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伏马菌素偶联卵清蛋白半抗原(fumonisin-OVA,FB-OVA)成功合成!!!
发布时间:2020-07-21     作者:zhn   分享到:

伏马菌素偶联卵清蛋白抗原(fumonisin-OVA,FB-OVA成功合成!!!


西安齐岳生物科技有限公司是可以提供一些的蛋白(如OVA、BSA、HSA)偶联药物的定制合成服务。

伏马菌素( fumonisin, FB)是一类主要由串珠镰刀菌产生的真菌毒素。其中FB1是一种小分子物质,相对分子质量为721.8,是典型的半抗原,虽然具有一定的反应原性,但没有免疫原性,因此为了制备成完全抗原,必须将其偶联到某种特定大分子蛋白载体上。齐岳生物实验室成功合成伏马菌素-卵清蛋白偶联物(fumonisin-OVA)。


伏马菌素-卵清白蛋白(简称FB-OVA)的偶联主要采用戊二醛一步法,合成步骤如下:

称取1.2 mg OVA,用PBS(0.01 M,pH 7.2)配制蛋白悬浮液,浓度为1 mg/mL,在磁力搅拌中用蛋白悬浮液溶解1 mgFB, ,并逐滴加入相同体积的戊二醛(2% ,体积分数比) ,室温反应1 h,用硼氢化纳终止反应,使硼氢化纳的终浓度为10 mg/mL,室温反应1 h。然后,在磁力搅拌条件下用PBS于4 C透析72 h。透析液经PEG20000浓缩后,使用考马斯亮蓝蛋白试剂盒检测蛋白含量。 

FB-OVA偶联物的聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS-PAGE)检测说明:

安装制胶板,配制电泳所需各种溶液,选用浓度为12%分离胶,5%浓缩胶,样品与上样缓冲液4:1混合,上样量每孔10 μL,浓缩电压为80 V,分离电压为120 V,考马斯亮蓝染液染色2 h,脱色过夜,拍照分析。

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电泳图中FB1-OVA的电泳条带迁移率比OVA的迁移率小

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质谱法检测得出FB1-OVAOVA的相对分子质量分别是51 928.61244 265.718

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免疫芯片检测可见偶联物与FB1McAb发生了特异性反应,初步证明偶联成功.

 

伏马菌素-卵清蛋白(fumonisin-OVA)溶于PBS中,蛋白浓度≧5mg/ml,可作为抗原免疫动物用于抗体的制备,或包被于固相载体用于伏马菌素及其抗体的检测,也可用于自身免疫病研究和实验动物自身免疫病模型的建立。

Stability: 12 months

Storage: -20°C in the dark

供应商:西安齐岳生物科技有限公司

 

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