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今天与大家一起揭开黑胶虫的神秘面纱。 江湖上流传很久的黑胶虫，到底真实身份是啥？ 我们一起来扒一扒~   逍鹏生物收集了全国29个黑胶虫污染样本进行DNA提取、测序、数据库比对，得到了鉴定结果，一起和大家分享一下吧。   表：黑胶虫检定 微生物种属 样本数 G+/G- 形状 直径大小 Mycoplasma  hyorhinis （猪鼻支原体） 3 / / 0.15~0.3 μm Mycoplasma bovis （牛支原体） 1 / / 0.15~0.3 μm Mycoplasma pulmonis （鼠肺支原体株） 1 / / 0.15~0.3 μm Mycoplasma yeatsii （山羊支原体） 6 / / 0.15~0.3 μm Actinobacterium sp. （放线菌属） 1 G+ 丝状 宽度近于杆状细菌，直径0.5~1 μm Ralstonia sp. （罗尔斯通菌属） 1 G- 杆状 1.2×2.5~3.5 μm Brevundimonas sp. （短波单胞菌属） 1 G- 杆状 0.4~0.5×1-2 μm Blastomonas natatoria （泳池芽殖单胞菌） 1 G- 卵圆形或杆状 / Pseudomonas sp. （假单胞菌） 1 G- 杆状 (0.5～1)×(1.5～4) μm Sphingobium sp. （鞘脂菌属） 1 G- 杆状 / Sphingomonas sp. （鞘氨醇单胞菌） 5 G- 杆状 0.3~0.8×1.0~2.7 μm Methylobacillus sp. （甲基菌属） 1 G- 杆状 0.8~1.0×1.0~8.0 μm Microbacterium sp. （微杆菌属） 2 G+ 杆状 1~10×0.2~0.6 μm Herbaspirillumhuttiense （赫氏草螺菌） 4 G- 螺旋型 长度至数十微米；螺旋波长为5~15 μm，螺旋幅度约一乃至数微米   如上表格所示：在这29个样本中，有11个样本鉴定为支原体，种类分别为猪鼻支原体、牛支原体、鼠肺支原体、山羊支原体。18个样本鉴定为细菌，种类分别为放线菌属、罗尔斯通菌属、短波单胞菌属、泳池芽殖单胞菌、假单胞菌、鞘氨醇单胞菌、甲基菌属、微杆菌属、赫氏草螺菌。   # 支原体污染 #   本次实验中，有11个样本鉴定为支原体污染。首先，我们先来了解一下支原体的基本特征。 逍鹏生物实验室在做沉降菌检测的时候，竟然出乎意外地培养出了一株支原体。支原体集落呈“荷包蛋样”：圆形，核心部分较厚，向下长入培养基，周边为一层薄的透明颗粒区。 图1. 支原体菌落   图2. 电镜下的支原体 图源网络，仅供参考学习用   在电子显微镜下，支原体大小为0.15~0.3 μm，无细胞壁，不能维持固定的形态而呈现多形性，呈球形、球杆形、长丝状及分支状等。   猪鼻支原体  // 图3. 固体培养基上的猪鼻支原体集落 图源网络，仅供参考学习用   鉴定结果：样本1，6，15 为 Mycoplasma hyorhinis（猪鼻支原体） 大小：0.15~0.3 μm 感染宿主：其感染猪的上呼吸系统的上皮细胞，通过口鼻途径传播。小猪可以被母猪或它们的同伴（无症状携带者）感染 污染细胞途径：推测胰蛋白酶主要是从猪的胰脏提取，纯化获得的结晶，再制成的冻干制剂，过滤除菌不当的胰酶溶液可能携带猪鼻支原体，建议大家买知名品牌胰酶，降低污染风险     鼠肺支原体  // 图4. 固体培养基上的鼠肺支原体株 图源网络，仅供参考学习用   鉴定结果：样本12 为 Mycoplasma pulmonis（鼠肺支原体） 大小：0.15~0.3 μm 感染宿主：大鼠和小鼠是主要的宿主。寄生于呼吸道上皮顶膜，附着感染从鼻前通道到肺泡的任何地方，可能是由表面糖蛋白介导的 污染细胞途径：在提取鼠源的细胞，例如鼠巨噬细胞，鼠肺动脉上皮细胞，鼠原代海马神经元时，如果提取的鼠带有鼠肺支原体，就有可能会引入污染   牛支原体  // 图5. 固体培养基上的牛支原体株 图源网络，仅供参考学习用   鉴定结果：样本28 为 Mycoplasma bovis（牛支原体） 大小：0.15~0.3 μm 感染宿主：主要寄生于牛体内，感染部位广泛，感染牛的呼吸道，会引起肺炎、中耳炎、关节炎、结膜炎 污染细胞途径：推测细胞增殖的主要营养之一就是胎牛血清。胎牛血清来源于动物，其主要通过0.1μm滤膜过滤除菌。如果血源及过滤除菌不当，就会给细胞带来潜在的支原体污染，因此建议大家购买知名品牌的胎牛血清     山羊支原体  // 图6. 固体培养基上的山羊支原体株 图源网络，仅供参考学习用   鉴定结果：样本9，10，17，18，19，20 为Mycoplasma yeatsii（山羊支原体） 大小：0.15~0.3 μm 感染宿主：主要寄生于山羊体内，感染部位广泛，寄生于羊的外耳道，咽后淋巴结、肺、脾 污染细胞途径：此类污染来源异常诡异，因为大家平时培养的细胞来源或营养体系，很难接触到此类污染的环节，故很难推测到污染源头。若培养相关的细胞或者使用相关的营养体系，就比较容易推测污染来源了       //  小结  // 如果黑胶虫的真实身份是支原体，那么支原体本身不会游动，不符合黑胶虫污染活跃游动或原地打转、颤动的特征，故推测可能细胞本身存在潜在的支原体污染，刚好被检测出来了。   好啦~ 本期分析到这里也就结束啦~ 剩余的18个被鉴定为细菌的黑胶虫样本我们将在下期分析，不要错过哦！ 如果您也想鉴定您的细胞是否有黑胶虫污染 快来参加逍鹏生物的 “黑胶虫通缉令”吧~ - 点击此处超链接 - 欢迎关注公众号留言咨询，给您最合适的解决方案~ 了解详细信息可戳原文，转载请标明出处。 BI 中国市场部：上海逍鹏生物科技有限公司