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德尔塔：提高MSC的扩增且不损失其分化潜能
作者：德尔塔 日期：2022-04-11
骨髓间充质干细胞或者骨髓基质细胞（MSCs）是具有多种系潜能的成人干细胞，它们便于基因改造并且具有免疫抑制能力。它们用途广泛，为组织工程学，再生医学和免疫疗法带来希望。包括骨髓，骨膜，骨小梁，脂肪组织，滑膜，骨骼肌和乳牙在内的许多组织都有MSCs。它们能分化为骨，软骨，肌肉，骨髓，腱，脂肪和结缔组织（图1）。怀着对在体和体外实验深入研究的希望，我们有兴趣优化培养和扩增MSC的培养条件，同时保留MSC的多能性和分化能力。为了评估不同来源和浓度的血清对MSC扩增的影响，我们用市上分化试剂盒和组分严格地测试了每种FBS对扩增潜能，维持hMSC表型特性和扩增的MSCs分化为脂肪细胞，骨细胞，软骨细胞的影响。我们通过对FBS的筛选开发了StemXVivo人/小鼠骨髓间充质干细胞扩增培养基。 我们的研究强调利用为研究hMSCs而开发，优化和测试的市上产品的优点。 我们的研究强调使用商品化产品的优势。为了hMSCs的研究，这些商品化的产品都已经被改善，优化，并且进行了检测。 材料和方法 人MSC 的培养。人MSCs（hMSCs ） 购于Cambrex（ Lonza, Walkersville），先根据供应商的说明书培养，然后用StemXVivo人/小鼠骨髓间充质干细胞扩增培养基（ 目录# CCM004；R&D Systems，Minneapolis）培养。为了测试不同批次FBS的扩增潜能，每种FBS以终浓度为10% 或20% 加入含有谷氨酰胺，丙酮酸钠（Irvine Scientic， Santa Ana） 的α-MEM 培养基（Invitrogen，Carlsbad）。将1.25×105量级的hMSCs接种于一个T75长颈瓶，在细胞汇聚之前让细胞生长3至4天。在培养期末，培养于不同条件的hMSCs同时用胰蛋白酶/EDTA溶液（Irvine Scientic）收集。对细胞计数，并且用下面的公式计算扩增倍数。重新培养时，将1.25×105量级的hMSCs接种于一个新的T75长颈瓶，并用适当的培养基培养。每次传代后对细胞进行计数。 抗体。藻红蛋白（PE）连接的小鼠抗人CD90和CD105的单克隆抗体（mAbs），PE非连接的山羊抗小鼠FABP-4多克隆抗体，PE非连接
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德尔塔：基因表达调控研究进展
作者：德尔塔 日期：2022-04-11
不同细胞具有不同的表型，这是由于在这些细胞中基因的差异表达所导致的。因此，一定存在一些基因表达调控机制，去控制管理不同细胞各自所必需的转录及转录后方式。基因表达调控这一领域的研究正是迅速地揭示基因表达的机制。不过我们也必须要同时意识到，基因表达调控的无限的复杂性。 正常的细胞进行正常的基因表达，而转录是基因表达*基础的一级。当该转录调控出现异常时则很可能会出现不同的疾病。所以，基因表达调控研究应用广泛于多种与人相关的疾病研究。近年来，其研究的方向主要集中于细胞通路的研究，并应用于发现疾病的发病或维持机制，从而*终选取适当的检测或**方法。 基因表达调控包括转录调控与转录后调控。主要是在于基因通过多种方法，使DNA结构、转录、翻译时空发生改变，但不改变DNA本身的序列，*终影响其表达效率。这些方法主要包括DNA甲基化、组蛋白修饰、非编码rna分子作用以及多种蛋白质结合修饰。其中，以*后一点尤为重要。 一、基因表达调控研究的进展 1 转录起始的控制 1.1 RNA聚合酶 转录其实是基因转录的关键控制点，而关键的作用酶正是RNA聚合酶。RNA聚合酶是一类大分子蛋白质，是一个由8-14个亚基组成的复合物，其分子质量在500kDa以上。在哺乳动物的细胞中，转录通过三种RNA聚合酶中的一种得以实现，而每一种RNA聚合酶都具有不同的特征 （1）RNA聚合酶I转录rRNA，位于核仁，主要负责50~70%的RNA聚合酶活性; （2）RNA聚合酶II合成核外RNA，位于核浆，主要负责20~40%的RNA聚合酶活性; （3）RNA聚合酶III合成tRNA、5S RNA以及小核RNA，位于核浆，主要负责10%的RNA聚合酶活性。 1.2 基本转录因子（GTFs，General transcription factors）的装配 RNA聚合酶II主要负责哺乳动物的基因差异表达，这完全依赖于转录因子控制转录起始。RNA聚合酶II与辅助的转录因子的复合物就是我们常说的基础转录装置或GTFs。这些独立的部件GTFs聚集在近端启动子区域，提供了一个招集RNA聚合酶II的平台。
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德尔塔：转染试剂盒系统的选择
作者：德尔塔 日期：2022-04-11
说到转染，invitrogen认第二，没人敢认。这么多年来，Invitrogen一直保持着转染市场的地位，而L2K（Lipofectamine 2000）对于做转染的人来说也几乎是无人不晓。当然，Invitrogen并没有躺在功劳簿上睡大觉，为顺应新的研究趋势，它在近几年推出了一系列新产品。如今，除了L2K这张王牌，Invitrogen手上的好牌还不少呢。 效率与温和之间的*佳平衡——Lipofectamine® LTX 强壮的细胞系自不必说，L2K便是很好的选择。但对于某些对转染试剂敏感的细胞系，L2K的毒性也是无法回避的问题。于是，Invitrogen推出了毒性较低的Lipofectamine® LTX。这也意味着在获得高转染效率和高蛋白表达的同时，无需担心转染后细胞的活力。 当然，转染效率也是大家首要考量的因素，特别是在研究原代细胞、神经细胞和干细胞这些难对付的细胞时。当然，Invitrogen也考虑到了。PLUS™ 试剂就是一个秘密武器，让大家在必要时候出手。Lipofectamine® LTX与PLUS™ 试剂配合使用，可以完成难转染的细胞和原代细胞的成功转染，包括人类脐带动脉细胞（HUVEC）、RAW267.3 巨噬细胞、神经元细胞及人类间充质干细胞。 转染过程也非常简单，无需去除转染复合物，也无需在转染后更换培养基。只需将质粒dna、Lipofectamine® LTX及PLUS™试剂加入细胞中，24小时之后，即可分析基因表达情况。 当然，还有一点需要特别注明，Lipofectamine® LTX试剂不能用于小分子RNA的转染，这一点与L2K可不同。因此，在选择质粒与RNA的共转染试剂时，还须选择L2K。 还有一个好消息!以往，Invitrogen的转染试剂只有0.75 ml/1 ml的包装。对于某些不经常做转染，或者只想试一下的客户来说，这个包装太大了，于是他们便改投了FuGENE的怀抱。Invitrogen当然也意识到了这个问题，不久前推出了0.1 ml的Lipofectamine® LTX & PLUS小包装，价格约为528元。常规的1 ml包装则为4800元。 高效转染RNA——Lipofectamine® RNAiMAX 从*初的siRNA到如今的miRNA，随着小分子RNA研究的持续升温，研究
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南京德尔塔：法检测细胞生长
作者：德尔塔 日期：2022-04-11
1．取96孔细胞培养板，每孔中加0.1ml含2×104～10×104靶细胞的培养液（含10％小牛血清的RPMI-1640培养液），在37℃ 5％ CO2的饱和水汽二氧化碳培养箱中培养2～3小时让细胞帖壁（如果是悬浮细胞可直接进行下一步）2．用RPMI-1640培养液2～10倍递次稀释细胞因子标准品，根据情况2～5倍递次稀释待检样品，每孔加0.1ml稀释的标准品和待检样品，每个稀释度3个重复孔。对照孔6个：3个阳性对照孔，每孔加0.1ml含大剂量细胞因子的RPMI-1640培养液，3个阴性对照孔，每孔加0.1ml RPMI-1640培养液。在37℃ 5％ CO2的饱和水汽二氧化碳培养箱中培养24～48小时或预定的时间。3．吸去培养液，用PBS洗涤一次（如为悬浮细胞，应在吸去上清液前离心培养板）。4．每孔加0.1ml PBS和10μl MTT染液，在37℃ 5％ CO2的饱和水汽二氧化碳培养箱中培养4～6小时。5．每孔加0.1ml酸化异丙醇，也可用含10％ SDS的10mmol/L HCl代替酸化异丙醇，在振荡器上振荡混匀，让还原产物充分溶解。置酶联检测仪上测定光密度（OD）值，检测波长570nm，参考波长630nm。以OD值对样品稀释度作图，比较标准曲线和待测样品曲线即可求得待测样品中细胞因子的含量。www.app17.come elisa试剂盒，进口elisa试剂盒，elisa kit，进口血清，进口试剂，明胶酶谱法检测试剂盒，大鼠elisa检测试剂盒，人elisa检测试剂盒-南京德尔塔技术有限公司 原创作者：德尔塔
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德尔塔：多个短串联重复基因座的自动化检验
作者：德尔塔 日期：2022-04-11
[实验原理] 在一个PCR 体系中同时扩增多个基因座的方法叫做复合扩增（Multiplexing PCR）。STR的复合扩增增加了单次检测的信息量，提高了个人识别率，同时可降低成本和检材的消耗，因此显示出重要的法医学应用价值。其基本原理就是利用基因座内等位基因长度的不同；扩增的基因座之间片段长度范围的不同，采用高分辨率的毛细管电泳技术进行分离。同时，结合激光诱导荧光染料显带自动分析技术。 通常，对于每个基因座中一条引物进行荧光标记，不同的基因座引物标记不同的荧光，结合扩增片段的迁移率和荧光的颜色，应用基因序列分析仪及采用相应的分析软件可自动化检出复合扩增的众多STR 基因座的所有信息。 [试剂与仪器] 试剂：1. Identifiler 试剂盒进行PCR 扩增的Master Mix: ⑴ Identifiler PCR Reaction Mix; ⑵ Golden Taq 聚合酶; ⑶ Identifiler Primer Set。 2. 分析试剂： ⑴ Hi-Di 甲酰胺；⑵ GS-500LIZ 分子量标记；⑶ 等位基因Ladder。 易生物仪器库：http://www.ebioe.com/yp/product-list-42.html 易生物试剂库：http://www.ebioe.com/yp/product-list-43.html 仪器：1. PCR 扩增仪（GeneAmp PCR System 9700）； 2. DNA 序列分析仪（ABI 公司3130 基因分析仪）。 [操作方法] 1. PCR 扩增： ⑴ Master Mix 的准备：根据扩增样品数目按下列比例配制。 Master Mix 试剂用量（μl） Identifiler PCR Reaction Mix 样品数×10.5 Golden Taq (5U/μl) 样品数×0.5 Identifiler Primer Set 样品数×5.5 ⑵ PCR Mix 的准备： PCR Mix 试剂用量（μl） Master Mix 15 DNA (0.05-0.125ng/μl) 10 总体积 25 ⑶ PCR 反应条件： 95℃11min→（94℃ 1min→59℃ 1min→72℃ 1min）×28 循环→60℃ 60min→4-25℃ 保温 2. 扩增产物电泳分析样品的制备： 试剂 3130 分析仪用量（μl） Hi-Di 甲酰胺 8.7 GS-500LIZ 分子量标记 0.3 PCR 产物或Ladder 1 总体积 10 95℃变性3min→迅速冰冷3min。然后将样品放入3130 样品载样盘上，备检。 3. 3130 电泳操作：见
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德尔塔：应用四极杆离子淌度飞行时间质谱进行靶向蛋白质组学分析
作者：德尔塔 日期：2022-04-11
应用优势： ■ 肽精确定量 ■ 更低的检测限和定量限 ■ 完全的产物离子覆盖范围，不会发生工作周期损失 ■ 简化方法开发 简介： 近来，基于靶向LC/MS的方法被应用于定量蛋白组学中，以利于实现高准确度的多重相对和绝对定量研究。在研究中，三重四极杆和高分辨率质谱仪均有使用。使用这两种仪器不是完整蛋白质直接定量，而是监测蛋白被酶解后产生的一定量的一种或多种特征肽作为替代。 通常，为了进行绝对定量需要在样品中加入特定含量的标准稳定同位素标记肽。基于三重四极杆的SRM/MRM检测的关键优势在于其灵敏度、采集速度和线性动态范围。 但是，SRM/MRM肽定量的特异性常受到质疑，从而促进了高分辨率精确质量数仪器在肽定量中的应用。本文中证实了SYNAPT G2-Si系统在蛋白质和肽定量中的优势，采用一种全新的High Definition MRM （HD-MRM）模式，其中在四极杆飞行时间质谱仪中以MS/MS模式使用T-Wave离子淌度分离，可在一次采集中提供高灵敏度和选择性的定量检测，并且肽分子离子的所有产物离子均具有响应。 www.shxfbio.com elisa试剂盒,elisa kit,西安elisa实验代测,SOD试剂盒,IgG试剂盒,IgM试剂盒,WB实验代做,免疫组化实验代做,放免实验代测,GIBCO,AMRESCO-德尔塔 原创作者：德尔塔
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德尔塔：利用沉淀实验测定蛋白质等电点
作者：德尔塔 日期：2022-04-11
一、蛋白质等电点的测定 1、目的 （1）了解蛋白质的两性解离性质。 （2）学习测定蛋白质等电点的一种方法。 2、原理 蛋白质是两性电解质。蛋白质分子的解离状态和解离程度受溶液的酸碱 度影响。当溶液的pH 达到一定数值时，蛋白质颗粒上正负电荷的数目相等， 在电场中，蛋白质既不向阴极移动，也不向阳极移动，此时溶液的pH 值称 为此种蛋白质的等电点。不同蛋白质各有其特异的等电点。在等电点时，蛋 白质的理化性质都有变化，可利用此种性质的变化测定各种蛋白质的等电 点。*常用的方法是测其溶解度时的溶液pH 值。 本实验借观察在不同pH 溶液中的溶解度以测定酪蛋白的等电点。用醋 酸与醋酸钠（醋酸钠混合在酪蛋白溶液中）配制成各种不同pH 值的缓冲液。 向诸缓冲溶液中加入酪蛋白后，沉淀出现*多的缓冲液的pH 值即为酪蛋白 的等电点。 3、器材 （1）水浴锅（2）温度计（3）200mL 锥形瓶 （4）100mL 容量瓶（5）吸管（6）试管 （7）试管架（8）乳钵 4、试剂 （1）0.4%酪蛋白醋酸钠溶液200mL 取0.4g 酪蛋白，加少量水在乳钵中仔细地研磨，将所得的蛋白质悬胶 液移入200 mL 锥形瓶内，用少量40～50℃的温水先洗涤乳钵，将洗涤液也 移入锥形瓶内。加入10mL1mol/L 醋酸钠溶液。把锥形瓶放入到50℃水浴中， 并小心地旋转锥形瓶，直到酪蛋白完全溶解为止。将锥形瓶内的溶液全部移 至100mL 容量瓶内，加水至刻度，塞紧玻塞，混匀。 （2） 1.00mol/L 醋酸溶液100mL （3）0.10mol/L 醋酸溶液100mL （4）0.01mol/L 醋酸溶液50mL 5、操作 （1）取同样规格的试管4 支，按下表顺序分别精确地加入各试剂，然后混匀①。 （2）向以上试管中各加酪蛋白的醋酸钠溶液1mL,加一管,摇匀一管。此时1、 2、3、4 管的pH 依次为5.9、5.3、4.7、3.5。观察其混浊度。静置10 分 钟后，再观察其混浊度。*混浊的一管的pH 即为酪蛋白的等电点。 www.app17.come elisa试剂盒，进口elisa试剂盒，elisa kit，进口血清，进口试剂，明胶酶
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德尔塔：高灵敏的电化学发光免疫检测方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-11
相思子毒素电化学发光检测原理：a. 多抗; b. 相思子毒素; c. 生物素化单抗; d. 三联吡啶钌; e. 链霉亲和素包被的磁性微球 传统的磁免疫电化学发光（ECL）检测方法是将磁微球用作捕获抗体的载体，利用其较大的反应面积及顺磁性来实现对检测物的快速结合与分离。由于单个抗体分子用作标记探针时表面可修饰的基团有限，在靶标浓度很低时，标记探针数量很少，很难检测到，这影响到灵敏度的进一步提高。本研究将酶联免疫吸附分析（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）在酶标板上进行的抗体包被、封闭、抗原结合、二抗结合等程序化的操作步骤与磁微球作为标记探针载体的优势相结合，以剧毒生物毒素相思子毒素（Abrin）为检测对象，建立了一种高灵敏的电化学发光免疫检测方法。实验过程如图所示，首先在酶标板上吸附固定相思子毒素多抗，与相思子毒素作用后再与生物素化的单抗结合，形成双抗体夹心免疫复合物，然后通过生物素-链霉亲和素特异相互作用连接三联吡啶钌标记的亲和素包被磁性微球形成磁性微球免疫复合物。将复合物从酶标板上解离后进行电化学发光检测。这样，结合于酶标板的磁微球的量即可反映Abrin 的浓度，且磁微球表面携带大量标记物，可放大检测信号，提高检测的灵敏度。利用此方法检测相思子毒素，浓度在2-200 ng/ L 范围内与电化学发光强度呈良好的对数线性关系，检测限达2 ng/ L。该方法灵敏度较传统方法提高两个数量级，也远高于目前国内外已报道的方法。该法特异性高、重现性好，可用于痕量蛋白的高灵敏检测，在临床诊断、环境监测、生物防护等领域有较好的应用前景。www.shxfbio.com elisa试剂盒,elisa kit,西安elisa实验代测,SOD试剂盒,IgG试剂盒,IgM试剂盒,WB实验代做,免疫组化实验代做,放免实验代测,GIBCO,AMRESCO-德尔塔 原创作者：德尔塔
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德尔塔：Folin—酚法测定血清蛋白的含量
作者：德尔塔 日期：2022-04-11
一、目的 1、学习分光光度计的原理和使用方法。 2、学习Folin—酚法测定蛋白质含量的原理和方法。 3、进一步掌握比色法或分光光度法，准确测定未知样品。 二、原理 蛋白质浓度从它们的物理化学性质，如折射率，比重，紫外吸收测定而得知，或用化学方法，如定氮，双缩脲反应，Folin—酚法是一般实验室中经常使用的方法。Folin—酚法是双缩脲法的发展，反应的步涉及到在碱性溶液中铜一蛋白质复合物的形成，然后这个复合物去还磷钼酸—磷钨酸试剂（Folin氏剂），产生深蓝色（钼蓝和钨蓝混合物）。Folin—酚法灵敏度高，较双缩脲法灵敏100倍。 所测蛋白质样品中若含酚类及柠檬酸均有干扰作用，浓度较低的尿素（约0.5%左右），胍（0.5%左右），硫酸钠（1%），硝酸钠（1%），三氯乙酸（0.5%），乙醇（5%）乙醚（5%），丙酮（0.5%）等溶液对显色反应影响，这些物质浓度高时必须做校正曲线。含硫酸铵的溶液只须加浓碳酸钠—氢氧化钠溶液即可显色测定。若样品酸度较高，显色后色浅。则必须提高碳酸钠—氢氧化钠溶液的浓度1—2倍。 三、材料、试剂与器具 （一）材料 血清：使用前稀释100% （二）试剂 1、标准酪蛋白溶液：称取125毫克酪蛋末，用0.1N氢氧化钠溶液溶解，加蒸馏水到250 毫升，则配成500微克/毫升的标准酪蛋白溶液。 2、Folin—酚试剂甲：由下述四种溶液配制而成。 （1）4%碳酸钠溶液 （2）0.2N氢氧化钠溶液 （3）1%硫酸铜（CuSO4·5H2O）溶液 （4）2%酒石酸钾钠溶液，在使用前，将（1）和（2）等体积混合成碳酸钠—氢氧化钠溶液。将（3）与（4）等体积混合配成硫酸铜—酒石酸钾钠溶液。然后将这两种溶液按50：1的比例混合，即为Folin—酚试剂甲。该试剂只能用一天，过期失效。 3.Folin—酚试剂乙：在2升的磨口回流装置内加入钨酸钠（Na2WO4·2H2O）100克，钼酸钠（Na2MOO4·2H2O）25克，蒸馏水700毫升，85%磷酸50毫升和浓盐酸100毫升，充分沸合后以小火回流10小时，再加入硫酸锂（Li2SO4）150克，蒸馏水50毫升及数滴液
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德尔塔：由补体介导的细胞毒试验
作者：德尔塔 日期：2022-04-11
补体介导的细胞毒试验(Complement Mediated Cytotoxicity Test)是指特异性抗体与细胞膜上相应抗原结合后,在补体的参与下,可产生细胞膜损伤,细胞死亡;不带相应抗原的细胞仍然存活.利用染料排斥实验判定淋巴细胞死活状态,活细胞不着色,具有折光性,大小也正常.死细胞着色,体积增大。 一、实验原理 带有特异抗原的靶细胞(如正常细胞、肿瘤细胞、病毒感染细胞)与相应抗体结合后，在补体的参与下，引起靶细胞膜损伤，导致细胞膜的通透性增加、细胞死亡。染料(例如：伊红-Y、台盼蓝)可通过细胞膜进入细胞内使细胞着色，故可用于指示死细胞或濒死细胞，而活细胞不着色。此即补体依赖性细胞毒试验，利用细胞毒试验可以检查细胞膜抗原，亦可鉴定抗体的特异性。 本实验中，Thy-1 抗原是小鼠胸腺T 细胞特异的表面抗原，在体外利用抗小鼠Thy-1 的单克隆抗体通过补体的协同作用，可杀伤95%以上的胸腺细胞。 二、实验材料 1. 解剖器械(眼科剪、眼科镊)、平皿、80～100 目不锈钢网 2. 试管、lml 吸量管、尖吸管 3. 载玻片、盖玻片 4. C57BL/6J 小鼠 5. 含5%NBS 的冷Hank＇s 液 6. 抗小鼠Thy-1 的单克隆抗体(*适稀释度) 7. 补体(豚鼠新鲜血清并经小鼠胸腺细胞吸收，预先测定效价并稀释为*佳稀释度) 8. 1%伊红-Y 染液 三、实验方法 1. 小鼠胸腺细胞悬液的制备： 将4～6 周龄小鼠采用颈椎脱臼法处死，取出胸腺放入已加入约4ml冷Hank＇s液的平皿中，在100 目的不锈钢网上研磨后，过筛，放入试管，离心1000rpm，5 分钟，用Hank’s液洗两次。将沉淀的细胞重悬于Hank＇s液中，配成1×107/ml细胞悬液。 2. 取试管3 支，标明顺序，依据下表依次加入1×107/ml胸腺细胞悬液、抗小鼠Thy-1 的单克隆抗体(*适稀释度)及Hank＇s液，放入37℃水浴30 分钟。 3. 取出后每管加入1%伊红-Y 染液1 滴，混匀，室温放置2 分钟。 4. 重新混匀后分别在一张载玻片上滴片，加盖玻片镜检。先在低倍镜下观察，再用高倍镜观察，比较3 管中细胞死活情况。 四
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德尔塔：胶体金标记物的制备及鉴定
作者：德尔塔 日期：2022-04-11
胶体金标记蛋白质的原理，一般认为是由于pH值等于或稍偏碱于蛋白质等电点时，蛋白质呈电中性，此时蛋白质分子与胶体金颗粒相互间的静电作用较小，但蛋白质分子的表面张力却，处于一种微弱的水化状态，较易吸附于金颗粒的表面，由于蛋白质分子牢固地结合在金颗粒的表面，形成一个蛋白层，阻止了胶体金颗粒的相互接触，而使胶体金处于稳定状态，如果=低于蛋白质的等电点时，蛋白质带正电荷，胶体金带负电荷，二者极易静电结合形成大的聚合物。如果pH高于蛋白质等电点时，蛋白质带负电荷，与金颗粒的负电荷相互排斥而不能互相结合。为防止蛋白质与胶体金的聚合与沉淀，常用牛血清白蛋白，卵白蛋白，聚乙二醇或明胶作稳定剂。用Sephacryb S—400 （丙烯葡聚糖S—400 ）层析分离纯化胶体金蛋白标记物只适用于以BSA作稳定剂者。一、待标记蛋白质的准备（1）透析除盐：蛋白质溶液内应除去多余的电解质，不然过高的盐类物质会降低胶体金颗粒的Zeta电位，影响蛋白质的吸附，因此，标记之前必须彻底除盐。一般将蛋白质置入透析袋中然后直接放入双蒸水或极低浓度的盐水（0.005mol/L NaCl ， pH7.0）透析。（2）去除蛋白质中的沉淀：长期低温保存的蛋白质或4℃较长时间保存的抗体，特别是在浓度高于2mg/ml的情况下，很容易形成聚合物，聚合物对标记过程及免疫金探针的稳定性有一定影响，因此，标记之前须离心以除去这些聚合物。一般以100000r/min 4℃离心60min取上清液，调整蛋白质浓度至1mg./ml即可用于标记。二、胶体金pH值的调整胶体金与蛋白质的结合成功与否，取决于pH值，一般只有在蛋白质等电点（PI）略偏碱的条件下二者才能牢固地结合，因此，标记之前须将胶体金溶液的pH值调至待标记蛋白质的等电点略偏碱。需要提高胶体金的pH值时可用0.1molK2CO3，需要降低胶体金的pH值时可用0.1N HCl.测定金溶液的pH可能损害pH测定计的探头，因此，一般用精密的pH试纸测定其pH即可。www.shxfbio.com elisa试剂盒,elisa kit,西安elisa实验代测,SO
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德尔塔：植物信号转导中的MAPK级联途径
作者：德尔塔 日期：2022-04-11
MAPK diverse_plants：Our current studies focus on five MAPK cascades, including those involved in osmotic stress responses, Flg22 peptide-mediated defense responses, the ethylene pathway, ａnd auxin ａnd H2O2 signaling. The overall strategy involves the identification ａnd cloning of the complete set of Arabidopsis genes encoding MAPKs, MAPKKs, MAPKKKs, ａnd relevant protein phosphatases. Transient expression of epitope-tagged MAPKs, MAPKKs, ａnd MAPKKKs will be used to determine which MAPK cASCades respond to particular abiotic or biotic stress or hormone signals in Arabidopsis ａnd maize protoplasts. Constitutively active ａnd dominant negative forms of these MAPKKKs ａnd MAPKKs will be used to identify specific reporter genEs associated with particular signaling pathways. DNA array technology will be used to analyze MAPK-related gene expression patterns, ａnd to reveal new downstream targets ａnd crosstalk between specific MAPK cascades. Identification of Arabidopsis knockout mutants corresponding to key MAPK-related regulatory genes will be initiated. Transgenic Arabidopsis, maize ａnd soybean plants that overexpress particular engineered MAPKKK ａnd MAPKK genes will be generated. The transgenic plants will be tested for the exhibition of agronomically useful traits.www.shxfbio.com elisa试剂盒,elisa kit,西安elisa实验代测,SOD试剂盒,IgG试剂盒,IgM试剂盒,WB实验代做,免疫组化实验代做,放免实验代测,GIBCO,AMRESCO-德尔塔 原创作者：德尔塔
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德尔塔：如何进行DNA甲基化分析
作者：德尔塔 日期：2022-04-11
生物通报道： 表观遗传学修饰是一种不改变DNA序列的重要调控机制，包括组蛋白和DNA修饰。近年来，表观基因组已经成为了生物医学领域中的一大热点。分析表观基因组图谱，研究者们可以鉴定潜在的功能性序列，注释“垃圾”基因组区域的功能。另外，DNA甲基化异常与癌症和其他发育疾病密切相关。!－－?xml:namespace prefix = o ns = "urn:schemas-microsoft-com:office:office" /－－ 胞嘧啶残基的甲基化（5mC）是哺乳动物基因组中*常见的一种表观遗传学修饰，主要位于CpG岛。这种甲基化修饰在细胞生长、细胞分化、细胞增殖和疾病状态中起到了关键性的作用。启动子和其他调控区域的DNA甲基化与基因沉默有关，而基因体的高度甲基化往往是活跃转录的标志。 重亚硫酸盐测序本质上就是重亚硫酸盐转化与二代测序（NGS）的结合。这一技术是在全基因组范围内分析DNA甲基化的基础工具，也是是甲基化研究中*受欢迎的技术，哈佛医学院的张毅（Yi Zhang）教授说。 甲基化分析 之前有研究比较了现有甲基化分析技术的29种组合，涵盖了片段化、文库制备、处理、扩增和分析。“基本上每一种组合都是可行的，”Oklahoma大学的Willard Freeman说。 举例来说，可以在测序之前免疫沉淀甲基化片段，或者用甲基化敏感（或不敏感）的限制性酶切割DNA。如果不进行重亚硫酸盐转化，这些技术只能用来检测存在甲基化的DNA区域，不能给出确切的甲基化位点，Zymo Research公司的表观遗传学服务项目经理Keith Booher说。它们无法分辨胞嘧啶全部被甲基化的片段和胞嘧啶部分被甲基化的片段。“而重亚硫酸盐测序可以精确算出甲基化的比例。” 重亚硫酸盐处理会将所有未甲基化的胞嘧啶转化为尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶保持不变。在测序时这些尿嘧啶被读取为胸腺嘧啶，将其与参考序列进行比较，就能确定哪些核苷酸*初是胞嘧啶。（延伸阅读：Nature Methods发表单细胞重亚硫酸盐测序技术） 重亚硫酸盐测序“完全转变了”DNA甲基化分析，“使这种不精确的模糊研究，
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德尔塔：定量PCR实验数据处理
作者：德尔塔 日期：2022-04-11
96孔板设置举例 样品 标准品 目的：生成标准曲线，建立CT值与浓度之间的数学关系 不要求： 数学关系是抽象的，不要求标准品与目标基因使用相同的DNA 可以使用相同的DNA 也可以使用不同的：PCR产物、质粒、病毒、人工合成片段…… 要求： 5点以上 浓度已知 PCR效率一致，且接近100% •仪器一致 •反应条件一致：循环参数、同一次实验 •试剂质量一致：模板、引物和探针Tm值、酶及缓冲液 www.shxfbio.com elisa试剂盒,elisa kit,西安elisa实验代测,SOD试剂盒,IgG试剂盒,IgM试剂盒,WB实验代做,免疫组化实验代做,放免实验代测,GIBCO,AMRESCO-德尔塔 原创作者：德尔塔
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德尔塔：免疫组化染色之无色片和“杂音”染色片原因分析
作者：德尔塔 日期：2022-04-11
良好的免疫组化染色切片是正确判断染色结果的基础和前提。由于免疫组化染色过程中存在很多步骤或环节，每一个步骤或环节都可能影响到染色的*终结果，因此，要做好一张高质量的免疫组化切片并不是一件非常容易的事。需要病理技术员和病理医生密切配合、相互协调、共同努力才能保证做出合格的免疫组化切片。虽然免疫组化染色可以存在各种各样的问题，但从染色的结果看，一般可分为两类：无色片（即无阳性信号）和“杂音”染色片（有阳性信号）。 一、 无色片 染色结束后，切片中见不到任何阳性信号。这是常规工作中比较常见的现象，出现这种现象，有两种可能：1、真阴性结果：整个染色过程没有出现问题，组织或细胞确实不表达与抗体相关的抗原。2、假阴性结果：即此阴性结果不是真实的反映。假阴性结果又可分为两种情况：（1）、切片中根本就不包含所预期检查的组织或细胞。出现这种情况，要麽是病理医生选择错了切片或抗体选错了，要麽是技术员选错了蜡块。获得正确的切片进行染色是获得正确结果的前提。由此表明：制作出合格的免疫组化切片不仅仅是技术员的事，病理医生也起着不可缺少的作用。（2）、染色过程中的某一或某些环节出了问题。比如，组织未进行抗原修复，有的组织必须经过抗原修复才能检测抗原表达；或选用了只能用于冰冻组织而不能用于石蜡包埋组织的抗体；或一抗失效，虽然抗体失效在理论上是一个逐渐的过程，但偶尔也遇到突然失效的情况，抗体长期不用和/或已超过有效期是主要的原因。也可见于染色过程中漏掉了某一环节，如忘记加二抗或三抗，或用了两次二抗而缺少了三抗，或配制DAB时少了过氧化氢。为了避免这种简单的错误，有一种简单的方法：在三抗孵育结束时，将切片上的三抗甩在一张白纸上，在将配制好的DAB滴一滴在白纸的三抗上，观察是否出现棕色。如果出现了，证明三抗和DAB的配制过程没有错误。如果这种DAB再滴到切片上没有出现任何阳性信号，问题一定是出在三抗以前。如果纸上不出现棕色反应，问
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