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胶原蛋白可分为哪几类
作者：德尔塔 日期：2022-02-18
胶原蛋白是一类蛋白质家族，已至少发现了30余种胶原蛋白链的编码基因，可以形成16种以上的胶原蛋白分子。 根据其结构可分为纤维胶原、基底膜胶原、微纤维胶原、锚定胶原、六角网状胶原、非纤维胶原、跨膜胶原等。 根据胶原在体内的分布和功能，胶原可分为间质胶原、基底膜胶原和细胞周围胶原。 类型的间质胶原蛋白分子身体大部分的胶原蛋白,包括Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型胶原蛋白分子,Ⅰ型胶原蛋白主要分布在皮肤,肌腱,和水产品加工废弃物(皮肤、骨骼和大小),其中一个最丰富的蛋白质占80 - 90%的总胶原蛋白含量,使用最广泛的药物。 Ⅰ型胶原在鱼类胶原蛋白,最引人注目的一个特点是热稳定性较低,还有物种特异性。Ⅱ型胶原蛋白由软骨细胞产生;基底膜胶原类型,通常被称为Ⅳ胶原蛋白,它主要分布在基底膜;周细胞外胶原蛋白通常Ⅴ中指类型胶原蛋白,在结缔组织比比皆是。 根据胶原蛋白的功能可以分为两组,第一组胶原纤维,包括第Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ,Ⅺ,ⅩⅩⅣ,ⅩⅩⅦ胶原蛋白类型;其余是第二组，非纤维性胶原蛋白。非成纤维胶原的-链同时包含三个螺旋结构域(COL)和非三螺旋结构域(NC)，其中成纤维胶原约占胶原总量的90%。
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台盼蓝染色如何分辨死活细胞
作者：德尔塔 日期：2022-02-18
原理：活细胞不会被台盼蓝染成蓝色，而死细胞会被染成淡蓝色。 正常的活细胞，胞膜结构完整，能够排斥台盼蓝，使之不能够进入胞内；而丧失活性或细胞膜不完整的细胞，胞膜的通透性增加，可被台盼蓝染成蓝色。通常认为细胞膜完整性丧失，即可认为细胞已经死亡，这与中性红作用相反。 因此，借助台盼蓝染色可以非常简便、快速地区分活细胞和死细胞。台盼蓝是组织和细胞培养中最常用的死细胞鉴定染色方法之一。注意凋亡小体也有台盼蓝拒染现象。 台盼蓝染色后，通过显微镜下直接计数或显微镜下拍照后计数，就可以对细胞存活率进行比较精确的定量。
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细胞实验PBS缓冲液为什么不能含钙离子和镁离子
作者：德尔塔 日期：2022-02-18
PBS中加入了Na2HPO4和0.24g KH2PO4，他们能与钙离子和镁离子，金属离子结合生成沉淀。 0.01M 磷酸盐缓冲液（PBS）配制方法： 称取8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4和0.24g KH2PO4,溶于800ml蒸馏水中，用HCl调节溶液的pH值至7.4，最后加蒸馏水定容至1L即可。在15lbf/in2(1034×105Pa)高压下蒸气灭菌（至少20分钟），保存存于室温或4℃冰箱中。 需要注意事项：通常所说的浓度0.01M 指的是缓冲溶液中所有的磷酸根浓度，而非Na 离子或K 离子的浓度，Na 离子和K 离子只是用来调节渗透压的。如果是用于免疫组化的话，则需要在配置的时候分别加入100 u/ml青霉素和链霉素之后再调PH、定容、灭菌消毒。
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质粒小量提取跟大量提取有什么区别
作者：德尔塔 日期：2022-02-18
区别： 1、所需菌液不同。质粒大用于大量菌液的提取，100ml-500ml 均可，而质粒小量用的菌液量很少，一般1.5-5ml。 2、纯度不同。一般试剂盒中质粒大量比质粒小量多了溶菌酶、异丙醇（回收沉淀核酸）、含一定量PEG的氯化物（回收质粒DNA）及乙酸铵等，其作用及目的都是有利于细菌的裂解和质粒的纯化，所以质粒大量提取的产物比质粒小量提取的量多很多，而且纯度很高。 3、实验要求不同。质粒小量提取一般用于质粒鉴定和对纯度要求不是很高的实验，质粒大量提取用于质粒的大量提取和转染等纯度要求很高的实验。 质粒大量提取质粒和质粒小量提取质粒的基本原理是一样的，都是通过一定的方法（如加碱裂解）使在细菌内大量扩增的质粒释放出来，然后经过去蛋白去RNA等一系列步骤纯化DNA，最终将DNA提取出来。
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去离子的作用及用途
作者：德尔塔 日期：2022-02-18
去离子水的作用是去除了水中的离子状杂质，让水更纯净。用途很广，各行各业都有用到去离子水。 去离子水的广泛用途: 1、制取电子工业生产如显像管玻壳、显像管、单晶硅半导体、线路板、液晶显示器、计算器硬盘和集成电路芯片等工艺所需的超纯水。 2、制取电力行业发电锅炉和厂矿企业中、低压锅炉给水所需的软化水、除盐水。 3、制取医药行业所需的医用大输液、药剂、注射剂、生化制品纯水、医用无菌水和人工肾透析用纯水。 4、制取饮料(含酒类)行业的饮用纯净水、蒸馏水、酒类生产勾兑用纯水以及啤酒糖化投料用水和纯生啤酒过滤等。 5、制取化工行业制造过程所需的工艺纯水。 6、制造纺织印染工艺所需的除硬度除盐水。 7、制取光学玻璃镀膜前清洗用纯水、超纯水。 8、制取电镀工艺用去离子水、电池生产工艺用纯水以及汽车、家电、建材产品表面涂装和清洗用纯水。 9、海水、苦咸水制取生活用水和饮用水。 10、宾馆、楼宇、社区、机场房产屋业的优质供水网络系统和泳池循环水处理系统。 11、制取实验室用蒸馏水。
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革兰氏染色的配置介绍
作者：德尔塔 日期：2022-02-18
革兰氏染色法是细菌学中广泛使用的一种鉴别染色法，未经染色之细菌，由于其与周围环境折光率差别甚小，故在显微镜下极难观察。染色后细菌与环境形成鲜明对比，可以清楚地观察到细菌的形态、排列及某些结构特征，而用以分类鉴定。革兰氏染色属复染法。 其配制方法如下： (1)结晶du紫液：结晶紫zhi乙醇饱和液(结晶紫2g溶于20mL95%乙醇中)20mL，1%草酸铵水溶液80mL 将两液混匀置24h后过滤即成。 (2)卢戈氏碘液：碘0.33g，碘化钾0.66g，蒸馏水100mL。先将碘化钾溶于少量蒸馏水中，然后加入碘使之完全溶解，再加蒸馏水至100mL即成。配成后贮于棕色瓶内备用，如变为黄色即不能使用。 (3)95%乙醇：用于脱色，脱色后可选用复染即可。 (4)番红溶液：番红O2.5g, 95%乙醇100mL，溶解后可贮存于密闭的棕色瓶中，用时取20mL与80mL蒸馏水混匀即可。
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DNA的提取方法
作者：德尔塔 日期：2022-02-18
酚抽提法：先用蛋酶K、SDS破碎细胞，消化蛋白，然后用酚和酚-氯DNA。 甲酰胺解聚法：破碎细胞同上，然后用高浓度甲酰胺解聚蛋白质与DNA的结合，再透析获得DNA。 玻璃棒缠绕法：用盐酸胍裂解细胞，将裂解物铺于乙醇上，然后用带钩或U型玻璃棒在界面轻搅，DNA沉淀液绕于玻棒。生成DNA。 异丙醇沉淀法：用二倍容积异丙醇替代乙醇，可去除小分子RNA（在异丙醇中可溶状态）。 表面活性剂快速制备法：用Triton X-100A或NP40表面活性剂破碎细胞，然后用蛋白酶K或酚去除蛋白，乙醇沉淀或透析。 加热法快速制备：加热96℃-100℃，五分钟，然后离心后取上清，可用于PCR反应。 碱变性快速制备：先用NaOH作用20分钟，再加HCI中和，离心后取上清，含少量DNA。
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核酸纯化怎样保存核酸
作者：德尔塔 日期：2022-02-18
纯化后的核酸，最后多使用水或者低浓度缓冲液溶解；其中 RNA 以水为主，DNA 则多以弱碱性的Tris 或者 TE 溶解。经典的 DNA 溶解方法多提倡使用 TE 溶解，认为 EDTA 可以减少 DNA 被可能残留下来的 DNase 降解的风险；如果操作过程控制得当，DNase 的残留几乎是可以忽略的，完全可以直接使用 Tris 或者水 (pH 接近 7) 溶解 DNA。基本上，核酸在保存中的稳定性，与温度成反比，与浓度成正比。如果温度合适，保存中核酸发生降解或者消失，首要原因是酶残留导致的酶解，第二个原因则是保存核酸溶液的 pH 值不合适导致的水解 (RNA 在弱酸性更稳定，而 DNA 在弱碱性更合适)。还有一个不为人重视的，就是 EP 管对核酸的影响。首先一定要坚信一点，那就是核酸一定会与装它的容器的接触面发生反应，达到某种均衡。EP管的材质，首先可能吸附核酸，其次还可以诱导核酸的结构发生某些变化，如变性。在核酸的浓度比较高时，这个现象可能观察不到；当核酸浓度很低时，则比较明显了。如抽提的质粒电泳的构型越来越多，除了原来的三种带型外，还可能出现变性 cc 、Cc 的多级形式等等带型。在低浓度的核酸中加入 格莱汀，糖原，牛血清白蛋白 可以稳定核酸。
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4×和5×的上样缓冲液区别
作者：德尔塔 日期：2022-02-18
4×和5×的上样缓冲液的区别就是加样的比例不一样。 4×上样缓冲液使用方法： 1、按每30微升蛋白样品加入10微升上样缓冲液的比例(4倍稀释)来使用。如果蛋白浓度过高，可用双蒸水稀释。 2、混匀后，100℃水浴加热5-10分钟，使蛋白变性。 3、冷却至室温后，10000-14000rpm离心2-5分钟，取上清直接上样电泳即可。 5×上样缓冲液使用方法： 1. 在室温或不超过37℃的水浴中溶解SDS-PAGE上样缓冲液(5X)。水浴溶解后立即室温存放，尽量避免长时间置于水浴中。 2. 按照每4微升蛋白样品加入1微升蛋白上样缓冲液(5X)的比例，混合蛋白样品和蛋白上样缓冲液(5X)。 3. 100℃或沸水浴加热3-5分钟，以充分变性蛋白。 4. 冷却到室温后，直接上样到SDS-PAGE胶加样孔内即可。 5. 通常电泳至蓝色染料到达胶的底端处附近即可停止电泳。
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常用到的几种组织固定液
作者：德尔塔 日期：2022-02-18
中性缓冲甲醛：该液能够固定大多数组织结构，对脂类有较好的固定效果。免疫组化、原位杂交等试验都可以使用。本液还可以长时间存放，是实验室常备的固定液之一。固定液浸透较慢，固定时间不限，浸透之后可以长时间存放（免疫组化和原位杂交标本建议不要这么做）。美中不足是染色时酸性染料着色不佳，并且本液对糖类没有固定作用。 AAF：该液由醋酸（A）、酒精（A）和甲醛（F）为主要成分，广泛用于动植物组织的固定和各种实验检测，植物固定则是**。固定液渗透均一，速度很快。固定时间一般为4 ~ 24 h。此液处理后，染色结果细腻，但酸性染料着色力下降。本液配制后可以短时间放置。 Bouin：过去常用的一种固定液，主要用于软化皮肤或者富含结缔组织的标本，在胚胎标本处理中使用很广。用本液处理后，酸性染料着色鲜艳。但是，由于含有苦味酸，不能用于原位杂交等实验检测。此外，本液对很多细胞器的破坏较大，尤其不适于固定肾脏标本。经本液固定的标本，尺寸应尽可能小，否则内外固定的效果有所差别。本液可以较长时间存放，但标本在其中不应久存，固定8 ~ 24 h为宜。 Zamboni：用于免疫组化和免疫电镜的**固定液。保存细微结构和抗原特性**的固定液之一。固定液浸透速度较慢，要求标本不能过大，常用于血管灌注。该液可以长时间存放，标本在其中也可以保存较长时间，抗原封闭作用相对较弱。由于含有苦味酸，故不用于原位杂交试验。 Helly，Susa，Zenker：这是三种比较相近的固定液，含有汞盐和重铬酸钾。经这类固定液处理，标本对酸性和碱性染料均有较好的亲和能力。染色处理前需要脱汞和脱碘操作。目前除了几种传统染色更鲜艳外，并无其他优势。
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氯金酸的制备方法
作者：德尔塔 日期：2022-02-18
纯金与王水反应经过滤、浓缩后，加浓盐酸除氮化物，再经浓缩结晶、磨碎而得产品。从乙醇溶液中可结晶出无水氯金酸（HAuCl4）。 反应方程式：Au+HNO3+4HCl=HAuCl4+NO+2H2O在这个反应中，浓盐酸中的氯离子与金配位结合（4Cl-+Au==(AuCl4)4-），使其更容易被氧化，之后浓硝酸中的N5+将配位后的金氧化成Au3+，而自己被还原成N2+，（N5++(AuCl4)4-==(AuCl4)-+N2+）并放出分子中多余的O2-。 O2-与浓盐酸中多余的氢离子结合成H2O，而N2+则以NO的形式放出。三氯化金溶于浓盐酸得到氯金酸。有研究称金粉溶于过氧化氢-浓盐酸也可以安全环保地制备氯金酸。
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DTT对蛋白有哪些影响
作者：德尔塔 日期：2022-02-18
DTT的作用是DTT可用于阻止蛋白质中的半胱氨酸之间所形成的蛋白质分子内或分子间二硫键。DTT对蛋白的影响是DTT也可以对蛋白质中二硫键进行还原。 DTT是DL-Dithiothreitol的缩写，中文名为二硫苏糖醇。DTT往往无法还原包埋于蛋白质结构内部的二硫键，这类二硫键的还原常常需要先将蛋白质变性。反之，根据DTT存在情况下，二硫键还原速度的不同，可以判断其包埋程度的深浅。 由于容易被空气氧化，因此DTT的稳定性较差；但冷冻保存或在惰性气体中处理能够延长它的使用寿命。 由于质子化的硫的亲核性较低，随着pH值的降低，DTT的有效还原性也随之降低。Trisphosphine HCl可以作为低pH值条件下DTT的替代品，而且也比DTT更为稳定。
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二甲基亚砜和氯化亚砜有何区别
作者：德尔塔 日期：2022-02-18
二甲基亚砜（DMSO）是一种含硫有机化合物，常温下为无色无臭的透明液体，是一种吸湿性的可燃液体。具有高极性、高沸点、热稳定性好、非质子、与水混溶的特性，能溶于乙醇、丙醇、苯和氯仿等大多数有机物，被誉为“万能溶剂”。在酸存在时加热会产生少量甲基硫醇、甲 醛、二甲基硫、甲磺酸等化合物。在 高温下有分解现象,遇氯能发生剧烈反应,在空气中燃烧发出淡蓝色火焰。可作有机溶剂、反应介质和有机合成中间体。也可用作合成纤维的染 色溶剂、去染剂、染色载体,以及回收乙炔、二氧化硫的吸收剂。 亚硫酰氯又名氯化亚砜：是一种无色或淡黄色发烟液体，有强刺激性气味。遇水或醇分解成二氧化硫和氯化氢。 对有机分子中的羟基有选择性取代作用。本产品可溶于苯、氯仿和四氯化碳。加热至150°C开始分解，500°C分解完全。 SOCl2分子：是金字塔形的(偶极矩:1.4D)，表明一个孤对电子在S (IV)中心。 相反，没有孤对电子的COCl2是平面的。
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乙二胺和二乙胺有什么区别
作者：德尔塔 日期：2022-02-18
乙二胺和二乙胺是不同的物质，结构式不同。 1、乙二胺: H2N-CH2-CH2-NH2 乙二胺，无色或微黄色油状或水样液体，有类似氨的气味。呈强碱性。有腐蚀性。主要用于溶剂和分析试剂。 2、二乙胺: CH3-CH2-NH-CH2-CH3 二乙胺为无色液体、强碱性、具腐蚀性、易挥发、易燃。与水或乙醇能任意混合。具有强烈刺激性，能刺激眼、气管、肺、皮肤和排泄系统。 二乙胺的主要用途： （1）用于制造医药、农药、染料、橡胶硫化促进剂、纺织助剂以及金属防腐剂、乳化剂、阻聚剂等，也用作蜡的精制溶剂、共轭双烯乳液聚合时的活化剂以及配制发动机的抗冻剂等。 （2）二乙胺为溶剂和化工原料中间体,可制取药物普鲁卡因、氯喹、尼可刹米、可拉明及磺胺等类药，也可用于生产农药、染料、橡胶硫化促进剂、选矿药剂、纺织助剂、杀菌剂、缓蚀剂、阻聚剂和抗冻剂等。 （3）用于有机合成，染料、药物合成。用作分析试剂,如薄层色谱法检测硫代巴比土酸的显色试剂。还用作防腐剂。 （4）用于有机合成和环氧树脂固化剂。 乙二胺的主要用途： （1）用作分析试剂，如非水滴定的溶剂。还用作环氧树脂固化剂，并用于有机合成及高分子聚合。 （2）用于非水溶液滴定。氨羧络合剂。测定锑、铋、镉、钴、铜、汞、银及铀。用作环氧树脂的固化剂，蛋白质、纤维蛋白的溶剂。 （3）用于有机合成和农药、活性染料、医药、环氧树脂固化剂等的制取。 （4）乙二胺是良好的碱和还原试剂，可以与金属离子形成配合物，可作为链延长的模块，也可用于制备咪唑啉、吡嗪、1,4-二氮杂衍生物、含有N2n的大环及其它一些杂环化合物。 （5）乙二胺在电化学、分析化学中作溶剂使用。由于对二氧化碳、硫化氢、二硫化碳、硫醇、硫、醛、苯酚等的亲和力强，可用作汽油添加剂、润滑油、鱼油、矿物油和醇的精制用。
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