-
鲎和鲎试剂细菌内毒素检测的发展史及在制药和质控检测方面的应用
作者：德尔塔 日期：2022-04-13
笑看风云5亿载 · 默默奉献半世纪 ——记鲎和鲎试剂细菌内毒素检测 对，没错，我们这次是讲鲎（h-òu），不是h-ōu，更不是鳖（biē）。 硬硬的壳，尖尖的尾，四只眼，似蟹而非蟹，如同马蹄，人称“马蹄蟹”。拉丁名Limulidae，英文名Horseshoe Crab，别名夫妻鱼。 “马蹄蟹”牌扫地机器人 传奇的鲎生——笑看风云5亿载 最早的鲎化石发现于奥陶纪（5.05~4.38亿年前），到志留纪时（4亿多年前）海洋无脊椎动物发生了重要的更新，繁盛一时的三叶虫逐渐衰退，板足鲎类开始兴起，这就是现代鲎的祖先。4亿年后，鲎没有发生太大变化，几乎只是玩了一把“穿越”。现代鲎没有近亲，与蜘蛛、蝎子同门，仅有4个物种：美洲鲎、中国鲎、巨鲎、圆尾鲎。 图1. 志留纪板足鲎复原图和现代鲎分类学地位 [1] 在我国，关于鲎的记载由来已久。 山海經註：鱟魚形如惠文冠，靑黑色，十二足，長五六尺，似蟹，雌常負雄，漁子取之，必得其雙。子如麻子，南人爲醬。 那“鲎”名有啥来源？ 据说在南方一些方言中，鲎和“学”字同音，所以应该是“学”表音，“鱼”表意。这样说来，鲎还是“一种有学问的鱼”了。的确，笑看风云5亿年，这种生物的存在的确蕴含着独特的生存智慧。 几亿年间，地球上因为内部和外部的环境变化，一共经历过5次生物大灭绝（6500万年前白垩纪~4.4亿年前奥陶纪晚期，行星撞击和全球气温变化，导致约70%~90%的生物毁灭），而鲎以它坚强的意志力、无与伦比的适应能力，保全了自己，活到现在，且容颜未改，纯属奇迹！ 图2. 鲎化石及化石复原图及现代鲎血液系统[2] （左：2021年重庆秀山，恐鲎生态复原图，距今4.3亿年[3]；中：2007年云南罗平，罗平鲎，距今2.4亿年[4]；右：鲎血液循环系统） 至于奇迹发生的原因，大致有如下：身上长有坚硬的“盔甲”，可以防身；自然界中鲎也没什么天敌，具有毒性一般不被人食用；繁殖能力很强，一次产卵200粒以上；三种栖息地（沙滩，低潮位泥质滩涂，海域）依次渡过，避免大鲎和小鲎争抢食物地盘，分
-
小鼠悬尾实验测试方法与指标评价
作者：德尔塔 日期：2022-04-13
1985年,Steru等建立悬尾实验方法,其原理主要是:将小鼠尾巴悬挂,小鼠头部向下成倒悬体位,刚开始小鼠会剧烈挣扎试图逃脱这一不适的状态,但挣扎一段时间后发现逃跑无望会表现出不动状态,也被认为是一种“绝望”状态。悬尾实验以悬尾小鼠的不动时间为指标检测动物的绝望行为,是抗抑郁药物初筛以及检测模型动物是否出现“抑郁样”行为的常用检测实验。 实验软件 VisuTrack动物行为分析软件采用动物轮廓识别技术，针对抑郁实验的特点单独开发的识别算法，可精确辨别动物的四肢。先识别动物的全部身体形态，然后计算动物特征身体部位，针对于每一个身体部位的动作独立分析。分析更细致，结果更准确，数据更客观。 测试方法 在小鼠悬尾实验中，将小鼠尾巴 3 /4 处固定在某 一挂钩上，离地面 30 厘米左右，并在与小鼠悬挂装置 水平方向放置摄像头。实验过程中，需要有“实验组” 与“控制组”，分别是用药与未用药小鼠，注射药物一 段时间后进行实验(皮下注射需等待 30 分钟，口服药 物则需要等待 60 分钟)。 悬尾实验多采用小鼠,其操作方法如下 : (1) 实验开始前,动物尾部悬吊使小鼠呈倒悬体位,头部应与悬尾箱底面保持一定距离。 (2) 如同时进行多只动物实验时,每两只动物间应用不透明挡板隔开。 (3) 记录检测期动物的不动时间。 (4) 实验时间应为 6 min,记录后 4 min 内动物的不动时间。 评价指标 用不动、运动挣扎二类动作行为的时间进行判定。 (1)摇摆不动：动物停止挣扎,身体保持垂直倒悬状态,静止不动。动物的在悬尾实验中的不动时间越 长表明抑郁程度越重。空白对照组 c57 小鼠不动时 间较长,均值多大于100s;空白对照组 ICR 小鼠不 动时间均值多小于 100 s;抑郁行为判断标准:不动时间与对照组相比有显著性增加(P < 0. 05)。 (2)运动挣扎：动物有明显可见的挣扎运动。运动挣扎时间越短,表明抑郁程度越重。 注意事项 1、TST 悬尾实验不建议用较重的大鼠，因为大鼠只能通过它们的尾巴来支持它们的体重，
-
基于像素的实例分割方法利用Airphen表型车对稠密树叶进行数据采集
作者：德尔塔 日期：2022-04-13
来自法国农业科学院等研究机构的专家，利用Hiphen公司开发的Airphen多光谱成像系统（集成与表型车上），发表了题为“Pixelwise instance segmentation of leaves in dense foliage”的文章，文章发表于Computers and Electronics in Agriculture，Volume195,April 2022,106797。 摘要 叶片的像素级实例分割是在植物种类的混合体上执行的。 提出了一种新的基于形状的损耗函数，并将其应用于每个连接部件。 分割输出使用分水岭和深度索引方法进行细化。 该方法的基准测试是在“叶片分割挑战”上进行的。 共享了一个新的多光谱数据集，其中包括在自然光下采集的300幅图像。 使用图像分析检测和识别植物是精准农业（从表型到特定地点杂草管理）中许多应用的关键步骤。实例分割通常用于检测整个植物。然而，被检测物体的形状在个体和生长阶段之间会发生变化。减少这些变化的一个相关方法是缩小对叶片的检测范围。然而，当图像包含混合植物种类时，当个体重叠时，尤其是在不受控制的室外环境中，分割叶片是一项困难的任务。为了充分解决这个问题，本研究基于最近的卷积神经网络机制，提出了一种基于像素的实例分割方法来检测密集树叶环境中的树叶。它结合了“深度轮廓感知”（从其边缘的内部分离大叶子）、“叶子分割槽、边缘的分类”（以特定的内边缘分离实例）和“密集叶的金字塔CNN”（考虑不同尺度的边缘）。但分割输出也会使用分水岭和计算优化植被指数（deepindex）的方法进行优化。该方法与其他运行叶片分割挑战（由PPPN国际植物表型网络提供）的方法进行了比较，并应用于小松属植物的外部数据集。此外，还介绍了一个新的多光谱数据集，包含300幅豆类植物图像（具有浓密的叶子、个体重叠、物种混合和自然光照条件）。地面真值（例如树叶边界）由标记的多边形定义，可用于培训和评估各种专门用于树叶检测或作物/杂草分类的算法的性能。在通常的数据集上，该方法的性能与通常的叶片分割方法相似。在新的数据集上，它们的结
-
酵母细胞的培养与观察操作指南
作者：德尔塔 日期：2022-04-13
一、实验目的 1.掌握酵母细胞的培养方法 2.学会使用相差和微分干涉显微镜 二、异源互补技术概述 酿酒(芽殖)酵母的培养在许多方面可以与大肠杆菌相比较。这种酵母可以用标准的微生物学技术在液体和固体培养基中进行培养。大多数酵母菌株在复合液体培养基中的倍增时间为90～120min，到静止期时细胞滴度为3×108到5×108细胞/mL。单个细胞在复合固体培养基上经过36hr可长成1～2mm的单菌落，在合成的有限培养基中生长较慢，倍增时间至少增加为原来的两倍，且细胞的最终滴度仅达到2×107到3×107细胞/mL。在有限培养基平板上菌落需大约60hr才能长成容易计数的大小。在复合或有限培养基上生长的菌落能影印培养或转移到膜上，进行分子水平的分析。 非洲粟酒裂殖酵母和其近亲酿酒酵母一样，是一种子囊真菌，但它与发芽酵母的关系并不密切，两种酵母的蛋白质序列和基因同源性在60﹪到90﹪。与酿酒酵母相比，非洲粟酒裂殖酵母通常是单倍体细胞，可分为两种交配型，在饥饿情况下不同的交配型单倍体进行交配，形成杂合的双倍体合子。双倍体合子经过减数分裂形成4个孢子，由孢子发芽而长成单倍体菌落。非洲粟酒裂殖酵母具有典型的真核生物的细胞周期，包括G1、S、G2和M四个时期。在基本或复合培养基中其世代时间为2到4个h，其中G2期占细胞周期的70﹪，其它期各占10﹪。 三、材料、试剂和仪器 1.材料 酿酒芽殖酵母(Saccharomycescerevisiae)和非洲粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyceskephir)。 2.试剂 1)酿酒芽殖酵母的培养基 (1)YPD(YPED)液体培养基(用于酵母菌摇培，100mL) 细菌培养用蛋白胨(Bacto-peptone)2g 细菌培养用酵母提取物(Bacto-Yeastextract)1g 葡萄糖(Glucose，配成40%detrose贮液单独灭菌,4℃保存)2g 加ddH2O至90mL，调pH值至4-5，定容至95mL，高温灭菌(121℃,15min)。待温度降至55℃时，加入5mL预热(至少室温放置30min)无菌的40%detrose贮液。
-
焦虑状态动物模型之高架十字迷宫的实验方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-13
随着工作、生活节奏加快，压力增大，焦虑是临床常见症状，过度焦虑可导致焦虑症、抑郁症等心理 疾病，严重影响人们的生活质量和健康水平。焦虑状态动物模型的制作对进一步研究疾病十分重要。 高架十字迷宫（elevated plus maze，EPM）实验是利 用动物对新异环境的探究特性和对高悬敞开环境的 恐惧形成矛盾冲突行为来考察动物的焦虑状态，是动物焦虑行为学研究中较为经典的测试。但目前对于 EPM实验的应用并无统一标准。本文通过检索以往应用这项实验评价大鼠焦虑状态的研究，并进行整理分析，以期为后续使用该方法评价焦虑大鼠模型提供参考。 01高架十字迷宫的装置 常用的高架十字迷宫多在温度、湿度相对稳定、进行过遮光处理、安静的房 间里设置４个高于地面的十字交叉窄臂。十字臂距离地面的高度通常为40-70cｍ，其中50cm的较多，一般不超过75cm。２条开放臂的尺寸 多为45cm以上的长度、宽度为10cm 或15cm，边 为1cm的臂高。另外两条多为长宽与开放臂相 同的封闭臂，其臂高多为30cm 或40cm 以上， 仅发现一项研究中封闭臂的臂高为12cm。４条 臂之间的中央连接区多为15cm×10cm 或10cm ×15cm的正方形，如图,A：十字臂距地面的高度 B：开放臂长度 C：开放臂宽度 D：开放臂臂高 E封闭臂臂高 F：中央连接区 02将大鼠放置入EPM的初始状态 高架十字迷宫开始时多将单只实验大鼠置于迷宫中央平台区，大 鼠头朝向其中一个开放臂或封闭臂，也有研究开始时将大鼠放置于其中一个开放臂，头朝中央区域。 03大鼠提前进入实验环境时间 一般提前15min将大鼠放入EPM 实验房间，使其适应环境，也有实验提前1h或2h。 04实验时长 大多数文献中每只大鼠在EPM 实验时间为5min，少数研究将时间延长到10min，甚至更长时间。 05高架十字迷宫实验结果评判方法 EPM实验过程中，通常由操作者人工或通过迷宫上设置的摄像、使用VisuTrack动物行为分析跟踪设备（上海欣软）记录大鼠进入开放臂次数 （open arm entry，OE）、开放臂停留时间（op
-
旷场实验测试方法、指标评价及注意事项
作者：德尔塔 日期：2022-04-13
旷场实验是经典的情绪相关行为学检测实验, 最早由 Hall 设计。 是用于检测动物在陌生环境中的行为表现,包括自发活动行为和探索行为,是评价动物在新异环境中自主行为、探究行为与紧张度的一种方法。 检测指标为动物首次进入中央区的潜伏期、中央区停留时间和穿行次数;结合抑郁模型可检测动物的“抑郁样”行为和药物的抗抑郁作用,检测指标为动物的开场活动性,可人工计数动物的水平爬格次数和垂直站立次数作为行为指标,也可采用自动摄像记录动物运动轨迹,并采用行为学分析软件进行分析运动距离、运动速度、休息时间等行为指标。 该实验亦可用于评价抗抑郁药物的起效速率。 实验材料 旷场实验箱通常分为大鼠和小鼠两种规格，其中大鼠旷场实验箱建议尺寸为100cm*100cm*40cm，小鼠旷场实验箱尺寸建议为50cm*50cm*40cm。实验箱材质采用黑色或者白色单面磨砂亚克力为宜，也可以使用中性颜色（如蓝色）的医用ABS工程塑料，内壁不可反光。 旷场实验的分析软件可使用VisuTrack动物行为分析软件（上海欣软），自动跟踪目标老鼠的运动轨迹，识别动物的头部、重心及尾巴，直接生成活动轨迹图、区域偏好指数图和活动量热图等。 实验方法 旷场实验操作简单,在用于抑郁行为学评价中,无适期阶段,操作步骤如下 : (1) 实验前,动物应适应检测环境 30 ~ 60 min； (2)实验人员在VisuTrack软件中预先设置好相应的参数，记录好动物的编号、日期、状态信息； (3) 动物放入测试箱后,即开始检测,检测时间宜为5~10 min; (4) 每次实验时应从同一位置同一方向将动物放入测试箱中央。 大小鼠旷场实验箱，型号：XR-XZ301，上海欣软 评价指标 (1) 总路程(total distance)：动物在实验记录时间内产生的物理位移累积； (2) 速度(speed)：动物在单位时间产生的物理位移。 5min内正常动物总路程多为1000~2500cm,速度为3~8cm/ s。 动物出现抑郁行为时,速度减少； (3) 运动总时间(total move time)：动物在实验记录时间
-
基于近端多源时序数据和多任务深度学习同步预测小麦产量和品质性状
作者：德尔塔 日期：2022-04-13
Plant Phenomics | 基于近端多源时序数据和多任务深度学习同步预测小麦产量和品质性状 产量和品质是小麦生产中最重要的两个指标。氮肥的过量施用在促进小麦稳产高产的同时造成了小麦品质“强筋不强，弱筋不弱”等问题。收获前的小麦产量和蛋白质含量预测是解决这种产质不协调问题有效途径。近端遥感技术的发展为高效精确的产量/籽粒蛋白质含量（GPC）预测带来了新机遇。但是，如何能够有效地融合近端、多源和长时序数据，实现高精度、高效率的产量和蛋白质同步预测，仍充满挑战。 近日，Plant Phenomics在线发表了南京农业大学前沿交叉研究院金时超课题组联合农学院姜东课题组合作完成的题为Simultaneous Prediction of Wheat Yield and Grain Protein Content Using Multitask Deep Learning from Time-Series Proximal Sensing的研究论文。 该研究利用田间轨道式高通量表型分析平台（图1a），收集了小麦全生育期逐日的多光谱和激光雷达数据，主要目的包括：1）探讨多源数据融合、多任务学习和不同时序特征提取的深度学习模块对产量和GPC模型预测精度的影响；2）提出一个新的双输入双输出深度学习模型，耦合了数据融合、多任务学习和最优特征提取模块（注意力机制模块）等策略；3）可视化了注意力机制模块的时间通道注意层，解释了生育时期对模型预测精度的贡献。 图1整体流程 基于模型输入和输出的变量个数，本文提出了4种模型结构：单输入单输出模型（图2a）、单输入双输出模型（图2b）、双输入单输出模型（图2c）和双输入双输出模型（图2d）。 图2模型结构 主要结果如下： （1）单输入单输出模型的产量和GPC预测性能 选用代表性结构性状和光谱性状各4个，利用单输入单输出模型，验证了GNDVI在光谱性状中表现最优，而Hmean在结构性状中表现最优（图3）。 图3不同性状在单输入单输出模型中对产量和GPC的预测精度 （2）数据融合和多任务学习对模型性能的影响 利用双输入单输出模型，
-
寄生虫做单细胞转录组分析
作者：德尔塔 日期：2022-04-13
布氏锥虫简介：布氏锥虫是一种鞭毛寄生虫，能够导致布氏锥虫病，可以在人和动物体内进行寄生，引起人的嗜睡症和家畜的那加那病。 文章题目：Single-cell transcriptomic analysis of bloodstream Trypanosoma brucei reconstructs cell cycle progression and developmental quorum sensing 中文题目：血液布氏锥虫的单细胞转录组学的分析重建细胞周期进程和发育群体感应 发表时间：2021.05 发表期刊：Nature Communications 摘要 锥虫生命周期中的发育步骤涉及了复制型和非复制型之间的转变，该转变专门用于哺乳动物和舌蝇宿主之间的生存和传播。在这里，我们利用寡肽诱导的体外分化，模拟了从复制的“细长型“到可传播的“短粗型”锥虫的渐进发展，并利用单细胞转录组测序（scRNA-seq），捕获了8599种寄生虫的转录组。利用这个框架，我们详细描述了异步发育过程中生物事件的相对顺序，分析了动态基因表达模式，并确定了可能的调控因子。此外，我们还绘制了增殖寄生虫的细胞周期图，并将短粗型细胞周期退出的时间定位在发展到一个不同的G0状态之前的G1早期。利用scRNA-seq进一步分析瞬时升高的发育调节因子ZC3H20的无义突变体，确定了其在发育图谱中的失败节点。寄生虫分化与病原体生物学的不同转变相关，这种方法为剖析寄生虫分化事件提供了一个范例。 研究结果 Result1：scRNA-seq区分细长型和短粗型的转录组 为了在体外得到短粗型的锥虫，作者用富含寡肽的10%的BHI处理细长型锥虫，同时，检测0h、24h、48h、72h时锥虫的数量、锥虫形态、含有短粗型maker蛋白PAD1的锥虫数量、细胞核的拷贝数以及动质体DNA，结果发现，72h以后，锥虫生长停滞、形态改变且短粗型锥虫数量发生了增长。 接着，为了捕获细长型、中间型以及短粗型的寄生虫，作者将0h、24h、48h、72h的锥虫等比例混合，利用Chromium Single Cell 3′ workflow和Illumina两个平台得到锥虫的转录组数据，总共做了2个重复：WT1、WT2，分别得到了5321和3278
-
“双眼”无人机和图像处理技术用于空中精准农业和植物表型分析研究
作者：德尔塔 日期：2022-04-13
农业领域是无人机和图像处理技术快速发展的试验平台，这些技术正迅速成为高效精准农业和植物表型（可观察到植物性状的评估）不可或缺的工具。利用无人机搭载的多光谱相机获得的航拍图像，专家可以快速获得有用的信息，例如植物高度、叶绿素和氮含量，以及植物病害的存在和程度。无人机（UAV）的进步带来了智能农业，降低了成本并提高了产量。然而，由于无人机的自主性有限，它的数据质量和总飞行时间之间存在制衡。无人机作为依赖小型电池作为能源的设备，它的自主性相当低，充电或更换电池所花费的时间会严重阻碍它们在足够大的田地中的数据“吞吐量”。目前，这个问题只能以牺牲空间分辨率或目标表面三维重建的质量为代价来解决。这些瓶颈限制了无人机的效率和准确性。 近日，Plant Phenomics 在线发表了法国国家农业食品与环境研究院（INRAE）和法国 HIPHEN 公司的 UMT CAPTE 团队题为 A double swath configuration for improving throughput and accuracy of trait estimate from UAV images 的研究论文。研究人员开发了一种新颖的配置，可以大大提高准确性并将图像采集和处理时间减半，从而为更高效的精准农业打开了大门。 该研究提出了一种新的图像采集策略，他们在同一无人机上安装至少两个不同焦距的相机。通过使用适当的图像处理算法，研究员设法共同配准（对齐和调整）来自不同光谱带的图像，包括使用不同焦距和略微不同角度捕获的图像。反过来，这使他们能够生成土壤和农作物的三维密集点云，然后他们用它来创建整个田地的 “正射影像”（经过几何校正以统一比例的航空照片）并提取植物高度。 使用这种具有两种不同焦距的“双波长配置”的好处是多方面的。首先，在给定的最小空间分辨率和预定重叠下，覆盖整个目标区域所需的图像数量基本上减半。因此，不仅飞行时间而且处理时间至少都减少了一半。此外，实验结果表明，“双波长配置”方法在“地理参考”或将航拍照片的内部坐标映射为相应的物理空间坐标方面具
-
浅析条件性恐惧实验（场景恐惧实验）的行为学测试方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-13
一、实验介绍 条件性恐惧实验系统（场景恐惧系统）用于小型啮齿类动物（大、小鼠）环境相关条件性恐惧实验研究。啮齿类动物在恐惧时会表现出特有的不动状态（ Freezing ），动物在这种情况下倾向于保持静止不动的防御姿势。抗抑郁药和抗中枢兴奋药可以明显缩短不动状态持续的时间。 实验过程中，实验对象被给与一个声音信号（条件刺激），随后给予电击（非条件）刺激。该训练称为条件性训练，训练结束后实验动物进行声音信号或环境联系性实验。一般情况下啮齿类动物对相应的环境和不同环境下同样的声音信号都会做出明显的条件性恐惧反应，如静止不动。这种测试可以在训练结束后立刻或几天后进行可以提供在条件信号影响下短期和长期记忆的信息。 二、实验设备 包括条件恐惧箱、隔音箱和SuperFcs软件，型号：XR-XC404，由上海欣软信息科技有限公司生产。条件恐惧箱包括与箱底格栅地板相联的电击发生器（可产生0.1~1.0mA的各种强度的电击）、声音发生器（可产生宽频的卡嗒声或低频音），并与计算机相联。隔音箱装有一灯、一小风扇（用于通风和产生背景音）以及一个与声音发生器相联的扩音器。隔音箱门上有一猫眼，用于观察操作箱内的动物。一个隔音箱内可放置两个操作箱，这样可同时观测两只动物，但两动物彼此不能互相看见。关联箱由透明有机玻璃制成，有可移动的格栅式地板和纱窗式顶部。 三、 实验方法 分为训练和测试两阶段 （一）训练阶段（第一天） 1、调试仪器，以确保格栅地板有电流刺激，扩音器有声音刺激，并分别记录电流强度和声音强度（分贝）。 2、将大鼠放入条件恐惧箱2min（A相），记录这最初2min内动物的凝滞（freezing）时间作基线。 3、接着加入条件声音，80Db,30s(B相)。 4、紧接着再给予电击，0.35mA，2s（C相），完成一轮训练。如需要多轮训练，则重复A、B、C三相训练即可。 5、记录整个训练阶段动物凝滞时间（s），用以测量动物的非条件恐惧（unconditioned fear）。 6、将大鼠移开操
-
单细胞测序神经发育单细胞多组学解决方案
作者：德尔塔 日期：2022-04-13
小胶质细胞是位于脑实质中的免疫细胞，在发育早期中调节神经回路和连接以及大脑稳态方面发挥着重要作用。小胶质细胞通过吞噬多余的突触，参与神经发育过程。小胶质细胞的吞噬功能异常可能导致突触修剪过度或不足，从而影响神经系统发育，导致相关精神疾病（自闭症和精神分裂症等）。美国哈佛大学医学院的研究团队在Immunity（IF 38.50）上发表题为“Disruption of the IL-33-ST2-AKT signaling axis impairs neurodevelopment by inhibiting microglial metabolic adaptation and phagocytic function”的研究成果，在这项研究中，研究人员利用10X genomics单细胞转录组测序结合Smart-seq2单细胞转录组测序发现小胶质细胞线粒体的活性与吞噬功能相关，并且表现出异质性，其中IL-33-ST2信号轴与线粒体的代谢作用相关。IL-33-ST2信号轴的受损影响了神经发育，增加了癫痫发作的可能性。 研究材料 从幼鼠的大脑皮质中分离出的小胶质细胞；BV2细胞株 技术路线 步骤1：通过流式分选技术、细胞学实验结合Smart-seq2测序发现了小胶质细胞的吞噬功能与线粒体的活性相关； 步骤2：通过10Xgenomics单细胞测序发现小胶质细胞的吞噬功能受IL-33-ST2信号轴驱动，且IL-33-ST2通路被阻断会导致突触异常和行为缺陷； 步骤3：实验发现IL-33-ST2信号轴在小鼠体内依赖AKT元件调控小胶质细胞的能量代谢； 步骤4：通过拟时序分析发现在大脑的发育过程中，小胶质细胞内AKT元件的激活受时间影响。 研究结果 1. 小胶质细胞线粒体活性与其在大脑中的吞噬功能相关 为了探索小胶质细胞的功能状态是否反映在它们的细胞代谢中，作者设计比较了出生后第9天的小鼠大脑中具有不同线粒体活性程度的小胶质细胞，发现线粒体活性高的小胶质细胞高表达CD63以及hallmark基因。同时通过对第9天的小胶质细胞研究发现，发现吞噬能力强的小胶质细胞同样具有高表达CD63以及hallmark基因的特征。显示了小胶质细胞线粒体活性在功能上与小胶质细胞吞噬活性的
-
人胆囊癌细胞的培养和应用
作者：德尔塔 日期：2022-04-13
一、背景 人胆囊癌细胞是从一位61岁的男性低分化胆囊癌患者中建立的；GBC-SD细胞的形状有多边形、纺锤形和正方形；GBC-SD细胞能分泌CEA和CA19-9。GBC-SD细胞倍增时间大约为21.4小时，可移植到裸鼠，生成的肿瘤与原发肿瘤相似。 二、细胞培养步骤 1、培养基及培养冻存条件准备： 1）准备DMEM培养基；优质胎牛血清，10%；双抗，1%。 2）培养条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。 3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。 2、细胞处理： 1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，离心管加入4mL培养基混合均匀。在800-1000RPM条件下离心4-5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入T25培养瓶中培养，补加培养基至6ml。 2）细胞传代：如果细胞密度达80%，即可进行传代培养。 1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。 2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3-4ml此细胞的培养基终止消化。 3.轻轻吹打后吸出，移入15ml离心管中，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养液后吹匀。 4.收到细胞后首次传代将细胞悬液按1：2的比例分到新的含6ml培养基的新皿中或者瓶中，建议冻存一支备用，后续传代根据实际情况按1:2到1:4的比例进行。 3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。 三、应用 用于青蒿琥酯联合5-氟尿嘧啶对人胆囊癌细胞作用的实验研究： 研究青蒿琥酯和5-FU对人胆囊癌细胞的增殖、迁移、凋亡和细胞周期的影响,比较两种药物对细胞的作用强度,探究青蒿琥酯在**胆囊癌中的应用前景。 方法：用CCK-8法来检测青蒿琥酯和5-FU的OD值并计算半数抑制浓
-
酵母细胞质粒提取步骤和酵母细胞破壁方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-13
酵母细胞质粒提取步骤和酵母细胞破壁方法 一、酵母细胞质粒提取步骤 1.接种单菌落(待检测酵母细胞)于25mLYNB(补加氨基酸营养物)培养基中，30℃振荡培养过夜。 2.第二天取一滴菌液于进行显微镜下观察,目镜用16,物镜用40倍观察细胞壁破碎前的状态,其成杆状,流动性比较下. 3.取10ml的培养酵母菌液,5000g离心3min,弃上清液.加入5ml的1倍TE悬浮. 4.将悬浮液倒入高压破壁仪的样品管中,利用高压破碎机进行破碎细胞壁,压力加到20Mpa,停留15s,降压,反复来回压3次.取出细胞液,取一滴于显微镜下观察,如果细胞呈不规则的球状时,而且其流动性比较大,说明其细胞壁已经破碎成为原生质体. 5.取2个EP管,每管加入1.5ml上述的细胞液,12000g离心5min,收集原生质体.弃取上清液,每管加入300ul10%的SDS溶液,混匀冰浴5min,进行破原生质体. 6.然后加入150ul的tris饱和酚,和150ul的卤仿异戊醇混合液(卤仿:异戊醇=24:1),混匀,12000g,离心10min. 7.将水相移到另一EP管中,加入等体积的卤仿异戊醇混合液(卤仿:异戊醇=24:1),混匀,12000g,离心10min. 8.将水相移到另一EP管中,加入1/10体积的3MKAC溶液和2倍体积的无水乙醇,放入-20℃冰箱中 9.1h,12000g离心10min,倒出乙醇,等干燥后加入1ml的70%的无水乙醇,混匀,12000g,离心10min. 10.弃去乙醇,等室温干燥后,每管加入20ul的TE溶液(如要去处RNA酶,加入1ul的100mg/ml浓度的RNA酶),放入-20℃冰箱即可. 11.跑电泳进行检测是否从酵母菌中提出质粒了. 二、酵母破壁方法 我给你介绍两个必叫简单点的酵母破壁方法，非常实用，我作过很多实验，这两个方法是我自己总结出来的，希望对你有用。 酵母的细胞壁比较厚,不易破，而且细胞壁中含有的一些成分容易影响以后的实验，所以破壁的步骤非常关键!其他步骤只要你按照说明就可以了。 1.酚氯仿剧烈振荡方法破壁：培养好的1ml酵母细胞在STE溶液中洗涤两次后，用70ulTE缓冲液重旋!加入50ul玻
-
新奇事物探索实验方法、指标评价及注意事项
作者：德尔塔 日期：2022-04-13
新奇事物探索实验也叫新物体识别实验，是一种较新的评价抑郁症的典型症状：兴趣缺失的行为学方法。 其主要是研 究动物对新奇事物的探索行为，是基于动物先天的 寻求新奇的行为，并用此来评价抑郁症模型是否存在兴趣缺失症状的方法，一般情况下抑郁症模型动物在新奇事物实验中的探索行为减少。 1998年Harris 等通过对慢性不可预测性应激模型大鼠研究第一次将动物对新奇物体的探索行为作为评 价抑郁症动物模型兴趣缺失的评价指标。 实验材料 硬件：新奇事物探索实验可以分为大鼠和小鼠测试，其中小鼠建议的测试箱规格为40cm*40cm*40cm的透明箱体，大鼠规格建议为72cm*72cm*40cm的透明箱体。 软件：需要使用VisuTrack动物行为分析软件，自动跟踪实验动物的头部、重心及尾巴，考察动物头部接触物体的潜伏期、持续时间、接触次数等偏好指标。 实验方法 新奇事物探索实验分为适应期和测试期两个阶段，操作步骤如下 : (1)适应期：动物放入自发活动测试箱，适应5min后，取出，放回原笼； (2)测试期：在同一环境条件下引入一新物体 (应放入中心位置),再将待测动物面壁放入测试 箱，开始实验； (3)检测时间应为10min。 评价指标 潜伏期( latency period):实验开始至动物首次 主动探索(接触)物体的时间。 如规定检测时间内， 动物没有接触新物体，则潜伏期记录为检测时间。 正常大鼠潜伏期多在 130 s 以内。 抑郁行为判断标准：与对照组相比有显著性增加(P < 0. 05)。 (注： 动物对新物体的探索标准：动物口鼻在新奇物体≤ 2 cm 范围内，直指向新奇物体或直接接触物体。) 注意事项 所有行为学实验都要求周围安静，实验应在隔音，光强度和温、湿度适宜且保持一致的行为实验室内进行。 实验前需要对实验动物每天抚摸1-2min以减少非特异性应激刺激对实验动物的影响；实验前需要提前至少3小时将动物带入实验室，降低动物对新环境的不安情绪。 实验过程尽量是同一个人在每天的同一个时段来做；若多个人多批动物重复一个实验
-
半水生生物呼吸与能量代谢监测技术方案
作者：德尔塔 日期：2022-04-13
北京易科泰生态技术有限公司致力于提供“生态-农业-健康”研究全面解决方案，积十几年动物能量代谢与生理生态仪器技术服务经验，与美国Sable、Pyro等国际一流能量代谢技术公司合作，为动物生理生态、生物医学等科研工作者提供动物能量代谢与动物生理生态研究全面解决方案： 1、实验动物能量代谢测量技术方案：包括果蝇、斑马鱼、大小鼠、豚鼠、家兔等实验动物 2、家畜家禽能量代谢、营养代谢测量技术方案 3、生物医学研究能量代谢测量技术方案 4、生物安全、媒介生物能量代谢测量技术方案 5、昆虫等能量代谢测量技术方案 6、病虫鼠害能量代谢测量技术方案 7、动物生理生态能量代谢测量技术方案 8、动物呼吸与能量代谢测量技术、红外热成像分析技术、体温心率监测技术、行为观测分析技术等综合技术方案。 生物的能量代谢和呼吸方式多种多样，比如青蛙和蝾螈不止可以在地表用肺呼吸，还可以在水体中利用皮肤来呼吸，它们的皮表下有很多的血管，让氧气进入血管；而半水生蜥蜴在水下自然呼吸时，其疏水性皮肤可以在其身体表面维持一层薄薄的空气层，通过从肺部呼出的空气进入这个气泡进行再呼吸，产生一个局部扩张的再呼吸气泡，然后重新吸入这些空气。此外非水生蜥蜴在水下时不会形成覆盖皮肤的空气层，这些物种呼出的空气以小气泡的形式流失到水面，因此无法进行水下“再呼吸”。 针对半水生动物奇特的呼吸策略，北京易科泰生态技术有限公司利用国际先进的呼吸和能量代谢相关研究仪器技术与最新的科研成果，推出易科泰半水生生物呼吸与能量代谢监测技术方案： 1.完全暴露于大气环境的通用动物呼吸与能量代谢测量模块：包括O2、CO2、CH4、水汽等不同监测单元，根据动物体型定制化的专业呼吸室，以及便携式和多通道的集成单元等； 2.暴露于水体但利用体表气泡“再呼吸”的水体气体分压呼吸与能量代谢监测模块：包括O2、PH和温度等多种监测模式； 3.完全暴露于水体的溶解氧呼吸代谢测量模块：包括O2、PH值、温度
咨询热线
18133906270
德尔塔官方微信