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原代细胞骨架的染色方法

发布时间:2022-04-30     作者:德尔塔   分享到:

【产品介绍】:

原代细胞骨架的染色方法   微丝的显示方法步骤: 1.    用PBS液漂洗盖片培养的原代细胞3次,每次30s; 2.    用2%的甲醛/PBS液固定原代细胞3min; 3.    用0.5%的三硝基甲苯/PBS处理3次,每次10min; 4.    PBS漂洗3次; 5.    用罗丹明(rhodamine)标记的鬼笔环肽(phalloidin)(1:10)室温中反应15min; 6.    PBS漂洗3次; 7.    60%甘油+荧光防淬剂封片; 8.    荧光显微镜观察;   微管的显示方法: 1.    用PBS液漂洗盖玻片的原代细胞3次,每次30s; 2.    在室温中用3%甲醛/PBS固定20min; 3.    用PBS液再漂洗3次,每次1min,最后用滤纸吸干多余的PBS液; 4.    投入冷丙酮中(-10—-20℃)7min; 5.    用PBS漂洗3次,每次1min,最后用滤纸吸干多余的PBS液; 6.    向直径6cm的干净碟皿中央滴一滴浓度为0.1—0.2mg/ml的一级抗微管蛋白抗体,令小盖片细胞面向下扣在抗体液上,覆以皿盖,于37℃温箱中放置45min—1h; 7.    向碟皿内匀速缓慢滴加PBS,令盖片浮起在液面,用镊子夹出,按步骤3处理; 8.    向干净碟皿中央滴一滴浓度为0.1—0.2mg/ml的荧光标记的二抗,其后操作按步骤6进行; 9.    按步骤7和3操作; 10.滴pH8.5的90%的甘油/PBS少许于载玻片上,把小盖片的原代细胞面覆在大盖片上; 11.将盖片置于荧光显微镜下观察;