【产品介绍】：

10x Genomic Visium空间基因表达解决方案（Visium Spatial Gene Expression Solution）在确定不同细胞群的同时保留空间位置，为细胞功能、表型和组织微环境中位置的关系提供了重要信息。该技术一经问世便受到了人们的广泛关注，而越来越多的研究成果也表明了空间转录组测序技术为广大科研工作者带来了前所未有的组织学研究深度。 在进行空间转录组研究时，实验样本的准备直接决定了研究的成败。如何高质量的准备组织样本呢？一起来看看这份秘籍吧。 秘籍1：组织样本要筛选  空间转录组研究的特点是基于空间物理位置的转录组学研究，所以组织样本的选择是该研究的前提条件。由于空间转录组捕获芯片的限制（6.5mmX6.5mm），组织样本最后上芯片的切片不能超过该面积范围。因此，在选择实验样本前，需要对进行研究的样本进行预实验。通过前期组织学检测，确认好样本的最佳取材位置，最合理组织大小。如果样本是较大的组织，可以在后续OCT包埋、切片过程中被分割（1mm切口的预冷刀片），避免深切口损伤组织。 秘籍2：样本保鲜很重要 空间转录组是针对转录组学的检测，因此，新鲜样本是保证RNA完整性的前提（后续RNA RIN值＞7）。将新鲜组织样本取下后迅速用预冷的PBC溶液或者生理盐水冲洗组织表面残留，然后用干净的纱布或吸水纸吸干液体（防止其他体液在组织表面形成冰晶，影响OCT包埋效果）。 组织冷冻与包埋过程 秘籍3：样本冻存不可少 空间转录组研究平台是基于冰冻样本（基于FFPE样本的空间测序须参照石蜡样本标准制备指南）进行研究的，所以在样本冻存前至少提前10分钟将异戊烷和液氮浴准备好（之所以用异戊烷而不直接用液氮进行速冻，是因为液氮沸点比较低，直接液氮处理可能在沸腾过程中使组织周围形成空穴，导致不同区域降温不同步而改变内部形态，甚至组织碎裂）。然后用镊子或者刮刀将新鲜组织转移到异戊烷中，使组织完全浸没且浸泡至少1分钟。冷冻后，可用镊子或者刮刀将组织转移到密封的预冷容器或者冻存管中，-80℃储存，或者进行OCT包埋。 秘籍4：OTC包埋需仔细 OCT包埋是用来为后续切片制作做准备。将预冷好的OCT填充入冷冻模具的底部（可做好标记，以确认组织方向），然后用镊子迅速将冰冻好的组织放入，并用OCT覆盖组织，使之完全包埋住。该过程应避免产生气泡。然后立即将冷冻磨具转移到碎干冰上。当OCT变得完全不透明时，说明包埋成功。当然，作为强迫症的你，也可以对组织进行修理，去掉多余部分，留下需要的组织块。最后，包埋好的组织块可放置于干冰上运输至-80°C进行储存。 OTC包埋前后对比 秘籍5：切片制备要适宜 做好冰冻组织包埋工作后，如果实验室有设备，可自行进行切片制备及相关组织学检测。以现有研究测试样本情况来看，大部分的样本切片厚度保持在10-20μm之间为宜。如果没有后续切片设备进行切片制备，可以直接将样本给我们，我们来进行后续的工作及空间转录组测序实验。我们会取OCT包埋样本的10张切片，用核酸试剂盒抽提RNA并通过RIN评估制备样本的质量，RIN>7的样本，建议做下游组织优化的实验。 以上就是空间转录组测序样本制备秘籍的全部内容了，你学会了吗？