【产品介绍】：

德国IBL肺炎衣原体IgM ELISA试剂盒 (货号：RE57051)   1、 前言说明 衣原体是一种不能运动的革兰氏阳性菌，同时也是一种强制性的胞内寄生菌，而且这种细菌可在其寄主细胞的胞浆内形成明显的包涵体。这种包涵体在光学显微镜下很容易看到。目前人们知道有三种不同的衣原体对人具有至病性，它们是：沙眼衣原体、肺炎衣原体和鹦鹉衣原体，还有一种对动物具有至病性的衣原体（兽类衣原体）。沙眼衣原体是世界上性传播疾病最流行的传播因子（4000-5000万例），并且此传染病的数量还在不断增加。感染了沙眼衣原体的孕妇可以在分娩时将病毒传染给胎儿，从而导致胎儿患结膜炎或肺炎。 衣原体感染不**的个体会导致慢性输卵管炎，并且很有可能出现宫外孕或不孕。在男性中，沙眼衣原体是导致非淋球菌性尿道炎的主要因素。在衣原体感染中，频繁性的无症状隐性阶段是一个很严重的问题，因为它可能启动慢性疾病。在许多例子中，原发性感染都没有被发现，之后只能检测到由持续上升病原体而引起的后遗症。 种类 感染机制 疾病 诊断方法 沙眼衣原体 直接传播或性传播：主要感染部位是眼或泌尿生殖道黏膜 淋巴性肉芽肿，沙眼，新生儿或成年包涵体性结膜炎，宫颈炎、输卵管炎、尿道炎、附睾炎、直肠炎及新生儿肺炎。 血清学 肺炎衣原体 呼吸道黏膜浸润 呼吸道疾病 有争议的疾病：心内膜炎，冠心病 心脏病 PCR 鹦鹉衣原体 吸入受染禽类的粪便；接触了受染禽类的内脏。 饲鸟病（鹦鹉热） 镜检 可通过以下方法来检测是否感染： n        镜检：Giemsa染色 n        PCR n        血清学：用ELISA检测抗原            用IF、EIA或ELISA检测抗体 2、应用范围 IBL公司的肺炎衣原体IgM ELISA试剂盒可用于人血清中抗肺炎衣原体IgM抗体的定性检测。 3、实验原理 抗肺炎衣原体IgM抗体的定性免疫酶检测利用的是ELISA技术。包被板上预先包被了能结合样本中相关抗体的肺炎衣原体抗原。洗板以除去未结合的样品物质，之后加入辣根过氧酶标记的抗人IgM。之后，酶标物会结合到捕获的肺炎衣原体特异性抗体上，加入能产生蓝色反应产物的TMB底物液后，如果显示蓝色则可知已形成免疫复合物。所显示颜色的强度与样品中肺炎衣原体特异性IgM抗体的量成正比。加入硫酸以终止反应,以便产生黄色的终点颜色。用一酶标仪在450m处读取OD值。 4、材料 4.1试剂盒成分 1)      肺炎衣原体包被板（IgM）：12×8，可拆，微孔中包被了肺炎衣原体抗原，真空密封。                            2)      IgM样本稀释液：1瓶，100ml，用于样品的稀释，内含抗人IgG，PH为7.2±0.2，即用，绿色白盖。 3)      终止液：待用硫酸，1 瓶，15ml，内含硫酸，0.2mol/l，红盖。              4)      浓缩洗涤液（20X）：1瓶，50ml，PH为7.2±0.2 ，白盖。           5)      肺炎衣原体抗IgM酶标物：1瓶，20ml，内含过氧化物酶标记的兔抗人IgM，红色黑盖。即用。 6)      TMB底物液，1 瓶，内含TMB，黄盖，15ml，即用。 7)      肺炎衣原体IgM阳性质控，1 瓶    ，黄色液体，2ml，红盖 8)      肺炎衣原体IgM临界质控，1 瓶    ，黄色液体，2ml，绿盖 9)      肺炎衣原体IgM阴性质控，1 瓶    ，黄色液体，2ml，蓝盖        4.2 实验所需材料和器材 1)      酶标仪，可在450/620测吸光度值 2)      37℃孵化器 3)      手工或自动微孔清理设备 4)      10µl和1000µl的取样吸头 5)      旋涡混合器 6)      去离子水或蒸馏水 7)      试管 8)      记时器 5．样本贮藏和准备： 5.1用人血清做为样本。如果检测在样品收集后24小时内进行，则样品应当存放与2-8℃的环境下；否则应当将其贮存于-70℃—20℃的环境下。如果样品被冻存过，则在检测之前应小心解冻样品，避免反复冻溶。 5.2样品的稀释 检测前，所有的每样品都应按1：100的比例当用IgM样品稀释液进行稀释。在10µl样品中加入1ml IgM样品稀释液，旋涡混合器上完全混合。阳性质控和阴性质控不需要稀释，待用。 6．实验步骤： 实验开始之前仔细阅读操作步骤，严格遵守操作步骤才可以获得可靠的实验结果。如果这实验是在ELISA自动系统上进行，为了避免洗板的影响，我建议在洗板步骤时，洗板3次改成洗板5次，洗涤液从300µl增加到350µl。实验开始之前，应当在试剂盒提供的结果单上标记好所有的样品和质控品。取适当数量的板条置于板架上。 请至少做以下几个孔： 1孔（例A1）做空白对照孔 1孔（例B1）做阴性质控 2孔（例C1+D1）做临界质控 1孔（例E1）做阳性质控 如果有必要的话，我们建议您质控和病人样品做双份检测。照说明书给出的实验步骤进行操作，并避免不同步骤之间的时间隔无明显差别。加每一质控品和样品时都应当用新的取样吸头。把恒温箱调至37 ± 1℃ 1)      加100µl质控品或已稀释样本于相应反应孔中，留A1孔做空白。 2)      盖板 3)      37℃±1℃下温育60+5分钟。 4)      温育之后，移去粘性金属板，弃去孔内反映液，用300µl洗涤液洗板3次，每次洗板循环间的时间间隔应大于5秒，并在吸水纸上拍干。 注意：洗板很重要，如果洗板不充分，则检测结果会不精确，而且会错误的提高OD值。 5)      除空白孔外，加100µl 肺炎衣原体抗IgM酶标物于各孔中，盖板。 6)      37℃±1℃下避光温育30+2分钟。。 7)      重复步骤4。 8)      每孔加100µl TMB底物液。 9)      室温避光温育30分钟。 10)  以加底物一样的顺序和速度在每孔中加入100µl终止液。 11)  30分钟内在450nm读吸光度。 7．结果判定： 1）必须符合以下条件, 实验结果才能成立. 空白孔A1：OD＜0.100 阴性质控孔B1：OD＜0.200 临界质控孔C1和D1：OD值界于0.250---0.900 阳性质控孔E1：OD大于或等于临界 2）结果计算：cut-off值是临界质控检测结果的平均值 例如：临界质控OD值1.44+临界质控OD值0.42=0.86/2=0.43 Cut-off值=0.43 3）结果解释： 如果样品的OD值比cut-off值高10%以上则认为此样品呈阳性 如果样品的OD值在比cut-off值高或低10%的范围内，则认为次样品是可疑的。（灰色区域）建议2-4周后用新鲜样品重复检测，如果结果仍位于灰色区域内，在认为此样品为阴性。 如果OD值比cut-off值低10%以上则认为此样品呈阴性。 4）实验结果的单位 = [Units = U]  病人的（平均）OD值x 10                      Cut-off值 = 28 U ( Units)例如：1.204 x 10                         0.43 临界值：10U 灰色区域：9-11U 阴性：＜9 U 阳性：＞11 U 本译文仅供参考，详情请以原文为准。