【产品介绍】：

一、RT-PCR实验简介： RT-PCR是将RNA的反转录(RT)和CDNA的聚合酶链式扩增(PCR)相结合的技术。 RT-PCR技术灵敏而且用途广泛,可用于检测细胞中基因表达水平,细胞中RNA病毒的含量和直接克隆特定基因的cDNA序列。 二、RT-PCR实验所需材料及试剂： EP管、离心机、氯仿、异丙醇、乙醇、DEPC水、溴化乙锭 三、RT-PCR实验步骤 （一）、总RNA提取 1.取200mg组织，将其放入1.5ml EP管中，加入1ml Trizol切碎。 2.震动30秒。 3.加入0.2ml氯仿，在室温下剧烈摇动30s 3分钟。 4. 12000×g，4℃离心15分钟。 5.吸出上层无色水相，并转移到另一个EP管（约0.5ml）中。 6.加入等体积的异丙醇，-20℃，30min。 7.在12000×g，4°C下离心10分钟，在试管底部可以看到微量的RNA沉淀 8.丢弃上清液，加入1ml的75％乙醇并摇匀。 9. 7500×g，在4℃下离心10分钟。 10.丢弃上清液，用滤纸小心吸收残留的液体，并在室温下干燥5-10分钟。 11.将沉淀物溶于20μlDEPC水中，取1μl，然后加入79μlDEPC水以测量OD260 / OD280 12.计算浓度和纯度，并保存在-70℃。 （二）、逆转录合成cDNA 快速混合并离心一次，冻存在-20℃冰箱冰柜中。 （三）、PCR反应 1.快速混合并离心一次，PCR产物在-20℃下保存。 2.取8μlPCR产物并加入5×上样缓冲液2μl2％琼脂糖凝胶电泳120V 3.100mA 30min溴化乙锭染色，凝胶成像仪成像和存储 四、实验所需试剂清单： 1 1.5ml尖底连盖高速离心管（灭菌）                                  F-EP015-H   2 异丙醇                            JT25997   3 甲醇中三氯甲烷 BDM000285   4 溴化乙锭(EB) SS1957   5 DEPC处理水 HC1335   6 乙醇 JT26000