4大类常用生物类缓冲液配制方法
【产品介绍】:
一、通用缓冲液 0.5 M EDTA缓冲液,pH 8:适用于500 mL 将93.05 g Na2•EDTA•2H2O(二水合二钠)重悬于约400 mL 双蒸水(ddH2O)中 添加约9 g固体NaOH 所有NaOH溶解后,用10 N NaOH缓慢调节pH值 用双蒸水(ddH2O)将体积调至500 mL 注意:EDTA在pH达到8之前不会完全溶解。 1 M HEPES缓冲液:1 L 将238.3 g HEPES(游离酸)溶于800 mL 双蒸水(ddH2O) 用10 N NaOH将pH调节至所需值 用双蒸水(ddH2O)将体积调至1 L 50万MES缓冲液:1升 将97.6 g MES(游离酸)溶于800 mL 双蒸水(ddH2O) 用10 N NaOH将pH调节至所需值 用双蒸水(ddH2O)将体积调至1 L 1 M MOPS缓冲液:用于1 L 将209.3 g MOPS(游离酸)溶于800 mL 双蒸水(ddH2O) 用10 N NaOH将pH调节至所需值 用双蒸水(ddH2O)将体积调至1 L 5 M NaCl溶液:用于1 L 将292.2 g NaCl溶解在1 L 双蒸水(ddH2O)的最终体积中 10 M NaOH(= 10 N NaOH):500 mL 将200 g NaOH溶解在最终体积为500 mL 双蒸水(ddH2O)中 1 M Tris缓冲液:1 L 将121.1 g Tris碱溶于800 mL 双蒸水(ddH2O) 用浓盐酸调节pH至所需值 用双蒸水(ddH2O)将体积调至1 L 琼脂糖凝胶电泳缓冲液50x TAE:1 L 将242.2 g Tris碱溶于约600 mL的双蒸水(ddH2O) 缓慢加入57.1 mL冰醋酸 加入100 mL 0.5 M EDTA,pH 8 用双蒸水(ddH2O)将体积调至1 L 6x DNA上样缓冲液:100 mL 在100 mL量筒中称取60 g甘油 加入12 mL 0.5 M EDTA,pH 8 添加10毫克溴酚蓝 用双蒸水(ddH2O)将体积调至100 mL 10x DNA上样缓冲液:100 mL 在100 mL量筒中测量20 mL 50x TAE 添加40克蔗糖 添加10毫克溴酚蓝 用双蒸水(ddH2O)将体积调至100 mL SDS-PAGE缓冲液1.5 M Tris,pH 8.8(用于分离凝胶的储备缓冲液)1 L 将181.65 g Tris碱溶于约800 mL 双蒸水(ddH2O) 用浓盐酸调节pH值至8.8 用双蒸水(ddH2O)将体积调至1 L注意:在进行最终的pH调节之前,请确保将溶液冷却至室温。 1.5 M Tris缓冲液,pH 6.8(用于堆叠凝胶的储备液)1 L 在约700 mL的双蒸水(ddH2O)中溶解181.65 g Tris碱 用浓盐酸将pH调节至6.8 用双蒸水(ddH2O)将体积调至1 L 注意:在进行最终的pH调整之前,请确保将溶液冷却至室温。 10x Tris-甘氨酸运行缓冲液:用于4 L 121.1克Tris碱 576克甘氨酸 200 mL 20%SDS 用双蒸水(ddH2O)将体积调至4 L 2x样品上样缓冲液(非还原):用于100 mL 5 mL 1 M Tris,pH 7 25 mL 20%SDS 20毫升甘油 2毫克溴酚蓝 用双蒸水(ddH2O)将体积调至100 mL 2x样品上样缓冲液(减少):1 mL 950 µL 2x非还原样品上样缓冲液 50 µLβ-巯基乙醇 染色/脱色溶液:对于4 L: 200 mL无水乙醇 300毫升冰醋酸 用双蒸水(ddH2O)将体积调至4 L 定影液,1 L: 600 mL无水乙醇 75毫升冰醋酸 用双蒸水(ddH2O)将体积调至1 L 考马斯蓝原液:对于100 mL: 将250 mg考马斯亮蓝G-250(不是R-250!)溶解在100 mL固定液中 蛋白质印类迹缓冲液 10x传输缓冲液:用于4 L 121.1克Tris碱 576克甘氨酸 用双蒸水(ddH2O)将体积调至4 L 1x传输缓冲液:1 L 700毫升冷双蒸水(ddH2O) 100毫升10倍转移缓冲液 200毫升甲醇 20x TBS缓冲液:4升 193.6克Tris碱 640克氯化钠 使用双蒸水(ddH2O)将体积提高到3.2 L 用浓盐酸调节pH到7.6 用双蒸水(ddH2O)将体积调至4 L 20x TBST缓冲液:对于100 mL 将2 mL Tween-20加入100 mL的20x TBS中 三、大肠杆菌生长培养基系列 LB培养基:1升 10克胰蛋白p 5克酵母提取物 10克氯化钠 可选:用双蒸水(ddH2O)将体积调至900 mL左右,然后将pH调节至7.4 用双蒸水(ddH2O)将体积调至1 L 通过高压灭菌30分钟进行灭菌要制作LB琼脂,在高压灭菌之前添加15 g琼脂 LB培养基(低盐):1升 10克胰蛋白p 5克酵母提取物 5克氯化钠 可选:用双蒸水(ddH2O)将体积调至900 mL左右,然后将pH调节至7.4 用双蒸水(ddH2O)将体积调至1 L 通过高压灭菌30分钟进行灭菌要制作低盐LB琼脂,请在高压灭菌之前添加15 g琼脂 SOC:1升 20克胰蛋白p 5克酵母提取物 0.5克氯化钠 0.186克KCl 0.952克氯化镁 用双蒸水(ddH2O)将体积调至900 mL左右,然后用10 N NaOH将pH调节至7.4 用双蒸水(ddH2O)将体积调至1 L 高压灭菌30分钟 在使用前立即添加20 mL无菌1 M葡萄糖 1 M葡萄糖:100 mL 将18 g葡萄糖溶于100 mL 双蒸水(ddH2O) 通过0.2 µ过滤或高压灭菌15分钟进行灭菌 四、抗生素类缓冲液 氨苄西林(1000x)缓冲液: 将5 g氨苄西林溶于25 mL 双蒸水(ddH2O) 添加25 mL无水乙醇 储存在-20°C 羧苄青霉素(液体培养基1000x,平板2000x)缓冲液: 将2.5 g羧苄青霉素溶于25 mL 双蒸水(ddH2O) 添加25 mL无水乙醇 储存在-20°C 氯霉素(1000x)缓冲液: 将1.7 g氯霉素溶于50 mL无水乙醇 储存在-20°C 卡那霉素(1000x,但自动诱导培养基为250x)缓冲液: 将1.25 g氨苄西林溶解在50 mL 双蒸水(ddH2O)中 通过0.2 µ过滤灭菌 储存在-20°C下,每份1.5 mL 四环素(1000x)缓冲液: 将0.75 g四环素溶于50 mL无水乙醇或异丙醇中 储存在-20°C的1.5 mL液体中