的作用? 移液器是生物研究中的实验仪器,其配件吸头在试验中的使用数量也非常巨大。市场上吸头基本上都是用聚丙烯塑料(化学惰性高,使用温度范围广的无色透明塑料)做的。不过,同样是聚丙烯,品质差别也会很大:高品质的吸头般都是用天然聚丙烯,而低廉的吸头则很可能用回收的聚丙烯塑料(这种情况下,我们多能说其主要成份是聚丙烯)。 除此之外,多数吸头在制造过程中还会加入少量的添加剂,常见的有: 1.显色材料。 在市场上俗称的蓝枪头(1000ul)和黄枪头(200ul),就是在聚丙烯中加入了相应的显色材料(我们希望是高品质的色母粒,而非低廉的工业颜料) 2.释放剂。 帮助吸头在成形后迅速与模具脱离。当然,添加剂越多,在移液过程中发生不受欢迎的化学反应的概率越高。所以好是不加添加剂!但由于对生产工艺要求比较高,完全不加添加剂的吸头在市场上凤毛麟角。 移液器吸头规格: 10ul/20ul/100ul/200ul/1000ul 二、吸头滤芯的作用: 吸头滤芯因为是次性滤芯吸头,使用过程中大的作用就是防止交叉污染:与其他包含可抑制酶促反应的添加剂的过滤器类型不同,本生供应的过滤的移液器吸头由纯净的原始烧结聚yixi制成。 疏水性聚yixi颗粒可防止气溶胶和液体被吸入移液管体内。 吸头滤芯的过滤器是机器加载的,以确保在制造和包装过程中完全不受影响。 经认证,它们不含RNase,DNase,DNA和热原污染。 此外,所有滤嘴在包装后都经过辐射预灭菌,以增强对生物样品的保护。 使用滤芯吸头可以用作防止移液器被样品损坏,大大提高移液器的使用寿命。 什么时候使用吸头滤芯: 何时使用吸头滤芯技巧? 必须在所有对污染敏感的分子生物学应用中使用过滤器移液器吸头。 滤芯吸头有助于减少烟雾形成的可能性,防止气
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细胞培养产品须知
作者:德尔塔 日期:2022-03-31
细胞培养的培养器皿有培养瓶、培养带以及培养箱,今天主要来讲讲培养袋的一下相关信息,便于大家操作使用。接下来就给大家举例如下一款细胞培养带的一下相应信息: 该产品为CORNING和KOHJIN联合推出的悬浮细胞培养袋,主要用于T细胞,NK细胞,NKT细胞等人体淋巴细胞的培养。 细胞培养袋结构示意图如下: 产品使用方法: 1.将细胞培养袋支架立于操作台上,确保台面无尖锐物品。 2.取50m注射器一个,拔出推塞,将注射器套筒插入培养袋支架上的圆孔内。 3.将培养袋A端螺口旋下,与注射器套筒连接。 4.加入待培养细胞及培养液。具体步骤如下图所示: 5.排除袋内空气。 6.旋紧培养袋A端螺口。 7.将培养袋放入培养箱。 8.需要取液或添加细胞因子时,拔下培养袋B端旋帽,使用注射器加液或取液。 产品描述: 该细胞培养袋是一种由特殊材料制作的能支持高密度细胞生长的细胞培养容器。 特点: 1.采用透明材质,可在显微镜下直接观察细胞形态。 2.气体交换面积大,与细胞培养瓶相比,可获得更大量的细胞。 3.密封性强,可降低细胞污染与操作人员感染概率。 储存方法: 室温保存 应用: 主要适用于培养悬浮细胞,目前主要用于T细胞,NK细胞,NKT细胞等人体淋巴细胞的培养。
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琼脂糖的那些事
作者:德尔塔 日期:2022-03-31
琼脂糖是线性的多聚物,基本结构是1,3连结的β-D-半乳糖和1,4连结的3,6-内醚-L-半乳糖交替连接起来的长链 。琼脂果胶是由许多更小的分子组成的异质混合物。琼脂糖在水中一般加热到90℃以上溶解,温度下降到35-40℃时形成良好的半固体状的凝胶,这是它具有多种用途的主要特征和基础。琼脂糖凝胶性能通常用凝胶强度表示。强度越高,凝胶性能越好。 琼脂糖Agarose,缩写为AG,是琼脂中不带电荷的中性组成成份,也译为琼胶素或琼胶糖。琼胶糖化学结构是由1,3连结的β-D-半乳糖和1,4连结的3,6-内醚-L-半乳糖交替连接起来的长链构成 。 来源于红藻的多糖,其主要成分为多聚半乳糖,其中约70%为琼脂糖,30%为支链琼脂糖。琼脂糖具线型结构,由D-半乳糖和3,6-脱水半乳糖通过β-1,4和α-1,3连接交替形成重复双糖单位。支链琼脂糖则从β-1,3键分出另一链。 用热水从海藻抽提的物质约含40%琼脂。市售的琼脂(俗称洋菜)常呈片状或疏松绳索状,通常作食用胶质,药物包装剂或细菌培养基使用。纯制的琼脂糖常在生物化学实验室中,作为电泳、层析等技术中的半固体支持物,用于生物大分子或小分子物质的分离和分析。 琼脂,它的英文名为agar。这个词来源于马来语的agar-agar,意思是胶状物。又名琼胶、菜燕、冻粉,是一类从石花菜及其它红藻类(Rhodophyceae)植物提取出来的藻胶(phycocottoid),在我国及日本已有三百多年(1658年)的历史。中国人亦称为洋菜或冻粉。日本人称之为寒天(kanten),因为它在冬天收获。中国台湾人叫它菜燕,和燕窝的质感差不多。韩国人的叫法是??(不知道啥意思)。 琼脂作为一种独特的食品在我国已经有悠久的历史。它是从大型海洋藻类石花菜、紫菜、江篱等提取分离制成的,广泛应用于食品和生化等行业。我们常吃的果冻、冰淇淋、糕点、软糖、罐头、八宝粥中都含有琼脂。我国的山东、福建、广东、海南等拥有优越的海洋资源和气候条件,适宜大型海洋藻类的生长,是生产琼脂的主要地区,产品远销世界各地。 琼脂是由琼脂
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二甲基亚砜的信息检索
作者:德尔塔 日期:2022-03-31
二甲基亚砜的定义是怎样的呢?二甲基亚砜(DMSO)是一种含硫有机化合物,分子式为(CH3)2SO,常温下为无色无臭的透明液体,是一种吸湿性的可燃液体。具有高极性、高沸点、热稳定性好、非质子、与水混溶的特性,能溶于乙醇、丙醇、苯和氯仿等大多数有机物,被誉为"万能溶剂"。 其存在的物化性质有: 1.无色粘稠液体。有吸湿性。能与水、乙醇、丙酮、乙醛、吡啶、乙酸乙酯、苯二甲酸二丁酯、二恶烷和芳烃化合物等任意互溶,不溶于乙炔以外的脂肪烃类化合物。二甲亚砜与酰氯类物质如氰尿酰氯、苯酰氯、乙酰氯、苯碘酰氯、亚硫酰氯、硫酰氯、PCl3等接触时,发生激烈的放热分解反应。与硝酸结合,生成(CH3)2SO·NHO3。 2.无色液体,可燃,几乎无臭,带有苦味。该品是极性高的有机溶剂,可与水以任意比例混合,除石油醚外,可溶解一般有机溶剂。在20℃时能吸收氯化氢30%(重量);二氧化氮30%(重量);二氧化硫65%(重量)。有强烈吸湿性,在20℃,当相对湿度为60%时,可从空气吸收相当于自身重量70%的水分。该品是弱氧化剂,不含水的二甲基亚砜对金属无腐蚀性。含水时对铁;铜等金属有腐蚀性,但对铝不腐蚀。对碱稳定。在酸存在时加热会产生少量的甲基硫醇;甲醛;二甲基硫;甲磺酸等化合物。在高温下有分解现象,遇氯能发生激烈反应,在空气中燃烧发出淡蓝色火焰。 化学性质:二甲亚砜还原生成甲硫醚。受强氧化剂作用氧化成二甲砜; 2.二甲亚砜与酰氯类物质如氰尿酰氯、苯酰氯、乙酰氯、苯碘酰氯、亚硫酰氯、硫酰氯、PCl3等接触时,发生激烈的放热分解反应。与硝酸结合,生成(CH3)2SO·NHO3。与碳酸钡作用可使二甲亚砜再生。与浓HI作用,生成二甲硫磺化合物。 3.二甲亚砜有吸水性,用前需要进行干燥处理。 其基本用途在于因氯化铬,MnCL4等过渡金属卤化物与KCl,氯化钠等卤化物在DMSO中有一定溶解度,故可以应用在有机电化学中。 二甲基亚砜广泛用作溶剂和反应试剂,特别是丙烯腈聚合反应中作加工溶剂和抽丝溶剂,作聚氨酯合成
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血清的保存方法
作者:德尔塔 日期:2022-03-31
血清的保存应该注意以下几点:(1)生物学实验中需要长期保存的血清储存于-20℃ - 70℃ 低温冰箱中。4℃冰箱中保存时间切勿超过1个月。由于血清结冰时体积会增加约10%,因此,血清在冻入低温冰箱前,预留体积空间,否则易发生污染或玻璃瓶冻裂。(2)热灭活是指56℃,30分钟加热已解冻的血清。生物学实验中加热过程中须规则摇晃均匀。此热处理的目的是使血清中的补体成分(complement)灭活。除非,一般不建议作此热处理,因为热处理会造成血清沉淀物显著增多,而且还会影响血清的质量。补体参与反应有:细胞毒作用,平滑肌细胞收缩,肥大细胞和血小板释放组胺,增强吞噬作用,促进淋巴细胞和巨噬细胞发生化学趋化和活化。(3)瓶装血清解冻需采用逐步解冻法:-20℃ 至 -70℃ 低温冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1天。然后移入室温,待全部溶解后再分装。生物学实验中在溶解过程中需不断轻轻摇晃均匀(小心勿造成气泡),使温度与成分均一,减少沉淀的发生。切勿直接将血清从-20℃进入37℃解冻,这样因温度改变太大,容易造成蛋白质凝集而出现沉淀。(4)一般厂商提供的血清为无菌,无需再过滤除菌。如发现血清有悬浮物,则可将血清加入培养液内一起过滤,切勿直接过滤血清。(5)血清中的沉淀物 絮状物:主要是血清中的脂蛋白变性及解冻后血清中纤维蛋白造成,这些絮状物不会影响血清本身的质量。可用离心3000rpm, 5分钟去除,也可不用处理。显微镜下"小黑点":经过热处理过的血清,沉淀物的形成会显著增多。有些沉淀物在显微镜下观察象"小黑点",常误认为血清受污染。一般情况下,此小黑点不会影响细胞生长,但如果怀疑血清质量,则应立即停止使用,更换另一批号的血清。(6)切勿将血清在37℃放置太久,否则血清会变得浑浊,同时血清中的有效成分会破会而影响血清质量。
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【综述】肝星状细胞 与肝纤维化、肝癌研究相关性
作者:德尔塔 日期:2022-03-31
肝星状细胞(Hepatic Stellate Cells, HSCs)作为肝脏合成细胞外基质的主要细胞群,不仅能分泌蛋白多糖、糖蛋白等细胞外基质成分,还能合成一定量的胶原酶以维持正常的基底膜结构,还能通过其突起的收缩参与肝窦的微循环调节。肝损伤导致的HSCs的激活、增殖及转化是肝纤维化过程中的重要环节,因此肝星状细胞在探讨新的抗肝纤维化**措施,对降低慢性肝病的发生率和死亡率具有不可估量的理论意义。 图1.肝纤维化与肝脏类疾病 肝星状细胞是肝脏特有的一种非实质细胞,约占肝脏细胞总数的8%-13%,占肝非实质细胞总数的33%,占肝脏总体积的1.4%,为单层的贴壁生长型细胞,细胞呈星形,纺锤形,多边形,梭形,有伪足,细胞质内含较多脂滴,亦称肝贮脂细胞。肝星状细胞位于肝窦内皮细胞(SEC)和肝细胞之间Disse腔(图2),是细胞外基质(ECM)的主要来源细胞。 图2.正常和静息状态下HSC 在正常肝组织中HSC常处于静息状态。但是当肝脏受到物理、化学和微生物感染等病理因素刺激时HSC就会发生增殖活化转变为其活化形式—肌成纤维细胞(MFB),表现出明显的细胞增殖、收缩性增加、大量表达α—平滑肌动蛋白(α—SMA),胞浆中视黄醛减少和细胞膜受体增多等活化特点。 图3.HSC分泌细胞因子参与肝纤维化调节 肝纤维化是机体的一个创伤修复反应,损伤区域被大量的细胞外基质包裹,而HSC是细胞外基质的主要来源,所以HSC活化是肝纤维化的中心事件。HSC的激活为抗纤维化提供了潜在靶点**肝纤维化。另外HSC可以被肿瘤细胞诱导在其周围产生大量的生长因子、细胞趋化因子,有利于肿瘤细胞的增殖和侵袭(图3)。HSC可以分化为具有很强迁移能力的肌成纤维细胞,为肿瘤细胞的生长提供所需的微环境。目前,临床上单纯运用化疗药物**肝癌效果尚有限,相信随着肝星状细胞研究的更加深入,不久将来,将手术和肝星状靶向**相结合的综合**方法将会为临床肝癌的的**带来福音。 图4.大鼠HSC(来源:齐氏生物) 对HSC的**是阻止肝脏疾病纤
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天津大学张雁教授团队揭示噬菌体基因组中二氨基嘌呤取代腺嘌呤的广泛途径
作者:德尔塔 日期:2022-03-31
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