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洋葱根尖细胞有丝分裂的观察
作者：德尔塔 日期：2022-04-06
正常细胞在植物体中，有丝分裂常见于根尖、茎尖等分生区细胞。高等植物细胞有丝分裂的过程，分为分裂问期和有丝分裂期的前期、中期、后期、末期。可以用高倍镜观察植物细胞有丝分裂的过程，根据各个时期细胞内染色体或染色质)的变化情况，识别该细胞处于有丝分裂的哪个时期。细胞核内的染色体容易被碱性染料(如龙胆紫、醋酸洋红)溶液着色。 材料 洋葱(可以用蒜、葱代替)。 用具 显微镜，载玻片，盖玻片，玻璃皿3个，、剪刀，镊子，滴管。 药品 质量分数为15%的盐酸，酒精的体积分数为95%的溶液，龙胆紫的质量浓度为 0.01 g/mL的或 0.02 g/mL的溶液(或醋酸洋红液)。 正常细胞方法步骤 一、洋葱根尖的培养 在上实验课之前的3d～4d，取洋葱一个，放在广口瓶上。瓶内装满清水，让洋葱的底部接触到瓶内的水面。把这个装置放在温暖的地方，注意经常换水，使洋葱的底部总是接触到水。待根长5 cm时，可取生长健壮的根尖制片观察。 二、装片的制作 1.解离 下午2时是洋葱有丝分裂的高峰期，可在此时剪取洋葱的根尖 2 mm～ 3 mm，立即放入盛有氯化氢的质量分数为匕%的溶液和酒精的体积分数为95%溶液的混合液(1：1)的玻璃皿中，在室温下解离3 min～5 min后取出根尖。 2.漂洗 待根尖酥软后，用镊子取出，放入盛有清水的玻璃皿中漂洗约10 min. 3.染色 把洋葱根尖放进盛有龙胆紫的质量浓度为 0.01g/mL或 0.02 g/mL的溶液(或醋酸洋红液)的玻璃皿中，染色3 min～5 min。 4.制片用镊子将这段洋葱根采取出来，放在载玻片上，加一滴清水，并且用镊子尖把洋葱根尖弄碎，盖上盖玻片，在盖玻片上再加一片载玻片。然后，用拇指轻轻地压盖玻片，这样可以使细胞分散开来。 洋葱根尖细胞有丝分裂的观察 1.低倍镜观察 把制作成的洋葱根尖装片先放在低倍镜下观察，慢慢移动装片，要求找到分生巨细胞，它的特点是：细胞呈正方形，排列紧密，有的细胞正在分裂。 2.高倍镜观察 找到分生区细胞后，把低倍镜移走，换上高倍镜，用细准焦螺
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冷冻细胞活化操作
作者：德尔塔 日期：2022-04-06
1、ATCC细胞冷冻细胞之活化原则为快速解冻，以避免冰晶重新结晶而对细胞造成伤害，导致细胞之死亡。 2、细胞活化后，约需数日，或继代一至二代，其细胞生长或特性表现才会恢复正常(例如产生单株抗体或是其它蛋白质)。 3、材料 37℃恒温水槽、新鲜培养基、无菌吸管/离心管/培养瓶、液氮或干冰容器 4、ATCC细胞步骤： (1)操作人员应戴防护面罩及手套，防止冷冻管可能爆裂之伤害。 (2)自液氮或干冰容器中取出冷冻管，检查盖子是否旋紧，由于热胀冷缩过程，此时盖子易松掉。 (3)将新鲜培养基置于37℃水槽中回温，回温后喷以70%酒精并擦拭之，移入无菌操作台内。 (4)取出冷冻管，立即放入37℃水槽中快速解冻，轻摇冷冻管使其在1分钟内全部融化，以70%酒精擦拭保存管外部，移入无菌操作台内。 (5)取出解冻之细胞悬浮液，缓缓加入有培养基之培养容器内(稀释比例为1:10～1:15)，混合均匀，放入CO2培养箱培养。取0.1ml解冻细胞悬浮液作存活测试。 (6)解冻后是否立即去除冷冻保护剂(例如DMSO或glycerol)，依细胞种类而异，一般而言，大都不需要立即去除冷冻保护剂。惟若要立即去除，则将解冻之细胞悬浮液加入含有5-10ml培养基之离心管内，离心1000rpm，5分钟，移去上清液，加入新鲜培养基，混合均匀，放入CO2培养箱培养。 (7)若不需立即去除冷冻保存剂，ATCC细胞则在解冻培养后隔日更换培养基。
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过氧化物酶标记测定法原理
作者：德尔塔 日期：2022-04-06
肿瘤细胞原理：脱氧核糖核苷酸衍生物地高辛[(digoxigenin)-11-dUTP]在TdT酶的作用下,可以掺入到凋亡细胞双链或单链DNA的3-OH末端,与dATP形成异多聚体,并可与连接了报告酶(过氧化物酶或碱性磷酸酶)的抗地高辛抗体结合.在适合底物存在下,过氧化物酶可产生很强的颜色反应,特异准确的定位出正在凋亡的细胞,因而可在普通光学显微镜下进行观察. 毛地黄植物是地高辛的*来源.在所有动物组织中几乎不存在能与抗地高辛杭体结合的配体,因而非特异性反应很低.抗地高辛的特异性抗体与脊椎动物甾体激素的交叉反应不到1%,若此抗体的Fc部分通过蛋白酶水解的方法除去后,则可完全排除细胞Fc受体非特异性的吸附作用. (一)试剂配制 1、磷酸缓冲液PBS(pH7.4)：磷酸钠盐 50mM,NaCl 200mM. 2、蛋白酶K(200μg/ml,pH7.4)：蛋白酶K 0.02g;PBS 100ml. 3、含2%H2O2的PBS缓冲液(pH7.4)：H2O2 2.0ml;PBS缓冲液 98.0ml. 4、TdT酶缓冲液(新鲜配)：Trlzma碱 3.63g用 0.1N HCl调节pH至 7.2,加ddH2O定容到1000ml; 5、TdT酶反应液：TdT酶32μl;TdT酶缓冲液 76μl,混匀,置于冰上备用. 6、洗涤与终止反应缓冲液：氯化钠 17. 4g;柠檬酸钠 8.82g;ddH2O 1000ml 7、0.05%二氨基联苯(DAB)溶液：DAB 5mg;PBS 10ml,pH7.4, 临用前过滤后,加过氧化氢至0.02%. 8、0.5%甲基绿(pH4.0)：甲基绿0.5g;0.1M乙酸钠100ml. 9、100%丁醇,100%、95%、90%、80%和70%乙醇,二甲苯,10%中性甲醛溶液,乙酸,松香水等. 10、过氧化物酶标记的抗地高辛抗体(ONCOR) (二)肿瘤细胞实验步骤 1、标本预处理： (1)石蜡包埋的组织切片预处理：将组织切片置于染色缸中,用二甲苯洗两次,每次5min.用无水乙醇洗两次,每次3min.用95%和75%乙醇各洗一次,每次3min.用PBS洗5min 加入蛋白酶K溶液(20ug/ml),于室温水解15min,去除组织蛋白.用蒸馏水洗4次,每次2min,然后按下述步骤2进行操作. (2)冰冻组织切片预处理：将冰冻组织切片置10%中性甲醛中,于室温固定10min后,去除多余液体.用PBS洗两次,每次5m
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TFAR19蛋白的细胞定位分析
作者：德尔塔 日期：2022-04-06
人正常组织来源细胞材料试剂： FITC标记的单克隆抗体，pH7.4 、0.15Mol/L PBS，3%的多聚甲醛，PBS-T(pH7.4 、0.15Mol/L PBS 含0.2% Tween 20)，胎牛血清，荧光细胞洗液：pH7.4 、0.15Mol/L PBS含2%胎牛血清及0.1%NaN3 。FACS管，Tip头，移液器。 仪器：低温水平离心机, 37°C水浴箱，荧光显微镜，共聚焦激光扫描显微镜，流式细胞计 方法： 1 悬浮细胞的染色： (1)收获正常和诱导凋亡的细胞(0.5~1′106)，PBS洗2次，1000rpm′10min。 (2)3%多聚甲醛冰浴10min，PBS洗2次，1000rpm′10min。 (3)加入PBS-T溶液，37°C孵育15min，PBS洗2次，1000rpm′10min。 (4)加入200ml胎牛血清，室温反应30min。 (5)加入5ml FITC标记的TFAR19单抗(终浓度为1：40)，4°C反应30min (6)荧光细胞洗液洗2次，1000rpm 10min。 人正常组织来源细胞结果观察：将细胞沉淀滴片，荧光显微镜及共聚焦激光显微镜下观察TFAR19在细胞中的定位。同时用流式细胞计定量检测TFAR19蛋白的平均荧光强度。 (1) 贴壁生长的对数期细胞铺在24孔或6孔板中(内有洁净盖玻片)，让其爬片生长，待长到 50%~80%满时，凋亡诱导剂处理细胞。 (2) 将不同时间点处理的细胞进行免疫荧光染色，染色步骤同上。 (3) 将染色的爬片细胞放于一张滴有少量甘油(5ml)的载玻片上，荧光显微镜或共聚焦激光扫描显微镜观察TFAR19在人正常组织来源细胞中的定位。
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微生物菌种几种方法简便、效果好的保存方法介绍
作者：德尔塔 日期：2022-04-06
一、微生物菌种需要4℃冰箱保存 1、液体石蜡保存法 先将液体石蜡灭菌，然后放于37℃恒温箱中，使水汽蒸发掉备用。再将需要保存的菌种在zui适宜的斜面培养基中培养，用无菌吸管吸取已灭菌的液体石蜡，注入已长好的斜面培养基上，用量以高出斜面顶端1cm为准。试管需直立，置4℃或室温下保存，一般无芽胞细菌可保存1年左右。 2、蒸馏水保存法 取灭菌蒸馏水6-7ml加于试管斜面上，用吸管研磨，洗下菌苔充分混匀，将此菌液分装于灭菌的螺旋小瓶中，或用胶塞密封，置4℃保存可存活数年。 3、高层半固体琼脂石蜡保存法 将需保存的菌种经平板划线分离后，挑单个菌落用接种针反复穿刺接种到高层半固体琼脂培养基中，经37℃12小时培养后取出，用无菌操作将灭菌的液体石蜡滴加半固体琼脂菌种管表层约0.5cm高度，存放4℃冰箱，1年转种1次。 二、微生物菌种需-20℃冰箱冷冻保存 1、甘油保存法 甘油一生理盐水保存液的制备：取甘油(分析纯)8份加入生理盐水2份，充分混合后，经121.3℃30分钟灭菌备用。 将纯化后的菌株根据菌种不同分别划线接种于其zui适宜生长的培养基上培养后，用接种针取典型菌落接种肉汤管37℃培养6-8小时(链球菌和奈瑟氏菌接种血清肉汤管，5-10%CO2环境下8-10小时培养，真菌直接用接种环取菌洗入肉汤管，不培养)。此为培养液。 将此培养液与保存液以5：2的比例混合分装于灭菌的微量离心管，置-20℃冰箱保存(链球菌、奈瑟氏菌置-80℃冰箱保存)。使用时需37℃水浴中快速解冻。 用上述方法保存一般菌株可存活3年以上，链球菌、奈瑟菌可存活12-15个月，且性状未发生变异。此方法采用幼龄肉汤培养物效果好，且适用于链球菌、奈瑟氏菌、弧菌、真菌等需特殊方法保存的菌种。 2、低温保存法 菌种保存液的配制：K2HPO412.6g，柠檬酸钠0.98g，MgSO4·7H2O0.18g，KH2PO43.6g，甘油88g加蒸馏水至1000ml，103.4KPa灭菌30分钟，4℃保存备用。 将细菌接种于肉汤培养基中，37℃培养16-18小时，或斜面培养物刮取于生理盐水中，然后加入等体积的菌种保
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抗原elisa试剂盒技术原理
作者：德尔塔 日期：2022-04-06
抗原elisa试剂盒灵敏度和特异性均优于间接法。用1种双抗原夹心法和4种间接法检测抗-HCV血清盘和不同浓度的室内质控品，严格按试剂说明书在Xantus全自动加样仪和FAME全自动酶免分析仪中进行检测。血清盘中阴性参考品符合率均为20/20，阳性参考品符合率均为20/20。双抗原夹心法灵敏度高，0.05NCU/mL的室内质控品能完全检测出来，间接法zui低检出为0.5NCU/mL，间接法的10个单试剂阳性标本用双抗原夹心法和RIBA确认法检测全部为阴性。ELISA试验反应需要一定的时间，才能进入平台状态，否则反应不完全。时间的长短又与温度的高低有关，所以实验室室温的变化会直接影响酶反应进入孵箱后在37'℃时的反应时间，而使抗原elisa试剂盒规定的孵育时间相对不足或延长，造成试验结果不稳定。据有关抗原elisa试剂盒资料显示，酶反应板分别在4℃室温和25℃室温放入37℃的孵箱，可相差10rain的显色时间。由此可见反应的温度，时间对0D值进入平台状态的影响很明显。
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植物乙烯（ETH）Elisa试剂盒操作注意事项和标本要求
作者：德尔塔 日期：2022-04-06
植物乙烯（ETH）Elisa试剂盒注意事项 1．elisa酶联免疫试剂盒说明书试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未 用完，板条应装入密封袋中保存。 2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。 3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间 控制在5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。 4． 请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD 值 大于标准品孔*孔的OD 值） ，请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计 算时请zui后乘以总稀释倍数（×n×5） 。 5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。 6．底物请避光保存。 7．严格按照elisa酶联免疫试剂盒说明书说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准. 8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。 9．本试剂不同批号组分不得混用。 10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。 植物乙烯（ETH）Elisa试剂盒标本要求 1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关elisa酶联免疫试剂盒说明书文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能 马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融 2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性
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3D4/21细胞株复苏失败原因分析
作者：德尔塔 日期：2022-04-06
3D4/21细胞株复苏失败原因分析 生物试剂销售中心细胞库提供遗传变异细胞系、正常组织来源细胞系、肿瘤细胞系、工程细胞系、干细胞系，涉及人类，大鼠、小鼠、鸟类、仓鼠、鱼类、猫类、狗、牛、貂、猪、恒河猴、长鼻袋鼠等。 产品名称：3D4/21细胞 中文名称：猪肺泡巨噬细胞 种属：猪 来源：肺泡巨噬细胞；SV40转化；Landrace 培养条件：DMEM 生长状态：贴壁 3D4/21细胞株复苏失败原因分析 细胞的冻存与复苏 为了防止因污染或技术原因使长期培养功亏一篑，考虑到培养细胞因传代而迟早会出现变异，有时因寄赠、交换和购买，培养细胞从一个实验室转运到另一个实验室，*的策略是进行低温保存。这对于维持一些特殊细胞株的遗传特性极为重要。现简要介绍深低温保存法(－70℃~－196℃)的特点。细胞深低温保存的基本原理是：在－70℃以下时，细胞内的酶活性均己停止，即代谢处于完全停止状态，故可以长期保存。细胞低温保存的关键，在于通过0~20℃阶段的处理过程。在此温度范围内，水晶呈针状，极易招致细胞的严重损伤。 一、细胞的冻存：为避免污染造成的损失，zui小化连续细胞系的遗传改变和避免有限细胞系的老化和转化，需要冻存哺乳细胞。冻存细胞前，细胞应该特性化并检查是否污染。 有几种普通培养基用来冻存细胞。对于包含有血清的培养基，成分可能如下： 包含10％甘油的完全培养基， 包含10％二甲基亚砜（DMSO）的完全培养基， 50％ 细胞条件培养基和50％含有10％甘油的新鲜培养基，或 50％ 细胞条件培养基和50％含有10％二甲基亚砜的新鲜培养基。 对于无血清培养基，一些普通的培养基成分可能是： 50％ 细胞条件无血清培养基和50％包含有7.5％二甲基亚砜的新鲜的无血清培养基，或 包含有7.5％二甲基亚砜和10％细胞培养级BSA的新鲜无血清培养基。 3D4/21细胞株复苏失败原因分析 CEK 鸡胚肾细胞 鸡 胚肾 DMEM 贴壁 NCI-H1770 人非小细胞肺癌细胞 人 非小细胞肺
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KYSE450细胞株复苏失败原因分析
作者：德尔塔 日期：2022-04-06
KYSE450细胞株复苏失败原因分析 生物试剂销售中心细胞库提供遗传变异细胞系、正常组织来源细胞系、肿瘤细胞系、工程细胞系、干细胞系，涉及人类，大鼠、小鼠、鸟类、仓鼠、鱼类、猫类、狗、牛、貂、猪、恒河猴、长鼻袋鼠等。 产品名称：KYSE450细胞 中文名称：人食管癌细胞 种属：人 来源：食管鳞癌；男性 培养条件：EMEM 生长状态：贴壁 KYSE450细胞株复苏失败原因分析 细胞的冻存与复苏 为了防止因污染或技术原因使长期培养功亏一篑，考虑到培养细胞因传代而迟早会出现变异，有时因寄赠、交换和购买，培养细胞从一个实验室转运到另一个实验室，*的策略是进行低温保存。这对于维持一些特殊细胞株的遗传特性极为重要。现简要介绍深低温保存法(－70℃~－196℃)的特点。细胞深低温保存的基本原理是：在－70℃以下时，细胞内的酶活性均己停止，即代谢处于完全停止状态，故可以长期保存。细胞低温保存的关键，在于通过0~20℃阶段的处理过程。在此温度范围内，水晶呈针状，极易招致细胞的严重损伤。 一、细胞的冻存：为避免污染造成的损失，zui小化连续细胞系的遗传改变和避免有限细胞系的老化和转化，需要冻存哺乳细胞。冻存细胞前，细胞应该特性化并检查是否污染。 有几种普通培养基用来冻存细胞。对于包含有血清的培养基，成分可能如下： 包含10％甘油的完全培养基， 包含10％二甲基亚砜（DMSO）的完全培养基， 50％ 细胞条件培养基和50％含有10％甘油的新鲜培养基，或 50％ 细胞条件培养基和50％含有10％二甲基亚砜的新鲜培养基。 对于无血清培养基，一些普通的培养基成分可能是： 50％ 细胞条件无血清培养基和50％包含有7.5％二甲基亚砜的新鲜的无血清培养基，或 包含有7.5％二甲基亚砜和10％细胞培养级BSA的新鲜无血清培养基。 KYSE450细胞株复苏失败原因分析 CEK 鸡胚肾细胞 鸡 胚肾 DMEM 贴壁 NCI-H1770 人非小细胞肺癌细胞 人 非小细胞肺癌；淋巴结转移；
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细胞培养开始前的准备工作
作者：德尔塔 日期：2022-04-06
一、掌握相关知识： 1.学习细胞培养知识。 了解相关概念、方法，记住操作过程，观摩、参与实际操作。参考书《动物细胞培养-基本技术指南》（科学出版社）。 2.掌握无菌技术。 高压消毒实验用品：操作台上不是一次性的物品均需做灭菌处理，无法高压的物品应使用75%酒精消毒。 消毒操作间和操作台：使用75%酒精擦拭无菌间的墙面、地面，操作台的台面，孵箱，离心机等。操作前须用紫外线照射无菌间和操作台30分钟消毒。入无菌间须穿隔离服，戴手套、口罩、帽子。用75%酒精洗去手套上的滑石粉。 无菌操作：操作时应尽量接近酒精灯；拿取吸管时，避免接触其使用端；不要在开口器皿的上方操作；吸取不同液体应更换吸管。不能碰瓶口。万一碰到，更换吸管。 二、细胞引进/订购： 1.根据实验目的和要求选择实验细胞：细胞培养已广泛应用于各个生物学、医学实验室及**和生产上。应根据自身实验的特性、要求，充分文献学习，了解细胞的特性，选择可以使用的细胞范围。并与导师沟通后，决定所需细胞。充分了解目前对实验用细胞质量的要求。 2.预定细胞：咨询舜冉生物细胞销售中心（舜冉细胞资源中心细胞服务），详细了解细胞的详细情况，如培养基种类、代次、价格等。预定细胞时间一般为实验前的1-2周。需提供细胞名称（英文缩写）、订购人的姓名、、单位。 三、细胞培养用品的准备： 1无菌服装：包括消毒隔离服（有条件的实验室）或工作服（如白大褂）、无菌手套、无菌帽和口罩。除隔离服外，其他物品为一次性使用。 2.操作台：有条件的实验室可装备超净培养间，超净工作台和生物安全柜也可。所有物品除一次性物品外均需高压灭菌。有酒精灯及95%酒精、吸管或枪（枪头）、洗耳球、或电动移液器、小试管及试管架、培养瓶架、离心管、培养皿或培养瓶、计数板、废液缸。 3.仪器设备：相差显微镜、离心机、冰箱、水浴锅、无菌车及架子、废物桶、marker笔、灭菌擦手纸、75%酒精喷壶。 4.培养用液：PBS或D-hanks、胰酶等消化
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中性粒细胞呼吸爆发定量检测试剂盒
作者：德尔塔 日期：2022-04-06
中性粒细胞（PMNs）的吞噬作用在抵御细菌、真菌等病原微生物感染过程中发挥重要作用。吞噬作用过程包括几个主要阶段： 趋化，黏附，内吞，胞内氧依赖性（呼吸爆发）和氧非依赖性的杀伤。 正常条件下细菌感染后，机体PMNs被激活，PMNs吞噬和氧化功能增强是机体重要的天然免疫防御机制。因此通过观察PMNs的活化状态可以帮助了解机体细菌感染的状况。 爱必信（Absin）提供的试剂盒采用流式细胞仪（FMC）检测PMNs功能，用PMA作为刺激剂，以二氢若丹明作为荧光底物。中性粒细胞受刺激后产生反应性氧化物，氧化二氢若丹明为可发出荧光的若丹明123。这个反应可以由溶血素终止。产生的反应性氧化物可以用荧光强度来表示。PMNs活化和机体的天 然免疫能力。可用于研究在各种病理情况下如感染、自身免疫疾病、应急、肿瘤、手术等中中性粒细胞的功能改变及药物的效果评价。该试剂盒不仅用于人，还可以用于小鼠、大鼠、兔、狗、牛等其他种属。 货号 产品名称 规格 价格 abs50002a 中性粒细胞呼吸爆发定量检测试剂盒 25T 2000 abs50002b 中性粒细胞呼吸爆发定量检测试剂盒 50T 3200 abs50002c 中性粒细胞呼吸爆发定量检测试剂盒 100T 5000 操作步骤： 1. 无菌肝素抗凝的全血50ul，加刺激剂（如PMA）50ul, 37°C 孵育15分钟。 2．加二氢若丹明25ul, 37°C避光孵育5分钟 3．溶血素用无菌去离子水1：10稀释，加稀释后的溶血素1ml ，室温避光溶血15分钟 4．PBS洗涤2次,1500rpm离心5分钟，去上清液 5．加0.5mlPBS重悬细胞，上流式细胞仪检测 实验结果示例图： 图1前向角、侧向角点状图谱光柱状图谱 图2 静止、活化中性粒细胞FL1荧
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养好细胞注意点（二）
作者：德尔塔 日期：2022-04-06
（一）何时须更换培养基。培养基中是否须添加抗生素。 视细胞生长密度而定，或遵照细胞株基本数据上的更换时间，按时更换培养基即可。 一般正常培养状态下，培养基中可以添加抗生素。 按1％体积分数加入双抗贮存液(青霉素+链霉素)，使青霉素和链霉素的终浓度分别为100 U／mL和100 μ／mL。 (二）贴壁细胞传代时所使用的 trypsin-EDTA 浓度及相应处理 一般使用的 trypsin-EDTA 浓度为 0.25% trypsin-0.53mMEDTA.4 Na。*次开瓶后应立即少量分装于无菌试管中，保存于 –20 ℃，避免反复冷冻解冻造成 trypsin 的活性降低，并可减少污染的机会.。 （三）将一般动物细胞离心下来，离心速率多少 回收动物细胞，其离心速率一般为 1 000 rpm，5~10 分钟，过高的转速，将造成细胞死亡。 （四）细胞的接种密度 依照细胞株基本数据上的接种密度或稀释分盘的比例接种即可。细胞数太少或稀释的太多亦是造成细胞无法生长的重要原因之一。 （五）细胞冷冻培养基的成分及DMSO的等级 动物细胞冷冻保存时zui常使用的冷冻培养基是含 5~10% DMSO （dimethyl sulfoxide） 和 90~95 % 原来细胞生长用的新鲜培养基均匀混合。注意：由于 DMSO 稀释时会放出大量热能，故不可将 DMSO 直接加入细胞液中，必须使用前先行配制完成。冷冻保存使用的 DMSO 等级，必须为 Tissue culture grade 的 DMSO ，其本身即为无菌状况，*次开瓶后应立即少量分装于无菌试管中避光保存。 （六）冷冻保存细胞的方法及冷冻细胞浓度 将贴壁细胞消化后离心收集，悬浮细胞直接离心收集，以含有DMSO完全培养基或胎牛血清的冻存液重悬细胞至终浓度约1x106/ml。。以每管1～2ml分装至冻存管中。用绝热材料包裹置-70摄氏度冰箱冷冻。次日保存到液氮中。 冷冻管内细胞数目一般为 1x106 cells/ml vial，融合瘤细胞则以 5x106 cells/ml vial 为宜。
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血涂片的制备和细胞大小的测量
作者：德尔塔 日期：2022-04-06
目的要求 1.掌握血涂片的制备方法； 2.认识红细胞及各种白细胞的典型形态； 3.掌握显微测微尺的使用方法。 实验原理 涂片技术是制备血液样品zui常用的技术。将血液样品制成单层细胞的涂片标本，染色后可对血液中各种细胞形态进行形态观察、细胞计数、细胞大小测量等工作。 实验用品 1.器材:医用一次性采血针、酒精棉球、镊子、经脱脂洗净的载玻片 、双凹片（推片） 。 2.试剂:Wright’s染液：Wright’s色素粉末0.1g，溶于60 ml甲醇。 方法与步骤 一.血涂片的制备与血细胞的观察 二.显微测微尺的使用 采血前用70％酒精棉球消毒人的指腹 血涂片的制备和细胞大小的测量 采血 血涂片的制备和细胞大小的测量 由于*滴血中含单核白细胞较多，因此弃去*滴血。 血涂片的制备和细胞大小的测量 推片：挤出第二滴血置于载玻片的右侧 再取另一张边缘光滑的双凹片，斜置于血滴的前缘，先向后稍移动轻轻触及血滴，使血液沿玻片端展开成线状。 两玻片的角度以30~45°为宜，轻轻将双凹片向前匀速推进，即涂成血液薄膜。
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培养基的种类
作者：德尔塔 日期：2022-04-06
培养基英文名为Medium，它是供微生物、植物和动物组织生长和维持用的人工配制的养料，一般都含有碳水化合物、含氮物质、无机盐（包括微量元素）以及维生素和水等。 培养基按其用途又可分为基础培养基，营养培养基，鉴别培养基，厌氧培养基，选择培养基。 基础培养基含有细菌所需要的zui基本的养分，可供大多数细菌生长，常用的有：肉汤及琼脂培养基、蛋白胨水等。 营养培养基是在基础培养基中添加一些其它营养物质，如葡萄糖、血液、血清、酵母浸膏等，可供营养要求较高的细菌生长，常用的有血液琼脂斜面及平板。 鉴别培养基是利用各种细菌分解糖类、蛋白质的能力及其代谢产物不同，在培养基中加入某种特殊营养成分和指示剂，便于观察细菌生长后发生的变化而鉴别细菌，如麦康凯培养基等。 厌氧菌必须在无氧的环境中才能生长，凡适用于厌氧菌生长的培养基称为厌氧培养基。如肝片肉汤、疱肉培养基等应用时应覆盖液体或固体石蜡。用葡萄糖肝琼脂培养厌氧菌需用厌氧培养法，造成厌氧的方法较多，如焦性没食子酸法、共栖培养法和抽气法。 在培养基中加入某种化学物质，抑制某一类细菌生长，而有利于另一类细菌生长，从而把后者筛选出来，这种培养基叫做选择培养基。如SS培养基，含有胆盐能抑制革兰氏阳性菌生长，而枸橼酸盐和煌绿能抑制大肠杆菌，这种SS培养基就能用于分离肠道致病菌。此外，通过加抗生素、结晶紫等其它抑菌物质，达到选择培养的目的。 培养基按照其化学性质可分为天然培养基，组合培养基，半组合培养基。 天然培养基指一类利用动、植物或微生物体包括其提取物制成的培养基。如蛋白胨培养基、麦芽汁培养基等；组合培养基又称为合成培养基或综合培养基，是一类按微生物的营养要求设计后用多种高纯化学试剂配制成的培养基。如葡萄糖铵盐培养基、淀粉硝酸盐培养基等；半组合培养基指一类主要以化学试剂配制，同时还加有某种或某些天然成分的培养基。
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关于钙红的注意事项
作者：德尔塔 日期：2022-04-06
钙红又名乙二醛缩双邻氨基酚Glyoxalbis（2-hydroxyanil）。主要用于 用于络合指示剂，测定钙。 钙红的性状：棕色至黑色结晶或褐色粉末。易溶于碱液和氨水，微溶于水。在pH不大于10时呈红色，pH在13～14间为浅蓝色，能和钙形成红色的螯合物。熔点300℃。zui大吸收波长560（366）nm。有刺激性。市售商品中也有制成钠盐的，易溶于水，水溶液和乙醇溶液均不稳定。常与100倍的氯化钠混匀后使用。 钙红的注意事项：不慎与眼睛接触后，请立即用大量清水冲洗并征求医生意见； 穿戴适当的防护服；刺激眼睛；刺激呼吸系统；刺激皮肤。钙红的相关产品：甲酚红 10 微生物指示剂 结晶紫 25 微生物指示剂 美蓝（亚甲基蓝） 25 微生物指示剂 固绿 10 118.5 微生物指示剂 苯酚红 25 微生物指示剂 刃天青 1 微生物指示剂 酸性品红 25 微生物指示剂
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