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Bradford法测定蛋白质操作说明

发布时间:2022-04-06     作者:德尔塔   分享到:

【产品介绍】:

抗原elisa试剂盒蛋白质与考马斯亮兰染料结合生成蓝色物质,蓝色物质的量与蛋白质浓度的高低成正比。生成的蓝色物质在595nm处有zui大光吸收,通过测定595nm的光吸收,来测定蛋白质浓度。实验中一般利用牛血清白蛋白(BSA)来作标准曲线,此法的灵敏度为25~200ug/ml。甘油、吐温(tween)80、去污剂、乙酸、硫酸铵、三羟甲基氨基甲烷(Tris)和一些碱性缓冲液会干扰该检测反应,可以通过设立当的对照来消除这种干扰。抗原elisa试剂盒试剂准备:1.Bradford储存液:95%乙醇,100mL;88%磷酸,200mL;考马斯亮兰G-250染料,350mg;室温下可长期稳定保存。2.Bradford工作液:双蒸水,425mL;95%乙醇,15mL;88%磷酸,30mL;Bradford储存液,30mL;Whatman I号滤纸过滤,室温保存于棕色瓶中,可用数周,但用前需重新过滤。3.标准蛋白:1mg/mL牛血清白蛋白。抗原elisa试剂盒操作方法:1.以PBS为空白对照,将标准蛋白BSA梯度稀释为20ug/mL、17.5 ug/mL、15 ug/mL、12.5 ug/mL、10 ug/mL、7.5 ug/mL、5 ug/mL、2.5 ug/mL,待测样品做适当稀释,每管100uL。每次实验应做一新的标准曲线;没个样品2~3个重复管。2.加入1mL Bradford 工作液,振荡混匀,室温反应2分钟。由于染料和蛋白的反应时连续的,所以染料应依次加入到个蛋白样品中,所有样品也应按照加入染料的顺序测定A595值。3.测定A595值,测量应在1小时内完成。4.以标准蛋白的浓度为横坐标,A595值为纵坐标画出标准曲线,根据标准曲线,通过待测样品的A595值,确定其浓度。