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乙胺嘧啶（是什么，性质，结构，药理学）
作者：德尔塔 日期：2022-03-24
乙胺嘧啶是什么？ 乙胺嘧啶是乙基嘧啶的合成衍生物，具有有效的抗疟特性。乙胺嘧啶是二氢叶酸还原酶 (DHFR) 的竞争性抑制剂。DHFR 是产生四氢叶酸的氧化还原循环中的关键酶，四氢叶酸是合成 DNA 和蛋白质所必需的辅助因子。乙胺嘧啶通常与其他抗疟药联合使用，用于**单纯性恶性疟。 乙胺嘧啶性质 乙胺嘧啶分子式 C12H13ClN4 乙胺嘧啶分子量 248.71g/mol 乙胺嘧啶密度 1.2171g/cm3 乙胺嘧啶熔点 233.5°C 乙胺嘧啶沸点 393.35°C 乙胺嘧啶外观 无味的白色结晶粉末 乙胺嘧啶溶解性 几乎不溶于水；微溶于乙醇 乙胺嘧啶结构 乙胺嘧啶药理学 乙胺嘧啶是一种抗寄生虫化合物，通常用作**简单的、耐氯喹的恶性疟原虫疟疾的辅助药物。乙胺嘧啶是一种叶酸拮抗剂，其**作用的基本原理是基于宿主和寄生虫对参与生长的核酸前体的不同需求。该活性对疟原虫和刚地弓形虫具有高度选择性。乙胺嘧啶对人的疟原虫具有杀血裂殖体和一些组织裂殖体杀灭活性。然而，4-氨基喹啉化合物对红细胞裂殖体更有效。它不会破坏配子体，但会阻止蚊子体内的孢子形成。当与磺胺类药物联合使用时，乙胺嘧啶对刚地弓形虫的作用大大增强。
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氯化锶（是什么，性质，应用）
作者：德尔塔 日期：2022-03-24
氯化锶是什么？ 氯化锶被描述为锶和氯化物的盐，氯化锶分子式为 SrCl 2，它通过形成中性水溶液被定义为典型的氯化锶盐。与 Sr 的所有化合物类似，这种盐在火焰中也会发出鲜红色；事实上，氯化锶可以用作准备烟花的发红源。这种化合物的化学性质介于剧毒的氯化钡和氯化钙之间。 氯化锶性质 氯化锶分子式 Cl2Sr 氯化锶分子量 158.52g/mol 氯化锶密度 3.052g/cm3 氯化锶熔点 875℃ 氯化锶沸点 1250℃ 氯化锶外观 白色结晶固体 氯化锶溶解性 易溶于水，微溶于无水乙醇、丙酮，不溶于液氨 氯化锶化合物与氟气反应生成氯气和氟化锶。 SrCl 2 (aq) + 2HF (gas) → SrF 2 (solid) + Cl 2 (gas) 氯化锶还与硫酸反应形成氯化氢和硫酸氢锶。 SrCl 2 + 2H 2 SO 4 → Sr(HSO 4 ) 2 + 2HCl 氯化锶的应用 1.生物学研究 短暂接触氯化锶可诱导卵母细胞孤雌激活，可用于发育生物学研究。 2.牙齿保健 氯化锶还可用于通过在牙本质中的包含因牙龈退缩而暴露的神经末梢的微观小管上产生屏障来降低牙齿敏感性。在美国，它被称为 Sensodyne 和 Elecol，这些产品被称为“氯化锶”牙膏管，尽管目前大多数使用硝酸钾 (KNO 3 ) 代替它作为镇痛剂而不是屏障。 3.铵储存 一家商业公司使用基于氯化锶的人造固体作为在低压下储存铵化合物的一种手段，主要用于由 Diesel 运营的车辆的 NOx 减排。他们还声称他们的专利材料是由其他几种盐制成的，但他们选择了这种氯化锶化合物进行大规模生产。 此外，早期的公司研究认为储存的铵是一种储存合成铵燃料化合物的方法。然而，这一特定方面尚未商业化。他们的材料和工艺已获得专利。而且，他们的早期实验是使用氯化镁实现的。
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3~5分子的生物素与1分子的蛋白结合实验
作者：德尔塔 日期：2022-03-24
一、实验步骤： 1. 溶解2~10 mg 蛋白于1 ml 的BuphTm磷酸盐缓冲液中，并计算溶解的毫摩尔数。如果蛋白含有不恰当的缓冲液（如Tris或者甘氨酸），可以通过在PBS中透析或浓缩的方法除去。计算：蛋白质量（mg）/蛋白分子量（MW）＝蛋白质的毫摩尔数。 2. 在打开之前，平衡生物素至室温。加2 mg Sulfo-NHS-Biotin于100 ul 超纯水中，加入足够量浓度的生物素，一般对于10 mg/ml 蛋白来说超过12倍分子数，对于2 mg/ml 蛋白溶液应超过20倍，或者该试剂也可以直接以粉末的形式加入蛋白溶液中 3. 室温30分钟，或冰上放置2小时。 4. 用30 ml PBS预洗纯化柱，上样，加入与欲收集量相同的缓冲液，收集0.5 ml 或1 ml 于单独的管中。 5. 以280 nm 的吸收值测定蛋白含量。 6. 生物素化的蛋白4℃存放至使用，可加入叠氮钠、甘油等保存。 实验所需的试剂： 序列 产品名 货号 CAS号 备注 1 磷酸盐缓冲液 HC1789 2 Tris SS1426 77-86-1 3 甘氨酸 SS3763 56-40-6 4 甘油 JT26018 56-81-5 5 1000ul蓝吸头 FT-1000 6 200ul吸头 FT-200 7 2ml离心管 F-EP020 8 1.5ml离心管 F-EP015
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ELISA实验技巧：ELISA（双抗体夹心法）检测HBsAg
作者：德尔塔 日期：2022-03-01
已知抗体(抗HBs)包被载体，然后将含有抗原的待检标本加入，共同孵育后，抗原结合于包被抗体上，再加入酶标记特异抗体(酶标抗HBs)，酶标抗体连接到抗原上，最后加入底物溶液，根据颜色反应来判定抗原含量。 【材料】 HBsAg试剂盒，本试剂盒含： 1、包被抗-HBs反应条 1瓶 2、酶结合物 1瓶 3、HBSAg阳性对照 1瓶 4、HBsAg阴性对照 1瓶 5、洗涤液:用前每瓶作1：20稀释 1瓶 6、显色剂(TMB)A 1瓶 7、显色剂(TMB)B 1瓶 8、终止液 1瓶 【方法】 1、加入待测标本每孔0.05ml，并设HBsAg阳性对照2孔，HBsAg阴性对照2孔，空白对照1孔，然后加入酶结合物每孔1滴(0.05ml、空白对照孔不加)，充分混匀后置37℃孵育30分钟。 2、洗板:弃去反应条孔内液体、拍干、用洗涤液注满每孔，弃去拍干，反复五次后拍干。 3、显色剂:先加显色剂A每孔1滴(0.05ml)，然后再加显色剂B每孔1滴(0.05ml)，混匀，37℃孵育10分钟。 4、每孔加终止液1滴(0.05ml)，混匀。 【结果】 比色法:波长450nm，先用空白孔校零点，然后读取各孔光密度值。 样品OD值/阴性对照平均OD值≥ 2.1判断为阳性，否则为阴性。 备注：阴性对照平均OD值低于0.05作0.05计算，高于0.05按实际OD值计算。阳性对照OD值≥0.8，实验结果有效。 【注意事项】 1、试剂盒置2℃～8℃保存。 2、使用前试剂应摇匀，并弃去1～2滴后垂直滴加。 3、从冷藏环境中取出试剂盒内全部瓶装试剂及待测标本所需微孔条，置室温平衡30分钟后再行测试，余者应及时封存于冰箱中以备后用。 4、待测标本不可用NaN3防腐。 5、不同批号试剂请勿通用。 6、结果判断须在10分钟内完成。 7、若浓缩洗涤液出现结晶时，请置37℃至溶解。
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ELISA操作要点：ELISA结果判断
作者：德尔塔 日期：2022-03-01
ELISA试验结果的判断主要根据所做实验的说明书进行,现一般按S/CO进行判断,其中S为样品吸光度,CO为K*阴性对照,K值依据所做实验有所不同。如果没有光度计(酶标仪)靠肉眼判断,则阴、阳性判断主要靠经验。 ELISA常用结果判定方法如下： 1、 定性测定 定性测定的结果判断是对受检标本中是否含有待测抗原或抗体作出"有"或"无"的简单回答，分别用"阳性"、"阴性"表示。"阳性"表示该标本在该测定系统中有反应。"阴性"则为无反应。用定性判断法也可得到半定量结果，即用滴度来表示反应的强度，其实质仍是一个定性试验。在这种半定量测定中，将标本作一系列稀释后进行试验，呈阳性反应的最高稀释度即为滴度。根据滴度的高低，可以判断标本反应性的强弱，这比观察不稀释标本呈色的深浅判断为强阳性、弱阳性更具定量意义。 在间接法和夹心法ELSIA中，阳性孔呈色深于阴性孔。在竞争法ELISA中则相反，阴性孔呈色深于阳性孔。两类反应的结果判断方法不同，分述于下。 （1） 间接法和夹心法 这类反应的定性结果可以用肉眼判断。目视标本也无色或近于无色者判为阴性，显色清晰者为阳性。但在ELSIA中，正常人血清反应后常可出现呈色的本底，此本底的深浅因试剂的组成和实验的条件不同而异，因此实验中必须加测阴性对照。阴性对照的组成应为不含受检物的正常血清或类似物（见3.6）。在用肉眼判断结果时，更宜用显色深于阴性对照作为标本阳性的指标。 目视法简捷明了，但颇具主观性。在条件许可下，应该用比色计测定吸光值，这样可以得到客观的数据。先读出标本（sample，S）、阳性对照（P）、和阴性对照（N）的吸光值，然后进行计算。计算方法有多种，大致可分为阳性判定值法和标本与阴性对照比值法两类。 a． 阳性判定值 阳性判定值（cut-off value）一般为阴性对照A值加上一个特定的常数，以此作为判断结果阳性或阴性的标准。 用此法判断结果要求实验条件十分恒定，试剂的制备必须标准化，阳
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ELISA实验操作要点：ELISA测定应该如何正确操作
作者：德尔塔 日期：2022-03-01
ELISA测定现在通常为采用手工操作的以微孔板条为固相的测定模式，测定操作非常简单，一般涉及到标本的收集保存、试剂准备、加样、温育、洗板、显色、比色、结果判断和结果报告及解释等方面，其中任一步骤的不当都会影响测定结果，且尤以加样、温育和洗板等步骤为甚。现分述如下。 一、临床标本的收集和保存 用于ELISA测定的临床标本最为常用的是血清（浆），有时因为特定的检测目的，也用到唾液、脑脊液、尿液、粪便等标本。目前临床上使用血清标本测定的标志物一般有传染性病原体的抗原和抗体、肿瘤标志物、激素、特种蛋白、细胞因子和**药物等。对用于激素和**药物测定的血清标本的收集，要注意收集时间甚或体位有可能会对测定结果产生影响。如可的松在早晨4～6点之间，会有一峰值出现：生长激素、促黄体激素（LH）和促卵泡激素（FSH）均以阵发性方式释放，因此，在测定此类激素时，有必要在密切相连的时间间隔内采取数份血样本，以其中间值为测定值。又如当从卧位变为站立位时，血清中肾素活性将出现明显增高。再如**药物的检测，应根据药代动力学选择服药后的最适时间抽血检测。用于传染性病原体的抗原和抗体、肿瘤标志物和特种蛋白等的检测的血清标本的收集则没有时间和体位方面的影响，只是在处理和保存方面要考虑以下几个方面： （1）要注意避免出现严重溶血。血红蛋白中含有血红素基团，其有类似过氧化物的活性，因此，在以HRP为标记酶的ELISA测定中，如血清标本中血红蛋白浓度较高，则其就很容易在温育过程中吸附于固相，从而与后面加入的HRP底物反应显色。 （2）样本的采集及血清分离中要注意尽量避免细菌污染，一则细菌的生长，其所分泌的一些酶可能会对抗原抗体等蛋白产生分解作用；二则一些细菌的内源性酶如大肠杆菌的β-半乳糖苷酶本身会对用相应酶作标记的测定方法产生非特异性干扰。 （3）血清标本如是以无菌操作分离，则可以在2～8℃下保存一周，如为有菌操作，则建议冰冻保存。样本的长时间保
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ELISA实验原理：ELISA的原理、类型及操作步骤
作者：德尔塔 日期：2022-03-01
ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。在测定时，受检标本(测定其中的抗体或抗原)与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，间接地放大了免疫反应的结果，使测定方法达到很高的敏感度。 ELISA方法类型和操作步骤 elisa可用于测定抗原，也可用于测定抗体。在这种测定方法中有3种必要的试剂： ① 固相的抗原或抗体， ② 酶标记的抗原或抗体， ③ 酶作用的底物。根据试剂的来源和标本的性状以及检测的具备条件，可设计出各种不同类型的检测方法。 （一）双抗体夹心法 双抗体夹心法是检测抗原最常用的方法，操作步骤如下： （1）将特异性抗体与固相载体连接，形成固相抗体：洗涤除去未结合的抗体及杂质。 （2）加受检标本：使之与固相抗体接触反应一段时间，让标本中的抗原与固相载体上的抗体结合，形成固相抗原复合物。洗涤除去其他未结合的物质。 （3）加酶标抗体：使固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合。彻底洗涤未结合的酶标抗体。此时固相载体上带有的酶量与标本中受检物质的量正相关。 （4）加底物：夹心式复合物中的酶催化底物成为有色产物。根据颜色反应的程度进行该抗原的定性或定量。 根据同样原理，将大分子抗原分别制备固相抗原和酶标抗原结合物，即可用双抗原夹心法测定标本中的抗体。 （二）双位点一步法 在双抗体夹心法测定抗原时，如应用针对抗原分子上两个不同抗原决定簇的单克隆抗体分别作
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ELISA实验操作要点：如何在ELISA检测中得出完美结果
作者：德尔塔 日期：2022-03-01
ELISA检测系统可谓是免疫学反应应用到科研生产中最为广泛最为灵敏的技术手段。可是在新老手操作过程中总是会出现或大或小的问题，比如说花板，假阳性，全显色，全部显色，显色比空白还低.....。德尔塔生物为您总结7步ELISA检测实验经验，做好这7步您就能得出完美的实验结果。 1、包被原的性质很重要，蛋白浓度，是否降解，这关系到你做出的抗体可不可以被其识别，所以保存抗原很重要，我做重组蛋白时，师兄都严格警告我一定要在冰浴下缓慢融化就是这个道理。还有有的包被原可能不是蛋白，对于生物素和脂类物质或小分子物质我们要事先对其改造再加以包被，方法简要的列出如下: ①亲和素生物素:先亲和素先包被载体，加入生物素化的DNA，这种包被方法均匀、牢固，已扩大应用于各种抗原物质的定量测定。 ②脂类物质:可将其在有机溶剂(例如乙醇)中溶解后加入ELISA板孔中，开盖置冰箱过夜或冷风吹干，待酒精挥发后，让脂质自然干固在固相表面。 ③小分子必须依靠和大的蛋白载体偶联后才能固定在固相载体上。 2、包被液的选择，一般选择ph9.6的碳酸盐缓冲液。但有时由于试验的需要，包被原的特殊性也可能采用中性的缓冲溶液来包。应注意以下原理：由于蛋白质与聚苯乙烯固相载体是通过物理吸附结合的，靠的是蛋白质分子结构上的疏水基团与固相载体表面的疏水基团间的作用，这种物理吸附是非特异性的，受蛋白质的分子量、等电点、浓度等的影响，大分子蛋白质较小分子蛋白质通常含有更多的疏水基团，故更易吸附到固相载体表面。具体的试验还要有坚固的理论外也要实践，看一下最终可不可以应用到自己试验当中去。常用的包被液除了刚才提到的pH9.6碳酸盐缓冲液，还有pH7.2的磷酸盐缓冲液和pH7-8的Tris-HCL缓冲液等等。 3、封闭：继包被之后用高浓度的无关蛋白质溶液再包被的过程。封闭就是让大量不相关的蛋白质充填这些空隙，从而排斥ELISA后的步骤中干扰物质的再吸附。常用封闭剂有：0.05%-0.5%的BSA;10%的小牛
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ELISA操作要点：ELISA实验18条通用规则
作者：德尔塔 日期：2022-03-01
ELISA实验操作所要求的条件是比较严格的，无论是对实验的硬件条件还是对实验的操作人员的技术要求，都是如此。下面所提到的就是一些在进行ELISA实验时所要注意的一些问题。 ELISA实验18条通用规则 1、要保证移液枪的准确性，误差不能超过2%。可用水和电子天平进行确定。但**有专业人员进行矫正。 2、要配备20ul、50ul、100ul、1000ul和排枪各一支。吸取不同的液体后，要更换枪头。即使是吸取标准品时。 3、要在实验前1小时将试剂盒从冰箱中取出，使各种试剂都恢复到室温，以使结果更稳定。 4、实验时，要使底物避光保存。 5、用枪吸取液体时速度不能太快，以免产生气泡而使吸取量不准确。 6、吸取液体时，要用量程和需要量接近的枪去吸，减少误差。 7、将液体加到酶标孔中时，避免枪头和孔内液体接触，可使枪头上的液滴和孔壁接触，液滴会自然流下去。 8、液体全部加完后，可将酶标板在桌子上平行轻轻晃动30秒，混匀液体。也可以用酶标仪的晃动功能。 9、温浴时，要用不干胶或胶带纸封好酶标板，防止水分的蒸发。 10、洗板时，每次洗液加入后，应静置1分钟，使清洗更加彻底。没有洗板机时，倒去液体后，要将酶标板在报纸或毛纸上用力拍干。 11、洗液不够时，可用蒸馏水自行配制PH7.4，0.02M的磷酸缓冲液，加入0.1%的吐温20作为洗液。加入1/1000的叠氮钠后可长期保存。 12、底物是光敏感的，要在临用前现配。 13、检测前，要打开酶标仪，使之稳定10分钟以上。 14、底物有一定的毒性，终止液对皮肤有腐蚀性，应尽量避免接触。 15、待检样品要澄清，否则会影响结果。 16、温浴时间应遵守试剂盒规定。 17、应尽量做双孔实验，这样才能保证数据的准确性。 18、对结果有疑问的样品要用其它方法进行确证。
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ELISA实验概念与原理：ELISA原理
作者：德尔塔 日期：2022-03-01
酶联免疫吸附试验（Enzyme Linked ImmunoSorbent Assay， ELISA）于1971年分别由瑞典学者和荷兰学者报道，开创了运用酶标记免疫技术，进行液体标本中微量物质测定的实验方法。 ELISA基本原理是把抗原或抗体在不损坏其免疫活性的条件下预先结合到某种固相载体表面，测定时，将受检样品（含待测抗体或抗原）和酶标抗原或抗体按一定程序与结合在固相载体上的抗原或抗体起反应形成抗原或抗体复合物，经洗涤去除反应液中其他物质，加入酶反应底物后，在酶的催化下变为有色物质，最后通过定性或定量分析有色产物量即可确定样品中被测物质量。 ELISA方法具有高度敏感性和特异性，易于自动化，应用非常广泛，几乎所有的可溶性抗原抗体系统均可使用，ELISA质量保证是一个复杂的过程，许多重要环节都影响到检测结果。大分子物质常用的测定模式有：双抗体夹心法、间接法、双抗原夹心法、IgM捕获法等，小分子物质常用竞争法，竞争法由于存在游离抗原和酶标抗原在操作时差、免疫亲和力、结构改变等方面的差异，影响因素更多，更加难于控制。 目前免疫学方法在环境监测、食品安全、药物监测、激素监测等领域，获得长足发展，大量的竞争法ELISA试剂盒被开发，质量控制越来越严格。 德尔塔生物经过10年的技术积累与沉淀，一直拓展顶尖的产品研发与经验丰富的技术团队，不断创新突破。 目前公司主营产品有： 人ELISA试剂盒、大鼠ELISA试剂盒、小鼠ELISA试剂盒、猪ELISA试剂盒等众多种属指标。
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ELISA实验技巧：ELISA实验数据要怎么处理？
作者：德尔塔 日期：2022-03-01
(数据处理,类型,散点图,拷贝,标准曲线) 如果是新的数据，你只要双击图表，把它输入到图表的数据中，就可以拟和曲线。根据曲线方程式，计算出浓度。 ELISA实验数据要怎么处理？(数据处理,类型,散点图,拷贝,标准曲线) 方法： 1、拟和曲线： 输入行： 浓度值，如0 10 50 100 输入第二行：该浓度下的调整后的od值，如0 0.586 1.397 1.997 3.42 选择这些输入的数据，用插入里的图表按钮，进入图表向导，在“标准类型”中选择“xy散点图”；在“子图表类型”中选择“折线散点图”，按“下一步”；选择“系列产生在行”，按“下一步”；数据标志，可以填写：如数据y轴，OD值；数据x轴，浓度；按下一步，点击完成。可得曲线图。 单击曲线，按右键，选择“添加趋势线”，在类型中，选择多项式；在选项中，选择显示公式，选择显示R平方值。 得到公式和R平方值。 也可以用上面说的方法：双击图表，把它输入到图表的数据中，就可以拟和曲线。 2、计算浓度： 第一次实验： 标准曲线为： y = -4E-05x2 + 0.026x R2 = 0.9745 为例，已知OD值，计算浓度。 由于y = -4E-05x2 + 0.026x，所以可以得到： 4E-05x2 －0.026x ＋y＝0 ax2 ＋bx ＋y＝0 a＝4E-05；b＝－0.026； x＝（－b－（b*b－4ay）（平方根））/(2*a) 代入a，b，和y值，得 x＝（0.026－（0.026*0.026-0.00016*y）(平方根）)/(2*0.00004） 在excel里可以用以下公式表示： x＝(0.026-EXP(LN(0.026*0.026-0.00016*y)/2))/(2*0.00004) 通用公式为： x＝（－b－EXP(LN（b*b－4ay）/2)）/(2*a) 应用excel的公式拷贝功能，计算所有浓度
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ELISA实验原理：ELISA结果判断
作者：德尔塔 日期：2022-03-01
定性测定 定性测定的结果判断是对受检标本中是否含有待测抗原或抗体作出"有"或"无"的简单回答，分别用"阳性"、"阴性"表示。"阳性"表示该标本在该测定系统中有反应。"阴性"则为无反应。用定性判断法也可得到半定量结果，即用滴度来表示反应的强度，其实质仍是一个定性试验。在这种半定量测定中，将标本作一系列稀释后进行试验，呈阳性反应的最高稀释度即为滴度。根据滴度的高低，可以判断标本反应性的强弱，这比观察不稀释标本呈色的深浅判断为强阳性、弱阳性更具定量意义。 在间接法和夹心法ELSIA中，阳性孔呈色深于阴性孔。在竞争法ELISA中则相反，阴性孔呈色深于阳性孔。两类反应的结果判断方法不同，分述于下。 （1） 间接法和夹心法 这类反应的定性结果可以用肉眼判断。目视标本也无色或近于无色者判为阴性，显色清晰者为阳性。但在ELSIA中，正常人血清反应后常可出现呈色的本底，此本底的深浅因试剂的组成和实验的条件不同而异，因此实验中必须加测阴性对照。阴性对照的组成应为不含受检物的正常血清或类似物。在用肉眼判断结果时，更宜用显色深于阴性对照作为标本阳性的指标。 目视法简捷明了，但颇具主观性。在条件许可下，应该用比色计测定吸光值，这样可以得到客观的数据。先读出标本（sample，S）、阳性对照（P）、和阴性对照（N）的吸光值，然后进行计算。计算方法有多种，大致可分为阳性判定值法和标本与阴性对照比值法两类。 a． 阳性判定值 阳性判定值（cut-off value）一般为阴性对照A值加上一个特定的常数，以此作为判断结果阳性或阴性的标准。 用此法判断结果要求实验条件十分恒定，试剂的制备必须标准化，阳性和阴性的对照品应符合一定的规格，须配用精密的仪器，并严格按规定操作。阳性判定值公式中的常数是在这特定的系统中通过对大量标本的实验检测而得到的。现举某种检测HBsAg的试剂盒为例。试剂盒中的阴性对照品为不含HBsAg的复钙人血浆，阳性对照品HBsAg的含量标明为P=9±2ng/ml。每次试验设2个阳
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ELISA实验操作要点：ELISA实验中缓冲溶液等试剂的配置
作者：德尔塔 日期：2022-03-01
ELISA实验中是以抗原和抗体的免疫反应为基础，ELISA试剂以及各种溶液如何配置？最近刚做了下ELISA实验，把各种ELISA配置方法汇总如下： 1、ELISA实验包被缓冲液 2、ELISA实验洗涤缓冲液 3、ELISA实验稀释液 4、ELISA实验终止液 5、ELISA底物缓冲液 6、ELISA实验TMB四甲基联苯胺、使用液 7、ELISA实验ABTS使用液 8、ELISC 试剂 1、ELISA实验包被缓冲液(PH9.6 0.05M碳酸盐缓冲液)： NaHCO3 1.59g NaHCO3 2.93g 加蒸馏水至 1000ml 2、ELISA实验洗涤缓冲液(PH7.4 PBS)：0.15M KH2PO4 0.2g Na2HPO4·12H2O 2.9g NaCl 8g KCl 0.2g Tween-20 0.05% 0.5ml 加蒸馏水至 1000ml 3、ELISA实验稀释液： 牛血清白蛋白(BSA) 0.1g 加洗涤缓冲液至 100ml 或以羊血清、兔血清等血清与洗涤液配成5～10%使用。 4、ELISA实验终止液(2M H2SO4)： 蒸馏水178.3ml，逐滴加入浓硫酸98%、 21.7ml。 5、ELISA底物缓冲液(PH5.0磷酸棗柠檬酸)： 0.2M Na2HPO4(28.4g/L) 25.7ml 0.1M 柠檬酸(19.2g/L) 24.3ml 加蒸馏水50ml 6、ELISA实验TMB(四甲基联苯胺)使用液： TMB(10mg/5ml无水乙醇) 0.5ml 底物缓冲液(PH5.5) 10ml 0.75%H2O2 32μl 7、ELISA实验ABTS使用液： ABTS 0.5mg 底物缓冲液(PH5.5) 1ml 3%H2O2 2μl 8、ELISA实验封闭液： 牛血清白蛋白(BSA) 5g 加洗涤缓冲液至 100ml 值得一提的是有的封闭液中含有脱脂奶粉，不适合长期保存。 为了保证ELISA实验的准确性，实验操作中加入的缓冲液和各组分一定要精确，将洗涤液加入酶标板中的时候防止加入的试剂混入另外一个酶标孔，严防交叉污染。
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ELISA试剂盒：选对品牌，用对品牌，让您的实验效率事半功倍！
作者：德尔塔 日期：2022-03-01
ELISA试剂盒深受广大科研工作者的喜爱。而且市面上的ELISA试剂盒数不胜数， 让大家选择的时候都比较纠结。到底怎么选择试剂盒呢？怎么才能不被纷扰世道的假的试剂盒迷惑双眼呢？选什么样的试剂盒才能性价比高呢？ 品牌试剂盒随便一个价钱都是要一千块以上，如果选错了试剂盒，轻则损失一笔科研经费，重则毁掉整个实验课题，再重则影响科研事业的发展，这个锅您能背么？不背…… 市面上的ELISA Kit质量良莠不齐，想要挑选到合适的试剂盒还真不是一件很容易的事情。不背锅，咱就坐下来，看看如何擦亮双眼，找对的，不找贵的（当然便宜的更不能找）；找好的，不找差的（怎么样才知道好差呢？） 下面小编“借您借您一双慧眼吧”跟大家一起把这纷扰看的清清楚楚、明明白白、真真切切！（小板凳搬过来，小编要分享经验咯……） 要从如下几个方面来甄别挑选合适的ELISA Kit。 如何选择ELISA试剂盒/挑选ELISA试剂盒 1 查找待测样本的蛋白浓度：可以通过美国国立生物技术信息中心（NCBI）的文献，Universal Protein（uniprot）上给出的蛋白表达量参考值来比较ELISA试剂盒中给出的样本值与报道值是否一致； 2 试剂盒的应用种属、检测样本的种类：除试剂盒特别说明外，一般不同种属不能通用。常见待测样本种类有：血清和血浆（不同抗凝剂），细胞上清，和细胞裂解液，试剂盒中不同样本的稀释液不混用； 3 试剂盒的检测范围：也就是标曲范围，特别要注意待测样本浓度是否落在标曲范围内，对于浓度很高的样本，可以先进行预实验摸索到比较好的稀释倍数后再大量测定样本。 4 试剂盒中的稀释线性及回收率： a.稀释线性一般指样本稀释线性，是将样本梯度稀释下来，看各稀释梯度浓度是否成线性；参考样本稀释线性可以选择样本的最佳稀释倍数； b.稀释线性也有做加标稀释线性的情况，加标稀释线性是将标准品加入样本中测定加入的标准品浓度测定是否准确；同样也是确定待测样本稀释倍数的参考指标
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ELISA实验技巧：ELISA试剂盒ELISA空白孔的设置
作者：德尔塔 日期：2022-03-01
ELISA试剂盒ELISA空白对照有几种： 1. 空气空白\水空白：一般是用于仪器调零的,所有孔数值减掉该孔数值。 2. 底物空白：一般是用于防止底物弱显色所造成的读数偏高，同样所有孔数值减掉该孔数值（只加底物和终止液） 3. 酶空白：一般在2步法实验中使用，主要是看酶是否和板有非特异性结合的，一般不做这个 。 ELISA空白孔一般设一个，这是为了减除显色液的OD值。而阴性和阳性标准品**是设2个复孔，虽然有点浪费，但为了确保实验的可靠性，我认为还是很有必要的。ELISA空白孔加什么？一般两个做法，看个人习惯或者说看你们实验室的习惯： 1，什么都不加，然后那个孔按照操作流程来做，这个说法的根据就是空白，也就是什么都没有。 2，加样本稀释液，然后按照操作流程来做。这个做法的根据就是只要不含阳性物质就算是空白的，加入样本稀释液的目的是为了使这个孔除了在没有阳性物质上其他的都与其他孔一致。 怎麽控制显色时间？ 显色时间要通过预实验找到所测所有sample的显色OD在0.1到2.0的有效range间，用过OPD solution，一般incubation for 15min at RT，测一次然后立即加入stop solution 在测一次。
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