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2017标准品研究过程中的技术发现
作者：德尔塔 日期：2022-04-06
本年度的新春已经到来，而此时有阳春三月的暖意，反让人感到阵阵“寒意”。新学期就要开始了，在这里，上海恒远首先要提醒各位老师、同学们，出门要做好保暖防护工作，注意预防感冒，同时，还要注意标准品的正确保存哦！ 据上海恒远消息了解，虽然目前国家规定只能由国务院药品监督管理部门的药品检验机构负责标定国家药品标准品、对照品，但在新药研究过程中，常遇到的情况是国内无法提供相应的新药标准物质，也无法从国外获得或者购得量无法满足新药开发整个过程的需要。为此，选择和标定标准物质是极为必要的程序之一。 在候选标准物质时，一般选用供试原料的精制品，并且经元素分析、IR、UV、MS及NMR等光谱分析、X-射线衍射分析，热分析等手段确定其化学结构，结晶以及含水情况。一般情况下，所选标准物质的准确度应比被测仪器或检测方法的准确度高3～5倍。 药品标准物质是用以确定产品或材料的量值，评价测量方法的准确和标定测量仪器测试质量的实物标准。由于标准品、对照品作为计量标尺的用途特殊性，以及目前某些药物标准品、对照品的不易得性，优瓦标准品网专家建议：在新药的研发过程中应进一步重视对该部分内容的研究。 以上2017标准品研究过程中的技术发现内容，上海恒远公司主营标准品、对照品、ELISA试剂盒等实验室科研产品，如有感兴趣的朋友可以随时致电给我司业务员，质量保证。
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青海发光杆菌菌种培养温度和湿度分析
作者：德尔塔 日期：2022-04-06
青海发光杆菌微生物在一个较宽的温度范围内生长。但是，要获得高质量的孢子，其zui适温度区间很狭窄。一般来说，提高培养温度，可使菌体代谢活动加快，缩短培养时间，但是，菌体的糖代谢和氮代谢的各种酶类，对温度的敏感性是不同的。因此，培养温度不同，菌的生理状态也不同，如果不是用zui适温度培养的孢子，其生产能力就会下降。不同的菌株要求的zui适温度不同，需经实践考察确定。例如，龟裂链霉菌斜面zui适温度为36.5～37 ℃，如果高于37 ℃，则孢子成熟早，易老化，接入发酵罐后，就会出现菌丝对糖、氮利用缓慢，氨基氮回升提前，发酵产量降低等现象。培养温度控制低一些，则有利于孢子的形成。龟裂链霉菌斜面先放在36.5 ℃培养3天，再放在28.5 ℃培养1天，所得的孢子数量比在36.5 ℃培养4天所得的孢子数量增加3～7倍。 青海发光杆菌斜面孢子培养时，培养室的相对湿度对孢子形成的速度、数量和质量有很大影响。空气中相对湿度高时，培养基内的水分蒸发少；相对湿度低时，培养基内的水分蒸发多。例如，在我国北方干燥地区，冬季由于气候干燥，空气相对湿度偏低，斜面培养基内的水分蒸发的快，致使斜面下部含有一定水分，而上部易干瘪，这时孢子长得快，且从斜面下部向上长。夏季时空气相对湿度高，斜面内水分蒸发得慢，这时斜面孢子从上部往下长，下部常因积存冷凝水，致使孢子生长得慢或孢子不能生长。试验表明，在一定条件下培养斜面孢子时，在北方相对湿度控制在40％～45％，而在南方相对湿度控制在35％～42％，所得孢子质量较好。一般来说，真菌对湿度要求偏高，而放线菌对湿度要求偏低。 在培养箱培养时，如果相对湿度偏低，可放入盛水的平皿，提高培养箱内的相对湿度，为了保证新鲜空气的交换，培养箱每天宜开启几次，以利于孢子生长。现代化的培养箱是恒温、恒湿，并可换气，不用人工控制。 青海发光杆菌zui适培养温度和湿度是相对的，例如相对湿度、培养基组分不同，对微生物的zui适温度会有影响。培养温度、培养
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细胞生存必须具备的基本条件分析
作者：德尔塔 日期：2022-04-06
1．细胞基本营养物质 （1） 糖 六碳糖主要能源、维持渗透压，含葡萄糖1-5%。 （2） 氨基酸 维持生存需12种氨基酸（精、胱、亮、异亮、赖、蛋、苯丙、苏、色、组、酪、缬）。谷氨酰胺需量zui大,缺乏时细胞生长不良。 单细胞培养或细胞量少时,所需氨基酸的种类和量增多，细胞主要利用左旋氨基酸异构体。 （3） 维生素 细胞大部分需水溶性B族维生素，Vitc不可少，1-10mg/100ml可促进正常细胞生长繁殖。 2．促生长因子、激素类物质 3．其它物质 基本元素、微量元素、促细胞贴附物质(纤粘连蛋白、层粘连蛋白laminin、IV型胶原、氨基多糖类) 4．水 主要成分和生存环境,要求高纯度水。 5．温度 哺乳动物及人源细胞zui适培养温度为35℃—37℃,对低温耐受力比高温强。39℃以上受损→死亡；不低于0℃时（0℃-34℃），细胞能生存，但代谢降低、分裂延缓。 6．气体环境和pH 需O2、CO2，通氧量过大对细胞有毒害。 CO2主要与维持pH有关，细胞培养*pH为7.2—7.4，通过缓冲系统和调节CO2含量，维持正常pH。 开放培养要求5%CO2环境、HEPES10—50mmol/ml可防止pH变化。 含Earle’s缓冲系统的培养基适合于5％CO2的培养条件，Hanks’缓冲系统的培养基仅含有0.35g/L NaHCO3，不能用于5％CO2的环境，若放入CO2培养箱，溶液将迅速变酸，使用时应注意。 7．湿度和光 开放培养相对湿度控制在95%。细胞培养需避光，紫外线或可见光可造成核黄素、酪氨酸、色氨酸等产生有毒的光产物，抑制细胞生长，降低其贴壁能力。 8．影响细胞生长的其它因素 接触橡胶用品、收集细胞时离心速度过大、细胞接种浓度过低等。
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ELISA试剂盒进口大鼠实验规则与结果分析
作者：德尔塔 日期：2022-04-06
ELISA试剂盒进口大鼠实验规则：1、将液体加到酶标孔中时，避免枪头和孔内液体接触，可使枪头上的液滴和孔壁接触，液滴会自然流下去。 2、液体全部加完后，可将酶标板在桌子上平行轻轻晃动30秒，混匀液体。也可以用酶标仪的晃动功能。3、温浴时，要用不干胶或胶带纸封好酶标板，防止水分的蒸发。4、洗板时，每次洗液加入后，应静置1分钟，使清洗更加彻底。没有洗板机时，倒去液体后，要将酶标板在报纸或毛纸上用力拍干。5、洗液不够时，可用蒸馏水自行配制PH7.4，0.02M的磷酸缓冲液，加入0.1%的吐温6作为洗液。加入1/1000的叠氮钠后可长期保存。ELISA试剂盒进口大鼠实结果分析：孵育完毕后取出微孔板，如果采用水浴法，用吸水纸吸干外壁的水分。在微孔后面放置一张白纸并观察孔内的颜色变化，从微孔壁侧面所能观察的颜色比从顶部或者底部所能观察到的更准确。有时候孵育时在微孔侧旁会出现气泡，可以在没有气泡的另一侧进行观察。对于一些颜色介于阴性和阳性质控的样品，需要进行更进一步的分析和重测。试剂的准备孔板(条或孔)和阳性和阴性质控临用前取出,应在室温下放置至少半小时。不使用的微孔板应置于2-8°C保存，剩余的阳性和阴性质控应放回原处冰冻保存ELISA试剂盒进口大鼠。
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细胞培养方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-06
1收到细胞时如无异常情况 ，请在显微镜下观察细胞密度，如为贴壁细胞，未超过80%汇合度时，用75%酒精（建议配置75%酒精的水也是灭菌超纯水。喷洒整个瓶消毒后放到超菌台内，严格无菌操作：然后打开盖子，先用枪头把培养基吸出10ML左右，放在离心管里，然后瓶口过火，（严禁直接倾倒），这样可以保证不污染，再用10ML的移液管，将剩余的培养基全部吸出，放于离心管中，培养瓶中只剩余5-10ML左右培养液继续培养就可以了）：超过80%汇合度时，请按细胞培养条件传代培养。如为悬浮细胞，吸出培养液，1000转/分钟离心3-5分钟，吸出上清，管底细胞用新鲜培养基悬浮细胞后移回培养瓶。2.将培养瓶置于37℃培养箱中培养，盖子微微拧松。吸出的培养基可以保存在灭菌过的瓶子里，存放于4℃冰箱，以备不时之需。第二天换液时，要配制新鲜的培养基和进口胎牛血清。这样对细胞生长更好。不要再用我们原瓶的培养基了。3.24小时后，细胞形态已恢复并贴满瓶壁，就可以传代了。（贴壁细胞）将培养瓶里的培养基倒去，加3-5ml（以能覆盖细胞生长面为准）PBS或Hanks’液洗涤后弃去。加0.5-1ml 0.25%含EDTA的胰酶消化，消化时间以具体细胞为准，一般1-3分钟，不超过5分钟。可以放入37℃培养箱消化。轻轻晃动瓶壁，见细胞脱落下来，加入3-5ml培养基终止消化。用移液管轻轻吹打瓶壁上的细胞，使之完全脱落，然后将溶液吸入离心管内离心，1000rpm/5min。弃上清，视细胞数量决定分瓶数，一般一传二，如细胞量多可一传三，有些细胞不易传得过稀，有些生长较快的细胞则可以多传几瓶，以具体细胞和经验为准。（悬浮细胞）用移液管轻轻吹打瓶壁，直接将溶液吸入离心管离心即可。4.贴壁细胞 ，悬浮细胞。严格无菌操作。换液时，换新的细胞培养瓶和换新鲜的培养液和进口胎牛血清，37度 5%CO2 培养5. 收到细胞后，请镜下观察细胞，用恰当方式处理细胞。若悬浮的细胞较多，请离心收集细胞，接种到一个新的培养瓶中。弃掉原液，使用新鲜配制的培养基，使用进
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苏云金芽孢杆菌蛋白（BT）ELISA试剂盒组成说明书
作者：德尔塔 日期：2022-04-06
本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定相关样本中苏云金芽孢杆菌蛋白（BT）的含量。 实验原理： 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中苏云金芽孢杆菌蛋白（BT）水平。用纯化的苏云金芽孢杆菌蛋白（BT）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入苏云金芽孢杆菌蛋白（BT）,再与HRP标记的苏云金芽孢杆菌蛋白（BT）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的苏云金芽孢杆菌蛋白（BT）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中苏云金芽孢杆菌蛋白（BT）浓度。 试剂盒组成： 试剂盒组成 48孔配置 96孔配置 保存 说明书 1份 1份 封板膜 2片（48） 2片（96） 密封袋 1个 1个 酶标包被板 1×48 1×96 2-8℃保存 标准品：90ng/g 0.5ml×1瓶 0.5ml×1瓶 2-8℃保存 标准品稀释液 1.5ml×1瓶 1.5ml×1瓶 2-8℃保存 酶标试剂 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存 样品稀释液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存 显色剂A液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存 显色剂B液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存 终止液 3ml×1瓶 6ml×1瓶 2-8℃保存 浓缩洗涤液 （20ml×20倍）×1瓶 （20ml×30倍）×1瓶 2-8℃保存 样本处理及要求： 1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。 2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。 3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左
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细胞培养的注意事项
作者：德尔塔 日期：2022-04-06
养好细胞注意点 （一）冷冻管应如何解冻 取出冷冻管后，须立即放入37 ℃ 水槽中快速解冻，轻摇冷冻管使其在1分钟内全部融化，并注意水面不可超过冷冻管盖沿，否则易发生污染情形。另冷冻管由液氮桶中取出解冻时，必须注意安全，预防冷冻管的爆裂。 （二）细胞冷冻管解冻培养时，DMSO如何处理 在细胞解冻之后，可直接离心去除DMSO，用新鲜的培养基悬浮后直接放入含有 新鲜培养基的培养角瓶中进行细胞培养，如此可避免解冻后细胞生长受到DMSO影响。 （三）可否使用与原先培养条件不同的培养基 每一细胞株均有其特定使用且已适应的细胞培养基，若骤然使用和原先提供培养条件不同的培养基，细胞大都无法立即适应，造成细胞无法存活，不应该马上替换。 （四）可否使用与原先培养条件不同的血清种类 血清是细胞培养上一个极为重要的营养来源，所以血清的种类和品质对于细胞的生长会产生极大的影响。来自不同物种的血清，在一些物质或分子的量或内容物上都有所不同，血清使用错误常会造成细胞无法存活。 （五）何谓 FBS，FCS，CS，HS FBS （fetal bovine serum） 和 FCS （fetal calf serum） 是相同的意思，两者都是指胎牛血清。CS （calf serum） 则是指小牛血清。HS （horseserum） 则是指马血清。 （六）培养细胞时应使用 5% 或 10% CO2 一般培养基中大都使用 HCO3-/CO32-/H+ 作为 pH 的缓冲系统，而培养基中 NaHCO3 的含量将决定细胞培养时应使用的 CO2 浓度。理论当培养基中 NaHCO3 含量为每公升 3.7 g 时，细胞培养时应使用 10% CO2；当培养基中 NaHCO3 为每公升 1.5 g 时，则应使用 5% CO2 培养细胞。
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ELISA试剂盒试验原理解析
作者：德尔塔 日期：2022-04-06
ELISA试剂盒构成构造：1、 血清：操作过程中防止任何细胞影响。运用不含热原和内毒素的试管。搜集血液后，1000×g离心10分钟将血红细胞敏捷小心肠别离。2、 血浆：EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检查。1000×g离心30分钟去除颗粒。3、 细胞上清液：1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。4、 安排匀浆：将安排参加适当盐水捣碎。1000×g离心10分钟，取上清液。5、 保留：如果样品不当即运用，应将其分红小有些-70℃保留，防止重复冷冻。尽可能的不要运用溶血或高血脂血。如果血清中很多颗粒，检查前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热冻结。应在室温下冻结并确保样品均匀地充沛冻结。ELISA试剂盒操作注意事项1．试剂应按标签阐明书贮存，运用前康复到室温。稀稀往后的规范品应丢掉，不行保留。2．试验中不必的板条应当即放回包装袋中，密封保留，防止蜕变。3．不必的其它试剂应包装好或盖好。不相同批号的试剂不要混用。保质前运用。4．运用一次性的吸头防止穿插污染，汲取停止液和底物A、B液时，防止运用带金属有些的加样器。5．运用洁净的塑料容器配置洗刷液。运用前充沛混匀试剂盒里的各种成份及样品。6．洗刷酶标板时应充沛拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反响孔中吸水。7．底物A应蒸发，防止长期翻开盖子。底物B对光灵敏，防止长期露出于光下。防止用手触摸，有毒。试验完成后应当即读取OD值。8．参加试剂的次序应一致，以确保一切反响板孔温育的时刻相同。9．依照阐明书中标明的时刻、加液的量及次序进行温育操作。
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教您如何判断ELISA试剂盒灵敏度、稳定性
作者：德尔塔 日期：2022-04-06
ELISA试剂盒有着特异性强、灵敏度高、稳定性好、操作简便等优点，那么是否所有的试剂盒都具备这些优点呢？我司技术人员分析轻松鉴别ELISA试剂盒灵敏度高低的方法。 由于各种ELISA试剂盒的机能之间没有明显的水平差异，但是在InBios试剂盒检测到的数据体现愈甚的原尺度低(P / N
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常见问题之样本处理
作者：德尔塔 日期：2022-04-06
用ELISA检测样本的种类非常多，但是不同类型的样本前期的处理也是不一样的，正确的处理样本是保证ELISA检测的正确性和准确性的*步，下面简单的介绍几种样本的处理方法。血清：全血标本于室温放置2小时或4℃过一夜后于1000×g离心20分钟。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。 血浆： 应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合10-20分钟后，于1000×g离心15分钟，仔收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。 尿液： 用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。 细胞上清液：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（1000×g）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心10分钟左右（5000×g）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。 组织样本： 用预冷的PBS （0.01M,pH=7.4）冲洗组织，以去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样本对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。zui后将匀浆液于5000×g?离心5~10分钟，取上清检测。 上海恒远拥有一对一全程指导服务，的ELISA检测试剂盒，让您赢在*步。公司主营：Elisa试剂盒,人Elisa试剂盒,大鼠Elisa试剂盒,小鼠Elisa试剂盒,生物试剂,血清,抗体,培养基,标准品,国产血清、GIBCO胎牛血清等。
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大鼠白细胞介素1β（IL-1β）elisa试剂盒操作方法：
作者：德尔塔 日期：2022-04-06
?本试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织匀浆及相关液体样本中大鼠白细胞介素1β（IL-1β）的含量。 ?有效期：6个月 ?保存条件：2-8℃ ?本试剂盒仅供体外研究使用，不用于临床诊断 实验原理 试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被大鼠白细胞介素1β（IL-1β）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的大鼠白细胞介素1β（IL-1β）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。 样本处理及要求 1. 血清：将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过一夜，然后1000×g离心20 分钟，取上清即可，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。 2. 血浆：用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本，并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃ 1000×g离心15分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。 3. 组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。zui后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。 4. 细胞培养物上清或其它生物标本：请1000×g离心20分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。 注：标本溶血会影响zui后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。 需要而未提供的试剂和器材 1.酶标仪（450nm） 2.高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL 3.37℃恒温箱 4.蒸馏水或去离子水
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ELISA试剂盒进口大鼠测定技术分析
作者：德尔塔 日期：2022-04-06
1、ELISA试剂盒进口大鼠基因工程试剂对免疫测定技术发展的影响 免疫测定技术的基础在于抗原抗体之间的特异结合反应，所以任何的诊断试剂离不开的原料，如抗原抗体，酶等。以前用于免疫测定的抗原通常为各种纯化抗原，而抗体则为纯化抗原免疫动物后获得的多克隆抗体和使用杂交瘤技术得到的单克隆抗体，ELISA试剂盒进口大鼠而抗原或抗体的标记物如酶标结合物则通过各种化学合成方法制备。近年来，随着分子生物学的发展，使用基因工程方法制备各种特殊的抗原或抗体及其酶结合物等免疫测定试剂几成为现实的新一代试剂，各种新型使用的测定方法也不断出现。 HBsAg试剂特点(检测模式：临床抗体夹心法)： 包被抗体为山羊多抗，多抗具有高亲和性和对抗原各种表位的反应性。 酶表抗体为与HBsAg有不同结合位点的鼠复合单位。 可测得HBsAg变异样品。 提高检测的特异性(99.98%) 提高检测的灵敏度，应用Parl Ehrich 学说(PEI)HBsAg标准品，对ad标准品的灵敏度为0.05nｇ/ml对ay标准品灵敏度为0.025ng/ml 2、基因工程 较早用于免疫测定的基因工程抗原是HBcAg和HBsAg,这两种基因工程抗原的出现，较好地解决了抗HBc和HBe的测定问题。因为要从病毒本身去大量获取这两种纯抗原较为困难，并且这一点对于难培养的病原微生物来说，如HIV、HCV和梅毒螺旋体等都有些共性。 2.1 HCV-ELISA试剂盒进口大鼠 HCV目前尚不能体外培养，只能用基因工程或化学合成方法获取HCV结构和非结构区的各种抗原片断，已知HCV基因组有7个功能区组成：核心、E1、E2/NS1 NS2 NS3 NS4 NS5(有分为NS和NS5b)区，合成抗原的优点是易于纯化，特异性好，抗原抗体反应强。 2.1.1 *代抗HCV-ELISA试剂盒进口大鼠 -由美国ortho公司克隆C1003抗原几个片断与人超氧化物歧化酶(SOD)结合。用酵母从病毒基因组非结合区得到表达，表达为融合蛋白，亦作为包被固相载体。 -抗原组合：NS4 区二个基因片断为NS 5-1-1和C1003 -特性：IgG抗C100在发病后数月后，才检出，故不宜作早期诊断。
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Nature报道肿瘤细胞耐药新机制
作者：德尔塔 日期：2022-04-06
有一种“臭名昭著”的蛋白质，能够将化疗药物从癌细胞中“泵”出来，还能阻止药物到达中枢神经系统。范德堡大学医学中心的研究人员zui近绘制了一副这名“罪犯”“犯罪”时的构象变化。 P-糖蛋白是一种，ATP结合盒（ABC）转运蛋白。ABC转运蛋白是一个膜内在蛋白超家族。它将ATP水解，释放ATP分子中储存的化学能，提给各种分子进行跨膜运输。P-糖蛋白是一类负责向细胞外排分子的ABC转运蛋白，也包括排“毒”。因此，他控制了身体的药代动力学。 P-糖蛋白活跃于许多组织，包括小肠、肝脏、肾脏、胎盘和血脑屏障。利用电子顺磁共振波谱法(EPR)，又称双电子共振double electron-electron resonance（DEER），研究人员将各种各样的类药化合物与P-糖蛋白结合，并将它们被弹出细胞外时P-糖蛋白的形状变化捕捉了下来。尤其是P-糖蛋白的ATP“马达”如何驱动它的膜结构域（蛋白质结合和运输分子的部分）构象或空间方位的改变。这种构象的变化被称为“交替访问”。 通过与伊利诺伊大学香槟分校的计算生物学家Emad Tajkhorshid博士合作，针对这种特别的蛋白，研究人员创建了其向外弹射药物的计算模型。 科学界累积花费了15年的努力去了解ABC转运蛋白的工作原理。而如今的P-糖蛋白无论是结构上还是功能上都与ABC转运蛋白不同。 科学家们发现了一种P-糖蛋白的中间态——“咬合”构象——它发生在P-糖蛋白与靶药物结合之后，把药物弹出去之前。这是一个关键性的发现。这种中间态构象指示出，我们是有机会通过干涉P-糖蛋白的工作，阻止其将化疗药物弹出肿瘤细胞外。 Mchaourab说，现在的问题是我们能不能合成一种稳定“咬合”构象的分子，让转运蛋白先停止一下工作。为此，Mchaourab实验室正在构建转基因模型（将人类P-糖蛋白的基因转入斑马鱼），试图先了解转运蛋白是如何与各种化合物相结合的，再找出一个比较好的阻断它的方式。
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单个细胞分离培养技术分析
作者：德尔塔 日期：2022-04-06
材料 1．转化细胞的制备经过原代或传代培养的细胞。 2．培养用液克隆适应培养液、Hanks液、0.125％胰蛋白酶。 3．培养用品包括直径为0.5mm，长为8mm的毛细玻璃管，培养瓶皿、培养板（24孔、96孔）、吸管、微量加样器等。 方法 1．稀释克隆法 （1)毛细管克隆法 1)将一定量的细胞悬液（如105个／ml或更低）倍比稀释至1个／ml; 2）取l0ml稀释的细胞悬液，用直径为0.5mm，长为8mm的毛细玻璃管若干（30～50支），在负压作用下，将悬液吸入各毛细管中； 3）在倒置显微镜下检查出每管只有1个细胞的毛细管，然后放入适应性培养基或有饲养层细胞的培养瓶（皿）内，置37℃ ,5% CO2孵箱中培养。当一个细胞在毛细管内繁殖后向管外扩展时，会形成单细胞克隆的细胞群体。 (2）有限稀释铺板法：有限稀释需将细胞悬液在一排试管中进行梯变倍数稀释，然后将稀释的细胞悬液接种于微孔培养板（也可在96孔板上直接稀释），使每孔仅含1个细胞。经镜下检测，标记下含单细胞的孔，置培养箱培养。数日后，凡在已标记的孔中有生长增殖的细胞集落即为克隆细胞。 1)低密度细胞悬液的制备：选用对数生长期的状况良好的待克隆细胞，如为贴壁细胞则先用胰蛋白酶消化，使其脱离瓶壁，经反复吹打使细胞相互分离，用培养液梯变倍数稀释细胞，分别稀释成50/m1,10/m1,5/ml三种稀释度的细胞悬液。 2)接种：先用吸管轻轻吹打细胞悬液，使之混悬均匀。将三种稀释度的细胞分别用加样器接种于96孔培养板，每孔分别加100ul细胞悬液（100ul内平均细胞分别为5,1,0.5个细胞）和100ul培养液。接种时要迅速准确，争取在zui短时间内加完，以免培养液蒸发。迅速盖好盖板，置于37℃,5% C02的培养箱中培养。 3）标记与培养：培养6～12小时待细胞下沉并贴附于培养板孔底后，从温箱中取出培养板，置于倒置显微镜台上，观察和标记下含单个细胞的孔。以单个细胞落于孔底平坦部而周边清晰者为符合要求。然后，送回C02培养箱中继续培养。培养期间视其pH的变化决定是否换液或补加培养
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常见的细胞因子受体检测的方法介绍
作者：德尔塔 日期：2022-04-06
（一）活细胞系吸收试验 原理 将过量的待测细胞与限量细胞因子共孵育，若细胞膜表面存在相应的细胞因子受体即可结合细胞因子，通过测定前、后细胞因子生物活性的对比情况可推测待测细胞表面细胞因子受体是否存在。 方法 1．过量的待测细胞、适量细胞因子准备。 2．共孵育，时间根据待测细胞和细胞因子选择。可设2h,4h,6h,8h和更长时间。 3．离心（1500r/min, 5分钟）收集上清液。 4．测定孵育前后的细胞因子活性。方法同细胞因子测定。 注意事项 此法简便，适用于定性，但不适用于定量检测。 （二）核素标记重组细胞因子的放射受体分析 该方法是确定细胞因子受体分布及其特性的主要方法，可测定细胞受体的数量及亲和力。通常标记的方法有以下两种： 1．重组细胞系因子和核素体体外共孵育。 2．利用cDNA转录获得足够量的细胞因子mRNA，注入非洲爪蟾卵母细胞内，在体外翻译的底物中加入核素标记的氨基酸（如35S-Met或3 H-Leu等）。通过生物合成内标记产生的重组细胞因子的功能不受影响，因此适用于某些稳定性较差的细胞因子的检测。 （三）可溶性细胞因子受体的检测 细胞因子受体除存在于细胞膜外，尚有部分细胞因子受体可分泌进入体液，称为可溶性细胞因子受体（solublecytokinereceptor)，如sIL-2R,sIL-4R和slFN-yR。这类受体多采用免疫学方法检测故在此不作介绍。 （四）抗受体McAb法 利用细胞因子的McAb既可通过封闭受体抑制相应细胞因子的生物学活性进行受体检测，也可用标记的McAb直接作免疫放射受体分析或免疫沉淀。 （五）重组细胞因子RIA法 利用化学交联剂将标记的重组细胞因子与膜受体交联，细胞裂解物经PAGE后进行放射自显影分析，通过带型分析可确定受体的分子量及亚单位。 （六）受体cDNA分析 分子克隆是在基因水平上研究细胞系因子受体的*途径，通过核苷酸序列推导的氨基酸顺序进行结构功能区分析，是深入探讨受体作用机制的基础。此外还可利用基因工程技术生产重组受体子。目前已有10多种细胞因子受体的基
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