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即用型平板培养基的选择
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
一，即用型平板培养基的选择 （1）根据细胞特点、蛋白表达及病毒特点和培养方式选择细胞培养基 商售工业用细胞培养基主要是干粉培养基，常用的培养基主要包括199、MEM、RPMI-1640、DMEM、DMEM/F12等系列，根据细胞的特性及工业化的生产需求，开发或生产的同一系列的细胞培养基在成份上也有一定的变化，如MEM细胞培养基有含Earle's平衡盐的类型，也有含Hanks'平衡盐的类型；依据除菌方式又可分为高压灭菌型和过滤除菌型；还有含非必需氨基酸的类型，及是否含有酚红等；DMEM培养基分为高糖型和低糖型，据此结合实际培养的细胞特点、产品特点及生产工艺等进行选择和优化，zui终选择的培养基需要达到以下目标： 1.提高细胞密度和细胞活力； 2.提高单位体积培养液中病毒量或抗体表达量，提高生产效率； 3.降低动物来源成份，简化纯化成本，提高生物制品的安全性。 不同的细胞株甚至同一细胞株在不同的培养条件下都有着不同的营养需求，细胞作为病毒等繁殖的宿主，为细胞株选用合适的培养基，使细胞保持快速增殖和高活率状态，才能够提高生物制品的产率。在选用合适的细胞培养基时可根据以下几种方法进行： 可从细胞系zui初建系用培养基，也可从细胞的来源处获得，细胞库（如ATCC、ECACC）可以提供常用细胞系所用即用型平板培养基的信息。但该种细胞培养基通常选择的是zui基础的培养基。 1.还可用多种细胞培养基培养目的细胞，观察其生长状态，可用生长曲线、集落形成率等指标判断，根据试验结果选择*培养基，这是zui客观的方法，但比较繁锁。 2.也可根据本实验室惯用的细胞培养基，许多培养基可以适合于多种细胞，通过几种培养基的选择测试进行挑选，亦可参考一些经验（见表6-1），缩小选择的范围。 3.针对细胞特点及培养工艺需要。 规格: ≥98% Eugenol 特价供应： 丁香酚 规格: 95% Syringaresinol-di-O-glucoside 特价供应： 丁香树脂醇双葡萄糖苷
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单个细胞的PCR分析
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
单个二倍体细胞在分析单精子以前，Li等人对个体二倍体细胞内的β珠蛋白基因进行过研究。两 个组织培养细胞株用于这些实验。其中一个纯合是镰刀型细胞密码子6（βS）发生突 变，另一个纯合子则来源于正常的βB等位基因。扩增含有密码子6的β珠蛋白片段的 引物，及能够区别这两个特异的等位基因的寡核苷酸探针（ASO）已经报道过。βA纯 事细胞和βB纯合细胞和βS纯合细胞在同一组织培养瓶中共同培养数天。将用相差显 微镜观察到的混合培养的单个细胞转入溥塑料胡管内。分别将单个细胞转入含裂解液 的PCR管中，保温后，加入PCR缓冲液，缓中有四种dDNP．Taq dna聚合酶和扩增已知 珠蛋白基因的PCR引物。95℃10分钟变性靶DNA，然后根据已发表方法的改进方案进行 50全循环的扩增。通过打点杂交，等量的扩增产物打点于尼龙膜后，扩增产物分别与 βA和βS的探针杂交。所分析的37个细胞中，84％细胞只与βA和βS探针杂交，杂交 强弱各不相同；19个与βA探针．12个与βS探针杂交。12个以水作空白对照的反应管 中瓜呈阴性，它表明忽略不记DNA的污染。没有与两种探针都杂交的样品，它暗示转 入到反应管中的单个细胞，而且组织培养基中存在的从βA或βS细胞中裂解出来的 DNA并未吸附在单个细胞上。单个细胞的pcr扩增产生的β珠蛋白基因的数量通过与已知携带蛋白基因的质粒 DNA样品在杂交模上的杂交信号的强度进行比较确定。据估计PCR反应开始时，一个二 倍体细胞珠蛋白DNA量（3.0X10-24摩尔）在5－500毫微微摩尔之间，每个PCR循环以 平均效率65％计算，经50个循环后它的DNA相当于平均扩增了7.6×1010倍。考虑到扩 增的程度之大，因此排除任何可能的污染对于单个细胞的分析十分关键。单精子的分析Li等人随后对位于染色体19编码LDL受体(LDLr)的基因的杂合体单精子的基因型 进行分析。根据已知的DNA序列，他们用PCR和ASO分析检测LDLr的RFLP。PCR的引物和 探针以前已有报道。单个精子的分离与二倍体细胞的分离方法一样，精液经蔗糖梯度 离心得到纯化的精子，精
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人叶酸（FA）酶联试剂盒注意事项
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中叶酸（FA）含量。 注意事项 1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。 2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。 3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。 4． 请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔*孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请zui后乘以总稀释倍数（×n×5）。 5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。 6．底物请避光保存。 7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准. 8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。 9．本试剂不同批号组分不得混用。 10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。
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短小芽孢杆菌培养方法
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)为芽孢杆菌属，菌体细杆状，一般为0.6~0.7μm×2.0~3.0μm，革兰氏阳性。本司还同时公开了下述短小芽孢杆菌的培养方法，以及利用下述短小芽孢杆菌制备抗菌活性物质的方法： 1、 菌株操作应在无菌条件下进行，防止杂菌污染。 2、 斜面菌苔转接方法：将配套液体培养基倾入斜面试管中并使用无菌接种环将菌苔刮取于液体中， 将含有菌苔的液体培养基倒回原始管中，振荡使菌苔分布均匀。将无菌棉拭子充分浸入菌悬液， 并涂布平板1/5~1/3区域，使用接种环交叉划线涂布区域使形成单菌落。 3、 液体培养物转接方法：使用无菌吸管去除液体表面的液体石蜡，振荡混匀液体培养物，将无菌棉 拭子充分浸入菌悬液，并涂布平板1/5~1/3区域，使用接种环交叉涂布区域划线使形成单菌落。 4、 本方法仅供参考，视情况可以通过其它合理途径进行传代和保存。 5、 本公司出售的菌株仅用于科研、教学及卫生微生物检验质量控制。 培养基：营养琼脂、细菌保存培养基或胰酪胨大豆琼脂培养基 培养条件：35℃ 24-48小时 保存温度：2-8℃ 备注：如需保存，则挑取单菌落接种至细菌保存培养基斜面，每月转接1次，5代后应销毁。
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小鼠ELISA试剂盒组织结构
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
小鼠ELISA试剂盒组织结构： 1、 血清：操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000×g离心23分钟将血红细胞迅速小心地分离。 2、 血浆：EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心60分钟去除颗粒。 3、 细胞上清液：1000×g离心32分钟去除颗粒和聚合物。 4、 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心33分钟，取上清液。 5、 保存：如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70℃保存，避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。 处理方法： 1、血清-----室温血液自然凝固10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。 2、血浆-----应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。 3、细胞培养上清---检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。 4、组织标本-----切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），或组织蛋白萃取试剂, 用手工或匀浆器将标本匀浆化。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。 5、培养细胞----- 检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融或加入组织蛋白萃取试剂，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。 小鼠ELISA试剂盒小鼠骨成型蛋白2(BMP-2)ELISA试剂盒 96T/48T 规格： 小鼠大内皮素(Big ET)ELISA试剂盒 96T/48T 规格：
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细胞培养标本的采集及保存
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
细胞培养标本的采集及保存： 1. 血清：全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000 x g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。 2. 血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2 - 8° C 1000 x g离心15分钟，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。 3. 细胞培养物上清或其它生物标本：1000 x g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。 操作步骤： 1.使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。 2.根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。标本用标本稀释液1：1稀释后加入50ul于反应孔内。 3.加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育1小时。 4.甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。 5.每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。 6.甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。 7.每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育10分钟。避免光照。 8.取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。 9.在450nm波长处测定各孔的OD值。 细胞培养HPEpiCL 人前列腺上皮细胞裂解物 200 µg HPrFL 人前列腺成纤维细胞裂解物 200 µg HPSMCL 人前列腺平滑肌细胞裂解物 200 µg HCOL 人颅骨造骨细胞裂解物 200 µg HSL 人滑膜细胞裂解物 200 µg HNPCL 人髓核细胞裂解物 200 µg HHSECL 人肝窦内皮细胞裂解物 200 µg HIBEpiCL 人
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劲马:开学前解说新技术,标准品定值方法告诉您
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
进口标准品对照品是我公司的重要产品之一，供实验研究使用，上海劲马所提供的产品高质量且实惠，是客户们的*选择！就要开学了，上海劲马在这之前说新技术，标准品的定值方法告诉您。 一般而言，检验工作中使用的标准品属应用标准。配制或供应这类标准品的实验室或厂商具有符合质量标准的纯品。将符合质量标准的纯品使用称量法和容量法配制成溶液。用决定性方法反复测定，结果在规定的范围内属合格。即使测定检定结果在范围标准品的上、下限，也不能将实测值作为标准值。因为测定制的可靠性取决于鉴定方法，分析方法的可靠性不如公认的称量法和容量法。所以标准品值由称量和容量法计算确定。检定不合格即报废，决不可将实测值替代修正。上海劲马教您区分进口标准品对照品： 它们两个不同的概念，中国药典凡例中已有明确的定义：标准品系指用于生物检定、抗生素或生物药品中含量或效价测定的标准物质，以效价单位(U)表示；对照品系指用于鉴别、检查、含量测定和校正检定仪器性能的标准物质。 文献中常将两种概念混淆，认为对照品就是标准品，是一种物质两种提法而已，造成错误的原因，可能是有的药品既有对照品，又有标准品。即使是同一种物质的，它们的规格、标定方法以及用途都可能是不同的。 感谢您对上海劲马的支持！我公司为您提供zui的Sigma品牌进口标准品对照品，欢迎您。
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支原体污染的影响是什么？
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
污染是细胞培养技术中面临的主要问题,特别是传代细胞被支原体污染是个世界性难题,细胞传代培养过程中一旦被支原体污染将很难清除。本文威正翔禹/缔一生物为您分析支原体污染的影响是什么？抑制细胞增殖达50%影响免疫反应影响病毒增殖和感染率引起染色体畸变和易位干扰杂交瘤技术使被污染细胞在HAT培养基更敏感在细胞壁上附着支原体会改变细胞壁完整性。降低电穿孔转染率达5%总之，支原体污染影响细胞所有的代谢功能。 综上所述，您是不是已经对支原体污染的影响是什么，有所了解。如果还有其他疑问，请咨询威正翔禹/缔一生物资深专家。
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鱼塘池塘有刺鼻气味发绿地 原因你知道吗？zznyjya
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
水体过肥或者经常缺氧,都会造成氨氮偏高,对鱼类产生毒害作用. 针对原因,我提几个建议:1适时开增氧机.2可以泼洒一些微生物制剂,如光合细菌,枯草芽孢杆菌等.3适当提高水体pH.4冬季干塘后清淤.zznyjya 品名： 邦恒-降解氨氮功能菌 原料组成：运用混合技术培养出来的多种嗜氧及厌氧性有益菌群，低耗氧复合芽孢、类球红细菌等，有效活菌数≥800亿CFU/克 产品性状：粉末状 适用范围：虾蟹、鱼类、海参、贝类、龟鳖、蛙类等各种水产动物。 主要功效和特点： 1、降氨氮*不反弹：本品为活菌，不含任何化学成分,在混合菌群作用下，恶臭的源头物质--氨、氮等难于合成。 2、预防氨氮亚硝酸盐和稳水，保持“肥活嫩爽”。 3、瘦水*。 用法与用量： 本品用少量红糖（糖蜜）浸泡2-12小时效果*。 1、氨氮1.0以下时：50克/亩·米，连用2天，共100克/亩·米。 2、氨氮在1.0-2.5范围内：用量70-100克/亩·米，连用2次。 3、水清瘦情况下，氨氮超标：应配合糖蜜（红糖）和少量肥水产品使用，水肥的情况下可单独使用。 4、在氨氮超过3.0以上投料量过大的情况下，应综合治理：停料、 5、预防氨氮亚硝酸盐和稳水，保持“肥活嫩爽”：成功率高达80％以上（5-7天使用一次，用量30-40克/亩·米，水清瘦时配合少量的肥水产品;水肥时，单独使用本品）。 6、瘦水*：（67克/亩·米） 7、本品配合底改菌连用2天，可有效解决黑水问题（本品50克/亩·米+底改菌67克/亩，连用2天）。 8、对于污泥发黑的鱼塘产生的氨氮严重超标，建议先用过硫酸氢钾底改片氧化底部，再降低氨氨。 9、本品可与元明粉、柠檬酸、粘合剂压成生物底改片。 注意事项： 1、不可与消毒剂、氧化剂同时使用，应隔24小时以上。 2、雨天使用本品效果不明显。 贮存方法： 存放在通风、干燥、无污染的地方，避免与有毒、有害物质混合存放。 净含量：100g/袋
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有关牛血清的使用问题
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
1、保存血清的方法？ 我们建议血清应保存在-5℃～-20℃。若您一次无法用完一瓶，建议您无菌分装血清至恰当的灭菌容器内,再放回冷冻。 2、如何解冻血清才不会使产品质量受损？ 我们建议您将血清从冷冻箱取出后，先置于2---8℃冰箱使之溶解，然后在室温下使之全溶。但须注意的是，溶解过程中必须规则地摇晃均匀。 3、血清解冻后发现有絮状沉淀物出现,如何处理？ 血清中沉淀物的出现有许多种原因，但zui普遍的原因是由于血清中脂蛋白的变性所造成，而血纤维蛋白（形成凝血的蛋白之一）在血清解冻后，也会存在于血清中，亦是造成沉淀物的主要原因之一。但这些絮状沉淀物，并不影响血清本身的质量。欲去除这些絮状沉淀物，可以将血清分装至无菌离心管内，以1000转/分～2000转/分稍微离心，上清液即可直接加入培养基内使用。我们不建议您以过滤的方法去除这些絮状物，因为它可能会阻塞您的过滤膜。 4、何谓热灭活？有无必要？ 一般以56℃、30分钟来处理已解冻的血清，因为此加热步骤，可以使补体去活化，而补体所参与的反应有:溶细胞活性，平滑肌的收缩，肥大细胞和血小板组胺的释放，增强吞噬作用，淋巴细胞、巨噬细胞的趋化和激活。 实验显示，即使对血清进行正确的热灭活处理，对大多数的细胞而言也是不需要的。经此处理过的血清对细胞的生长只有微小的促进，或完全没有任何作用，甚至通常因为高温处理影响了血清的质量，而造成细胞生长速率的降低。而经过热处理的血清，沉淀物的形成会显著的增多，这些沉淀物在倒置显微镜下观察，像是"小黑点"，常常会让研究者误以为是血清遭受污染，而把血清放在37℃环境中，又会使此沉淀物更增多，使研究者认为是微生物的分裂扩增。 因此我们建议您,若非必须，您可以不需要做热处理这一步。如此一来，不但节省您宝贵的时间，更确保您的血清的质量。 质量控制、容器管道清洁度监控、设备及工艺卫生监控、膜可靠性监控、加工过程中间样品检测、加工时
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如何选用培养基
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
选择培养基没有一定标准，以下几点建议可供参考：● 建立某种细胞株所用的培养基应该是培养这种细胞的培养基。可以查阅文献，或在购买细胞株时咨询。● 本单位现有的培养基不妨一试，许多培养基可以适合多种细胞。培养某一类型细胞没有固定的培养条件。在MEM中培养的细胞，很可能在DMEM或M199中同样很容易生长。总之，MEM做粘附细胞培养、RPMI-1640做悬浮细胞培养是一个好的开始。● 根据细胞株的特点、实验的需要来选择培养基。如小鼠细胞株多选RPMI1640；进行细胞杂交、基因转移实验，可选IMDM。● 用多种培养基培养目的细胞，观察其生长状态，可以用生长曲线、集落形成率等指标判断，根据实验结果选择*培养基，这是zui客观的方法，但比较繁琐。
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断定ELISA试剂盒SCI文章实验的结果
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
的ELISA试剂盒SCI文章是良好的仪器和正确的操作是保证ELISA检测结果准确可靠的必要条 件。ELISA的操作因固相载体的形成不同而有差异，国内医学检验一般均用板式点。 本文将叙述板式ELISA各的试剂，良好的仪器和正确的操作是保证ELISA检测结果准确可靠的必要条件。ELISA的操作因固相载体的形成不同而有所差异，国内医学检验一般均用板式点。其次 ，样本的选择可用作ELISA测定的标本十分广泛，体液（如血清）、分泌物（唾液）和排泄物（如尿液、粪便）等均可作标本以测定其中某种抗体或抗原成份。有些标本可直接进行测定（如血清、尿液），有些则需经预处理（如粪便和某些分泌物）。大部分ELISA检测均以血清为标本。血浆中除尚含有纤维蛋白原和抗凝剂外，其他成份均同等于血清。制备血浆标本需借助于抗凝剂，而血清标本只要待血清自然凝固、血收缩后即可取得。除特殊情况外，在医学检验中均以血清作为检测标本。在ELISA中血浆和血清可同等应用。血清标本可按常规方法采集，应注意避免溶血，红细胞溶解时会释放出具有过氧化物酶活性的物质，以HRP为标记的ELISA测定中，溶血标本可能会增加非特异性显色。血清标本宜在新鲜时检测。如有细菌污染，菌体中可能含有内源性HRP，也会产生假阳性反应。如在冰箱中保存过久，其中的可发生聚合，在间接法ELISA中可使本底加深。一般说来，ELISA试剂盒SCI文章在5天内测定的血清标本可放置于4℃，超过一周测定的需低温冰存。冻结血清融解后，蛋白质局部浓缩，分布不均，应充分混匀宜轻缓，避免气泡，可上下颠倒混和，不要在混匀器上强烈振荡。混浊或有沉淀的血清标本应先离心或过滤，澄清后再检测。反复冻融会使抗体效价跌落，所以测抗体的血清标本如需保存作多次检测，宜少量分装冰存。保存血清自采集时就应注意无菌操作，也可加入适当防腐剂。Oxysophocarpine 氧化槐果碱 26904-64-3 20mgalpha-Hederin α-常春藤皂苷 27013-91-8 20mgAmpelopsin 蛇葡萄素； 二氢杨梅
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昆虫MFO ELISA检测试剂盒免费代测
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
昆虫混合功能氧化酶(MFO)ELISA试剂盒 英文名称：Insect MFO ELISA Kit 实验类型：夹心法 检测范围：25 U/L – 800 U/L zui低检测限：1.0 U/L 应用范围：血清、血浆、组织匀浆、细胞培养物上清或其它相关液体（本产品仅供实验室科研及非临床用途） 昆虫混合功能氧化酶(MFO)ELISA试剂盒实验目的 本试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织、细胞上清及相关液体样本中昆虫混合功能氧化酶（MFO）的含量。 有效期：6个月 保存条件：2-8℃ 昆虫混合功能氧化酶(MFO)ELISA试剂盒代测服务，实验所需的其他试剂消耗品均免费提供。实验有我司的资深酶免技术人员协力完成，实验设 备精良，实验结果度高，是科研工作者值得信赖的科研代测公司。 如有所需，欢迎广大科研工作者来电详询，我们的销售/技术工程师7×24h竭诚为您服务。期待与您的合作！
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亮发光杆菌的分离与筛选
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
1. 亮发光杆菌和培养基从稳定运行的生物脱硫脱氮 EGSB-DSR 反应器的不同高度采集污泥。将采集的样品 50 mL (固体 5.0 g)放入 500 mL 灭菌的锥形瓶中，加入无菌水稀释到 250 mL，放入玻璃珠 20−25 个，在摇床中以 220 r/min 振荡 24 h。将菌胶团或土壤颗粒振碎，制成菌悬液。采用 Hungate 厌氧滚管技术筛选功能微生物，培养基的配方(g/L)：Na2S·9H2O 0.50，无水乙酸钠 0.28，NaHCO3 1.50，NH4Cl 0.05， KNO3 0.15， K2HPO4 0.05。采用 4 mol/L NaOH 将 pH 调至 7.5。在配制培养基过程中全程采用80%氮气吹脱以保证厌氧环境。制作固体培养基时，在液体培养基中加入 2%左右的琼脂。 2. 菌种的分离与筛选吸取 1 mL 的污泥菌悬液，用无菌水稀释至 10–4。接入固体培养基中在恒温培养箱 30 ºC 培养 5 d 至培养基上出现单菌落为止。挑取培养基上的单菌落转入液态分离培养基，进行扩大培养，在恒温培养箱 30 ºC 培养，培养周期为 5 d 左右，培养基出现白色混浊为宜。用接种针粘取液态培养基的菌种，在固态培养基上进行平板划线培养。在恒温培养箱 30 ºC 进行培养，然后挑取单菌落转入液态培养基中。重复以上分离步骤 5 个周期，直至分离出单一菌落。 3. 菌株 A2 形态特征以及 16S rRNA 基因的测序鉴定采用透射电镜的方法观察菌株的形态特征：取纯化的液体培养物一滴置于铜网上，15−20 min 后取铜网于 2%的磷钨酸钠溶液中负染色 40 s，取出铜网置于干燥的滤纸上划线分区，晾干。将此铜网置于透射电镜的样品室，观察细菌形貌。之后进行革兰氏染色实验。采用天根公司的细菌基因组提取试剂盒提取菌株 A2 的细菌基因组 DNA，然后用正向引物 F8 (5′-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3′) 和反向引物 R1492 (5′-GGTTACCTTGTTACGACTT-3′)进行细菌的 16S rRNA PCR 扩增，反应体系(50 μL)：模板 DNA 3 μL，正向引物(20 pmol/L) 2 μL，反向引物(20 pmol/L) 2 μL，dNTP mixture (1.95 mmol/L) 2.5 μL，Taq DNA 聚合酶(5 U/μL) 1.5 μL，10×Buffer 3 μL，dd
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显色培养基的配置
作者：德尔塔 日期：2022-04-02
一、显色培养基平板 800 ml水加入15 g琼脂，高压灭菌15 min。然后加人200 ml无菌的5 X 极限培养液和碳源。待冷却至50°C，加人补充成分。每个10 cm平板倒入32~40 ml培养基（每升培养基可制作25〜30个平板）。于室温干燥2〜3天，或将平板的上盖稍 微打开，于37°C或在层流通风橱干燥30 min，将晾干的平板包裹好储存于4°C。 二、丰富培养基平板 将水加人以下所列出的培养基配方的成分中，定容至1L，高压灭菌25 mm。待冷却至50°C，加人补充成分。每个LB或H培养基平板倒人32~40 ml培养基（每升培养基可制作25〜30个平板），每个λ肉汤培养基平板倒人约45 ml培养基（每升培养基可制作20个平板）。平板的干燥和保存如上所述。 1. H 平板，每升 10 g 胰化蛋白胨 8 g NaCl 15 g 琼脂 2. λ肉汤平板，每升 10 g 胰化蛋白胨 2.5 g NaCl 10 g 琼脂 3. LB平板，每升 10 g 胰化蛋白胨 5 g 酵母提取物 5 g NaCl 1 ml 1 mol/L NaOH 15 g 琼脂或者琼脂糖 三、显色培养基添加物 其他的抗生素和半乳糖苷 1. 抗生素（如果需要）： 氨苄青霉素 50 μg/ml 四环素12 μg/ml 2. 半乳糖苷（如果需要）： X-gal终浓度为 20 μg/ml IPTG终浓度为0. I mmol/L 8-Shogaol 8-姜烯酚 36700-45-5 10mg Vitexin 牡荆素 3681-93-4 20mg Puerarin 葛根素 3681-99-0 20mg Oroxylin A 7-O-beta-D-glucuronide 千层纸素A-7-0-β-D-葡萄糖醛酸苷 36948-76-2 10mg Sennoside C 番泻苷C 37271-16-2 10mg Sennoside D 番泻苷D 37271-17-3 5mg Jolkinolide B 岩大戟内酯B 37905-08-1 20mg 显色培养基
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